寿胎丸对小鼠自然流产模型蜕膜组织细胞因子信号转导抑制因子基因表达的影响

目的:探讨寿胎丸对小鼠自然流产模型蜕膜组织细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)中SOCS1mRNA,SOCS3mRNA表达的影响。方法:设立小鼠正常妊娠与反复自然流产模型,并将反复自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组、寿胎丸低,中,高剂量组,应用原位杂交法检测孕14d各组蜕膜组织SOCS1mRNA和SOCS3mRNA表达。结果:SOCS1mRNA和SOCS3mRNA在各组均有表达,模型组SOCS1mRNA比正常妊娠组明显升高(P<0.01),而SOCS3mRNA比正常妊娠组明显降低(P<0.01);寿胎丸低,中,高剂量组SOCS1mRNA表达明显低于模型组(P<0.01),而SOCS3mRNA明显高于模型组(P<0.01)。结论:寿胎丸可能通过降低自然流产模型小鼠蜕膜组织SOCS1mRNA表达,而升高SOCS3mRNA表达,从而调控Th向Th2分化,以达到改善妊娠预后的目的。     

寿胎丸对自然流产模型小鼠母胎界面TNF-αmRNA和IL-4mRNA表达的影响

目的:探讨寿胎丸对反复自然流产模型小鼠蜕膜组织Th1/Th2型细胞因子TNF-αmRNA和IL-4mRNA表达的影响.方法:设立正常妊娠与自然流产模型,并将自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组,寿胎丸低剂量组,寿胎丸中剂量组,寿胎丸高剂量组,应用原位杂交法检测孕14 d各组蜕膜组织TNF-αmRNA和IL-4mRNA的表达.结果:TNF-αmRNA和IL-4mRNA在各组均有表达,与正常妊娠组相比模型组TNF-αmRNA明显升高(P＜0.01),IL-4mRNA表达明显降低(P＜0.05);与模型组相比寿胎丸低、中、高剂量组TNF-αmRNA表达明显降低(P＜0.01),IL-4mRNA表达明显升高(P＜0.05),但与正常妊娠组相比均无明显差异(P＞0.05).结论:寿胎丸可能通过降低自然流产小鼠模型TNF-αmRNA表达、升高IL-4mRNA表达.从而调控Th1/Th2型细胞因子的平衡,以达到治疗反复自然流产的目的.     

肾虚型早期自然流产患者蜕膜PR表达的研究

目的:探讨肾虚型早期SA与PR的相关性,分析其中医肾虚证型规律,以揭示肾虚型自然流产的部分实质.方法:选择肾虚型早期自然流产清宫孕妇11例为实验组,设立非肾虚型早期自然流产清宫孕妇20例和正常早期妊娠要求人工流产者10例为对照组.运用RT-PCR方法检测蜕膜PRmRNA的表达.结果:肾虚型早期自然流产患者蜕膜PR的表达明显低于正常早孕要求人工流产的患者(P＜0.01),同时也发现其表达明显低于非肾虚型早期自然流产的患者PR的表达(P＜0.01).结论:通过研究,发现蜕膜PR低表达与肾虚型早期自然流产的发生有着密切的关系.     

寿胎丸对小鼠自然流产模型蜕膜组织SOCS1蛋白表达影响

目的:探讨寿胎丸对反复自然流产模型小鼠蜕膜组织SOCS1蛋白表达的影响.方法:设立正常妊娠与自然流产模型,并将自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组、寿胎丸低剂量组、寿胎丸中剂量组、寿胎丸高剂量组,应用免疫组化法检测孕14 d各组蜕膜组织SOCS1蛋白的表达.结果:SOCS1在各组均有表达,模型组SOCS1比正常妊娠组明显升高(P<0.05),寿胎丸低、中、高剂量组SOCS1明显低于模型组(P<0.05),但与正常妊娠组差异无统计学意义(P>0.05).结论:寿胎丸可能通过降低自然流产小鼠模型SOCS1表达,调控Th向Th2分化,以达到治疗反复自然流产的目的.     

正常妊娠与自然流产模型小鼠蜕膜组织SOCS蛋白表达的差异

目的:检测细胞因子信号转导抑制因子SOCS1、SOCS2、SOCS3在正常妊娠模型与反复自然流产模型小鼠的不同表达。方法:建立反复自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2及正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB/c,取孕14 d的蜕膜组织,免疫组化方法检测SOCS1、SOCS2、SOCS3蛋白的表达。结果:SOCS1、SOCS2、SOCS3在自然流产小鼠模型及正常妊娠小鼠模型蜕膜组织均有表达,但与正常妊娠组比较,SOCS1在反复自然流产小鼠升高(P<0.05),而SOCS3表达降低(P<0.05),SOCS2无明显差异(P>0.05)。结论:SOCS1、SOCS3可能在妊娠的维持中发挥主要作用。     

正常妊娠与自然流产模型小鼠蜕膜组织细胞因子信号转导抑制因子基因表达的差异

目的:检测细胞因子信号转导抑制因子SOCS1mRNA、SOCS2mRNA、SOCS3mRNA在正常妊娠模型与反复自然流产模型小鼠的不同表达。方法:建立反复自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2及正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB/c,取孕14d的蜕膜组织,原位杂交方法检测SOCS1mRNA、SOCS2mRNA、SOCS3mRNA基因的表达。结果:SOCS1mRNA、SOCS2mRNA、SOCS3mRNA在自然流产小鼠模型及正常妊娠小鼠模型蜕膜组织均有表达,与正常妊娠组比较,在反复自然流产小鼠SOCS1mRNA表达升高(P<0.01),而SOCS3mRNA表达降低(P<0.01)。结论:SOCS1mRNA、SOCS3mRNA可能在妊娠的维持中发挥主要作用。     

寿胎丸对自然流产模型小鼠母胎界面INF-γ和IL-10表达的影响

目的:探讨寿胎丸对反复自然流产模型小鼠蜕膜组织Th1/Th2细胞因子IFN-γ和 IL-10表达的影响.方法:建立正常妊娠与自然流产模型,并将自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组,寿胎丸低剂量、中剂量组、高剂量组,应用免疫组化法检测孕14天各组蜕膜组织IFN-γ和IL-10的表达.结果:IFN-γ和IL-10在各组均有表达,与正常妊娠组相比模型组IFN-γ明显升高(P<0.05),IL-10表达明显降低(P<0.05);与模型组相比寿胎丸低、中、高剂量组IFN-γ表达明显降低(P<0.05),IL-10表达明显升高(P<0.05),与正常妊娠组相比均无明显差异(P>0.05).结论:寿胎丸可能通过降低自然流产小鼠模型IFN-γ表达、升高IL-10表达,从而调控Th1/Th2型细胞因子的平衡,以达到治疗反复自然流产的目的.     

补肾活血方对不明原因复发性流产患者分泌晚期血清中IL-11、IL-11R的影响研究

目的探究补肾活血方对肾虚血瘀型不明原因复发性流产(URSA)患者分泌晚期血清中IL-11及其受体的影响。方法第一部分实验测定肾虚血瘀型URSA患者15例(6~10周)及无自然流产病史正常早孕的15例(6~10周)流产蜕膜组织中IL-11、IL-11R及蜕膜化标志物PRL、IGFBP-1mRNA的含量。第二部分实验将未孕的肾虚血瘀型URSA患者80例,随机分为服用中药补肾活血方实验组(40例)、服用西药阿司匹林对照组(40例),收集有过至少一次妊娠史的正常妇女40例作为正常组,检测未孕的肾虚血瘀型URSA患者治疗前后与正常妊娠妇女分泌晚期血清中IL-11、IL-11R及蜕膜化标志物PRL、IGFBP-1的表达水平。结果IL-11、IL-11R、PRL及IGFBP-1mRNA表达在URSA组中较正常组中低;IL-11、IL-11R、PRL、IGFBP-1水平在URSA患者血清中较正常妊娠女性血清中表达低;URSA患者口服补肾活血方治疗4周后,血清中IL-11、IL-11R、PRL、IGFBP-1表达升高,结果好于阿司匹林,且与正常人血清无显著差异。结论肾虚血瘀型URSA患者蜕膜组织中IL-11、IL-11R及蜕膜化标志物PRL、IGFBP-1表达减少,与URSA妊娠早期蜕膜化不足流产相关。补肾活血方可能通过适当升高肾虚血瘀型URSA患者分泌晚期血清中IL-11、IL-11R及蜕膜化标志物PRL、IGFBP-1的表达,促进滋养细胞蜕膜化和胚胎发育,并且比西药阿司匹林效果更显著。     

寿胎丸对自然流产模型小鼠母胎界面TNF-α和IL-4表达的影响

目的:探讨寿胎丸对反复自然流产模型小鼠蜕膜组织Th1/Th2型细胞因子TNF-α和IL-4表达的影响.方法:建立正常妊娠与自然流产模型,并将自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组,寿胎丸低剂量组、中剂量、高剂量组,应用免疫组化法检测孕14天各组蜕膜组织TNF-α和IL-4的表达.结果:TNF-α和IL-4在各组均有表达,与正常妊娠组相比模型组TNF-α表达明显升高(P<0.05),IL-4表达明显降低(P<0.05);与模型组相比寿胎丸低、中、高剂量组TNF-α表达明显降低(P<0.05),IL-4表达明显升高(P<0.05),与正常妊娠组相比均无明显差异(P>0.05).结论:寿胎丸可能通过降低自然流产小鼠模型TNF-α表达、升高IL-4表达,从而调控Th1/Th2型细胞因子的平衡,以达到治疗反复自然流产的目的.     

血小板反应蛋白-1在复发性流产患者绒毛膜组织中的表达及其价值探讨

目的探讨复发性流产(RSA)患者绒毛膜组织中血小板反应蛋白-1(TSP-1)的表达水平及临床意义。方法收集42例行早期人工流产的复发性流产患者记为观察组,选择同期35例既往分娩过足月正常胎儿、无不良生育史且自愿行人工流产产妇记为对照组,2组流产时分别留取绒毛、蜕膜组织并采用免疫组化SP法检测TSP-1表达水平,同时采用CD34标记血管内皮细胞检测绒毛、蜕膜组织中微血管密度(MVD)。结果 2组绒毛组织中TSP-1阳性区域灰度值均明显低于蜕膜组织(P均0.05),即绒毛组织中TSP-1表达量高于蜕膜组织,观察组绒毛组织中TSP-1灰度值明显低于对照组(P0.05),即RSA患者绒毛组织中TSP-1表达量高于对照组。观察组绒毛组织中MVD分别较对照组、本组蜕膜组织低(P均0.05),而对照组绒毛组织中MVD显著高于蜕膜组织(P0.05)。RSA患者绒毛、蜕膜组织中TSP-1灰度值与MVD均呈显著正相关(r=0.584,0.397,P均0.05),即绒毛、蜕膜组织中TSP-1表达量与MVD呈显著负相关。结论 RSA患者绒毛、蜕膜组织中TSP-1表达量异常升高,绒毛组织中MVD较蜕膜组织异常偏低,RSA患者绒毛膜组织中TSP-1的异常高表达可能是血管生成障碍、复发性流产的重要影响因素。     

寿胎丸对小鼠自然流产模型蜕膜组织SOCS3蛋白表达影响

目的:探讨寿胎丸对反复自然流产模型小鼠蜕膜组SOCS3蛋白表达的影响.方法:设立正常妊娠与自然流产模型.并将自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组、寿胎丸低剂量组、寿胎丸中剂量组、寿胎丸高剂量组,应用免疫组化法检测孕14 d各组蜕膜组织SOCS3蛋白的表达.结果:SOCS3在各组均有表达,模型组的SOCS3的表达明显低于正常组(P＜0.05),寿胎丸低、中、高剂量的SOCS3表达高于模型组(P＜0.05),但与正常妊娠组无明显差异(P＞0.05).结论:寿胎丸可能通过提高自然流产小鼠模型SOCS3蛋白表达水平,调控Th1向Th2分化,以达到治疗反复自然流产的目的.     

寿胎丸对自然流产模型小鼠母胎界面INF-γ和IL-10表达的影响

目的:探讨寿胎丸对反复自然流产模型小鼠蜕膜组织Th1/Th2细胞因子IFN-γ和IL-10表达的影响。方法:建立正常妊娠与自然流产模型,并将自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组,寿胎丸低剂量、中剂量组、高剂量组,应用免疫组化法检测孕14天各组蜕膜组织IFN-γ和IL-10的表达。结果:IFN-γ和IL-10在各组均有表达,与正常妊娠组相比模型组IFN-γ明显升高(P&lt;0.05),IL-10表达明显降低(P&lt;0.05);与模型组相比寿胎丸低、中、高剂量组IFN-γ表达明显降低(P&lt;0.05),IL-10表达明显升高(P&lt;0.05),与正常妊娠组相比均无明显差异(P&gt;0.05)。结论:寿胎丸可能通过降低自然流产小鼠模型IFN-γ表达、升高IL-10表达,从而调控Th1/Th2型细胞因子的平衡,以达到治疗反复自然流产的目的。     

益肾安胎中药对肾虚型复发性流产母胎界面PI3K信号通路的影响

目的:阐述磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路的相关分子的表达和肾虚型复发性流产的关系,探讨益肾安胎中药对母胎界面PI3K信号通路主要相关分子表达的影响。方法:选择30例肾虚型复发性流产的患者为实验组,30例同期正常早期妊娠的孕妇要求人工流产者为对照组。原代人蜕膜细胞培养,益肾安胎中药处理人蜕膜细胞为中药组,同期设空白对照组。免疫组化法检测PI3K在子宫蜕膜中的表达。RT-PCR分别检测两组子宫蜕膜组织以及两组蜕膜细胞中PI3K信号通路上相关分子血清和糖皮质激素激酶(SGK1)、透明质酸合成酶(HAS1、HAS2、HAS3),透明质酸酶(Hyal-1、Hyal-2、Hyal-3)mRNA相对表达量。结果:PI3K SGK1、HAS1、HAS3和Hyal-2在肾虚复发性流产组子宫蜕膜组织中的相对表达量显著低于正常妊娠对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。HAS2在肾虚复发性流产组子宫蜕膜组织中的相对表达量低于正常妊娠组,差异具有统计学意义(P0.05)。益肾安胎中药处理蜕膜细胞,PI3K在中药组中的相对表达量明显高于空白组,差异具有统计学意义(P0.01),SGK1、HAS1和Hyal-2在中药组中的相对表达量高于空白组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:肾虚型复发性流产与子宫蜕膜中PI3K信号通路的下调相关,益肾安胎中药能上调母胎界面PI3K信号通路。     

寿胎丸对自然流产模型小鼠母胎界面TNF-α和IL-4表达的影响

目的:探讨寿胎丸对反复自然流产模型小鼠蜕膜组织Th1/Th2型细胞因子TNF-α和IL-4表达的影响。方法:建立正常妊娠与自然流产模型,并将自然流产模型小鼠随机分为4组,分别为模型组,寿胎丸低剂量组、中剂量、高剂量组,应用免疫组化法检测孕14天各组蜕膜组织TNF-α和IL-4的表达。结果:TNF-α和IL-4在各组均有表达,与正常妊娠组相比模型组TNF-α表达明显升高(P&lt;0.05),IL-4表达明显降低(P&lt;0.05);与模型组相比寿胎丸低、中、高剂量组TNF-α表达明显降低(P&lt;0.05),IL-4表达明显升高(P&lt;0.05),与正常妊娠组相比均无明显差异(P&gt;0.05)。结论:寿胎丸可能通过降低自然流产小鼠模型TNF-α表达、升高IL-4表达,从而调控Th1/Th2型细胞因子的平衡,以达到治疗反复自然流产的目的。     

补肾活血方对不明原因复发性流产外周血中IL-2、IL-6的影响

目的:探讨补肾活血方对不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)患者外周血中IL-2、IL-6的影响。方法:本实验研究共分为两部分,第一部分选取2016年1月—2017年3月符合纳入标准的URSA妊娠失败患者及正常早孕人工流产者各15例,收集其蜕膜组织,用实时定量荧光PCR(RT-PCR)方法检测两组患者蜕膜组织中的IL-2Rα、IL-2Rβ、IL-6RαmRNA的表达量。第二部分收集符合纳入标准的URSA患者60例(孕6～8周)作为研究对象,分为补肾活血方联合地屈孕酮实验组30例和单用地屈孕酮对照组30例治疗4周。于入组及入组4周后收集两组患者静脉血,用ELISA法测定两组血清中IL-2、IL-6含量。结果:(1)IL-2Rα、IL-2Rβ在URSA患者蜕膜组织中的表达明显高于正常人流组(P0.05),IL-6Rα在URSA患者蜕膜组织中的表达明显低于正常人流组(P0.05)。(2)IL-2在患者外周血中的含量治疗后显著降低,IL-6则升高,且实验组比对照组结果更加明显(P0.05)。结论:URSA患者蜕膜组织中IL-2Rα、IL-2Rβ高表达,IL-6Rα的低表达,表明IL-2、IL-6细胞因子在URSA患者和正常早孕患者蜕膜组织中表达不同,提示IL-2、 IL-6可能参与了URSA的发病过程。补肾活血方可能通过降低患者外周血中IL-2的表达,升高IL-6的表达来改善URSA患者的妊娠结局。补肾活血方能够明显改善URSA患者外周血中P、E2、HCG的含量。     

补肾活血法调节孕激素对不明原因复发性流产分泌晚期蜕膜化的影响

目的:探讨补肾活血法对肾虚血瘀型不明原因复发性流产(Unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)患者分泌晚期血清孕激素(Progesterone,P)与蜕膜化因子泌催乳素(Prolactin,PRL)、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(Insulin-Like Growth Factor Binding Protein 1,IGFBP-1)的作用及其可能机制。方法:收集30例已孕观察者[其中15例正常人工流产妇女(正常组)与15例URSA妊娠失败患者(URSA组)]和55例肾虚血瘀型URSA未孕观察者[随机分组为补肾活血法治疗组(35例)和阿司匹林对照组(20例),分别治疗4周]。运用RT-PCR法检测正常组和URSA组蜕膜组织中孕激素受体(Progesterone receptor,PR)、PRL、IGFBP-1 mRNA含量。采用ELISA法测定治疗组和对照组分泌晚期(月经周期第26天)血清中P、PRL、IGFBP-1的水平。结果:(1)URSA组PR、PRL、IGFBP-1 mRNA含量较正常组明显降低;(2)治疗组分泌晚期血清中P、PRL、IGFBP-1水平升高,且与对照组相比水平更接近于正常妇女水平。结论:(1)URSA分泌晚期血清P、蜕膜PR和PRL、IGFBP-1表达异常降低与URSA妊娠早期蜕膜化不足流产有关;(2)补肾活血法可以提高肾虚血瘀型URSA血清P、PRL、IGFBP-1水平为正常妊娠持续提供基础。     

妊娠组织中转化生长因子及其受体与早期复发性自然流产相关性研究

目的:了解转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体(TβR、Ⅰ、Ⅱ)在绒毛及蜕膜组织中的表达情况,初步探讨(TGF-β1)及(TβR)与早期复发性自然流产(RSA)的关系.方法:应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测38例RSA患者和35例正常早孕妇女的绒毛及蜕膜组织中TGF-β1mRNA,TβR(Ⅰ、Ⅱ型)mRNA的表达情况.结果:TGF-β1及TβR、Ⅰ、Ⅱ型在正常早孕及RSA绒毛、蜕膜组织中均有表达,TGF-β1在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为(0.18&#177;0.02)、 (0.12&#177;0.01),对照组为(0.98&#177;0.03)、 (0.72&#177;0.02);TβR-Ⅰ在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为(0.15&#177;0.03)、 (0.11&#177;0.03),对照组为(0.71&#177;0.01)、 (0.73&#177;0.01);TβR-Ⅱ在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为(0.16+0.01)、 (0.09&#177;0.01),对照组为(0.68&#177;0.02)、 (0.86&#177;0.02);上述指标RSA组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:TGF-β1及TβR在绒毛及蜕膜组织中表达下降可能是早期复发性自然流产的重要原因之一.     

益气补肾实验方对自然流产模型小鼠foxp3、STAT5、NF-κB mRNA表达的影响北大核心CSCD

目的观察益气补肾实验方对自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞中foxp3mRNA表达及蜕膜组织foxp3、STAT 5、NF-κB mRNA表达的影响。方法将雌性CBA/J与雄性DBA/2或雄性BALB/c小鼠以2∶1合笼交配,制备自然流产模型。将CBA/J孕鼠分为5组:阴性对照组、阳性对照组、中药高剂量治疗组、中药中剂量治疗组、中药低剂量治疗组,每组10只;阴性对照组于妊娠第0天至处死日每天以10mg/kg的剂量灌服生理盐水1次;阳性对照组于妊娠第4天以10mg/kg的剂量单次灌服环孢素A溶液;中药高、中、低剂量治疗组于妊娠第0天至处死日每日分别按48、24、12g/kg的剂量灌服益气补肾实验方1次。将孕鼠于妊娠第9、14天处死,取新鲜脾脏用于提取Treg细胞,并取孕鼠蜕膜组织-80℃冻存。采用磁珠分选的方法分离和纯化脾脏CD4+CD25+细胞,采用流式细胞术鉴定分选前后CD4+CD25+的纯度,运用RT-PCR分析CD4+CD25+细胞中foxp3mRNA的表达情况;运用RT-PCR分析蜕膜组织中foxp3、STAT 5A、STAT 5B、NF-κB mRNA的表达情况。结果 CD4+CD25+Treg的纯度可达到88%以上,经台盼蓝检测其活性大于95%。纯化分离前CD4+CD25+/CD4+平均为13.20%;纯化分离后CD4+CD25+/CD4+平均为91.43%。与阴性对照组比较,阳性对照组、中药高剂量治疗组Treg细胞中foxp3mRNA表达水平明显升高(P<0.05);中药高剂量治疗组较中、低剂量组小鼠脾脏Treg中foxp3mRNA表达升高(P<0.05)。与阴性对照组比较,阳性对照组、中药高、中剂量组9、14天蜕膜组织foxp3、STAT 5BmRNA表达升高(P<0.05);阳性对照组、中药高剂量组9、14天及中药中剂量组蜕膜组织STAT 5A mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);阳性对照组及中药各剂量组蜕膜组织NF-κB mRNA表达降低(P<0.01)。结论益气补肾实验方可上调自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞foxp3mRNA及蜕膜组织中foxp3、STAT 5mRNA表达,下调母胎界面组织中NF-κB mRNA的表达,促进妊娠免疫耐受状态的维持。     

益气补肾实验方对自然流产模型小鼠foxp3、STAT5、NF-κB mRNA表达的影响

目的观察益气补肾实验方对自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞中foxp3mRNA表达及蜕膜组织foxp3、STAT 5、NF-κB mRNA表达的影响。方法将雌性CBA/J与雄性DBA/2或雄性BALB/c小鼠以2∶1合笼交配,制备自然流产模型。将CBA/J孕鼠分为5组:阴性对照组、阳性对照组、中药高剂量治疗组、中药中剂量治疗组、中药低剂量治疗组,每组10只;阴性对照组于妊娠第0天至处死日每天以10mg/kg的剂量灌服生理盐水1次;阳性对照组于妊娠第4天以10mg/kg的剂量单次灌服环孢素A溶液;中药高、中、低剂量治疗组于妊娠第0天至处死日每日分别按48、24、12g/kg的剂量灌服益气补肾实验方1次。将孕鼠于妊娠第9、14天处死,取新鲜脾脏用于提取Treg细胞,并取孕鼠蜕膜组织-80℃冻存。采用磁珠分选的方法分离和纯化脾脏CD4+CD25+细胞,采用流式细胞术鉴定分选前后CD4+CD25+的纯度,运用RT-PCR分析CD4+CD25+细胞中foxp3mRNA的表达情况;运用RT-PCR分析蜕膜组织中foxp3、STAT 5A、STAT 5B、NF-κB mRNA的表达情况。结果 CD4+CD25+Treg的纯度可达到88%以上,经台盼蓝检测其活性大于95%。纯化分离前CD4+CD25+/CD4+平均为13.20%;纯化分离后CD4+CD25+/CD4+平均为91.43%。与阴性对照组比较,阳性对照组、中药高剂量治疗组Treg细胞中foxp3mRNA表达水平明显升高(P0.05);中药高剂量治疗组较中、低剂量组小鼠脾脏Treg中foxp3mRNA表达升高(P0.05)。与阴性对照组比较,阳性对照组、中药高、中剂量组9、14天蜕膜组织foxp3、STAT 5BmRNA表达升高(P0.05);阳性对照组、中药高剂量组9、14天及中药中剂量组蜕膜组织STAT 5A mRNA表达升高(P0.05,P0.01);阳性对照组及中药各剂量组蜕膜组织NF-κB mRNA表达降低(P0.01)。结论益气补肾实验方可上调自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞foxp3mRNA及蜕膜组织中foxp3、STAT 5mRNA表达,下调母胎界面组织中NF-κB mRNA的表达,促进妊娠免疫耐受状态的维持。     

菟丝子总黄酮对大鼠流产模型血清P、PR、Th1／Th2细胞因子表达的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮对大鼠流产模型蜕膜PR及Th1/Th2细胞因子表达的影响,同时观察血清P和PR的变化.方法:对溴隐亭致SD孕鼠流产模型,设菟丝子总黄酮高、低剂量治疗组、达芙通为阳性对照组,于孕12d处死各组大鼠,酶联免疫检测血清P和PRL的水平,免疫组化法检测蜕膜PR的表达,RT-PCR法检测蜕膜Th1/Th2 mRNA的表达.结果:模型组蜕膜IL4、IL-10 mRNA及PR蛋白表达明显低于正常妊娠组,TNF-α、IFN-γ mRNA表达明显高于正常妊娠组,差异有显著性(P<0.05),菟丝子总黄酮可上调流产大鼠蜕膜IL-4、IL-10、PR的表达,下调TNF-α、IFN-γ表达,同时可提高血清P的水平,其作用与孕激素达芙通相似.结论:菟丝子总黄酮可能通过调节母胎界面内分泌-免疫网络平衡而起到维持早孕的作用.