血清药物化学和血清药理学相结合的方法探讨麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的物质基础

利用中药血清药物化学及血清药理学相结合的方法探讨麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的物质基础。通过比较麻黄附子细辛汤、给药后含药血清和空白血清的LC-MS/MS图谱,寻找麻黄附子细辛汤的入血成分; ELISA法测定各时间点含药血清对抗原刺激RBL-2H3细胞释放组胺、氨基己糖苷酶的影响;MTT法测定各时间点含药血清对脂多糖诱导小鼠脾细胞增殖的影响;采用逐步回归的方法对麻黄附子细辛汤的各成分与药理指标进行相关性分析。结果显示,灌胃给予麻黄附子细辛汤后,从大鼠血清中发现32个成分,其中27个原型成分(10个来自麻黄,13个来自附子,4个来自细辛),其他5个未知成分。与空白血清相比,麻黄附子细辛汤各时间点含药血清均能降低抗原诱导RBL-2H3细胞释放组胺(P<0.05);除麻黄附子细辛汤4 h含药血清外,其余各时间点含药血清均能抑制抗原诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒(P<0.05);麻黄附子细辛汤15,30 min含药血清能显著抑制脂多糖诱导的小鼠脾细胞增殖(P<0.05)。血中移行成分的化学数据和药理指标组胺释放量、β-氨基己糖苷酶释放率以及脾细胞增殖抑制率进行回归分析,推测甲基伪麻黄碱、伪麻黄碱与抗原诱导RBL-2H3肥大细胞释放组胺密切相关;伪麻黄碱、次乌头原碱、甲基伪麻黄碱与抗原诱导RBL-2H3细胞释放β-氨基己糖苷酶密切相关;苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、14-苯甲酰-10-羟基-中乌头原碱、新乌头原碱与脂多糖诱导小鼠脾细胞增殖抑制密切相关。由此可见,甲基伪麻黄碱、伪麻黄碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头原碱等成分可能为麻黄附子细辛汤抗炎和免疫抑制的部分物质基础。     

鹅不食草挥发油抗变态反应血清药理学研究

目的:用血清药理学方法研究鹅不食草挥发油对抗原诱导RBL-2H3细胞释放组胺、β-氨基已糖苷酶,对刀豆蛋白(Con-A)诱导小鼠脾细胞增殖、诱导脾淋巴细胞分泌IL-4的影响,探讨其抗变态反应的可能机制。方法:ELISA法测定鹅不食草挥发油含药血清对抗原诱导RBL-2H3释放组胺、β-氨基已糖苷酶的影响;MTT法测定鹅不食草挥发油含药血清对Con-A诱导脾细胞增殖的影响,ELISA法测定鹅不食草挥发油含药血清对Con-A诱导脾淋巴细胞分泌IL-4的影响。结果:与空白血清相比,鹅不食草挥发油0.5～2h含药血清(9g/kg生药量,10%含药血清)均具有抑制抗原诱导RBL-2H3释放组胺、β-氨基已糖苷酶,抑制Con-A诱导小鼠脾细胞增殖、分泌IL-4的作用。结论:鹅不食草挥发油抗变态反应作用机制可能与抑制炎症介质释放,抑制细胞免疫功能有关。     

缩泉丸含药血清对小鼠胚胎干细胞增殖、分化及Nanog基因表达的影响

目的研究缩泉丸含药血清对小鼠胚胎干细胞(ESCs)增殖、分化及Nanog基因表达的影响。方法选用129小鼠胚胎干细胞株,将培养的细胞分为空白组,金匮肾气丸组,缩泉丸低、中、高剂量组5组。空白组给予浓度为10%的空白大鼠血清;金匮肾气丸组给予浓度为10%的含药血清;缩泉丸低、中、高剂量组分别给予按0.585 g·kg~(-1)·d~(-1)、1.17 g·kg~(-1)·d~(-1)、2.34 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃给药的大鼠的含药血清,浓度均为10%。采用流式细胞仪检测缩泉丸对ESCs增殖的影响,倒置相差显微镜观察缩泉丸含药血清对DMSO诱导的ESCs的分化情况,荧光定量PCR检测ESCs关键因子Nanog mRNA的表达,流式法检测Nanog蛋白的表达。结果与空白组比较,缩泉丸含药血清中、高剂量能够促进ESCs的增殖(P0.01),缩泉丸低、高剂量可以显著提高ESCs中Nanog mRNA的表达(P0.05,P0.01),缩泉丸中、高剂量可以显著提高ESCs中Nanog蛋白的表达(P0.05,P0.01)。与空白组比较,缩泉丸高剂量能够促进DMSO诱导的ESCs进行分化。结论缩泉丸可以促进ESCs的增殖,促进DMSO诱导的ESCs进行分化,可能与其上调关键基因Nanog的表达相关。     

补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究补阳还五汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及细胞周期的影响。方法:以6.5,13,26 g·kg~(-1)补阳还五汤和等量蒸馏水连续灌胃SD大鼠1周,制备3种补阳还五汤含药血清和空白血清。将BMSCs分为补阳还五汤6.5 g·kg~(-1)组(用含10%6.5 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤13 g·kg~(-1)组(用含10%13 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),补阳还五汤26 g·kg~(-1)组(用含10%26 g·kg~(-1)生药制备的血清培养),空白组(用含10%空白血清培养)。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组BMSCs的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)和磷酸化丝(苏)氨酸蛋白酶(p-Akt)(Ser473)蛋白的表达。结果:13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用BMSCs 48,72 h后,细胞增殖活性较空白组明显升高(P0.05);3种补阳还五汤含药血清作用48 h后,BMSCs在S期的细胞比率随着药物浓度的升高而升高,与空白组比较有统计学意义(P0.05);13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清作用48 h后,PI3K和p-Akt(Ser473)蛋白表达较空白组显著增强(P0.01)。结论:13,26 g·kg~(-1)生药制备的补阳还五汤含药血清可能通过活化PI3K/Akt信号通路促使细胞进入S期,增强BMSCs增殖活性。     

细辛含药血清制备方法的研究

目的:从方法学的角度对细辛含药血清的制备进行探讨.方法:选用SD大鼠,细辛根散剂1.78g/kg,加蒸馏水3ml灌胃,每日1次,连续8天.末次给药2h后眼眶采血,分离血清,观察实验大鼠DRG神经元钾电流(IK)和钠电流(INa)变化.结果:细辛含药血清组IK和INa变化明显,与空白血清组比较有显著差异(P《0.05).结论:该方法制备细辛含药血清是可行的.     

肠安Ⅰ号方含药血清对致敏肥大细胞活化脱颗粒的影响

目的:探讨肠安Ⅰ号方含药血清对免疫球蛋白E(IgE)介导的大鼠嗜碱性粒细胞(RBL-2H3)活化脱颗粒的影响及对非受体型酪氨酸蛋白激酶/脾酪氨酸蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶(Lyn/Syk/MAPK)信号通路的调节作用。方法:制备肠安Ⅰ号方含药血清,将SD雄性大鼠随机分为肠安Ⅰ号方高、中、低剂量组及空白组,每组10只,给药剂量:空白组给予10 mL·kg~(-1)蒸馏水灌胃,肠安Ⅰ号方低、中、高剂量组分别予1.15,2.30,4.60 g·kg~(-1)药液灌胃,给药体积10 mL·kg~(-1),1次/d,连续灌胃7 d。细胞分组:空白组,予正常大鼠血清;模型组,予正常大鼠血清;酮替芬组,予正常大鼠血清+30μmol·L~(-1)酮替芬。肠安Ⅰ号方低、中、高剂量组分别为予肠安Ⅰ号方低、中、高剂量含药血清。建立IgE介导的RBL-2H3细胞活化、脱颗粒模型,采用甲苯胺蓝染色进行肥大细胞计数;采用比色法检测细胞脱颗粒β-氨基己糖释放率;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中肥大细胞类胰蛋白酶(MCT),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及组胺含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Lyn/Syk/MAPK通路蛋白表达。结果:对于细胞活化脱颗粒,与空白组比较,模型组细胞β-氨基己糖释放率显著升高(P0.01),脱颗粒率明显升高(P0.05);与模型组比较,肠安Ⅰ号方含药血清各剂量组细胞β-氨基己糖释放率显著下降(P0.01),细胞脱颗粒率明显下降(P0.05)。对于活性介质释放,与空白组比较,模型组细胞上清组胺,MCT,TNF-α及MCP-1含量均显著增高(P0.01);与模型组比较,肠安Ⅰ号方各剂量组细胞上清组胺,MCT,TNF-α及MCP-1含量均显著减低(P0.01)。与正常组比较,模型组细胞Lyn和Syk及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),c-Jun氨基末端激酶(JNK),p38 MAPK磷酸化水平明显升高(P0.05);与模型组比较,肠安Ⅰ号方各剂量Lyn,Syk及ERK1/2,JNK及p38蛋白磷酸化水平明显降低(P0.05)。结论:肠安Ⅰ号方含药血清通过下调RBL-2H3细胞活化上游信号通路关键蛋白Lyn,Syk和下游ERK1/2,JNK及p38蛋白的磷酸化水平,抑制肥大细胞活化脱颗粒,减少组胺,MCT,TNF-α及MCP-1等活性介质释放,这可能是其抑制肥大细胞活化,治疗腹泻型肠易激综合征(IBS-D)内脏高敏感的机制之一。     

不同产地细辛挥发油的GC-MS分析

目的:采用GC-MS法分析3个不同产地细辛挥发油的化学成分,为其质量评价提供依据。方法:采用水蒸气蒸馏法提取细辛挥发油,经正己烷萃取后,采用GC-MS法分析鉴定细辛中主要挥发油的化学成分,并进行比较。结果:3个不同产地的细辛挥发油中,共鉴定出18种相同成分,主要包括甲基丁香酚、黄樟醚、爱草醚、3,5-二甲氧基甲苯、α-蒎烯、β-蒎烯、3-蒈烯、优香芹酮、肉豆蔻醚和榄香脂素。结论:3个产地细辛挥发油主要成分为甲基丁香酚、黄樟醚、3,5-二甲氧基甲苯等,但各种成分比例存在差异。     

细辛挥发油对过敏性鼻炎豚鼠鼻黏膜和组胺影响的初步研究

目的:探讨细辛挥发油对过敏性鼻炎(AR)豚鼠行为学指标、鼻黏膜病理形态和血液组胺含量的影响。方法:将FMMU豚鼠40只按体重随机分为生理盐水对照组、AR模型组、辛芩颗粒组、细辛挥发油组,每组10只。采用鸡卵清蛋白全身致敏与局部攻击方法制作AR豚鼠模型,对照组和模型组给予生理盐水,辛芩颗粒组给予辛芩颗粒4.65g·kg-1,细辛挥发油组给予细辛挥发油按生药量计0.45 g·kg-1,观察豚鼠行为学指标和鼻黏膜病理形态的变化,测定血液组胺含量。结果:细辛挥发油组鼻痒、喷嚏、清涕等行为学指标及鼻黏膜炎症程度均有明显改善,血液组胺含量明显降低。结论:细辛挥发油能有效缓解过敏性鼻炎的局部症状,降低血液组胺含量,改善鼻黏膜炎症的局部浸润,达到治疗过敏性鼻炎的目的。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术分析不同配伍比例雄黄对青黛入血成分的影响

目的:基于青黄散的配伍组方,探讨不同比例雄黄与青黛配伍后青黛在大鼠血清中移行成分的差异。方法:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对青黛供试品溶液、空白血清以及3种不同配比(青黛10 g分别配伍雄黄52. 5,105,210 mg,依次记为A组,B组,C组)青黄散含药血清进行检测,结合青黛供试品溶液中鉴定的化学成分,分析3组复方中青黛在大鼠体内的移行成分差异;以3组青黄散含药血清作用于人白血病细胞HL-60细胞,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各含药血清对HL-60细胞活性的影响。结果:从青黄散A组,B组,C组含药血清中分别检测到了19,22,25个移行成分,且3组含药血清均含有来自青黛供试品溶液中的5个原型成分,分别为色胺酮,靛蓝,靛玉红,2-氨基苯甲酸和N-苯基-2-萘胺;CCK-8法检测结果表明青黄散C组含药血清对HL-60细胞的抑制作用最强。结论:固定青黛剂量后,随着雄黄剂量的增加,含药血清中移行成分增多,且对HL-60细胞的抑制作用也逐渐增强,提示雄黄可能会促进青黛中有效成分在体内的吸收,从而增强药效,进一步阐释了不同比例雄黄和青黛的配伍规律及药效物质基础。     

镇肝熄风汤含药血清对6-OHDA诱导PC12细胞损伤保护作用的抗氧化机制分析

目的:观察镇肝熄风汤含药血清对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡的影响,并探讨其是否通过抗氧化活性发挥神经保护作用。方法:将40只Wistar大鼠随机分为空白组、镇肝熄风汤低、中、高剂量组,每组10只。镇肝熄风汤按照8,16,32 g·kg~(-1)灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,采血制备含药和空白血清。常规培养PC12细胞,分为空白组、模型组、镇肝熄风汤低、中、高剂量组,空白组和模型组给予空白血清,其他3组给予10%含药血清,孵育1 h,再加100μmol·L~(-1)6-OHDA共孵育24 h后收集细胞。采用MTS法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,分光光度法检测脂质过氧化物(lipid peroxidation,LPO)水平,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测醌氧化还原酶-1(NADPH quinine oxidoreductase 1,NQO-1)mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低,而细胞凋亡和LPO水平明显增加(P0.05)。与模型组比较,10%的镇肝熄风汤低、中、高剂量含药血清组细胞活力显著增加,而细胞凋亡和LPO水平明显减少(P0.05)。与模型组比较,10%的镇肝熄风汤低、中、高剂量含药血清组NQO-1 mRNA表达明显上调(P0.05),而空白组与模型组NQO-1mRNA表达无显著性差异。结论:镇肝熄风汤含药血清具有保护6-OHDA诱导PC12细胞损伤的作用,其机制可能与上调PC12细胞NQO-1 mRNA表达进了提高了细胞抗氧化能力有关。     

七叶皂苷的药理作用机制研究进展

七叶皂苷是七树科欧马栗的主要活性成分，它具有抗炎、抗水肿、增强静脉张力、抑制胃排空、抑制胃酸分泌、清除活性氧和协同抗肿瘤作用。本文对七叶皂苷的药理作用及其作用机制进行了综述。     

莱菔子对人参补益作用的影响

历代方书及医家大多认为莱菔子解人参的补益作用,民间也传说服食人参时忌食莱菔子及萝卜。本实验表明,人参对提高小鼠的抗疲劳、耐缺氧及抗应激等方面都有明显作用,而同服莱菔子对上述作用未见影响。     

齐墩果酸的药理作用研究概况

目的:综述齐墩果酸的药理作用。方法:根据近10年的中外文献和相关成果,从药理作用及其作用机理和临床应用等方面作以阐述。结果与结论:齐墩果酸的药理作用广泛,来源充足,但今后的应用应放在提高其生物利用度,增强疗效方面。     

基于系统药理学的现代中药研究体系

由于系统生物学的高速发展,以及系统生物学对现代药理学领域的深刻影响,近年来正在形成一个新兴的、跨学科分支,即系统药理学（Systems Pharmacology）。然而系统药理学无论在理论和方法上均不成熟。尤其是,如何将系统药理学的思想和理论用于中药研究尚缺乏探索性工作。本文将综述当前系统药理学的最新进展,同时结合研究者的实践,重点介绍如何将药效学、药动学以及网络、组学以及系统分析综合起来,形成一个统一的完整的、可供开展中药药理学、药效学的预测和验证研究的系统模型。从而为从系统水平研究和分析中药和机体的相互作用,以及新药开发、靶点发现、新的治疗策略等提供新的研究方法。文章最后介绍了研究者最新开发的中药系统药理学数据库和分析平台软件。     

关于中药血清药理学方法的再思考

血清的形成与凝血及其相关过程（纤溶与补体系统活化）的蛋白酶级联反应以及血小板和白细胞活化有关，这些过程直接影响血标本的组成，并可能也影响中药成分；但这些过程可用抗凝剂而加以避免。因此，血浆的组成较血清能更好地反映生理、病理状况和吸收进入循环血中药物变化。根据已有报道，药物浓度与反应物质在血浆与血清中可能存在差异，故倡导在中药半体内实验中采用血浆药理学方法。由于不同抗凝剂的作用机制各异，究竟哪一抗凝剂适用于哪类半体内实验，需要进一步开展研究。我们建议在大多数中药半体内实验中，可以采取含药血浆与含药血清平行观察，除非事先对该试验的干扰已有充分了解。     

槲皮素的抗癌作用

槲皮素具有较强的抗癌活性,从清除氧自由基、抑制癌细胞增殖、对抗到癌因子和抗癌经增敏作用等几个方面,简要介绍槲皮素抗癌作用的研究情况。     

丹参改善血液流变性的实验研究进展

从丹参改善血液流变性的药理研究出发,查阅文献并进行归纳总结,从血管内皮细胞、血流力学和血液中有形成分等不同角度分析丹参及其复方制剂的作用机理,为丹参改善血液流变性的进一步研究提供一定依据,并为临床运用丹参治疗各种相关疾病提供实验研究基础。     

冠心克的抗凝血和耐缺氧作用研究

研究结果表明:冠心克能明显延长凝血时间、凝血酶原时间、缩短优球蛋白溶解时间,增加纤维蛋白溶解酶活力,提高动物的耐缺氧能力。提示冠心克对治疗冠心病有重要意义。     

药理学教学方法的改革初探

药理学作为医学教育中的一门桥梁课程,本文通过对药理学课程运用启发式、案例式、多媒体的教学方式,同时在教学中增加社会实践的比例,改革考试形式等方法改变原有的教学思想、方法和内容,更好地向学生传授知识,适应了新时代的教学要求。     

栀子的研究和应用进展

作为药食两用植物资源栀子世界范围内的应用已有几千年历史。近年来,人们利用现代技术就栀子提取物及活性成分进行了大量的研究,特别是对栀子抗氧化、抗炎、保肝、神经保护、抗糖尿病以及抗肿瘤等活性研究取得了重要进展。本文拟从栀子的植物鉴定、化学成分、药理学和药代动力学、安全性和毒性评价以及临床应用等方面的研究进展做一简单综述。