抗血管紧张素Ⅱ1型受体抗体阳性孕鼠模型的制备

目的制备抗血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）抗体阳性的孕鼠模型,为先兆子痫疾病的自身免疫机制研究提供重要工具。方法以合成的人AT1R细胞外第二环肽段（AT1R—ECⅡ）为抗原主动免疫雌性Wistar大鼠,待雌鼠体内抗AT1R抗体达高峰后,将其与正常雄鼠（未免疫）交配,从而建立抗AT1R抗体阳性的孕鼠模型。用SA—ELISA法检测孕鼠妊娠中期血清中抗AT1R抗体的水平、免疫球蛋白类型及亚类。结果免疫雌鼠体内抗AT,R抗体滴度在4周时明显升高,8周时达高峰（A值为2．89±0．21,同期对照组A值为0．44±0．06,P〈0．01）;与正常雄鼠交配怀孕后14d时,免疫孕鼠血清中的抗AT1R抗体仍维持高滴度。该抗体属于IgG类免疫球蛋白,而非IgM及IgA类,在大鼠IgC的4个亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c）中,该血清抗体主要属于IgG2b亚型（A值为0．32±0．04,同期对照组A值为0．08±0．01,P〈0．01）,尚有极少部分属于IgG2a亚型（A值为0．10±0．01,同期对照组A值为0．07＋0．01,P〈0．05）。结论用主动免疫法可使孕鼠体内产生高滴度的抗AT,R抗体,且该抗体的亚型与先兆子痫患者体内的AT1受体自身抗体（AT1-AA）具有良好一致性,所以该造模方法可以作为从免疫学角度研究先兆子痫的一种工具。     

血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体致血管内皮炎性损伤的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）自身抗体（AT1-AA）长期作用下大鼠血管内皮是否会发生炎性损伤。方法以人工合成的人AT1R的细胞外第二环功能表位肽段（AT1R—ECⅡ）为抗原,主动免疫雌性Wistar大鼠9个月,建立AT广AA阳性的大鼠模型。血细胞涂片法检测大鼠血中血细胞变化情况,以激光共聚焦法检测大鼠血管内皮细胞细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达,以免疫组化法检测血管内皮细胞血管细胞间黏附分子-1（VCAM-1）的表达。结果主动免疫的Wistar大鼠（n=9）血清中产生了高滴度的IgG类AT1-AA,从免疫2个月开始直到免疫结束,抗体维持在较恒定的高水平[免疫9个月时光密度值与同期溶剂对照组比较,（1．79±0．26）比（0．43±0．15）,P〈0．01]。免疫结束时,同溶剂对照组相比,大鼠血中自细胞数目有升高趋势,血小板数量显著下降,而血红蛋白含量未变。大鼠胸主动脉内皮细胞ICAM-1[荧光值（2．97±0．50）比（1．63±0．48）,P〈0．05]和VCAM-1[平均光密度值M00（O．27±0．04）比（0．17±0．04）,P〈0．05]表达均显著上调。结论AT1-AA长期刺激可引起大鼠血管内皮细胞发生炎性损伤。     

免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体IgG亚类的分布

目的明确免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类,为进一步研究此类抗体的作用机制提供实验依据。方法以合成的大鼠β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体细胞外第二环肽段为抗原分别主动免疫Wistar大鼠,应用免疫球蛋白纯化技术特异性提纯其血清中IgG类抗体,应用BCA进行蛋白定量,调整血清中蛋白量一致,用SA—ELISA法检测抗β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类。结果免疫组中属于IgG2a亚类的抗β1肾上腺素受体抗体的A值为（0．45±0．01）,明显高于对照组（0．08±0．003,P〈0．05）;免疫组中属于IgG2b亚类的抗艮肾上腺素受体抗体的A值为（0．59±0．02）,显著高于对照组（0．2±0．02,P〈0．05）;免疫组中属于IgG2a亚类的抗M2乙酰胆碱受体抗体的A值为（0．56±0．04）,显著高于对照组（0．12±0．01,P〈0．05）。结论免疫大鼠血清中抗β1肾上腺素受体抗体和抗M2乙酰胆碱受体抗体主要属于IgG2a亚类,抗β3肾上腺素受体抗体主要属于IgG2b亚类。     

抗血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体对在体大鼠心功能的影响

目的观察抗血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1-R）抗体对在体大鼠心功能的影响。方法健康Wistar大鼠随机分为5组：对照组、抗AT1-R抗体组、抗AT1-R抗体＋AT1受体阻断剂Losartan处理组、血管紧张素Ⅱ组、血管紧张素Ⅱ＋Losartan组。通过MS2000生物信号记录分析系统记录左心室收缩压（LVsP）、左心室内压最大上升速率和最大下降速率（±dP／dtmax）。结果抗AT1-R抗体可显著升高大鼠LVSP、±dP／dtmax（P〈0．05）,且这种增强心功能的效应可被Losartan逆转。结论抗AT1-R抗体可能通过激活ATl受体而发挥正性变力效应。     

抗β1肾上腺素受体细胞外第二环自身抗体长期存在对大鼠心肌细胞内游离钙的影响

目的观察抗β1肾上腺素受体细胞外第二环（β1-AR—EcⅡ）自身抗体长期存在对大鼠心肌细胞胞内游离钙水平的影响。方法分别将抗β1-AR—EC。抗体阴性和阳性大鼠血清中的IgG通过鼠尾静脉注入正常大鼠体内,建立对照及被动免疫模型。用ELISA方法定期监测血清中抗β1-AR—ECⅡ抗体水平;在免疫末期用BL-410生物信号记录分析系统测定大鼠在体心功能的变化;用激光共聚焦显微镜观察大鼠心肌细胞胞内游离钙水平。结果在免疫第40周时与对照组相比,免疫组±dp／dmax下降[（311．0±20．3）kPa／s比（465．0±24．0）kPa／s,P〈0．01],-dp／dt-下降[（-285．0±21．0）kPa／s比（-395．0±23．0）kPa／s,P〈0．01];LVDP升高[（6．44±0．36）kPa比（0．50±0．16）kPa,P〈0．01];心室肌细胞胞内游离钙水平显著升高（503．30±35．22比52．88±1．12,P〈0．01）。结论抗β1-AR-ECⅡ自身抗体长期存在可使大鼠心室肌细胞胞内游离钙水平升高发生钙超载,可能引起心脏功能的改变。     

缬沙坦对肝纤维化大鼠瘦素表达的影响

背景：瘦素与肝纤维化的形成和发展有关,血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）拮抗剂可降低大鼠脂肪组织瘦素的合成和分泌：目的：探讨ATIR拈抗剂缬沙坦对免疫性肝纤维化大鼠肝组织瘦素表达的影响。方法：36只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、模型组和缬沙坦预防组,后两组腹腔注射绪血清建立肝纤维化模型．缬沙坦预防组大鼠于造模开始后每天予缬沙坦（30mg／kg）灌胃。造模第10周处死大鼠,行HE染色和天狼猩红染色分析肝纤维化程度和胶原面积,以免疫组化法检测肝组织瘦素表达,结果：与正常对照组相比,模型组肝纤维化程度显著增强（P〈0．05）;胶原面积显著增多（10．08％±2．01％对0．62％±0．31％,P〈0．01）,肝组织瘦素表达显著增高（5．05±2．91对0．44±0．27,P〈0．05）。经缬沙坦干预后,上述指标均显著改善。结论：瘦素可促进纤维化发生,AT1R拮抗剂缬沙坦能通过降低肝组织瘦素表达而延缓肝纤维化的发展,这可能是其抗纤维化机制之一。     

赤雹根总皂苷对佐剂性关节炎大鼠脾淋巴细胞及腹腔巨噬细胞的影响

目的研究赤雹根总皂苷对佐剂性关节炎（AA）大鼠脾T淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞IL-1β、TNF-α合成的影响。方法以弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎,将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、赤雹根总皂苷160、80、40mg／（kg·d）组和雷公藤12mg／（kg·d）组,另取10只正常大鼠作为对照组。连续灌胃给药21d,给药后第22天处死大鼠。制备大鼠脾细胞悬液,用刀豆蛋白A（ConA）诱导脾T淋巴细胞增殖,MqT法测定增殖指数;制备大鼠腹腔巨噬细胞悬液,用脂多糖（LPS）诱导IL-1β、TNF-α合成,ELISA法检测IL-1β、TNF-α含量。结果与对照组比较,模型组大鼠脾T淋巴细胞增殖反应增强（P〈0．01）,腹腔巨噬细胞IL-1β、TNF-α合成增加（P均〈0．01）,赤雹根总皂苷能降低其脾T淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞IL-1β、TNF-α合成（P均〈0．01）。结论赤雹根总皂苷对大鼠AA的治疗作用与抑制脾T淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞IL-1β、TNF-α合成有关。     

甲状腺乳头状癌组织中ANG-Ⅱ、AT1R、VEGF表达及意义

目的探讨甲状腺乳头状癌（PTC）的发生机制。方法采用免疫组化SP法检测20例PTC（PTC组）、20例甲状腺良性病变（良性组）和15例正常甲状腺（对照组）组织标本中血管紧张素Ⅱ（ANG-Ⅱ）及其受体1（AT1R）和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。结果ANG-Ⅱ、ATIR、VEGF阳性率PTC组明显高于良性组和对照组（P〈0．05）,良性组高于对照组（P〈0．05）;PTC组织中ANG-Ⅱ、AT1R与VEGF蛋白表达呈显著正相关（r=0．594,P〈0．01;r=0．446,P〈0．05）。结论ANG-Ⅱ、AT1R高表达促进了PTC的发生,其机制可能为诱导VEGF产生,促进肿瘤新生血管形成。     

血管紧张素Ⅱ及其受体1在食管鳞癌血管生成中的作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及其受体1（AT1R）在食管鳞癌组织中的表达及其在血管生成中的作用。方法 应用免疫组化SP法检测30例食管鳞癌患者癌组织及其食管断端正常鳞状上皮中AngⅡ、AT1R和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。结果 AngⅡ、AT1R和VEGF蛋白表达主要定位于鳞癌细胞iAngⅡ、AT1R在鳞癌组织中的表达均显著高于正常鳞状上皮（P均〈0．01）；癌组织中AngⅡ的表达程度与VEGF的表达程度呈正相关（ra′=0．4249，P〈0．05），AT1R的表达程度与VEGF无相关性（ra′=0．1298，P〉0．05）。结论 食管鳞癌癌组织中高水平表达AngⅡ及AT1R，二者可能通过诱导VEGF的产生促进肿瘤新生血管的形成。     

风湿性心脏病患者血清抗β1肾上腺素受体自身抗体的生物学效应

目的探讨风心病患者血清中抗β1肾上腺素能受体（β1AR）自身抗体的生物学效应。方法①应用SA-ELISA方法,检测风心病患者（60例）,正常人（97例）,以及心衰大鼠（33只）和对照大鼠（20只）血清标本中的抗β1AR自身抗体;②亲和层析法纯化风心病患者、心衰大鼠抗体阳性血清中的IgGs;③观察抗β1AR自身抗体IgGs对乳鼠心肌细胞搏动频率的影响;④测定抗β1AR自身抗体IgGs对成年大鼠心肌细胞腺苷酸环化酶活性的影响。结果风心病患者血清中抗β1AR自身抗体的阳性率和抗体滴度分别为43%和1∶（98.3±1.6）,均显著高于正常人的4%和1∶（14.6±2.7）,P<0.01,类似的结果见于心衰大鼠[85%,1∶（67.3±2.4）]与对照大鼠[5%,1∶（17.3±2.1）]（P<0.01）之间;纯化的风心病患者、心衰大鼠抗β1AR抗体IgGs均可增加乳鼠心肌细胞的搏动频率,且在6 h内不脱敏;还可增强成年大鼠心肌细胞的腺苷酸环化酶活性,使cAMP产生量增加。结论风心病患者血清中的抗β1AR自身抗体具有激动剂样刺激效应,即具有正性变时效应（不易脱敏）、可增强腺苷酸环化酶活性。提示抗β1AR自身抗体可能是风心病患者神经体液调节功能紊乱的原因之一。     

比较替米沙坦与缬沙坦对人动脉平滑肌细胞增殖及血管紧张素Ⅱ受体表达的影响

目的 比较缬沙坦与替米沙坦对离体人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)增殖及对血管紧张素受体表达的影响.方法 HASMCs 复苏、传代后,分别用不同浓度及条件的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、缬沙坦(Val)、替米沙坦(Tel)、GW9662 干预HASMCs,采用CCK-8 检测细胞增殖能力,Western blot 方法检测细胞血管紧张素Ⅱ受体(AT)蛋白表达.结果 25 μmol/L Tel 与25 μmol/L Val 相比可更强地抑制1 μmol/L AngⅡ诱导的HASMCs 增殖.Tel 可抑制无AngⅡ刺激的HASMCs 增殖,且呈剂量依赖性,而Val 无此作用.25 μmol/L Tel 及Val 抑制HASMCs 上AT1受体表达相同(8.6%比17.0%,P>0.05),但Tel 促进AT2受体表达作用更强(29.9%比10.5%,P<0.05).氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)抑制剂GW9662 能抑制吡格列酮对HASMCs 抑制增殖的作用,但不能影响Tel 对HASMCs 抑制增殖作用.结论 替米沙坦比缬沙坦具有更强的抑制HASMCs 增殖及促进AT2受体表达上调的作用.     

抗β1-肾上腺素受体抗体对大鼠T淋巴细胞的作用

目的观察抗β1-肾上腺素受体（AR）抗体对大鼠T淋巴细胞的作用。方法用人工合成的β1-肾上腺素受体细胞外第二环肽段（β1-AR—ECⅡ）作为抗原主动免疫大鼠,采用流式细胞技术测定大鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化;观察抗β1-AR自身抗体对培养的淋巴结T细胞的影响。结果免疫组血清中T淋巴细胞亚群CD4^＋／CD8^＋在处理24h后开始升高,在第7天时达到高峰并持续2个月;抗β1-AR自身抗体可促进T淋巴细胞增殖,与β1-AR特异性阻断剂Metoprolol或β1-AR—ECⅡ共同作用时,可使抗体的促增殖效能显著减弱。结论抗β1-AR自身抗体可以使免疫系统失衡,促进T淋巴细胞的增殖。     

高脂状态对大鼠动脉血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA及一氧化氮的影响

目的观察高脂饮食对大鼠动脉血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡ1,AT1)mRNA表达、血清一氧化氮(nitrogen monoxidum,NO)水平的影响及降脂治疗的作用,探讨高脂饮食诱导内皮功能障碍的可能机制。方法将30只SD大鼠按电脑数字随机法分为3组,每组10只:正常对照组、高脂血症组和高脂血症治疗组。高脂血症组持续高脂喂养,高脂血症治疗组4周后在高脂喂养同时喂服辛伐他汀10mg/(kg·d),高脂血症组不予药物治疗。第20周末检测3组的血清脂蛋白浓度及AT1mRNA表达水平、血清AngⅡ和NO浓度。结果高脂血症组和高脂血症治疗组第4周末血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇浓度均高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05)。第20周末,高脂血症治疗组血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇浓度低于高脂血症组差异有统计学意义(P0.05)。3组第20周末收缩压比较,差异无统计学意义[(126±14)mm Hg vs.(127±13)mm Hg vs.(125±13)mm Hg,P0.05;1mm Hg=0.133kPa]。方差分析显示,3组第20周末血清NO2-/NO3-浓度[(38.0±9.9)μmol/L vs.(29.6±7.2)μmol/L vs.(35.8±9.5)μmol/L,P0.05]、主动脉组织AT1mRNA表达水平(0.66±0.05vs.0.75±0.08vs.0.70±0.06,P0.05]差异有统计学意义;3组血清AngⅡ浓度比较差异无统计学意义(P0.05)。相关分析结果显示,AT1mRNA表达水平与血清总胆固醇、三酰甘油浓度呈显著正相关(r=0.708,P0.05;r=0.656,P0.05)。结论高脂可能通过上调AT1受体表达和抑制NO活性而损伤血管,他汀类药物则可逆转这种状态,有利于阻止动脉硬化的发生发展。     

阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖和细胞内NADPH氧化酶-活性氧通路的影响

目的观察阿托伐他汀钙对血管紧张素Ⅱ的促人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖和其诱导的平滑肌细胞内NADPH氧化酶-活性氧通路的干预作用。方法用组织贴块法培养的第2～4代人肠系膜动脉平滑肌细胞作为实验标本;以四甲基偶氮唑盐(MTF)法比色测定各组平滑肌细胞增殖率;流式细胞仪检测被双氢乙酰乙酸-二氯荧光黄(DCFH-DA)标记的细胞内活性氧;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测细胞内p22phox蛋白mRNA的表达变化。结果 (1)与空白对照组比较,加入血管紧张素Ⅱ药物组的细胞增殖率、细胞内活性氧物质生成量、细胞内p22phox mRNA的表达均明显增高(P0.01)。(2)与浓度为10~(-6)mol/L血管紧张素Ⅱ孵育组比较,血管紧张素Ⅱ和阿托伐他汀钙共孵育组的细胞增殖率[阿托伐他汀组(0.242±0.018)比血管紧张素Ⅱ组(0.359±0.024),P0.01]、细胞内活性氧[阿托伐他汀组(130±29)比血管紧张素Ⅱ组(180±34),P0.01]、细胞内p22phox蛋白mRNA的表达[阿托伐他汀组(0.47±0.07)比血管紧张素Ⅱ组(0.71±0.05),P0.01]均降低。结论阿托伐他汀钙可以部分抑制血管紧张素Ⅱ的促人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖和其诱导的细胞内NADPH氧化酶-活性氧通路的作用。     

阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ引起的大鼠心肌连接蛋白43重构的防治作用

目的 观察阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)升高致大鼠心肌缝隙连接蛋白(connexin,Cx)43重构的模型的防治作用.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机按随机数字表法分为对照组(A组)、盐酸异丙基肾上腺素(B组)、盐酸异丙基肾上腺素加阿托伐他汀组(C组),每组IO只.喂养8周后处...     

伊贝沙坦对缺血再灌注心律失常的作用实验研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂伊贝沙坦对缺血再灌注心律失常的作用及其机制。方法:32只Sprague-Dawley雄性大鼠分为缺血/复灌对照组,缺血/复灌+伊贝沙坦(100umol/L)组,缺血/复灌+伊贝沙坦(50umol/L)组,缺血/复灌+伊贝沙坦(100umol/L)+CsA(1umol/L)组,每组8只。观察各组心脏离体灌注下左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、心率(HR)、最大收缩/舒张速率(±dP/dtmax)、冠脉流量(CF)、灌流液乳酸脱氢酶(LDH)及心律失常评分。结果:单用伊贝沙坦组LVDP、LVEDP、LDH及心律失常评分显著低于缺血/复灌对照组(P<0.01);±dP/dtmax、CF显著高于缺血/复灌对照组(P<0.05),合灌环胞菌素A可以部分甚至全部逆转伊贝沙坦的作用。结论:伊贝沙坦对离体大鼠缺血/再灌注心肌有保护作用,减少再灌注心律失常发生,部分可能是通过激活钙调神经磷酸酶起作用。     

糖尿病大鼠肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体表达及其对转化生长因子β1的影响

目的 探讨糖尿病（DM）大鼠肺组织血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）的变化及其对转化生子因子β1（TGF-β1）表达的影响.方法 高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ）鼠尾静脉注射建立DM大鼠模型20只,随机数字表法分为DM组10只和氯沙坦干预组（LST组）10只,LST组予以氯沙坦30 mg·kg＾-1·d＾-1灌胃12周,设正常对照组（NC组）10只.免疫组织化学检测各组大鼠肺组织AT1R表达,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting检测比较各组肺组织AT1R、TGF-β1表达.采用单因素方差分析比较组间差异,两两比较采用LSD检验,组间比较采用单因素方差分析.结果 与NC组相比,DM组大鼠肺组织AT1R、TGF-β1表达显著升高（AT1R mRNA：0.04±0.03比0.29±0.15,t=5.252; AT1R蛋白：0.62±0.05比0.77±0.05,t=6.736;TGF-β1 mRNA：0.10±0.05比0.73±0.16,t=12.377;TGF-β1蛋白：0.47±0.05比0.70±0.05,t=10.66;均P＜0.05）,LST组大鼠肺组织AT1R、TGF-β1表达显著低于DM组（AT1R mRNA：0.292±0.148比0.068±0.024,t=4.741;AT1R蛋白：0.77±0.05比0.63 ±0.04,t=7.396;TGF-β1 mRNA：0.74±0.16比0.19±0.09,t=9.563;TGF-β1蛋白：0.702±0.047比0.439±0.018,t=16.601;均P＜0.05）.结论 DM大鼠肺组织可能存在局部肾素-血管紧张素系统组分的激活,促进了TGF-β1表达的增加,可能参与了肺细胞外基质的改变.