黄芪多糖调节创伤小鼠活化T淋巴细胞的分子机制

研究了黄芪多糖（ＡＰＳ）对创伤小鼠活化Ｔ淋巴细胞内白细胞介素＿２（ＩＬ－２）及其受体（ＩＬ－２Ｒ）基因转录表达，ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量以及磷脂酰肌醇代谢的调节作用。结果显示：ＡＰＳ对创伤小鼠活化Ｔ淋巴细胞内ＩＬ－２ｍＲＮＡ、ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ、ＩＬ－２及ＩＬ－２Ｒ的降低均具有明显的拮抗作用，并可降低创伤小鼠血浆及活化Ｔ淋巴细胞内ｃＡＭＰ含量，增加ｃＧＭＰ含量，提高Ｔ淋巴细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）含量、游离钙Ｃａ￣２）浓度、钙调素（ＣａＭ）、ＣａＭ依赖的蛋白激酶（ＣａＭ－ＰＫ）及蛋白激酶ｃ（ＰＫＣ）的活性。表明ＡＰＳ可通过调节ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量以及促进磷脂酰肌醇代谢进而提高创伤后活化Ｔ淋巴细胞内ＩＬ－２及ＩＬ－２Ｒ的基因转录表达。     

复方中药白龙对G1期人胃癌细胞中抑癌基因的影响及与PKA信号通路的相关性

目的：探讨复方中药白龙对人胃癌ＢＧＣ８２－３Ｇ１期细胞周期蛋白激酶抑制因子（ＣＫＩ）ｐ１６＾ＩＮＫ４ａ，ｐ２１以及Ｒｂ，ｃ－ｍｙｃ等基因转录的影响和ｃＡＭＰ－ＰＫＡ信号通路的调节关系。方法：通过实验室常规分子生物学手段（细胞同步化，分子杂交－Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交等）检测相关基因的表达变化。     

雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞c-myc和血小板源性生长因子的mRNA的影响

目的：观察雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）中原癌基因（ｃ－ｍｙｃ）和血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）的ｍＲＮＡ表达水平的影响。方法：分别将所培养的第５￣１０代ＶＳＭＣ同步化培养２４ｈ后，加入２０％胎牛血清（ＦＣＳ）和不同剂量的雷公藤红素（０．１、０．２和０．３ｍｇ／Ｌ），共同孵育６ｈ和１２ｈ后，分别提取ＶＳＭＣ胞浆总ＲＮＡ，通过地高辛标记探针，采用斑点杂交方法检测ｃ－ｍｙｃ和ＰＤＧＦ的ｍＲ     

大蒜素对血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察大蒜素对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖细胞核抗原（ＰＣ－ＮＡ）表达的影响。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达，同时测定培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）的含量。结果：大蒜素能增加ＳＯＤ活性，降低ＬＰＯ，升高ＰＧＩ２和ｃＡＭＰ水平，抑制ＳＭＣ的ＰＣＮＡ表达（Ｐ〈０．０５－０．０１）。结论：大蒜素有抑     

“手十二井穴”放血抗兔实验性脑缺血机理的研究

结扎家兔双侧颈总动脉２小时后,可使其脑组织Ｃａ~（２＋）含量升高（Ｐ＜０．０１）,脑组织脂质过氧化物含量上升（Ｐ＜０．０５）,脑组织 ｃＡＭＰ含量升高（Ｐ＜０．０５）,而缺血后脑组织 ＳＯＤ活性和ＧＳＨ－Ｐｘ活性均明显降低（Ｐ＜０．０１和 Ｐ＜０．０５）。提示脑缺血后脑细胞内 Ｃａ~（２＋）超负荷,自由基产生增加。在缺血同时对家兔施行“十二井穴”放血,可使脑组织Ｃａ~（２＋）含量下降（Ｐ＜０,０５）,ＭＤＡ含量下降（Ｐ＜０．０５）,ｃＡＭＰ含量降低（Ｐ＜０．０５）,而 ＳＯＤ活性则明显升高（Ｐ＜０．０１）。结果提示,“手十二井穴”放血可对抗脑缺血后细胞内Ｃａ~（２＋）超负荷,防止氧自由基的毒副作用。     

瓜蒌注射液对兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

观察瓜蒌注射液对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的影响。采用液闪法测定平滑肌细胞（ＳＭＣ）氚－胸腺嘧啶核苷掺入量,同时检测培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷的含量。结果：瓜蒌注射液能抑制ＳＭＣ的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量,其作用呈剂量依赖关系;增加ＳＯＤ活性,降低ＬＰＯ,升高ＰＧＩ２和ｃＡＭＰ水平（Ｐ均〈０．０５￣０．０１）。提示：瓜蒌注射液     

当归提取液对培养的兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

通过培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）氚胸腺嘧啶核苷掺入量和培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ２）及环磷酸腺苷ｃＡＭＰ含量的测定，观察了当归提取液对ＳＭＣ增殖的影响。结果表明：当归提取液有抑制ＳＭＣ增殖的作用，其作用呈剂量依赖关系。当归提取液可能通过增加ＳＯＤ活性，降低ＬＰＯ水平，升高ＰＧＩ２、ｃＡＭＰ水平（Ｐ均＜０．０５），从而抑制ＳＭＣ增殖     

脑忆清胶囊对老年小鼠和拟痴呆大鼠记忆功能的影响

选用老年小鼠和Ａ１Ｃｌ３溶液制备的拟痴呆大鼠动物模型（ＤＭＲ）研究脑忆清胶囊（ＮＹＱ）对实验动物记忆功能的影响及其作用机理，结果表明，ＤＭＲ大脑皮层组织（Ｃｅｒ）中胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）活性比正常大鼠提高（Ｐ〈０．０１），而老年小鼠Ｃｅｒ中Ｍ－受体Ｒｔ值比正常青年小鼠降低（Ｐ〈０．０１），ＮＹＱ可显著降低实验动物Ｃｅｒ中ＡｃｈＥ活性（Ｐ〈０．０５～０．０１），增加Ｍ－受体Ｒｔ值（Ｐ〈０．０５～０．０     

血管通对实验性动脉粥样硬化家兔血管壁血小板衍化生长因子A、B及c－myc基因表达的影响

本实验采用斑点印迹杂交和原位杂交技术，进一步探讨血管通对与血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生相关基因表达的影响。结果表明，高脂组家兔血管壁血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ的ｍＲＮＡ呈高表达，杂交阳性颗粒主要分布在动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块边缘区及新生斑块区的ＳＭＣ胞浆内，而血管通组家兔血管壁ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ表达水平明显低于高脂组；高脂组血管斑块组织ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达水平亦比正常组高，血管通组血管壁ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平下降。上述结果初步说明血管通可能是通过影响血管壁ＰＤＧＦ－Ａ、ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达水平，以抑制ＶＳＭＣ增生，阻止ＡＳ形成。     

大蒜素对培养的兔主动脉平滑肌细胞增殖的影响

通过培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）氚胸腺嘧啶核苷掺入量和培养液中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）、前列环素（ＰＧＩ_２）及环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）的测定，观察了大蒜素对ＳＭＣ增殖的影响。结果表明：大蒜素有抑制ＳＭＣ增殖的作用，其作用呈剂量依赖关系。大蒜素可能通过增加ＳＯＤ活性，降低ＬＰＯ水平，升高ＰＧＩ_２，ｃＡＭＰ水平（Ｐ均＜０．０５～０．０１），从而抑制ＳＭＣ增殖。     

中药白龙与HMBA对人癌周期细胞CKI-P16的调控

目的 :研究中药白龙与西药环六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)对人癌细胞中周期蛋白抑制因子P16的表达与调节。方法 :采用Northernblot、Westernblot等方法检测人癌细胞在白龙或HMBA作用下P16的表达调节。结果 :在白龙或HMBA作用下癌细胞G1期P16的表达增加 ,这一作用与cAMP PKA和DAC PKC两套信号通路共调节作用密切相关。当以PKA抑制剂阻断PKA通路时 ,P16表达下降 ,相反当PKC通路被阻断时P16表达水平升高。结论 :(1)癌细胞G1期P16的低表达 (与其他时相比较 )可能是P16不能有效抑制癌细胞恶性变化的重要原因。 (2 )白龙和HMBA对肿瘤细胞的增殖抑制机理与G1期细胞P16表达升高相关。 (3)白龙和HMBA对人癌细胞内P16的表达调节表现了中西药对肿瘤细胞调节机理的共性。 (4 )首次阐明了P16上游调控与cAMP/PKC信号通路密切相关。     

中药白龙与HMBA对人癌周期细胞CKI-P16的调控

目的：研究中药白龙与西药环六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对人癌细胞中周期蛋白抑制因子P16的表达与调节。方法：采用Northern blot、Western blot等方法检测人癌细胞在白龙或HMBA作用下P16的表达调节。结果：在白龙或HMBA作用下癌细胞G1期P16的表达增加，这一作用与cAMP-PKA和DAC－PKC两套信号通路共调节作用密切相关。当以PKA抑制剂阻断PKA通路时，P16表达下降，相反当PKC通路被阻断时P16表达水平升高。结论：（1）癌细胞G1期P16的低表达（与其他时相比较）可能是P16不能有效抑制癌细胞恶性变化的重要原因。（2）白龙和HMBA对肿瘤细胞的增殖抑制机理与G1期细胞P16表达升高相关。（3）白龙和HMBA对人癌细胞内P16的表达调节表现了中西药对肿瘤细胞调节机理的共性。（4）首次阐明了P16上游调控与cAMP/PKC信号通路密切相关。     

中药白龙片与HMBA对人胃癌不同周期细胞癌基因与抑癌基因表达调控的共性研究

目的：探讨复方中药白龙片与环六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对人胃癌（MGC80－3）细胞不同周期时相细胞癌基因c-H-ras、c-myc，抑癌基因Rb、p53和p21以及PKC－α基因表达的影响。方法：采用Northern印迹法检测基因表达情况。结果：MGC80－3细胞不同周期时相用中药白龙片或HMBA处理，癌基因c-H-ras和c-myc的表达下降，多数周期的抑制率达50．0％以上；促增殖的信使激酶亚类PKC－α基因的表达基本与癌基因表达抑制相似。两类药物对抑癌基因的影响则有显著差异。HMBA处理细胞后，Rb与p21在G1期的表达不是增加而是下降，抑制率分别为39．5％和33．3％，Rb在S期也抑制3．0％。而中药白龙片对Rb与p21在各个周期内均是促进表达的作用，有的周期升高1－2倍以上。但是中药白龙片对抑癌基因p53的表达作用和HMBA都很近似，各个周期都有显著增加，多数时相达125．0％－233．4％。结论：（1）中药白龙片对癌基因和抑癌基因的调节作用基本与诱导分化剂HMBA相似，但中药白龙片的作用优于HMBA。（2）中药白龙片或HMBA对MGC80－3细胞增殖抑制和促分化作用的分子机理和两类药物对细胞周期内癌基因与抑癌基因调节相关。     

中药白龙与环六亚甲基双已酰胺对人胃癌不同周期细胞生长与表型调节的共性研究

目的：对比研究中药复方白龙与西药诱导分化剂环六亚甲基双已酰胺（Hexamethylen bisace-lamide,HMBA）对人胃癌MGC80－3不同周期细胞的生长与表型调节的共性作用。方法：采用高压笑气加胸腺嘧啶脱氧（TdR）双阻断法将MGC80－3细胞分别同步于G1、S、G2、M4个时相，用中药复方白龙和HMBA分别处理各时相细胞。结果：实验结果表明中药白龙或HMBA对MGC80－3不同周期细胞具有显著的增殖抑制作用，抑制率达46.2%－75.3％。细胞在软琼脂上的生长势态和细胞周期中中的增殖抑制相似，但在S与G2期中中药白龙的作用优于HMBA。与此同时细胞质微丝组装，除M期外，均显著增加。结论：中药白龙与HMBA对人胃癌MGC80－3各时相细胞的生长与分化表型作用具有明显的共性特征，为促进中西医结合提供理论认识基础。     

桂枝汤有效部位B对胃肠运动双向调节作用的实验研究Ⅵ—对cAMP、蛋白激酶A和C活性的影响

目的：探讨桂枝汤有效部位B(Fr．B)对胃肠运动双向调节的作用机理。方法：应用放射免疫法测定阿托品致胃肠运动受抑或新斯的明致胃肠运动亢进大鼠下丘脑及胃肠组织cAMP含量、PKA和PKC活性。结果：对阿托品致胃肠运动受抑大鼠,Fr．B可拮抗下丘脑和空肠组织cAMP含量及PKA、PKC活性的降低,对胃窦组织PKA活性的降低也具拮抗作用;对新斯的明致胃肠运动亢进大鼠,Fr．B可升高胃窦组织PKA活性、下丘脑和空肠组织PKC活性,对cAMP含量无明显影响。结论：Fr．B对胃肠运动的双向调节与其影响下丘脑及胃肠局部组织中cAMP含量和蛋白激酶活性有关。     

平郁胶囊对慢性应激抑郁大鼠受体后信号传导通路的影响

目的：观察平郁胶囊对慢性应激抑郁大鼠受体后信号传导通路重要调节因子cAMP, PKA, PKC的影响。方法：Wistar雄性大鼠，随机分为空白组，模型组，平郁胶囊低、中、高剂量组，阳性药帕罗西汀组。除空白组外其余各组大鼠均单笼孤养，并且给予电击足底、冰水游泳、热烘、夹尾等不可预见刺激，周期为21 d。取出大脑的海马和皮质，用放射性免疫法检测其cAMP的含量，用Elisa法检测其PKA和PKC的含量，用放射性同位素法检测其PKA和PKC的活性。结果：模型组大鼠海马和皮质内的cAMP含量、海马内PKA含量及活性、皮质内PKC含量均显著低于正常组，平郁胶囊及阳性药帕罗西汀均能使之上调。结论：平郁胶囊可能是通过调节受体后cAMP-PKA信号传导通路而发挥抗抑郁作用。     

卒中后抑郁大鼠受体后信号转导的变化及中药的干预作用

目的:从受体后信号转导通路上重要调节因子cAMP、PKA及PKC的角度,探讨卒中后抑郁模型受体后信号转导的变化及中药颐脑解郁方的干预作用.方法:在卒中后抑郁大鼠模型上,采用放射性同位素等方法,观察PSD大鼠脑前皮质及海马cAMP含量、PKA及PKC活性的变化及中药颐脑解郁方的干预作用.结果:卒中后抑郁模型大鼠前额叶皮质、海马cAMP含量及PKA活性明显低于正常组,中药颐脑解郁方能使之上调;模型组PKC活性明显高于正常组,颐脑解郁方能使之下调.结论:卒中后抑郁模型脑皮质及海马受体后cAMP-PKA信号通路系统下调而PKC信号通路上调,中药颐脑解郁方的抗抑郁作用可能与调节受体后cAMP-PKA及PKC信号通路有关.     

加味逍遥汤对抑郁大鼠海马cAMP,PKA,PKC的影响

目的:从信号转导通路上重要调节因子cAMP(环磷酸腺苷),PKA(蛋白激酶A)及PKC(蛋白激酶C)的角度,探讨抑郁大鼠模型受体后信号转导的变化及加味逍遥汤的干预作用.方法:将SD大鼠随机分为6个组,每组10只,即正常组、模型组、氯米帕明组(13.5 mg·kg-1)、加味逍遥汤高、中、低剂量组(生药11.7,5.85,2.925 g·kg-1).造模同时各组按10 mL·kg-1体重给药,正常组、模型组给予等量的生理盐水,每日1次,连续24 d.末次给药后1h,快速断头处死,在冰上剥离大脑,分离海马迅速放入冻存管,投入液氮中,随后置于-70℃低温冰箱保存备用.按ELISA试剂盒说明用酶标仪检测大鼠海马cAMP,PKA及PKC的含量变化.结果:与模型组比较,各组均能增加大鼠海马cAMP,PKA及PKC的含量,差异有显著性意义(P＜0.05),加味逍遥汤各剂量组cAMP,PKA及PKC的含量增加,随剂量增加作用加强,与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.05);加味逍遥汤高、中剂量组与氯米帕明组相比cAMP,PKA及PKC含量差异没有显著性意义.加味逍遥汤高、中剂量组与低剂量组相比,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:加味逍遥汤可能是通过调节受体后cAMP,PKA及PKC信号传导通路发挥抗抑郁作用.     

桂枝汤对发热大鼠下丘脑组织PKA,PKC活性的影响

目的:研究前列腺素受体Ⅲ型(EP3)受体激动剂硫前列酮(Sul)致热大鼠下丘脑蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)活性的变化及桂枝汤的解热作用机制。方法:选用Sul 1 mg.kg^-1脑室注射(icv)致大鼠发热,观察H-89(特异性PKA抑制剂)1 mg.kg^-1(icv),calphostin C(特异性PKC抑制剂)1 mg.kg^-1(icv)和桂枝汤10 g.kg^-1(ig)对模型大鼠发热的影响,继而采用放射性同位素法,测定给予桂枝汤后EP3受体激动剂致热大鼠下丘脑组织中PKA,PKC的活性变化。结果:Sul脑室注射后,呈现单峰的发热曲线,峰值时在注射后0.5 h左右,并伴有下丘脑组织中PKA活性显著增高和PKC活性的降低倾向。PKA,PKC抑制剂及桂枝汤均可使模型大鼠的发热曲线下移;口饲桂枝汤能显著抑制造模动物下丘脑PKA的活性,大剂量桂枝汤还能显著降低PKC的活性。结论:下丘脑组织中的PKA,PKC参与了EP₃致大鼠发热的病理过程,桂枝汤可抑制EP₃激动诱致的PKA活性增高,这可能是桂枝汤解热作用靶点之一。