Bouin氏液与10%福尔马林固定组织对Masson氏三色染法染色结果的影响

目的:了解Bouin氏液与10%福尔马林固定组织对Masson氏三色染法染色结果的影响。方法:取肝纤维化模型大鼠肺、肾、肝脏,分别用Bouin氏液与10%福尔马林固定,切片后,用Masson氏三色染法进行胶原纤维染色,比较染色结果。结果:Bouin氏液固定组织胶原纤维染成绿色,胞核、胞质染成紫红色,红细胞染成桔黄色;10%福尔马林固定组织胶原纤维、胞核染成绿色,胞质染成紫红色,红细胞染成桔黄色。结论:Bouin氏液较10%福尔马林固定组织Masson胶原纤维染色特异性更强,背景色干净,组织结构更清晰。     

固有丛—可能是针刺的受体

<正> 将人乳房晕皮肤和蛙抱雌疣(Clasping pad of frog)置入4%甲醛—1%氯化钙液中冷固定24小时,冰冻切片50微米,用Wachstin-Meisel介绍的三磷酸腺苷酶组织化学方法染色,相邻切片以GrosBielachwsky氏银法作为对比染色。发现这些区域富于“固有丛”,在三磷酸腺苜酶组化法处理后,着色很深,而非“固有丛”的其他结构染色淡.如经     

胎牛血清和大鼠血清对体外软骨组织构建的影响

目的观察胎牛血清和大鼠血清对体外构建大鼠软骨组织的效应,为组织工程软骨筛选出合适的培养方法。方法取大鼠原代软骨细胞,离心后,培养箱中放置48 h,细胞团块会自发形成软骨小结。分为胎牛血清组和大鼠血清组。每隔一天换一次液,连续培养2周。取出软骨组织,称量重量,固定于4%多聚甲醛,经过脱水、石蜡包埋、切片后,经HE(苏木素-伊红)染色,甲苯胺蓝和藏红-固绿染色及细胞免疫荧光检测Ⅱ型胶原(Col2a1)、I型胶原(Col1a1)的表达。结果胎牛血清组的软骨组织重量比大鼠血清组的软骨组织明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色结果表明:大鼠血清组的组织形态呈纤维样结构,而胎牛血清组组织形态呈典型的软骨结构。胎牛血清组的组织甲苯胺蓝和藏红染色明显,而大鼠血清组的组织甲苯胺蓝淡染,固绿深染,提示软骨组织退变或非软骨组织。进一步免疫荧光检测软骨标志基因Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原,胎牛血清组Ⅱ型胶原高表达,而大鼠血清组低表达,Ⅰ型胶原在两组的表达和Ⅱ型的表达呈相反的结果,即在大鼠血清组高表达,在胎牛血清组低表达。结论胎牛血清可促进体外软骨组织的形成,而大鼠血清抑制了软骨组织形成。胎牛血清适合体外构建大鼠软骨组织。     

印片细胞学及快速石蜡在术中的应用

小型医院无冰冻切片设备 ,细胞印片及石蜡快速诊断的应用给临床确定病变性质 ,决定手术范围提供了可靠依据 ,两者相结合能明显提高诊断准确率。1　材料与方法选自我科 1996～ 2 0 0 0年 138例 ,同时作印片、快速石蜡、石蜡诊断的病例 ,以石蜡诊断结果为标准。手术中未经固定的新鲜标本 ,将送检组织剖开 ,在不同处印片 3～ 4张 ,半干后投入 95 %乙醇中固定 ,染色 ,整个染色过程均用电吹风吹染 ,5分钟左右封片。快速石蜡 ,取材→混合固定液固定 3分钟→ 95 %乙醇 4分钟→丙酮 4分钟→二甲苯 3分钟→浸蜡 5分钟 ,整个固定脱水过程均在快速脱水…     

水解胶原在皮肤的应用

探讨了鱼中水解胶原对皮肤的作用。试验材料:从鱼皮中得到的胶原经选择性断裂酶处理,N末端含30%以上甘氨酸Gly-X-Y结构分子的水解胶原(胶原三肽,CTP-F)用于试验。方法及结果:使用阻抗计及TEWA计对CTP-F的保湿作用进行检测。CTP-F可使皮肤角质层的水分含量增加,连续涂抹后,使经表皮的水分蒸发量减少,从而达到保湿作用。进一步观察影响皮肤保湿的胶原、透明质酸。在培养的人正常皮肤成纤维细胞添加CTP-F后,以ELISA法检测胶原、透明质酸,结果CTP-F具有促进胶原、透明质酸生成以及改善皮肤弹性的作用。以氚标记CTP-F的三肽涂抹大…     

关节康中药血清促进去分化软骨细胞再分化的实验研究

目的:观察体外经传代培养去分化的关节软骨细胞,经关节康血清培养后生物学性状及功能的变化,探索使去分化软骨细胞再分化的手段,为软骨细胞组织工程种子细胞建立合适的体外培养方法。方法:无菌条件下取兔关节软骨组织,酶消化法分离软骨细胞,分成对照组及实验组,实验组常规培养3代后添加关节康血清,继续培养2周。观察对照各组细胞形态,细胞爬片后进行阿利新蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学检测,观察细胞表型变化。结果:兔关节软骨细胞体外培养3代后迅速去分化,增殖缓慢。添加关节康血清后去分化速度明显减缓,血清混合培养2周后,细胞外形恢复良好,阿利新蓝染色阳性及Ⅱ型胶原免疫组织化学检测阳性。结论:关节康血清与软骨细胞的混合培养,能延缓软骨细胞的去分化,并可以促进去分化后的软骨细胞再分化,分泌Ⅱ型胶原及糖蛋白,保持软骨细胞的形态和功能,有望用于在体外培养时防止软骨细胞的去分化及促进去分化软骨细胞的再分化。     

丹参治疗大鼠肝纤维化的效果观察

目的 观察丹参治疗四氯化碳所致大鼠肝纤维化的效果.方法 采用四氯化碳腹腔注射法制作大鼠肝纤维化模型,给予丹参灌胃处理,同时设立正常组、对照组,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ),肝组织行HE和Masson三色胶原染色,光镜下观察肝脏组织病理学变化.结果 较模型组,丹参组能明显降低肝纤维化时异常升高的ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅲ(P＜0.01),明显改善四氯化碳所致大鼠肝纤维化的病理学改变.结论 丹参具有治疗大鼠肝纤维化作用.     

胆石六号颗粒抗CCl_4致大鼠肝纤维化的作用研究

目的:探究胆石六号颗粒抗CCl_4致大鼠肝纤维化的作用。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为6组:正常组、模型组、阳性对照组(水飞蓟宾18 mg/kg)、胆石六号颗粒27.0、13.6、6.8 g/kg组;采用40%CCl_4橄榄油溶液腹腔注射诱导肝纤维化,用酶标仪检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)以及白蛋白(ALB)的水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、III型前胶原N端肽(PIIINP)、IV型胶原(Col IV)含量;采用HE染色和Masson三色染观察肝组织炎性反应及纤维化程度。结果:与正常组相比,模型组大鼠血清ALT、AST、ALP、HA、LN、PIIINP及Col IV含量明显升高,而ALB水平明显降低,肝指数明显升高,病理切片显示模型组大鼠肝脏内胶原沉积明显,有假小叶形成,肝脏炎症和纤维化程度明显;与模型组相比,给予胆石六号颗粒各剂量后,血清中ALT、AST、ALP、HA、LN、PIIINP和Col IV含量以及肝指数明显降低,血清ALB水平明显升高,肝组织胶原沉积显著减少,未观察到明显的假小叶结构,肝脏炎症活动和纤维化程度明显减轻。结论:胆石六号颗粒具有抗CCl_4致大鼠肝纤维化的作用,能够显著改善大鼠肝功能,减缓肝纤维化病变。     

还精煎抗衰老的实验研究(四)——老年小鼠内生殖器的组织化学与肝脏的超微结构变化

材料与方法一、实验动物及喂药方法见《上海中医药杂志》1985年第12期39页。二、组织学与组织化学方法:各组动物处死后迅速取材,右侧卵巢和睾丸以Bouin固定,HE染色。右侧子宫角中段的一段以Carnoy氏液固定,HE染色。一段以丙酮固定,钙钴法显示碱性磷酸酶。左侧睾丸恒冷箱低温切片,以Levy等改良法显示3-β羟基类固醇脱氢酶。在切片制作过程中,三组动物的各种组织块同时包埋或低温冰冻,同时切片染色,以保持染色条件的一致性。三、电镜标本制作:各组动物杀死后,快速取出肝组织,固定于二甲砷酸钠缓冲液配制的2%戊二醛溶液内,pH:7.3,置4℃冰箱内固定2小时,再经缓冲液冲洗后,用1%锇酸作后固定,经多级酒精脱水,618树脂包埋,超薄切片(LKB切片机)铅铀染色,     

丹七片对心肌缺血小型猪心脏结构与功能的影响

目的：探讨丹七片对慢性心肌缺血小型猪心脏结构与功能的影响。方法：缩窄环法制备小型猪心肌缺血模型,给予丹七片9 g/只·d（临床等效剂量）4周。超声心动图、大体病理观察、心肌组织石蜡切片HE和Masson染色分析心脏结构与功能的变化。结果：丹七片组动物室间隔收缩末厚度、心内膜下白色瘢痕组织的数量及大小、绿染胶原沉积面积等方面均较模型组显著改善。结论：丹七片虽不能逆转整体心功能,但具有一定的减小缺血范围、改善慢性心肌缺血与心室重构的作用。     

透明质酸酶对慢性压迫性神经损伤模型中神经源性疼痛的作用研究

目的:研究透明质酸酶对坐骨神经的疏松结扎(CCI)模型神经源性疼痛的作用,初步探讨临床通过相关穴位点注射透明质酸酶治疗慢性疼痛的机制。方法:采用CCI模型,记录损伤神经异位自发放电和热痛刺激的敏感程度。结果:用透明质酸酶作用于术后7d大鼠的损伤处并进行坐骨神经自发放电的测量,发现在测量的12只模型中,有8只模型的自发放电得到了有效的抑制,这8只的平均抑制率为50.9%±12.4%。在热刺激行为学实验中,损伤局部持续注射透明质酸酶溶液的CCI大鼠在术后3d、6d和14d的热刺激敏感度明显低于局部注射生理盐水的对照组CCI大鼠。通过CCI大鼠损伤坐骨神经组织切片观察,发现神经纤维排列混乱,纤维间存在空泡状间隙,并且在间隙周围分布着染成深色的多糖链;而经过透明质酸酶作用后CCI损伤坐骨神经切片观察,空泡状空隙与深色多糖链沉淀消失,神经排布较处理前更加规则。结论:细胞外基质与神经生理功能密切相关,透明质酸酶能够有效降低CCI模型的异位自发放电;临床穴位注射透明质酸酶改变穴位点聚集的细胞外基质,从而起到镇痛作用。     

参七内金散对四氯化碳肝纤维化模型大鼠肝星状细胞活化与凋亡的影响

目的：观察参七内金散抗大鼠肝纤维化的作用机制。方法：雄性SD大鼠30只随机分为3组：正常组、模型对照组、参七内金散组。以CCl4皮下注射造模,首次注射100%CCl45mL/kg体重,之后40%CCl4 橄榄油溶液3mL/kg皮下注射,2次/周,连续注射6周。造模成功后以0.8g/kg的参七内金散灌胃模型大鼠共2周,正常组与模型对照组则予以等量生理盐水灌胃,共2周。以盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量,分别以HE、天狼猩红染色观察肝组织的炎症与纤维化病理。免疫印迹及免疫组化检测α-SMA的表达,观察肝星状细胞活化;连续切片,依次TUNEL染色与α-SMA免疫组化双染色,观察肝星状细胞凋亡。结果：与正常大鼠比较,模型大鼠肝组织可见大量肝组织脂肪变性及胶原病理沉积,并可见纤维间隔形成;参七内金散显著能改善模型大鼠肝组织脂肪变性与胶原病理沉积,降低肝组织Hyp含量。正常大鼠仅表达少量α-SMA,主要分布于血管壁,未见凋亡星状细胞;模型组大鼠可见大量α-SMA表达,可见少量凋亡星状细胞;与模型组比较参七内金散组肝组织α-SMA表达显著减少（P≤0.01）,但凋亡肝星状细胞显著增多。结论：参七内金散具有抗肝纤维化作用;抑制肝星状细胞活化、促进活化的肝星状细胞凋亡是参七内金散抗肝纤维化的机理之一。     

黄芪多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化的特性

目的观察黄芪多糖对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞、脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化特性的影响,为开发有效而又低毒的分化诱导剂提供依据。方法采用全骨髓贴壁筛选法分离、纯化无特定病原体级Wistar大鼠BMSCs。用噻唑蓝(MTT)法筛选出黄芪多糖的合适浓度,取F3代细胞,采用随机数字表法分为对照组和诱导组(神经诱导、成脂诱导、成骨诱导、软骨诱导),采用甲苯胺蓝染色、油红O染色、茜素红染色检测神经细胞、脂肪细胞、软骨细胞表面特异性标记物。用Western Blot技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脂蛋白酯酶(LPL)、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅱ。分析黄芪多糖对F3代BMSCs向神经、脂肪、软骨和骨的诱导分化作用。结果 MTT显示,在1 g/L黄芪多糖诱导48 h下细胞增殖明显,甲苯胺蓝染色阳性,而油红O、茜素红染色阴性。Western Blot法检测显示NSE为阳性表达,LPL、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅱ均为阴性表达。结论黄芪多糖可诱导大鼠BMSCs定向分化为神经细胞,而未向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞分化。     

幼兔表层软骨移植修复全层软骨缺损的实验研究

为研究生长发育期表层关节软骨在全层软骨缺损中的修复作用,建立生长发育期幼兔表层软骨移植修复自身全层软骨缺损的动物模型,6周后取标本进行大体和光镜下观察,并行Ⅱ型胶原免疫组化染色.结果显示表层软骨移植组28例标本缺损完全由透明样软骨修复,修复组织Ⅱ型胶原表达强阳性;对照组2例由透明样软骨组织部分修复,Ⅱ型胶原表达阳性,其余由纤维软骨组织、纤维组织修复.说明生长发育期表层软骨移植能够修复全层软骨缺损,生长发育期表层软骨细胞具有增生、迁徙、修复软骨缺损的功能.     

肝性脑病大鼠海马 CA1区神经元形态变化和NOS 表达的研究

目的：观察肝性脑病大鼠脑海马 CA1区神经元形态的变化及一氧化氮合酶（NOS）的表达情况,探讨海马 CA1区神经元的形态学改变及一氧化氮（ NO）在肝性脑病发病机制中的作用。方法雄性大鼠50只,实验开始前所有动物进行莫里斯水迷宫测试,之后将动物分为正常对照组和实验模型组。9周后建立 CCl4肝性脑病模型,分别取2组大鼠海马组织进行尼氏染色及 NADPH - d 染色。结果尼氏染色显示：实验组大鼠海马神经元数目减少、染色较浅,胞浆内尼氏体减少或消失。NADPH - d 染色显示：实验组可见粗大轴突着色,树突联系广泛;对照组则少有粗大轴突着色,树突间联系不如实验组广泛。实验组 NOS 阳性神经元染色较对照组深,为紫蓝或深蓝色（强阳性及阳性）,且阳性神经元数目较多;而对照组染色浅淡,呈浅蓝或与背景同色,为弱阳性。结论肝性脑病时海马受到损伤,并且 NO 可能介导了神经元的损伤并参与了肝硬化和肝性脑病的发病。     

生肌玉红膏载入修饰后胶原的生物相容性研究

目的:通过动物体内实验研究生肌玉红膏载入修饰后胶原的体内降解行为和生物相容性,探讨生物可降解材料生肌玉红胶原作为生物医用材料的应用可能。方法:将生肌玉红胶原(实验组)与交联修饰后胶原(对照组)植入8只新西兰白兔背部皮下,分别于术后1、2、4及8周取出2组植入材料,行肉眼观察、埋植材料近旁组织切片后H-E染色显微镜下观察及对两组材料的扫描电镜(SEM)观察。结果:实验组在植入后动物体内炎症反应消失较对照组明显提前,组织相容性较同期对照组良好,可促进近旁组织毛细血管新生与胶原新生。结论:生肌玉红膏载入胶原较Ⅰ型胶原自身组织相容性更佳,基本上发挥出生肌玉红膏及修饰后胶原各自促创面愈合的优势,与周围组织有更加良好的生物相容性。     

玄参活性部位对冠状动脉结扎致心室重构大鼠心肌纤维化的影响

目的：探讨玄参活性部位对冠状动脉结扎所致心室重构大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法：冠状动脉结扎法制备大鼠心室重构模型。14周药物干预后,测定大鼠左心室及全心肥厚指数,病理切片HE染色观察心肌细胞横断面面积,天狼星红染色观察心肌间质及血管周围胶原沉积情况,并分析Ⅰ型、Ⅲ型胶原的分布和含量,荧光RT-PCR测定心肌组织Ⅲ型胶原基因表达水平。结果：玄参活性部位能降低心肌肥厚指数,减小左心室心肌细胞的横断面面积,改善心肌纤维化和胶原沉积,显著降低Ⅲ型胶原mRNA表达水平。结论：玄参活性部位对心肌细胞和间质胶原沉积两方面都有显著的抑制作用,抗心室重构的作用机制可能与抑制Ⅲ型胶原mRNA表达有关。     

淫羊藿苷调节PTEN激活成骨基因表达缓解大鼠骨质疏松症的实验研究

目的：探讨淫羊藿苷（ICA）调节PTEN激活成骨基因表达缓解大鼠骨质疏松症（OP）的相关作用机制。方法：术中收集患骨质疏松症和骨质正常者股骨骨髓8 mL，诱导骨髓间质干细胞（BMSCs）成骨分化14 d后，采用qRT-PCR检测PTEN的表达；随后选取7周龄的雌性大鼠36只，采用经典的雌性大鼠卵巢切除法复制绝经后骨质疏松症大鼠模型，术后12周鉴定为骨质疏松模型后开始给药干预，在同等饲养条件下造模大鼠以ICA处理或/和抑制PTEN表达治疗10周后，采取颈椎脱臼法处死大鼠，取双侧股骨干骺端骨组织，采用qRT-PCR法检测大鼠骨组织中PTEN及成骨基因（RUNX2、OPN）的表达、Western blot法检测成骨标志蛋白（RUNX2、OPN）的表达，并制成石蜡切片，采用IHC染色观察PTEN在细胞中的表达、HE染色观察骨组织微观结构。结果：PTEN在OP患者骨组织中高表达，诱导BMSCs成骨分化14 d后表达被抑制，造模组大鼠骨组织中PTEN表达也较高，IHC染色见细胞中PTEN表达呈阳性、HE染色骨小梁明显稀疏；ICA处理或/和抑制PTEN表达后PTEN的表达被显著抑制，同时逆转了其对成...     

冰冻切片技术制作药用植物组织永久切片的研究

目的本实验建立了冰冻切片技术制作药用植物组织永久切片的实验方法。方法将材料用FAA固定液固定,经过包埋后,利用冰冻切片机在-18℃--20℃温度下切片,切片经乙醇梯度脱水、番红-固绿染色、二甲苯透明后,用加拿大树胶封片即得。结果应用该方法制作的植物组织永久切片,结构完整而清晰。结论冰冻切片技术是制作药用植物组织永久切片简便有效的方法,应用前景广阔。     

墨旱莲提取物促进小鼠骨髓来源的间充质干细胞迁移和成骨方向分化作用研究

[目的]探究墨旱莲提取物(EHE)对小鼠骨髓来源的间充质干细胞(BMMSCs)迁移和向成骨分化作用的影响.[方法]提取6周C57BL/6J雌性小鼠后肢股骨和胫骨中的BMMSCs,使用流式细胞术检测细胞表面分子表达.采用血清碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色、甲苯胺蓝染色和油红O染色观察BMMSCs向成骨、成脂、软骨细...