黄芪当归配伍对气道变应性炎症大鼠Th1/Th2平衡的影响

目的通过研究黄芪当归配伍对气道变应性炎症模型大鼠鼻黏膜、肺组织干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）表达及血清中IFN-γ、IL-4含量的影响,探讨其作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、黄芪组、当归组、芪归配伍组、阳性对照组。采用卵清蛋白（OVA）皮下及腹腔注射致敏、OVA喷雾激发的方法造成大鼠气道变应性炎症模型,各给药组分别用黄芪、当归、黄芪当归配伍水煎液及曲尼司特水溶液灌胃给药。用免疫组化法测定鼻黏膜及肺组织中IFN-γ、IL-4的表达,ELISA方法测定血清中IFN-γ、IL-4含量。结果模型组血清及肺组织中IFN-γ降低,鼻黏膜中IFN-γ变化不明显,而血清、鼻黏膜、肺组织中IL-4均升高;黄芪组可增加鼻黏膜及血清中IFN-γ,当归组可降低肺组织、鼻黏膜及血清中IL-4。芪归配伍组可增加肺组织及血清中IFN-γ,降低鼻黏膜、肺组织、血清中IL-4。相关分析显示,鼻与肺之间IL-4、IFN-γ呈正相关。结论黄芪当归配伍可能通过调节气道变应性炎症中Th1/Th2细胞因子平衡,从而对气道变应性炎症起到抑制作用。     

黄芪-当归配伍对气道变应性炎症大鼠 IFN-γ,IL-4,STAT6,STAT4的影响

目的:通过研究黄芪-当归配伍对气道变应性炎症模型大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)含量及肺组织信号转导因子和转录活化因子4( STAT4)、信号转导因子和转录活化因子6(STAT6)表达的影响,探讨黄芪-当归配伍治疗气道变应性炎症的作用机制.方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏及喷雾激发的方法造成大鼠气道变应性炎症模型,分别用黄芪、当归、黄芪-当归配伍灌胃给药治疗.应用ELISA方法测定血清中IFN-γ、IL-4含量.应用Western blot方法检测肺组织STAT4、STAT6表达.结果:模型组血清IFN-γ含量降低,IL-4含量升高.黄芪组血清中IFN-γ含量增加,当归组血清中IL-4含量降低,芪归配伍组可增加血清中IFN-γ含量,降低IL-4含量.模型组肺组织STAT6、磷酸化信号转导因子和转录活化因子6( p-STAT6)表达增加,STAT4、磷酸化信号转导因子和转录活化因子4(p-STAT4)表达减少.黄芪组可降低STAT6,p-STAT6表达,增加p-STAT4表达.当归组可降低p-STAT6表达.芪归组可降低STAT6,p-STAT6,增加STAT4,p-STAT4表达.结论:黄芪-当归配伍可能通过抑制STAT6、促进STAT4,调节气道变应性炎症中Th1/Th2细胞因子平衡,从而对气道变应性炎症有抑制作用.     

“邵氏五针法”对慢性哮喘大鼠GATA-3/T-bet表达的影响

目的:探讨"邵氏五针法"对慢性哮喘大鼠Thl/Th2细胞失衡相关因子的影响。方法:SD大鼠40只按随机数字表法分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组,通过HE染色观察各组大鼠肺组织病理学变化,通过酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清白介素(IL)-5、γ干扰素(IFN-γ)含量,荧光定量PCR检测各组大鼠肺组织中GATA结合蛋白3(GATA-3)、T盒子转录因子(T-bet)mRNA表达水平。结果:肺组织病理显示针刺组和艾灸组大鼠气道炎症较模型组明显减轻,针刺组和艾灸组大鼠血清中IL-5含量及肺组织中GATA-3mRNA表达明显低于模型组,血清IFN-γ含量及肺组织T-betmRNA表达明显高于模型组。结论:针刺和艾灸能降低哮喘大鼠气道炎症,抑制Th2特异性转录因子GATA-3的表达,促进Thl特异性转录因子T-bet的表达,可能通过纠正Th1/Th2失衡,调控哮喘大鼠免疫功能,从而降低哮喘大鼠的气道高反应性及慢性炎症,达到防治哮喘的作用。     

基于T-bet/GATA-3表达研究化痰祛瘀法对哮喘小鼠气道炎症及免疫失衡的影响

目的:研究转录因子T-bet和GATA-3在哮喘模型小鼠疾病进展过程中的改变及其意义及其在Th1/Th2失衡中的作用,探讨化痰祛瘀法对支气管哮喘防治作用的机理。方法:通过卵蛋白致敏、激发建立支气管哮喘小鼠模型,于激发后7天和21天分批取材,用RT-PCR法检测肺组织匀浆中T-bet、GATA-3 mRNA表达。结果:激发7天后:与空白组比较:模型组T-bet明显降低,GATA-3明显升高,T-bet/GATA-3比值明显降低;两用药组T-bet及T-bet/GATA-3比值均明显降低,组间无明显差异。与模型组比较:两用药组T-bet均无明显变化,GATA-3均明显降低,T-bet/GATA-3比值均明显升高;组间无明显差异。哮喘激发21天后:与空白组比较:模型组T-bet明显降低,GATA-3明显升高,T-bet/GATA-3比值明显降低;两用药组T-bet及T-bet/GATA-3比值均明显降低。与模型组比较:地塞米松组T-bet无明显差异,GATA-3明显降低,T-bet/GATA-3比值明显升高;中药组T-bet明显升高,GATA-3明显降低,T-bet/GATA-3比值明显升高;两组间无明显差异。结论:BALB/c小鼠经OVA致敏及雾化激发后,使转录因子T-bet/GATA-3表达失衡,模型小鼠出现气道炎症及气道重建的相关表现,符合中医病机中的"痰瘀互结"。化痰祛瘀法对T-bet/GATA-3表达失衡具有双向纠偏的调节作用。对改善气道慢性炎症及气道重建方面,其疗效与地塞米松相近,但作用环节较对照组更为广泛,且随用药时间延长,有累加效应。     

玉屏风散对肺气虚型变应性鼻炎转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的通过建立肺气虚型变应性鼻炎(AR)动物模型,探讨玉屏风散对肺气虚型变应性鼻炎转录因子T-bet/GATA-3表达影响,为益气固表法治疗AR提供基因分子水平的依据。方法采用烟熏法及卵清蛋白为过敏原对大鼠致敏,建立大鼠肺气虚-变应性鼻炎病证复合模型,并将大鼠分为对照组、AR组、AR+肺气虚组、AR+肺气虚治疗组,予相应药液灌胃。采用ELISA检测大鼠血浆中IFN-γ与IL-4的浓度;QRT-PCR检测血浆中GATA-3、T-bet mRNA的表达情况;HE染色观察大鼠鼻黏膜结构与炎症情况。结果 HE染色结果显示,AR组呈慢性炎症表现,黏膜上皮排列紊乱,部分区域坏死脱落;AR+肺气虚治疗组黏膜上皮细胞修复良好。与对照组比较,AR组IL-4浓度和GATA-3 mRNA表达明显升高(P0.05),T-bet m RNA表达明显降低(P0.05);与AR组比较,AR+肺气虚治疗组IL-4浓度和GATA-3 m RNA表达明显降低(P0.05),T-bet m RNA表达明显升高(P0.05)。结论玉屏风散通过抑制GATA-3,增强T-bet,从而调节Th1/Th2细胞因子平衡,对肺气虚型变应性鼻炎大鼠发挥治疗作用。     

五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠肺组织初始CD4~+T细胞转录因子表达的影响

目的:探讨五虎汤对病毒诱发幼年SD哮喘大鼠肺组织初始CD4+T细胞转录因子mRNA及蛋白表达的影响。方法:采用RSV诱导,OVA致敏加激发制备大鼠哮喘模型。造模成功后,随机分成五虎汤高、中、低(4.752g/kg、2.376g/kg、1.188g/kg)剂量组,阳性对照组(地塞米松片,2.4mg/kg),哮喘模型组和空白对照组6组。治疗14d后,取肺组织,分别采用RT-PCR及免疫印迹法检测肺组织初始CD4+T细胞转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA及其蛋白表达情况。结果:模型组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白较正常对照组表达降低(P0.05),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白较正常对照组表达升高(P0.05);与模型组比较,五虎汤干预后,高剂量组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01),GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01);中剂量组T-bet、Foxp3 mRNA及蛋白表达升高(P0.05)、GATA-3、RORγt mRNA及蛋白表达降低(P0.05)。结论:五虎汤通过抑制转录因子GATA-3、RORγt表达、促进转录因子T-bet、Foxp3表达,进一步调控Thl/Th2、Th17/Treg细胞平衡和免疫功能进而抑制哮喘气道炎症形成。     

三拗汤对支气管哮喘大鼠Th1,Th2转录调节机制的研究

目的:重点探讨三拗汤对哮喘大鼠Th1/Th2细胞的调节作用,并深入研究其对转录因子GATA-3和T-bet水平的干预作用.方法:以鸡卵清蛋白腹腔注射并雾化吸入复制大鼠哮喘模型,分别以不同剂量三拗汤及地塞米松灌服,检测用药前后哮喘大鼠肺泡灌洗液中细胞因子IL-4和IFN-γ含量;RT-PCR方法检测肺组织中T-bet和GATA-3 mRNA表达水平.结果:中药中剂量组大鼠BALF中IL-4水平较其他组明显减低,IFN-γ水平升高,IL-4/IFN-γ较哮喘组明显减小,肺组织GATA-3和T-bet转录因子mRNA表达水平分别与IL-4及IFN-γ变化水平相一致.结论:中药三拗汤可能通过对哮喘大鼠Th1/Th2细胞转录因子的调节作用,达到抑制哮喘大鼠气道炎症的目的.     

从祛瘀化痰法探讨平喘方及拆方对哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的干预机制

目的研究平喘方及拆方干预哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的作用机制,并探究"化痰"与"祛瘀"两种治法干预气道炎症的疗效。方法对60只BALB/c雄性小鼠按随机数字表分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组、平喘方组、拆方1(祛瘀方)组、拆方2(化痰方)组共6组,每组10只,运用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝腹腔注射致敏并雾化吸入激发,建立小鼠支气管哮喘模型,末次激发后给药7 d并杀检取材,运用HE染色观察各组小鼠气道及肺组织病理改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中白介素4(IL-4)、干扰素γ(INF-γ)、白介素17(IL-17)、白介素10(IL-10)表达,蛋白质印迹法法(Western Blot)检测肺组织中转录因子GATA结合蛋白3(GATA-3)、T盒子转录因子(T-bet)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组病理染色显示炎症细胞侵润明显,管壁及肺组织结构受到破坏,周围组织伴有炎性物质渗出,IL-4、IL-17、GATA-3表达增高(P<0.05),INF-γ、IL-10、T-bet表达减低(P<0.05)。与模型组对比,平喘方及拆方组可显著减少病理染色中的气道炎症程度,减低IL-4、IL-17、GATA-3表达(P<0.05),升高INF-γ、IL-10、T-bet表达(P<0.05),拆方组间比较祛瘀方在改善气道病理优于化痰方,在降低IL-4、IL-17、GATA-3因子水平具有优于化痰方的统计学趋势。结论:平喘方及拆方可减少哮喘小鼠IL-4、IL-17、GATA-3表达,升高INF-γ、IL-10、T-bet表达,改善Th1/Th2免疫失衡,祛瘀与化痰两种治法相比较,祛瘀法在改善气道炎症方面疗效较优。     

艾灸对类风湿性关节炎大鼠Th1/Th2漂移特异性转录因子T-bet和GATA-3的干预作用

目的:观察艾灸对类风湿性关节炎大鼠Th1/Th2漂移特异性转录因子T-bet和GATA-3的干预作用。方法:30只大鼠用弗氏佐剂进行造模,随机分成模型组、艾灸组,西药组三组,10只正常大鼠作为空白对照组,经处理后,观察T-bet和GATA-3的表达。结果:模型组大鼠的脾脏细胞中T-bet表达较正常组明显增高,差异存在着显著性意义(P0.01),艾灸组和西药组T-bet表达升高,但差异无显著性意义(P0.05);模型组大鼠的脾脏细胞中GATA-3表达较正常组降低,差异存在着显著性意义(P0.05);艾灸和西药组中脾脏细胞中GATA-3表达较正常组降低,但差异无显著性意义(P0.05)。结论:艾灸可能通过抑制RA大鼠T细胞向Th1细胞分化,降低T-bet转录,促进GATA3转录,调整Thl/Th2功能失衡达到治疗目的。     

黄芪、当归、忍冬藤水提冻干粉组合对白细胞介素1β诱导大鼠T细胞亚群增殖与分化的影响

目的探讨黄芪、当归、忍冬藤活性成分对白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导大鼠T细胞增殖和分化的影响。方法 IL-1β诱导T细胞分化,IL-β抑制剂为阳性对照组,黄芪、当归、忍冬藤水提物冻干粉干预;流式细胞仪检测大鼠脾淋巴细胞T细胞亚群比率的改变,Western-Blot检测T辅助细胞(helper T cell,Th)特异性转录因子T-bet、GATA-3、ROR-γ表达差异。结果黄芪、当归、忍冬藤水提物冻干粉组合能显著降低细胞毒T细胞比率,显著降低Th1和Th17、升高Th2和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)比率;升高GATA-3,并降低ROR-γ和T-bet的表达。结论黄芪、当归、忍冬藤水提物冻干粉组合可能通过抑制IL-1β诱导的T细胞异常增殖和分化,缓解炎症免疫应答,恢复T细胞免疫应答的动态平衡。     

Effect and mechanism of ligustrazine on Th1/Th2 cytokines in a rat asthma model

Ligustrazine is an alkaloid isolated from the rhizome of Chuanxiong (Ligusticum chuanxiong Hort), which is known to possess antioxidant, anti-inflammatory, anti-fibrosis and immunomodulative effects. It is used clinically to treat asthma as an assistant therapy of glucocorticoid. The purpose of this study was to explore the effects of intraperitoneal ligustrazine on Th1/Th2 cytokines in a rat asthma model and the underlying mechanism. SD rats were sensitized and challenged with ovalbumin (OVA) to establish an asthmatic model. Within 24 hours after the last ovalbumin challenge, changes in airway histology were observed. The concentrations of IL-4 and IFN-gamma in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were measured by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The protein expressions of GATA-3 and T-bet in lung were measured by Western blot. The results showed that an increase of Th2 cytokine and an inhibition of Th1 cytokine were accompanied by an increased expression of GATA-3 protein and a decreased expression of T-bet protein in rat asthmatic airways compared to those in normal control group. Intraperitoneal ligustrazine administration could significantly lower the level of IL-4 in BALF and the expression of GATA-3 protein in lung and also increase the level of IFN-gamma and T-bet in asthmatic rats, resulting in a decreased percentage of eosinophils (EOS) in BALF and ameliorated airway inflammatory cell infiltration. In conclusion, ligustrazine inhibits OVA induced airway inflammation by modulating key master switches GATA-3 and T-bet that result in reversing the Th2 cytokine patterns in asthma.     

龙脷平喘膏抗哮喘大鼠气道炎症作用及机制

目的:探讨龙脷平喘膏对发作期小儿哮喘气道炎症的影响。方法:48只大鼠按体重均衡随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组(1 mg·kg-1)、龙脷平喘膏高、中、低剂量组(74.8,37.4,18.7 g·kg-1),每组8只。采用卵清蛋白(OVA)复制哮喘大鼠模型,连续给药1周,记录大鼠过敏性鼻炎症状,取鼻黏膜和肺组织,观察鼻黏膜及肺组织病理形态变化,并检测肺组织炎症细胞凋亡率和原癌基因Fas(Fas mRNA),B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2 mRNA)的表达。结果:除空白组外,其他各组在引发过敏性哮喘的同时均诱发了不同程度的过敏性鼻炎症状,且模型组鼻黏膜和肺组织均见嗜酸粒细胞浸润及相似的病理形态学改变;与空白组比较,模型组大鼠搔鼻和喷嚏的次数显著增多(P<0.01);与模型组比较,龙脷平喘膏能明显减少哮喘大鼠搔鼻和喷嚏的次数(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠肺组织中炎症细胞凋亡率显著降低(P<0.01);与模型组比较,龙脷平喘膏高、中剂量组大鼠肺组织中炎症细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且肺组织中促炎症细胞凋亡的调控基因Fas mRNA阳性表达率显著升高(P<0.01),抑制炎症细胞凋亡的调控基因Bcl-2 mRNA阳性表达率则显著下降(P<0.01)。结论:龙脷平喘膏能明显抑制哮喘大鼠气道炎症,机制可能与其逆转Fas/Bcl-2失衡,促进炎症细胞凋亡有关。     

悬灸对哮喘大鼠转录因子ROR-γt、GATA-3及T-bet的影响

目的:探讨ROR-γt与中性粒细胞哮喘、GATA-3和T-bet与嗜酸粒细胞哮喘的相关性及悬灸对他们的影响。方法:将75只SD雄性大鼠按随机数字表法分为5组各15只,包括A组(正常组)、B组(中性粒模型组)、C组(中性粒悬灸组)、D组(嗜酸粒模型组)、E组(嗜酸粒悬灸组),免疫组化法及RT-PCR法检测ROR-γt、GATA-3、T-bet蛋白及基因的表达。结果:中性粒模型组以高表达ROR-γt(显著高于嗜酸粒模型组),而嗜酸粒模型组以高表达GATA-3和T-bet(显著高于中性粒模型组);悬灸后悬灸组与相对应模型组比较各转录因子表达皆有非常显著性降低。结论:中性粒细胞哮喘以ROR-γt转录因子的高表达为主,而嗜酸粒细胞哮喘以GATA-3、T-bet的高表达为主,而悬灸可以调节ROR-γt、GATA-3、T-bet的表达,从而降低哮喘气道炎症反应。     

麻杏芎葶合剂对哮喘模型大鼠气道炎症的调控作用

目的 观察麻杏芎葶合剂对哮喘大鼠气道炎症的作用及机制.方法 SD大鼠100只随机分为6组:正常对照组、模型对照组各16只;麻杏芎葶合剂低、中、高剂量组(低、中、高剂量组),地塞米松组各17只.采用卵白蛋白溶液皮下注射和超声雾化器激发建立哮喘大鼠模型,各组给予相应药物7天后处死,取肺组织进行HE染色观察病理变化;采用免疫组织化学法和原位分子杂交(ISH)法检测肺组织的神经生长因子(NGF)及NGF mRNA水平;采用免疫组化学法检测肺组织蛋白激酶C(PKC)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平;采用RT-PCR法检测肺组织转录因子T-bet mRNA,GATA-3 mRNA;采用ELISA法检测血清细胞因子白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)表达.结果 与模型对照组比较,低、中、高剂量组肺组织炎性细胞浸润减少,支气管周围水肿减轻,气道上皮损伤减小.与模型对照组比较,中、低剂量组T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值明显下降(P＜0.01);低、中、高剂量组及地塞米松组NGF mRNA和NGF蛋白表达明显低于模型对照组(P＜0.01);低、中、高剂量组CGRP表达低于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01),低、中、高剂量组与地塞米松组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与模型对照组比较,中、低剂量组IFN-γ/IL-4比值明显下降(P＜0.05或P＜0.01). 结论 麻杏芎葶合剂能够减少炎性细胞在肺组织中的浸润,减轻哮喘气道炎症反应,缓解哮喘病情.     

Effects of cryptoporus polysaccharide on rat allergic rhinitis associated with inhibiting eotaxin mRNA expression

Aqueous extract from the fruiting body of Cryptoporus volvatus has been reported to present anti-tumor, anti-allergy, anti-inflammation and immunomodulatory activities. However, the effect mechanisms of anti-allergy and anti-inflammation are poorly understood. The aim of study is to evaluate whether Cryptoporus polysaccharides (CP) extracted from fruiting body of Cryptoporus volvatus decrease the development of nasal symptoms, airway hyperresponsiveness (AHR) to methacholine (MCh) and the infiltration of eosinophils in nasal mucosa in rat model of allergic rhinitis, and investigate a possible action mechanism of CP by detecting the expression of eotaxin mRNA in nasal mucosa and lung tissues. Rats were immunized with ovalbumin and consecutive topical antigen instillation was performed. Repeated intranasal ovalbumin challenge caused rhinitis symptom, AHR to MCh, eosinophil infiltration and histological alterations into the nasal mucosa and increase of eotaxin mRNA expression in nasal mucosa and lung tissue were examined. Pretreatment with CP 3, 9 and 27 mg kg(-1) (ig) decreased the numbers of sneezing 27.4%, 38.4% and 44.3% and nasal rubbing 27.5%, 34.9% and 47.7% comparison with model group, respectively. CP caused a dose-related inhibition of MCh-induced AHR. CP 27 mg kg(-1) decreased the expression of eotaxin mRNA in the nasal mucosa by 35%. These results suggest CP can relieve the symptom, eosinophil infiltration and injury of tissue in nasal mucosa and lung tissue and AHR of allergic rhinitis in rats. Its action mechanism may be associated with the decrease of eotaxin mRNA expression.