理冲生髓饮药物血清对卵巢癌细胞集落形成和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞株SKOV3集落形成和对Bcl-2蛋白表达的作用机理.方法:以不同剂量理冲生髓饮水煎剂灌饲大鼠,制备药物血清,培养SKOV3卵巢癌细胞株,采用SABC法检测SKOV3细胞Bcl-2蛋白表达和显微镜观察集落形成情况.结果:理冲生髓饮血清组Bcl-2基因蛋白表达低于顺铂组和空白血清组(P＜0.01);显微镜下可见集落内SKOV3细胞数量少,结构松散.结论:理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3的体外生长有抑制作用,可阻断Bcl-2癌基因蛋白的表达,提示Bcl-2是一种重要的细胞生存基因.     

利用基因芯片技术阐述中药复方对卵巢癌细胞株SKOV3的作用机制

目的：研究理冲生髓饮对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3的治疗作用,并利用基因表达谱芯片探索其作用机制。方法：Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备含药血清。提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与基因表达谱芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因。结果：共筛选出显著表达差异基因136种,其中16种基因表达水平下调,120种基因表达上调。结论：理冲生髓饮对SKOV3生长有抑制作用。     

中药复方药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3抑制作用的研究

目的：探讨中药复方理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖和细胞凋亡形态学变化的作用机理。方法：以不同剂量理冲生髓饮水煎荆灌饲大鼠，制备药物血清，培养SKOV3卵巢癌细胞株，应用MTT比色法观察SKOV3细胞生长情况和在电子显微镜下观察中药血清诱导SKOV3细胞凋亡的形态学变化。结果：理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3的体外生长有抑制作用；电镜下可见凋亡的肿瘤细胞表面微绒毛消失，细胞核固缩，染色质凝集成新月状，形成凋亡小体等典型的形态学改变。结论：理冲生髓饮药物血清对人卵巢癌细胞SKOV3的体外增殖有抑制作用并可诱导其细胞凋亡。     

理冲生髓饮有效组分调控炎性因子对卵巢癌侵袭转移影响的研究

目的探究理冲生髓饮有效组分通过调控炎性因子对卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移的影响。方法 (1)将32只大鼠随机分为空白组、生髓饮低剂量组、生髓饮中剂量组和生髓饮高剂量组,每组8只。生髓饮低、中、高剂量组分别给予3.76 g/(kg·d)、7.52 g/(kg·d)、11.28 g/(kg·d)理冲生髓饮灌胃,空白组给予同体积蒸馏水灌胃,均2次/d,连续7 d。末次灌胃结束2 h后眼眶取血,获得含药血清。(2)实验分为空白组、生髓饮低剂量含药血清组、生髓饮中剂量含药血清组、生髓饮高剂量含药血清组和贝伐单抗组,应用鸡胚绒毛尿囊膜血管实验观察各组血管生成情况。(3)选取在体外培养至对数生长期的人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白组、生髓饮低剂量含药血清组、生髓饮中剂量含药血清组、生髓饮高剂量含药血清组和贝伐单抗组,除空白组外,其余组分别加入相应浓度的理冲生髓饮含药血清及5 mg/L贝伐单抗培养,应用MTT法观察各组细胞增殖情况,用Transwell小室实验以及划痕实验检测细胞的迁移和侵袭能力,应用ELISA法检测卵巢癌相关炎性因子蛋白表达水平。结果生髓饮各含药血清组及贝伐单抗组一级和二级血管数目均明显少于空白组(P均0.05),且生髓饮中剂量含药血清组和贝伐单抗组均明显少于生髓饮低、高剂量含药血清组(P均0.05);与空白组比较,生髓饮各含药血清组及贝伐单抗组SKOV3细胞迁移率和侵袭率均显著降低(P均0.05),且生髓饮中、高剂量含药血清组和贝伐单抗组均显著低于生髓饮低剂量含药血清组(P均0.05)。生髓饮各含药血清组及贝伐单抗组血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及生髓饮高剂量含药血清组、贝伐单抗组白细胞介素-1(IL-1)水平均明显低于空白组(P均0.05);生髓饮高剂量含药血清组和贝伐单抗组VEGF、IL-6、TNF-α水平均明显低于生髓饮中、低剂量含药血清组(P均0.05),各组基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论理冲生髓饮有效组分能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的侵袭转移,其作用机制与抑制相关炎性因子的表达、影响肿瘤周围的炎性微环境有关。     

理冲生髓饮对大鼠卵巢肿瘤组织P53和PCNA表达影响的研究

目的:观察理冲生髓饮对大鼠卵巢肿瘤组织P53和PCNA表达的影响。方法:采用二甲基苯蒽(DMBA)卵巢局部埋线法诱发大鼠卵巢肿瘤模型,观察理冲生髓饮对癌组织P53和PCNA表达的影响,免疫组化SABC法检测卵巢肿瘤组织的P53和PCNA阳性表达。结果:大鼠卵巢肿瘤组织存在P53蛋白基因和PC-NA的过度表达。理冲生髓饮组可降低卵巢肿瘤细胞的PCNA和P53的表达,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:P53基因蛋白的突变可能是导致大鼠卵巢恶性肿瘤发生发展的原因,理冲生髓饮对其过度表达有调节作用。     

三和通窍开玄汤对鼻窦炎模型大鼠鼻黏膜生物学通路的影响及意义

目的:应用基因芯片技术分析通窍开玄法对鼻窦炎模型大鼠生物学通路的影响,并探讨其治疗鼻窦炎的生物学机制。方法:实验大鼠随机分为实验组、模型组和正常组,实验组和模型组据Y.Gel的改良方法造模,正常组不做任何处理。造模成功后实验组分别予三和通窍开玄汤低剂量组、三和通窍开玄汤中剂量组、三和通窍开玄汤高剂量组、青霉素V钾片灌胃7天,处死动物取鼻黏膜组织,应用Agilent基因芯片检测各组大鼠鼻黏膜基因表达,利用KEGG数据库分析差异表达基因生物学通路,并进行显著性分析。结果:中药低剂量组差异基因涉及278条通路改变、中药中剂量组差异基因涉及276条通路改变、中药高剂量组差异基因涉及277条通路改变、青霉素V钾片组差异基因涉及193条通路改变。中药各剂量组主要涉及PI3K/Akt信号转导通路。结论:中药不同剂量组与青霉素V钾片治疗鼻窦炎大鼠具有相似的实验效果,既通过不同的生物学通路和基因发挥作用,又通过相同生物学通路调控发挥作用,但是中药不同剂量组表达调控更强更广一些,通窍开玄法通过系统调控PI3K/Akt信号转导通路可能是治疗鼻窦炎的机制之一,为临床治疗鼻窦炎提供了新思路。     

从全基因表达谱角度探讨理冲汤抑制人子宫肌瘤细胞的作用机制

目的从全基因表达谱角度探讨理冲汤抑制人子宫肌瘤细胞的作用机制。方法采用胶原酶消化法培养子宫肌瘤细胞,并给予理冲汤大鼠含药血清进行干预,提取肌瘤细胞总RNA,运用Affymetrix Gene Chip Prime ViewTM全基因芯片检测基因表达谱的变化,并进行差异表达基因、基因本体(gene ontology,GO)、信号通路等方面的分析,最后采用实时定量PCR(Realtime PCR,RT-PCR)对差异基因的表达进行验证。结果结果显示,理冲汤组与空白对照组比较后差异表达基因数量为1154个(P0.05,上调基因Fold change1.5,下调基因Fold change0.5),其中上调基因630个,下调基因524个;富集的GO功能共有119条,主要涉及到细胞外基质的改变、细胞凋亡的诱导、细胞黏附等多方面的功能;差异基因富集的信号通路有73条,同时,RT-PCR验证结果也与基因芯片结果趋势一致。结论理冲汤对人子宫肌瘤的治疗作用机制是通过对多基因、多功能、多信号通路的调控而实现的。     

理冲生髓饮对卵巢上皮性癌患者免疫状态影响的临床研究

目的：研究理冲生髓饮提高卵巢癌患者免疫功能的机理。方法：随机设单纯化疗组和理冲生髓饮加化疗组针对NK细胞活性、T淋巴细胞亚群、红细胞C3b受体等指标进行临床研究。结果：理冲生髓饮可以减轻化疗药物的毒副作用，保障化疗顺利进行，同时通过增强卵巢患者免疫功能而达到抗肿瘤的作用。结论：理冲生髓饮对卵巢癌具有减毒增效、抗肿瘤的作用。     

理冲生髓饮对卵巢癌SKOV3细胞周期和凋亡影响

目的:探讨理冲生髓饮对卵巢癌SKOV3细胞周期和凋亡影响。方法:以卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,采用CCK-8法检测不同浓度顺铂对SKOV3细胞抑制作用,Annexin V-FITC法检测SKOV3细胞凋亡情况,细胞周期与细胞凋亡检测试剂测定SKOV3细胞周期变化,流式细胞术检测SKOV3细胞中CD44~+CD117~+细胞比例。结果:与空白组比较,24 h和48 h顺铂组SKOV3细胞凋亡率明显增加,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,CD44~+CD117~+细胞比例明显增加,与顺铂组比较,24 h和48 h理冲生髓饮联合顺铂组SKOV3细胞凋亡率明显增加,G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,CD44~+CD117~+细胞比例明显降低,其中理冲生髓饮中剂量组联合顺铂组作用效果最强。结论:理冲生髓饮具有抗肿瘤作用,其机制可能是增加顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡,调控细胞周期阻滞,降低卵巢癌SKOV3细胞中干细胞数量。     

益肺方对人肺癌A549细胞肿瘤相关生物学通路基因表达的影响

目的:通过PCR基因芯片检测益肺方对人肺癌A549细胞在肿瘤相关生物学通路基因的差异表达,分析其诱发基因谱改变的特征生物学通路,探讨其抗肿瘤作用的分子机制。方法:分别于对照组及实验组A549细胞中提取RNA,反转录成cDNA,以此为模板,应用美国Super Array公司人癌通路发现者PCR基因芯片,进行实时定量PCR反应,检测2组基因表达水平的差异。结果:两组比较在检测的89个基因中发现有8条基因表达水平显著上调,22条基因表达水平显著下调。差异表达基因主要与血管生成、细胞凋亡和细胞衰老、侵袭转移、信号传导等有关。结论:益肺方通过调控血管生成、细胞凋亡和细胞衰老、侵袭转移、信号传导等肿瘤相关生物学通路的基因表达水平,从而抑制人肺癌细胞生长,可能是益肺方抗肺癌作用的主要分子机制。     

复方理冲生髓饮对二甲基苯蒽诱发的大鼠卵巢肿瘤组织形态学的影响

目的:观察中药复方理冲生髓饮对二甲基苯蒽诱发大鼠卵巢肿瘤组织形态学的变化。方法:采用苯溶二甲基苯蒽(DMBA)卵巢局部埋线法诱发大鼠卵巢肿瘤模型,观察理冲生髓饮对模型大鼠卵巢肿瘤组织光镜和电镜下病理形态学及超微结构的变化。结果:理冲生髓饮对诱发的卵巢肿瘤组织形态改变明显,光镜下细胞病理改变以卵巢实质增生和腺泡囊肿为主,细胞异型性不大,间质受浸较轻。电镜下细胞核固缩,染色体边集,胞浆内可见大量脂滴堆积,出现凋亡小体。结论:理冲生髓饮对化学致癌因子诱发的大鼠卵巢肿瘤有抑制和阻断作用,并且长期用药在抑制靶细胞的肿瘤性转归方面具有显著效果。     

逍遥散对肝郁脾虚证大鼠下丘脑基因表达谱的影响

目的:在全基因组水平上系统探讨逍遥散对慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠下丘脑基因表达谱的影响及其抗应激调节机制。方法:采用Agilent大鼠全基因组表达谱芯片检测慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠模型(每天束缚3 h,连续21 d)正常组、模型组、逍遥散组(大、中、小剂量)下丘脑基因表达的差异,筛选出组间两两比较的差异基因表达谱,并利用生物信息学技术对差异基因表达谱进行GO功能分析、信号通路分析。结果:模型组、逍遥散大、中、小剂量组具有不同的差异基因表达谱,多条生物过程和信号通路的功能被显著上调或下调,其中模型组、逍遥散大、中、小剂量组差异基因参与的显著生物过程分别有909、712、516、1322个功能基因群,参与的显著信号通路分别有60、57、41、90条。结论:肝郁脾虚证具有下丘脑差异表达基因组学背景,逍遥散大、中、小剂量对肝郁脾虚证大鼠下丘脑众多差异表达基因及功能改变的信号通路、生物过程均有一定的干预作用,大剂量和中剂量结果显示优于小剂量。     

大黄素对人高转移卵巢癌细胞中癌相关基因表达的影响

目的探讨大黄素对人高转移卵巢癌抗肿瘤的可能作用机制。方法应用肿瘤基因芯片检测大黄素(40μmol/L)对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中癌相关基因表达的影响,并且实时定量PCR和Western blotting进行验证。结果共筛选出表达差异基因69个,其中33个基因表达水平上调,36个基因表达水平下调,涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞生长与分化、细胞运动、信号转导、基因转录和细胞代谢等7大类相关基因。结论基因芯片结果提示大黄素抗肿瘤作用可能与转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路密切相关。     

理冲汤对体外培养人子宫肌瘤细胞 p53信号通路基因表达谱的影响

目的:研究理冲汤对体外培养人子宫肌瘤细胞p53信号通路基因表达谱的影响。方法:体外原代培养子宫肌瘤细胞并传代后,加入理冲汤含药血清,继续培养。选用功能分类PCR p53信号通路基因芯片(PCR p53 Signaling PathwayMicroarray),从空白对照组、理冲汤组子宫肌瘤细胞中进行样品的RNA抽提及纯化,采用紫外吸收测定法及变性琼脂糖凝胶电泳进行RNA质量检测,合成cDNA,最后进行实时定量PCR。结果:所采用的PCR p53信号通路基因芯片共检测96条基因,理冲汤组与空白对照组比较,共17条(17.7%)基因表达发生明显变化,其中10条基因表达量明显下降(Fold Down-Regulation<-2),7条基因表达量上升(Fold Up-Regulation>2)。按功能将其进行大体分类,涉及到细胞凋亡、细胞周期、细胞生长增殖和分化、DNA修复等多方面。结论:理冲汤对子宫肌瘤p53信号通路的细胞凋亡、细胞周期、细胞生长增殖和分化、DNA修复等相关基因均有调节作用,提示细胞内外的信号传导是子宫肌瘤发病的关键环节,理冲汤对子宫肌瘤p53信号通路相关基因表达具有调控作用。     

大黄对实热证模型大鼠肝基因表达谱的影响

目的:利用基因芯片技术研究寒性中药大黄对2,4-二硝基苯酚致实热证模型大鼠肝脏全基因表达谱的影响,从基因水平分析大黄作用机制。方法:SPF级Wistar大鼠24只,随机分为空白对照组、模型对照组和大黄治疗组。造模后6h取肝组织,应用RatRef-12基因芯片检测各组大鼠肝脏基因表达,筛选差异表达基因,进行基因功能分类。结果:大黄水煎液组与实热模型组比较有177条差异表达基因。其中可注释基因113条,查询到29项显著性基因功能。其中生物学过程24项,主要为代谢过程功能包含59(52.21%)条差异基因;分子功能2项,主要涉及催化活性包含61(53.98%)条差异基因,其中氧化还原酶活性包含26(23%)条差异基因。结论:寒性中药大黄可调节代谢相关的基因降低机体代谢水平,实现其"清热泻火"作用。     

通窍开玄法对鼻窦炎模型大鼠鼻黏膜影响的分子机制研究

目的应用基因芯片技术观察通窍开玄法对鼻窦炎模型大鼠鼻黏膜通路及基因表达的影响,探讨其治疗鼻窦炎的分子机制。方法 SD大鼠随机分为实验组、模型组和正常组,实验组和模型组。依据Y.Gel的改良方法造模,正常组不做任何处理。造模成功后实验组分为中药组与青霉素V钾片组,分别予苍耳子鼻炎胶囊、青霉素V钾片灌胃,处死动物,取鼻黏膜组织,应用基因芯片检测各组大鼠鼻黏膜基因表达,筛选差异表达基因和通路并进行统计分析。结果中药组与青霉素V钾片组治疗效果相似;中药组和青霉素V钾片组分别与模型组比较:中药组得到的差异基因及通路改变均多于青霉素V钾片组;两组共同涉及13条通道,且共同上调8条基因、下调71条基因。结论通窍开玄法对治疗鼻窦炎大鼠存在物质基础,可为临床治疗鼻窦炎提供新的治疗思路。     

逍遥散对肝郁脾虚证大鼠胃组织基因表达谱的影响

目的:在全基因组水平上系统探讨逍遥散大、中、小剂量对慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠胃组织基因表达谱的影响及其抗应激调节机制。方法:采用Agilent大鼠全基因组表达谱芯片检测慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠模型(每天束缚3h,连续21 d)正常组、模型组、逍遥散组(大、中、小剂量)胃组织基因表达的差异,筛选出组间两两比较的差异基因表达谱,并利用生物信息学技术对差异基因表达谱进行GO功能分析、信号通路分析。结果:模型组、逍遥散大、中、小剂量组具有不同的差异基因表达谱,多条生物过程和信号通路的功能被显著上调或下调,其中模型组、逍遥散大、中、小剂量组差异基因参与的显著生物过程分别有597、1216、817、924个功能基因群,参与的显著信号通路分别有27、60、41、59条。结论:肝郁脾虚证具有胃组织差异表达基因组学背景,逍遥散大、中、小剂量对肝郁脾虚证大鼠胃组织众多差异表达基因及功能改变的信号通路、生物过程均有一定的干预作用,中剂量结果显示优于大剂量和小剂量。     

基因芯片技术研究附子对虚寒证大鼠肝全基因表达谱的影响

目的:采用基因芯片技术研究附子对虚寒证大鼠肝全基因表达谱的影响。方法:使用中药复方生石膏、龙胆草、黄柏、知母建立虚寒证大鼠模型,附子治疗后应用基因芯片检测大鼠肝脏基因表达,筛选差异表达基因,进行基因功能注释,荧光定量PCR验证芯片结果。结果:虚寒治疗组与虚寒模型组比较有212条基因差异表达,主要涉及免疫应答及氧化还原酶活性相关基因。结论:附子能够上调虚寒证大鼠的免疫应答相关基因及氧化还原酶活性相关基因,可能是经典热药附子温阳散寒作用的分子机制。     

基于转录组测序技术探讨复方蛇龙胶囊治疗膜性肾病大鼠潜在机制

目的:应用高通量转录组测序(RNA-seq)技术检测膜性肾病大鼠肾组织基因表达变化,分析复方蛇龙胶囊可能的作用机制。方法:采用改良Border法建立膜性肾病大鼠模型,设置模型组和复方蛇龙胶囊高、中、低剂量组(1.5、0.75、0.375 g/kg),每天灌胃1次,连续干预8周。采用RNA-seq技术检测复方蛇龙胶囊干预前后的差异表达基因,通过基因本体(GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析、蛋白质相互作用(PPI)及关键基因分析,筛选关键基因以及关键通路。结果:与模型组相比,复方蛇龙胶囊低、中、高剂量组共筛选出差异表达基因685个,其中535个上调基因,150个下调基因。GO富集分析显示差异表达基因主要涉及细胞膜结构,参与物质跨膜运输、细胞粘附与迁移,调控跨膜转运蛋白活性,KEGG富集分析显示差异表达基因主要富集在PI3K/Akt和MAPK信号通路。蛋白质相互作用网络筛选出Egfr、Fn1、Rac3、Frk、Cdh1、Agt、Hspg2、Itga8、Akt3和Fgfr2共10个关键基因,GO功能富集分析显示关键基因主要富集在细胞膜表面及间质,参与跨胞外基质组织及粘附过程,调控激酶活性,KEGG富集分析结果显示关键基因主要富集在PI3K/Akt信号通路。结论:调控肾足细胞自噬与凋亡可能是复方蛇龙胶囊作用的重要机制,与PI3K/Akt信号通路相关基因表达有关。     

基因芯片技术研究虚寒证大鼠肝全基因表达谱

目的:采用基因芯片技术研究虚寒证大鼠肝全基因表达谱的改变。方法:使用中药复方生石膏、龙胆草、黄柏和知母建立虚寒证大鼠模型,应用基因芯片检测各组大鼠肝脏基因表达,筛选差异表达基因,进行基因功能分类注释。荧光定量PCR验证芯片结果。结果:虚寒模型组与空白对照组比较有99条基因差异表达,主要涉及刺激应答功能。结论:虚寒证可能通过多种刺激应答相关基因的下调,导致免疫应答功能、防御应答功能及对其他生物体刺激应答功能的降低。虚寒证的物质基础可能与此类基因的异常表达相关。