艾灸对克罗恩病肠纤维化大鼠结肠黏膜TGF-β及Smad4表达的影响

目的:观察艾灸对克罗恩病(Crohn Disease,CD)肠纤维化大鼠结肠转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达的影响,从TGF-β/Smads信号途径探讨针灸治疗CD肠纤维化的作用机制.方法:采用雄性清洁级SD大鼠建立CD肠纤维化模型,应用随机的方法,将大鼠分为正常组、模型组、温和灸组、电针组、隔药灸组.正常组和模型组不予任何治疗;温和灸组、电针组、隔药灸组均取天枢、气海穴,分别施以温和灸、电针、隔药灸治疗.治疗结束后,采用免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测各组大鼠结肠TGF-β与Smad4蛋白的表达;采用荧光定量聚合酶链反应法(Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)检测结肠Smad4 mRNA的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠TGF-β蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达增加(P＜0.01).经温和灸、电针、隔药灸治疗后,与模型组比较,TGF-β蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05).结论:CD肠纤维化大鼠结肠TGF-β蛋白、Smad4蛋白及mRNA表达显著增多,温和灸、电针、隔药灸天枢和气海穴均可下调CD肠纤维化大鼠结肠TGF-β蛋白、Smad4蛋白及mRNA的异常表达.     

隔药灸对克罗恩病肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞CTGF、FN、Smad表达的影响

目的观察隔药灸对克罗恩病肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞(conlonic fibroblast,CFB)CTGF、FN蛋白和Smad3、Smad7 mRNA表达的影响,探讨隔药灸治疗克罗恩病肠纤维化的作用机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和西药组。在成功制备克罗恩病肠纤维化大鼠模型的基础上,隔药灸组取天枢穴(双)、气海穴进行治疗,西药组以美沙拉嗪灌胃治疗。各组治疗干预结束后,留取结肠组织,分离并体外培养大鼠CFB。采用免疫细胞化学法观察各组大鼠CFB的CTGF、FN蛋白表达,应用实时荧光定量PCR技术检测各组大鼠CFB的Smad3、Smad7 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠CFB的CTGF、FN蛋白表达升高(均P0.01);与模型组比较,隔药灸组CFB的CTGF、FN蛋白表达降低(均P0.01)。各组大鼠比较,CFB的Smad3和Smad7 mRNA表达变化均不显著(均P0.05)。结论隔药灸能下调克罗恩病肠纤维化大鼠肠成纤维细胞CTGF、FN的蛋白表达。     

基于TGF-β/Smad7信号通路探讨针灸对大鼠溃疡性结肠炎的影响※

目的 研究针灸对大鼠溃疡性结肠炎（UC）的疗效及作用机制。方法 将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成空白组、模型组、电针组、隔药灸组。空白组予生理盐水灌肠，其余三组均予TNBS-50%乙醇液灌肠，建立UC模型。造模成功后，电针组及隔药灸组均选取天枢穴（双侧）、气海穴，分别进行电针及隔药灸治疗，每日1次，空白组、模型组不干预。干预14 d后，进行大鼠疾病活动性指数（DAI）评分及结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分，并检测血清转化生长因子-β（TGF-β）、信号转导分子7（Smad7）、白介素-10（IL-10）及结肠组织TGF-β mRNA、Smad7 mRNA、IL-10 mRNA表达量。结果 空白组大鼠DAI、CMDI评分显著低于其他三组（P<0.05），电针组、隔药灸组大鼠DAI、CMDI评分均明显低于模型组（P<0.05）；空白组大鼠结肠组织TGF-β mRNA、Smad7 mRNA、IL-10 mRNA及血清TGF-β、Smad7、IL-10表达量明显低于其他三组（P<0.05），电针组、隔药灸组低于模型组（P<0.05）。结论 电针、隔药灸能通过调节TGF-β-Smad7-IL-10信号通路而达到治疗UC的目的。     

艾灸预处理“天枢”穴对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障保护的机制研究

目的：观察艾灸预处理“天枢”穴对UC大鼠的抗炎效应,探讨艾灸预处理“天枢”穴对UC大鼠肠黏膜屏障的保护机制。方法：SD雄性大鼠28只,随机分为正常组、模型组、隔药灸预处理组和温和灸预处理组,每组7只。造模前先予隔药灸、温和灸预处理干预7天;预处理后予模型组、隔药灸预处理组、温和灸预处理组4%葡聚糖硫酸钠水溶液连续饮用7天。采用HE染色法观察大鼠结肠组织病理学变化;免疫组化法和western blot法检测大鼠结肠组织分子的蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组结肠组织病理学评分显著升高,Occludin、JAM1、MUC2、ZO-1蛋白表达显著降低,NF-κBp65、IL-1β蛋白表达显著升高（P ＜ 0.05）;与模型组比较,隔药灸预处理组结肠组织病理学评分显著降低,Occludin、MUC2、JAM1、ZO-1蛋白表达显著升高,NF-κBp65、IL-1β蛋白表达显著降低（P ＜ 0.05）,温和灸预处理组结肠组织病理学评分显著降低,Occludin、MUC2、ZO-1蛋白表达显著升高,IL-1β蛋白表达显著降低（P ＜ 0.05）。结论：隔药灸预处理、温和灸预处理“天枢”穴均能升高UC大鼠肠黏膜屏障相关蛋白的表达,可能是艾灸有效预防减轻UC的机制之一。     

隔药灸和电针对克罗恩病大鼠结肠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5表达的影响

目的 研究隔药灸和电针对克罗恩病大鼠结肠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白及IGF-I mRNA的调节作用,探讨针灸治疗大鼠克罗恩病肠纤维化的作用机制.方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组、电针组和药物组.采用三硝基苯磺酸制备大鼠克罗恩病模型,应用HE染色、Masson染色光镜下观察结肠病理组织学变化及胶原纤维增生情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应检测结肠IGF-I mRNA的变化;采用免疫组织化学Envision法检测结肠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白表达变化.结果 与正常组比较,模型组大鼠结肠组织胶原增生,IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白表达均显著增加,IGF-I mRNA表达显著增加.经治疗后,与模型组比较隔药灸组、电针组、药物组大鼠结肠胶原增生均显著减少,隔药灸组较电针组作用显著.隔药灸组、电针组、药物组大鼠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白表达均显著降低;隔药灸组对IGF-I、IGFBP-5蛋白的下调作用优于电针组.隔药灸组、药物组IGF-I mRNA表达均显著降低,电针组变化不明显.结论 隔药灸和电针能够下调结肠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白的异常表达,该作用可能是隔药灸和电针改善克罗恩病肠纤维化的重要机制.隔药灸能够下调IGF-I mRNA表达,对IGF-I、IGFBP-5蛋白的下调作用优于电针,该作用可能是其改善克罗恩病肠纤维化优于电针的机制之一.     

艾灸对克罗恩病大鼠结肠黏膜MCP-1和IL-8蛋白表达的影响

目的通过观察艾灸对克罗恩病（CD）大鼠结肠黏膜MCP—1和IL-8蛋白表达的影响，探讨艾灸对CD大鼠结肠黏膜免疫功能的作用及可能机制。方法采用国际公认的MorriS方法制备CD大鼠模型。将动物随机分为正常对照组、模型组、隔药灸组、温和灸组、烟条灸组和热水灸组，均选取天枢（双侧）治疗。采用免疫组化方法，观察大鼠结肠黏膜组织IL-8、MCP-1蛋白的表达。结果模型组大鼠结肠黏膜组织MCP-1和IL-8蛋白表达阳性目标总面积和积分光密度均明显高于正常对照组（P〈0．01），经隔药灸和温和灸治疗后，CD大鼠结肠黏膜组织MCP-1和IL-8蛋白表达阳性目标总面积和积分光密度均显著降低（P〈0．01）。结论隔药灸和温和灸能够下调CD大鼠结肠黏膜MCP-1和IL-8蛋白的表达。     

针灸对克罗恩病大鼠低氧环境下结肠DNA甲基转移酶的影响

目的：观察针灸对克罗恩病（CD）大鼠结肠组织DNA甲基转移酶的影响,初步探讨针灸对CD的表观遗传调控机制。方法：将SD大鼠随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、电针组和柳氮磺吡啶组。采用5% 2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠的方法制备CD大鼠模型。隔药饼灸组和电针组均采用天枢（双侧）和气海穴进行干预,柳氮磺吡啶组采用柳氮磺吡啶肠溶片进行灌胃干预。治疗结束后,采用ELISA检测血清中C反应蛋白（CRP)、IL-6、白细胞介素-1β（IL-1β)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α)的含量;实时荧光定量PCR（RT-qPCR)检测结肠组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α)的mRNA表达;Western Blotting检测结肠组织中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b蛋白的表达。结果：与正常组比较,模型组血清中CRP、IL-6、IL-1β、TNF-α的蛋白含量均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,隔药饼灸组、电针组和柳氮磺吡啶组上述炎症介质的蛋白含量均显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组结肠组织中HIF-1α mRNA和DNMT1、DNMT3a、DNMT3b蛋白表达均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,隔药饼灸组和柳氮磺吡啶组HIF-1α mRNA和DNMT1、DNMT3a、DNMT3b蛋白表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）,电针组HIF-1α mRNA和DNMT1蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01）。结论：隔药饼灸和电针均能抑制CD大鼠CRP、IL-6、IL-1β、TNF-α等炎症介质以及HIF-1α、DNA甲基转移酶DNMT1的表达,其中隔药饼灸还能抑制DNMT3a、DNMT3b表达,可能是针灸减轻CD肠道炎症的机制之一。     

艾灸对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠CFB胶原合成的影响

目的观察艾灸对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞（conlonic fibroblast，CFB）细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原合成的影响，探讨艾灸防治溃疡性结肠炎肠纤维化的作用机制。方法采用免疫法加局部刺激制各溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠模型，随机将大鼠分为正常组、模型组、隔药灸组、温和灸组和柳氮磺胺吡啶（SASP）灌胃组。隔药灸组、温和灸组选取天枢和气海穴，分别进行隔药灸、温和灸治疗：SASP灌胃组给予柳氮磺胺吡啶灌胃。分离并培养各组大鼠结肠成纤维细胞，Western印迹法观察艾灸对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原合成的影响。结果溃疡性结肠炎纤维化大鼠结肠成纤维细胞细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原合成显著增强：隔药灸组、温和灸组大鼠结肠成纤维细胞细胞内Ⅰ、Ⅳ型胶原的合成均被显著抑制：SASP灌胃组大鼠结肠成纤维细胞细胞内Ⅰ型胶原的合成被显著抑制。结论艾灸能够调节溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠CFB细胞内胶原的合成。     

艾灸对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠GFB胶原合成的影响

目的观察艾灸对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞（conlonic fibroblast，CFB）细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原合成的影响，探讨艾灸防治溃疡性结肠炎肠纤维化的作用机制。方法采用免疫法加局部刺激制各溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠模型，随机将大鼠分为正常组、模型组、隔药灸组、温和灸组和柳氮磺胺吡啶（SASP）灌胃组。隔药灸组、温和灸组选取天枢和气海穴，分别进行隔药灸、温和灸治疗：SASP灌胃组给予柳氮磺胺吡啶灌胃。分离并培养各组大鼠结肠成纤维细胞，Western印迹法观察艾灸对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原合成的影响。结果溃疡性结肠炎纤维化大鼠结肠成纤维细胞细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原合成显著增强：隔药灸组、温和灸组大鼠结肠成纤维细胞细胞内Ⅰ、Ⅳ型胶原的合成均被显著抑制：SASP灌胃组大鼠结肠成纤维细胞细胞内Ⅰ型胶原的合成被显著抑制。结论艾灸能够调节溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠CFB细胞内胶原的合成。     

艾灸对克罗恩病大鼠结肠肿瘤坏死因子-α含量及艾灸鼠结肠上清液对培养的结肠上皮细胞内紧密连接蛋白及其基因表达的影响

目的:通过观察温和灸、隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导大鼠结肠上皮细胞紧密连接——咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白1(claudin-1)和闭锁蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)及其基因表达的影响,探讨艾灸对肠上皮屏障损伤的修复/保护机制。方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、温和灸组、隔药灸组和西药组,各12只。采用三硝基苯磺酸制备克罗恩病(Crohn’s Disease,CD)大鼠模型。温和灸组与隔药灸组选择"天枢""气海"穴分别予以温和灸和隔药灸,每日1次,共治疗14次;西药组以柳氮磺胺吡啶溶液灌胃,每日2次,共14次。治疗结束后剖取各CD组大鼠结肠,制备结肠黏膜上清液;正常组纯化并培养结肠上皮细胞建立肠上皮屏障体外模型。将各CD组结肠黏膜上清液分别与正常大鼠结肠上皮细胞混合培养1周,采用ELISA法检测各组结肠黏膜上清液TNF-α含量,Western blot和荧光定量PCR法观察其对CD大鼠体外结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达的影响。结果:CD模型组较正常组大鼠结肠黏膜上清液中TNF-α含量有显著增高(P<0.01),温和灸、隔药灸和柳氮磺胺吡啶治疗后TNF-α含量显著降低(均P<0.01),其中温和灸、隔药灸组优于西药组(均P<0.05);与此同时,温和灸、隔药灸和西药组结肠黏膜TNF-α上清液体外诱导大鼠结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达较模型组有显著增高(P<0.01,P<0.05),且隔药灸、温和灸两组也优于西药组(均P<0.05)。结论:艾灸(隔药灸、温和灸)可能是通过降低CD大鼠结肠黏膜异常增高的TNF-α,进而促进或调节结肠上皮紧密连接occludinc、laudin-1和ZO-1及其mRNA表达,达到修复/保护肠上皮屏障损伤的目的。     

艾灸对克罗恩病大鼠结肠肿瘤坏死因子-α含量及艾灸鼠结肠上清液对培养的结肠上皮细胞内紧密连接蛋白及其基因表达的影响

目的:通过观察温和灸、隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导大鼠结肠上皮细胞紧密连接--咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白1(claudin-1)和闭锁蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)及其基因表达的影响,探讨艾灸对肠上皮屏障损伤的修复/保护机制.方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、温和灸组、隔药灸组和西药组,各12只.采用三硝基苯磺酸制备克罗恩病(Crohn's Disease,CD)大鼠模型.温和灸组与隔药灸组选择"天枢""气海"穴分别予以温和灸和隔药灸,每日1次,共治疗14次;西药组以柳氮磺胺吡嘧溶液灌胃,每日2次,共14次.治疗结束后剖取各CD组大鼠结肠,制备结肠黏膜上清液;正常组纯化并培养结肠上皮细胞建立肠上皮屏障体外模型.将各CD组结肠黏膜上清液分别与正常大鼠结肠上皮细胞混合培养1周,采用ELISA法检测各组结肠黏膜上清液TNF-α含量,Western blot和荧光定量PCR法观察其对CD大鼠体外结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达的影响.结果:CD模型组较正常组大鼠结肠黏膜上清液中TNF-α含量有显著增高(P<0.01),温和灸、隔药灸和柳氮磺胺吡嘧治疗后TNF-α含量显著降低(均P<0.01),其中温和灸、隔药灸组优于西药组(均P<0.05);与此同时,温和灸、隔药灸和西药组结肠黏膜TNF-α上清液体外诱导大鼠结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达较模型组有显著增高(P<0.01,P<0.05),且隔药灸、温和灸两组也优于西药组(均P<0.05).结论:艾灸(隔药灸、温和灸)可能是通过降低CD大鼠结肠黏膜异常增高的TNF-α,进而促进或调节结肠上皮紧密连接.ccludin,claudin 1和ZO-1及其mRNA表达,达到修复/保护肠上皮屏障损伤的目的.     

艾灸对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞增殖影响的研究

目的 从对溃疡性结肠炎大鼠结肠成纤维细胞增殖影响的角度,探讨艾灸防治溃疡性结肠炎肠纤维化的作用机制.方法 采用免疫法加局部刺激制备溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠模型,随机将大鼠分为正常组、模型组、隔药灸组、温和灸组和西药组.隔药灸组和温和灸组选取天枢、气海穴分别进行隔药灸和温和灸治疗,西药组柳氮磺胺吡啶溶液灌胃治疗,治疗结束后处死大鼠,剖取结肠组织,分离并培养结肠成纤维细胞,流式细胞术观察各组大鼠结肠成纤维细胞增殖情况.结果 模型大鼠结肠成纤维细胞增殖率增高(P<0.01),处于G0-G1期细胞减少(P<0.01),G2-M期和S期细胞增多(P<0.01),隔药灸、温和灸疗法能显著改善大鼠结肠成纤维细胞的增殖率(P<0.01),使处于G0-G1期细胞、G2-M期和S期细胞趋向正常.结论 UC大鼠CFB增殖加快.隔药灸和温和灸天枢、气海穴治疗能显著抑制大鼠CFB的过度增殖.     

隔药灸对克罗恩病大鼠结肠p38MAPK、ERK1/2及c-fos调节作用的研究＊

目的 观察隔药灸对克罗恩（Crohn s Disease，CD）大鼠结肠p38MAPK、ERK1/2、c-fos的影响，探讨隔药灸治疗CD的作用机制。方法 将清洁级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和假灸组4组。采用TNBS合50%乙醇溶液灌肠制备大鼠CD模型。模型制备成功后，隔药灸组取天枢穴（双）、气海穴进行隔药饼灸治疗；假灸组取穴、操作与隔药灸组相同，但不点燃艾炷。治疗结束后，采用HE染色，光镜下观察大鼠结肠组织形态学变化；采用实时荧光定量PCR技术检测结肠p38MAPK mRNA表达；应用ELISA技术检测结肠p38MAPK、c-fos蛋白含量，Western blot技术检测结肠ERK1/2蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠结肠组织损伤严重，可见全壁性炎症、裂隙状溃疡，部分大鼠结肠可见纤维化；与模型组、假灸组比较，隔药灸组大鼠结肠形态结构改善，肠道炎症减轻；假灸组大鼠结肠损伤程度、炎症反应与模型组类似。与正常组比较，模型组p38MAPK mRNA表达增加（P < 0.01），p38MAPK、ERK1/2、c-fos蛋白含量均增加（均P < 0.05）；与模型组比较，隔药灸组p38MAPK mRNA表达降低（P < 0.05），p38MAPK、ERK1/2、c-fos蛋白含量均降低（均P < 0.05）；假灸组均无显著变化（均P > 0.05）。结论 隔药灸能下调克罗恩病大鼠结肠p38MAPK、ERK1/2、c-fos的表达，改善炎症、促进肠道组织修复。     

Effect of Moxibustion on the Synthesis and Secretion of Collagen by Colonic Fibroblasts in Ulcerative Colitis Fibrosis Rats

目的：从对溃疡性结肠炎大鼠结肠成纤维细胞（Colonic Fibroblast，CFB）合成分泌胶原的影响的角度，探讨艾灸防治溃疡性结肠炎肠纤维化的作用机制。方法：采用免疫法加局部刺激制备溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠模型，随机将大鼠分为正常组、模型组、隔药灸组、温和灸组和西药组。隔药灸组、温和灸组选取天枢、气海穴分别进行隔药灸、温和灸治疗，西药组柳氮磺胺吡啶溶液灌胃治疗。分离并培养结肠成纤维细胞，ELISA法观察艾灸对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞合成分泌Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的影响。结果：UC纤维化大鼠CFB培养上清液能显著激发正常大鼠CFB大量分泌Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原，隔药灸组、温和灸组上清液则显著抑制正常大鼠CFBⅠ、Ⅲ、Ⅳ型胶原的分泌，西药组上清液对Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌有一定抑制作用。结论：艾灸能够调节溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞合成分泌Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原。     

艾灸预处理天枢穴对溃疡性结肠炎大鼠结肠TLR4/TRIF信号通路调节作用的研究

目的观察艾灸预处理天枢穴对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠TLR4/TRIF信号通路的影响,探讨艾灸预处理防治UC的作用机制.方法将28只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸预处理组和温和灸预处理组.采用4%葡聚糖硫酸钠水溶液连续饮用7 d制备UC模型.隔药灸预处理组、温和灸预处理组先干预7 d后,模型组、隔药灸预处理组、温和灸预处理组再制备UC模型.采用HE染色法,观察大鼠结肠组织病理学变化;应用免疫组化、免疫印记技术检测大鼠结肠TLR4、TRIF、TRAF6、IRF3、IKK的蛋白表达.结果模型组大鼠结肠黏膜结构损伤较正常组明显加重;隔药灸预处理组和温和灸预处理组,结肠黏膜结构损伤较模型组明显改善.与正常组比较,模型组结肠TLR4、TRIF、TRAF6、IRF3、IKK蛋白表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,隔药灸预处理组、温和灸预处理组结肠TLR4、TRIF、TRAF6、IRF3蛋白表达均显著降低(P<0.05),隔药灸预处理组结肠IKK蛋白表达显著降低(P<0.05).结论艾灸预处理天枢穴能下调UC大鼠结肠TLR4、TRIF、TRAF6、IRF3蛋白表达;下调TLR4/TRIF信号通路相关分子的蛋白表达可能是艾灸预处理防治UC的作用机制之一.     

针灸对克隆氏病大鼠结肠TNF-αIL-10mRNA的调节机制研究

目的:探讨针灸对克隆氏病大鼠结肠TNF-α、IL-10mRNA的调节机制.方法:在成功制备克隆氏病大鼠模型的基础上,随机分为模型组、隔药灸组、电针组三组,并与正常大鼠进行对照.隔药灸组、电针组选用"天枢"、"气海"穴分别进行隔药灸和电针治疗,以原位杂交法观察大鼠结肠组织TNF-α与IL-10mRNA的表达.结果:克隆氏病模型大鼠结肠TNF-αmRNA与IL-10mRNA表达较正常组大鼠增高,隔药灸组、电针组均显著降低.结论:针灸可能是通过抑制克隆氏病大鼠结肠组织促炎症细胞因子TNF-αmRNA的表达,调整IL-10mRNA与TNF-αmRNA之间的平衡,从而减轻或消除肠道炎症,以达治疗之目的.     

针灸对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜形态学及GH IGF-I表达的影响

目的：探讨针灸大肠下合穴上巨虚对溃疡性结肠炎（UC）大鼠肠黏膜形态学及生长激素（GH）、胰岛素样生长因子-I（IGF-I）表达的作用。方法：采用免疫法加局部刺激制备UC大鼠模型,随机将大鼠分为模型组、隔药灸组、电针组,并与正常大鼠作对照。隔药灸组、电针组选取上巨虚穴分别进行隔药灸、电针治疗,连续治疗14次。治疗结束后采用光、电镜观察肠黏膜形态学变化;应用免疫组化法检测结肠GH、IGF-I蛋白表达。结果：UC大鼠结肠光镜观察可见溃疡形成和炎症,电镜观察可见结肠黏膜上皮细胞绒毛脱落短小缺损,胞膜损伤,线粒体肿胀,嵴消失,高尔基体囊泡较少,杯状细胞膜严重受损,胞内没有黏液颗粒;结肠GH、IGF-I蛋白表达增高。隔药灸组、电针组经过治疗后,结肠黏膜病理损伤减轻;结肠GH、IGF-I蛋白表达降低,趋于正常。结论：隔药灸、电针上巨虚穴均能明显改善UC大鼠结肠黏膜病理损伤,保护肠黏膜,促进肠黏膜机械屏障的修复;UC大鼠结肠GH、IGF-I表达增高,隔药灸、电针上巨虚穴均能促进结肠异常增高的GH、IGF-I的表达趋于正常。     

针灸对溃疡性结肠炎大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响

目的:探讨针灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠Th 1/Th 2免疫平衡的影响。方法:SD大鼠随机分为模型组、隔药灸组、电针组,每组10只,并另选10只正常大鼠作为对照组。采用免疫学方法并加局部刺激建立大鼠UC模型。隔药灸组、电针组选取"天枢"(双)和"气海"进行隔药灸或电针治疗,连续治疗14d。采用定量PCR法检测结肠组织中干扰素(INF)-γ、白介素(IL)-12、IL-4和IL-10mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附法检测结肠组织中INF-γ、IL-12、IL-4和IL-10的含量;采用流式细胞术分析结肠组织细胞中CD4~+INF-γ~+/CD 4~+IL-4~+的比值。结果:与对照组比较,模型组大鼠结肠组织中INF-γ、IL-12mRNA和含量显著升高(P0.05),IL-4、IL-10mRNA和含量显著下降(P0.05);隔药灸组和电针组大鼠结肠组织INF-γ、IL-12mRNA和含量显著低于模型组(P0.05),IL-4、IL-10mRNA和含量显著高于模型组(P0.05)。模型组结肠组织中CD 4~+INF-γ~+/CD 4~+IL-4~+的比值显著高于对照组(P0.05);与模型组比较,隔药灸组和电针组CD4~+INF-γ~+/CD 4~+IL-4~+比值显著下降(P0.05)。隔药灸组和电针组的各项指标比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:隔药灸和电针均能显著改善UC模型大鼠炎性反应,通过下调结肠组织中INF-γ和IL-12水平,上调IL-4和IL-10水平从而保持Th 1/Th 2细胞间平衡,进而改善免疫功能。     

针灸治疗大鼠溃疡性结肠炎的机理研究

采用免疫学方法,制备大鼠溃疡性结肠炎模型,并观察隔药灸、电针天枢和气海穴对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜β－ＥＰ、ＶＩＰ含量的影响。研究结果表明,模型组大鼠结肠粘膜β－ＥＰ、ＶＩＰ含量显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,而隔药灸组与电针组均明显下降,表明隔药灸与电针具有调节溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜β－ＥＰ、ＶＩＰ的作用。     

针灸对溃疡性结肠炎大鼠维生素D受体 及p53信号通路调节作用的研究

目的：维生素D（VD）缺乏与溃疡性结肠炎（UC）发病相关，针灸对UC有显著的疗效，起效机制尚未完全阐明，因此我们从维生素D受体(VDR)及与VDR相关的p53信号通路角度，观察针灸对UC大鼠调节的作用机制。方法：采用3%DSS制备UC大鼠模型。将大鼠随机分为正常组，模型组，电针组，隔药灸组和维生素D组。对双侧天枢穴采用电针或隔药灸干预1周，维生素D灌胃1周。分析大鼠结肠黏膜形态并评分，采用免疫组织化学法和QPCR检测结肠VDR蛋白和mRNA的表达，Western blotting检测结肠p53、PUMA和Caspase-3蛋白的水平。结果：与正常组比较，模型组组织病理学评分显著升高，经电针、隔药灸和VD干预后各组显著降低；与正常组比较，模型组VDR蛋白和mRNA表达显著降低，p53、PUMA和Caspase-3蛋白表达显著升高，与模型组比较，电针组、隔药灸组和维生素D组的VDR蛋白和mRNA表达显著升高，p53、PUMA和Caspase-3蛋白表达显著降低。结论：电针、隔药灸可以显著改善UC大鼠结肠黏膜炎性反应，该效应可能与针灸对VDR及下游p53信号通路的调节作用有关。