耳针对血管性痴呆大鼠记忆及海马凋亡相关蛋白表达的影响

目的：探讨耳针对血管性痴呆大鼠（VD）学习记忆障碍的改善与bcl-2,bax凋亡相关蛋白表达的关系。方法：采用4－血管阻断制备VD大模型,针刺脑、肾耳穴后,作免疫组化,行为学测试及图像分析,结果：耳针治疗后VD大鼠海马CA1区bcl-2,bax蛋白表达增加,特别是bcl-2明显增加,与学习记忆成绩呈正相关,结论：耳针改善VD大鼠学习记忆,可能是通过针刺调控细胞凋亡,达到对VD大鼠海马神经元的保护作用。     

耳针改善血管性痴呆大鼠记忆与nNOS表达的关系

目的 探讨耳针对血管性痴呆大鼠（VD）学习记忆的改善及与nNOS蛋白表达的关系。方法采用4－血管阻断的方法,建立大鼠VD模型,然后进行耳穴肾, 脑针刺治疗,用免疫组化法检测海马nNOS蛋白的变化,并用Nissl染色方法,结合图象分析统计海马神经元丢失比率;同时采用Y型迷宫,进行行为学检测,定量测定其学习记忆成绩,结果 耳针治疗后VD大鼠海马CA1区nNOS蛋白表达减少,海马CA1区神经元技失比率较VD模型组减少,与学习记忆成绩呈负相关。结论 耳针改善了VD大鼠学习记忆,这可能是针刺抑制脑缺血后nNOS的过量增加,达到对VD大鼠海马神经元的保护作用。     

姜黄素对血管性痴呆模型大鼠海马神经元凋亡和蛋白表达的影响

目的：观察姜黄素对血管性痴呆（VD）模型大鼠海马CA1区神经元凋亡和Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨姜黄素抗脑缺血损伤改善VD的作用机制。方法：取SD大鼠,采用不同时间点分别结扎左、右颈总动脉建立VD模型,将建模成功大鼠随机分为姜黄素组、模型组和假手术组,每组10只,灌胃给予相应药物,1次/d,连续给药4w后,用TUNEL法检测各组海马神经元凋亡,用免疫组织化学法检测其Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果：模型组大鼠海马可见大量凋亡神经元;模型组Bcl-2及Bax蛋白表达明显增加,与假手术组比较差异均有显著意义;而姜黄素组大鼠凋亡神经元和Bcl-2及Bax蛋白表达有明显改善。结论：姜黄素可通过减少海马神经元凋亡,影响Bcl-2及Bax蛋白表达来改善VD模型大鼠学习记忆能力。     

胡雪梅,朱正耀,唐中生*,朱世杰,范瑞娟,谢高宇

目的:探讨穴位埋线对血管性痴呆(VD)大鼠海马COX-2、PGE2表达的影响。方法:将大鼠随机分为4组,每组20只,分别为假手术组、VD模型组、VD穴位埋线组、VD尼莫地平组。两个治疗组分别运用穴位埋线和尼莫地平灌胃进行治疗,共治疗15天。治疗结束后,进行水迷宫行为学测试,采集血清后断头取脑海马CA1区组织,检测各组大鼠海马CA1区COX-2以及血清PGE2表达。结果:VD模型组大鼠出现了明显的学习记忆障碍,海马CA1区COX-2以及血清PGE2含量均明显增高,与假手术组比较,差异有统计学意义(P0.05);穴位埋线组大鼠水迷宫学习记忆成绩显著提高,海马CA1区COX-2以及血清PGE2含量均明显降低,与VD模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:穴位埋线可能是通过降低海马CA1区COX-2和血清PGE2蛋白表达,抑制炎症发展,从而改善VD大鼠的学习记忆能力。     

耳穴埋针对血管性痴呆大鼠记忆障碍及β淀粉样前体蛋白表达的影响

目的探讨耳针对血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆障碍的改善及其与β淀粉样前体蛋白（APP）表达的关系。方法采用4-血管阻断（4-VO）全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型，针刺脑、肾耳穴后，作行为学检测、免疫组化、图像分析。结果迷宫学习记忆能力测试表明，耳针组大鼠成绩优于VD模型组（P〈0．05）。耳针组大鼠脑内APP免疫阳性神经细胞数低于VD模型组，其平均光密度值高于VD模型组（P〈0．05）。结论耳针改善了VD模型大鼠学习记忆，这可能是耳针抑制了VD大鼠APP的过量表达，从而对VD模型大鼠海马神经元起到保护作用。     

养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达的影响

目的：观察养血清脑颗粒对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1区脑源性神经营养因子（BDNF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的影响。方法：72只SD大鼠随机分为假手术组、VD模型组（模型组） 和养血清脑颗粒治疗组（治疗组）,采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作VD大鼠模型,应用Morris水迷宫实验检测VD大鼠的学习记忆能力,采用免疫组化法检测海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠出现明显的学习记忆障碍,各时间点海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达增多（P<0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠学习记忆障碍明显改善,各时间点海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达明显增多（P<0.01）,以4周时表达最明显。结论：养血清脑颗粒能改善VD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与养血清脑颗粒上调BDNF和bFGF蛋白表达有关。     

基于PI3K/Akt/Bad信号通路探讨益髓解毒方对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨益髓解毒方对血管性痴呆(VD)大鼠海马神经元损伤及调控细胞凋亡信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)关联死亡启动子重组蛋白(Bad)的作用机制。方法:40只SD大鼠分为假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组、益髓解毒方组,每组10只。双侧颈总动脉永久结扎(2-VO)法制备VD动物模型,假手术组和模型组灌胃生理盐水;盐酸多奈哌齐组灌胃盐酸多奈哌齐原药0.52 mg·kg~(-1);益髓解毒方组灌胃益髓解毒方颗粒(11.11 g·kg~(-1));1次/d。30 d后,以Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力;苏木素-伊红(HE)染色观察海马CA1区组织形态结构;透射电镜(TEM)观察大鼠海马CA1区神经元超微结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Akt,Bad mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织Akt,磷酸化(p)-Akt,Bad蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠学习、记忆能力下降明显(P0.05),海马组织病理结构及神经元超微结构病变明显,海马组织Akt mRNA和Akt,p-Akt蛋白表达水平明显下降(P0.05),Bad mRNA和Bad蛋白表达水平明显升高(P0.05);与模型组比较,益髓解毒方组可明显提高大鼠的学习记忆能力,改善海马CA1区神经元细胞及超微结构变化,上调海马组织Akt mRNA和Akt,p-Akt蛋白表达水平,降低Bad mRNA和Bad蛋白表达水平(P0.05)。结论:益髓解毒方可明显提高VD大鼠学习、记忆能力,改善海马组织及神经元超微结构病理变化,修复神经元受损细胞,这可能与促进Akt磷酸化,激活PI3K/Akt/Bad信号通路,发挥抗细胞凋亡保护神经元有关。     

针刺督脉穴对血管性痴呆模型大鼠行为及细胞凋亡影响的实验研究

目的:评价针刺督脉穴对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠模型的学习记忆改善情况及可能机制,为针刺治疗血管性痴呆提供理论依据。方法:采用两侧颈总动脉血管阻断加硝普钠降压法复制VD大鼠模型;对VD大鼠模型进行西药(喜得镇)、针刺和电针干预;采用morris水迷宫法观察学习记忆情况;应用免疫组化法测定海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白表达及原位末端标记法检测细胞凋亡。结果:(1)morris水迷宫学习记忆能力检测,经过6次训练,与对照组比较,模型组跳台时间延长;与模型组比较,各治疗组跳台时间明显缩短,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)凋亡相关蛋白检测结果显示:与对照组比较,模型组海马组织bcl-2、bax及细胞凋亡明显增高,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,各治疗组海马组织bcl-2水平增高,bax及细胞凋亡水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:(1)各治疗组均可改善VD模型大鼠的认知能力,提高学习记忆成绩。(2)各治疗组均可抑制VD大鼠海马组织细胞凋亡。     

白芍总苷对脑缺血大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元的保护作用

目的:研究白芍总苷对脑缺血大鼠学习记忆能力的影响以及对海马CA1区神经元的保护作用并初探其机制。方法:通过结扎双侧颈总动脉制备大鼠脑缺血模型,术后第二天开始连续28 d灌胃给药白芍总苷(50、100、200 mg·kg~(-1)),每天1次。28 d后,通过Morris水迷宫实验和跳台实验评价大鼠学习记忆能力;HE染色观察海马CA1区神经元形态,TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡状况,免疫组织化学(IHC)法检测海马Bcl-2、Bax表达,检测抗氧化酶活性和MDA含量。结果:100、200 mg·kg~(-1)白芍总苷能够显著缩短脑缺血大鼠逃避潜伏期,显著缩短跳台潜伏期、增加跳台次数(P0.05或P0.01);明显改善海马CA1区神经元病理性形态结构变化和细胞凋亡状况,显著降低凋亡指数(Apoptosis Index,AI)(P0.01),显著上调海马Bcl-2表达、下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax值(P0.05或P0.01),显著改善抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性并降低MDA含量(P0.05或P0.01)。结论:白芍总苷具有改善脑缺血大鼠学习记忆能力的作用;可能与其抑制海马CA1区神经元病变、调节Bcl-2和Bax表达、抑制海马CA1区细胞凋亡有关。     

脑通汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡基因Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax比例变化的影响

目的观察脑通汤对血管性痴呆大鼠行为学、海马CA1区神经元凋亡基因Bcl-2、Bax表达及Bcl-2/Bax比例变化的影响。方法采用改良四血管法(4-VO)制备血管性痴呆(VD)模型,Morris水迷宫测定大鼠学习、记忆能力,免疫组化法检测海马CA1区神经元凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白表达水平,计算Bcl-2/Bax比例。结果与模型组比较,脑通汤大、中剂量组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增多,Bax表达降低,Bcl-2表达增高,Bcl-2/Bax比例升高。结论脑通汤可明显提高Bcl-2表达,减少Bax表达,升高Bcl-2/Bax比例,抑制神经细胞凋亡,从而减轻脑缺血对神经血管单元的损伤,改善VD大鼠学习、记忆能力,这可能是其治疗血管性痴呆的作用机制之一。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠脑细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的 :研究针刺在大鼠局灶性脑缺血中的脑保护作用及分子机制。方法 :采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血 (MCAO) 2 4hr模型 ,40只雄性大鼠随机分为脑缺血组和脑缺血 +针刺组 ,每组 2 0只 ,采用免疫组织化学方法观察两组脑细胞凋亡数与Bcl 2蛋白表达。结果 :脑缺血 +针刺组细胞调亡数 ( 3 .1 6± 1 .1 2个 /视野 )低于脑缺血组 ( 7.2 3± 1 .50个 /视野 ) ,P <0 .0 5。Bcl 2蛋白染色阳性细胞数 ( 89± 1 4个 /mm2 )高于脑缺血组 ( 42± 2 1个 /mm2 )P <0 .0 5。结论 :针刺可明显减轻局灶性脑缺血损伤 ,其提高Bcl 2蛋白的表达 ,进而抑制细胞凋亡 ,是其脑保护作用的分子机制之一。     

耳穴埋针对血管性痴呆大鼠记忆障碍及β淀粉样蛋白表达的影响

目的:探讨耳穴改善血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆障碍的反应机制。方法:采用4-血管阻断(4-Vesselocclusion,4-VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型,随机分为假手术组、正常对照组、模型组、耳针组,针刺耳穴脑、肾后,做免疫组化、行为学检测、图像分析。结果:耳针能显著降低VD模型大鼠脑内顶叶皮层Aβ免疫阳性神经元的细胞数,升高其平均光密度值(P<0·05)。结论:耳针能减少或抑制Aβ的过度产生,这可能是减少了Aβ的沉积,阻止Aβ装备成有毒性的聚合体,保护神经元免受Aβ的神经毒性,从而改善VD模型大鼠学习记忆。     

EFFECT OF ACUPUNCTURE ON EXPERIMENTAL CEREBRAL INFARCTION IN RATS

Ｗｅｈａｖｅｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｗｅｒｅａｃｈｉｅｖｅｄｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｅｒｅｂｒａｌｉｎｆａｒｃ ｔｉｏｎｍａｉｎｌｙｗｉｔｈ“ＮｉｅＳａｎＺｈｅｎ”ａｎｄ“ＳｉＳｈｅｎＺｈｅｎ”[1 ] .Ａｔｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔ ,“ＮｉｅＳａｎＺｈｅｎ”ａｎｄ“ＳｉＳｈｅｎＺｈｅｎ”ａｒｅｗｉｄｅｌｙａｄｏｐｔｅｄｉｎｔｈｅｃｌｉｎｉｃ .Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏａｃｑｕｉｒｅｒｅｌｉａｂｌｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄａｔａ ,ｗｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｃｈａ…     

针刺“百会”、“大椎”对拟血管性痴呆大鼠脑内谷胱甘肽过氧化物酶及细胞凋亡的影响

目的 :建立拟血管性痴呆 (VD)的动物模型 ,探讨针刺“百会”及“大椎”对VD大鼠脑内谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)的影响并观察海马区内细胞凋亡情况。方法 :选用纯系Wistar老年大鼠 3 6只 ,随机分为假手术组、模型组、针刺组和西药组 ,采用 2 血管阻断法 ( 2 VO)制作VD大鼠模型 ,之后进行“百会”、“大椎”针刺治疗。检测大鼠穿梭箱实验成绩及脑内GSH PX的活力 ,采用TdT介导的原位末端标记法观察海马区内细胞凋亡情况。结果 :经统计学处理数据表明 ,针刺VD大鼠的“百会”、“大椎” ,可明显减少VD大鼠在穿梭箱实验中的电击次数和电击时间 ,增强脑内GSH PX的活力 ,明显减轻VD大鼠海马区内神经元的损伤。结论 :针刺“百会”、“大椎”能提高VD大鼠的学习记忆能力 ,改善自由基代谢 ,促进受损神经元的恢复。     

耳针对血管性痴呆大鼠行为学及大脑皮质STAT1表达的影响

目的:探讨耳穴改善血管性痴呆(VascularDementia,VD)大鼠学习记忆障碍的反应机制。方法:雄性Wistar大鼠30只,随机分为3组:正常组,模型组,耳针组,采用4-血管阻断(4-Vesselocclusion,4-VO)全脑缺血再灌注制备VD大鼠模型,Y-型迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,SABC法检测大脑信号转导和转录激活子1(STAT1)阳性细胞的表达。结果:耳针能显著降低模型鼠大脑皮质的信号转导和转录激活子1(STAT1)免疫阳性细胞数,升高其平均光密度值(P0.05)。结论:耳针能减少或抑制STAT1的过度产生,改善VD模型大鼠学习记忆。     

耳针对阿尔茨海默病大鼠记忆能力及ChAT和GFAP表达的影响

目的:观察耳针对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,并探讨其可能机制.方法:30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、耳针组,每组10只.模型组、耳针组采用海马CA1区微量多次注射冈田酸(OA)建立AD大鼠模型,对照组注入等体积的对照液二甲亚砜(DMSO).耳针组采用针刺"脑""肾"耳穴治疗,模型组、对照组大鼠耳部未做处理.通过Morris水迷宫观察大鼠行为学改变,免疫组化方法观察胆碱乙酰转移酶(ChAT)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果:耳针治疗后,与模型组比较,耳针组Morris水迷宫定向航行试验中AD大鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P＜0.01),空间探索试验中撤去站台后原站台象限活动时间明显延长(P＜0.05),穿越站台次数明显增多(P＜0.01),海马及皮层ChAT表达增多(P＜0.01,P＜0.05),而海马CA1区GFAP阳性反应物表达明显减少(P＜0.01).结论:耳针可以改善AD大鼠学习记忆能力,其可能机制是耳针降低胆碱能神经元的损伤以及减少星形胶质细胞的异常活化与增生.     

针刺对糖尿病合并脑缺血大鼠海马细胞色素氧化酶的影响

目的 :探讨细胞色素氧化酶 (COX)在糖尿病合并脑缺血发病机制中的作用及针刺对其的影响。方法 :采用腹腔注射链脲佐菌素 (Streptozotocin ,STZ)建立糖尿病动物模型 ,注射后 3d用颈总动脉阻断法建立脑缺血模型。注射STZ 7d后测定空腹血糖 ,高于 1 5.5mmol/L定为糖尿病模型 ,术后 1个月经行为学测定确定糖尿病脑病模型。动物分为正常对照组 (n =5)、糖尿病 +假手术组 (n =5)、糖尿病 +脑缺血组 (n =6)、糖尿病 +脑缺血 +针刺组 (n =6) ,采用组织化学方法观察大鼠海马CA1区和CA3区COX活性反应物的分布 ,用图像分析仪对其光密度进行测定。结果 :糖尿病脑缺血组的大鼠海马CA1和CA3区的COX光密度明显低于正常 (P <0 .0 0 1 ) ,而针刺组高于糖尿病脑缺血组 (P <0 .0 0 1 )。结论 :糖尿病脑缺血可导致大鼠脑内海马CA1和CA3区的COX活性降低 ,针刺可以提高这两个区域的COX活性 ,从而提高细胞代谢的水平。     

电针对血管性痴呆小鼠海马神经元HSP70表达的影响

目的:观察电针对血管性痴呆(VD)小鼠海马神经元凋亡及相关基因HSP70表达的影响。方法:以反复脑缺血再灌注法复制VD小鼠模型,电针肾俞、膈俞和百会穴,对照组灌胃喜得镇,分别于治疗1天和7天后,以FCM法检测小鼠海马细胞凋亡率、HSP70表达。结果:术后1天,模型小鼠海马细胞凋亡率明显增高,术后7天较术后1天还高。说明海马细胞由于反复脑缺血再灌注而出现凋亡。术后1天,模型小鼠海马细胞HSP70表达明显下降,7天时则显著升高。电针和喜得镇在两个时点均可上调小鼠海马细胞HSP70的表达,降低凋亡率,但以电针作用为优。结论:电针具有抑制细胞凋亡、保护神经元的作用,可能是电针改善VD小鼠智能的作用机理之一。