氧化型低密度脂蛋白对培养的内皮细胞的致凋亡作用及尼莫地平的保护作用

通过研究氧化型低密度脂蛋白对培养的内皮细胞生长状态的影响及其致凋亡作用,阐述其致动脉粥样硬化机理,并研究尼莫地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡的作用。用Cu^2 引发脂质过氧化过程,制备氧化型低密度脂蛋白,用MTT检测法检测细胞活性,PI杂色法及ELISA法检测细胞凋亡。结果显示,细胞生长对氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性抑制作用。ELISA法和PI染色法进一步证实氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞发生凋亡。而尼莫地平可以抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡。提示氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞的细胞毒作用及其作用剂量有关;体内氧化型低密度脂蛋白通过致内皮细胞凋亡的途径,损伤血管内皮,引发动脉粥样硬化。尼莫地平可以对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡起到保护作用。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达及氧化型低密度脂蛋白摄取的影响

为了研究同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达及对氧化型低密度脂蛋白摄取的影响，分别在培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度的同型半胱氨酸孵育48h后，利用逆转录-聚合酶链反应检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达的改变；采用放射配基法检测细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取。结果发现，随着同型半胱氨酸浓度的增加。提示同型半胱氨酸能促进脐静脉血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达和对氧化型低密度脂蛋白的摄取，此效应可能与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化作用有关。     

氧化型低密度脂蛋白抑制人内皮细胞组织因子通路抑制子mRNA的表达

为探讨氧化型低密度脂蛋白在血栓形成过程中的作用及机制,用超速离心法从正常人血浆中分离出低密度脂蛋白后,用Ｃｕ２ ＋ 使之氧化变成氧化型低密度脂蛋白。在人脐静脉内皮细胞的培养基中加入一定浓度的低密度脂蛋白或氧化型低密度脂蛋白,培养一定时间后,用异硫氰酸胍法抽提细胞总ＲＮＡ,用反转录聚合酶链反应方法检测人脐静脉内皮细胞中组织因子通路抑制子ｍＲＮＡ的表达,以观察氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞表达组织因子通路抑制子ｍＲＮＡ 的影响。结果发现,人脐静脉内皮细胞能持续性地表达组织因子通路抑制子ｍＲＮＡ,它的表达不受低密度脂蛋白的影响。但氧化型低密度脂蛋白能明显地以时间和浓度依赖性方式抑制人脐静脉内皮细胞表达组织因子通路抑制子ｍＲＮＡ。实验结果提示氧化型低密度脂蛋白可能通过抑制血管内皮细胞表达组织因子通路抑制子,从而在诱导动脉粥样硬化斑块内血栓形成过程中发挥极为重要的作用。     

对氧磷对血管内皮细胞的损伤作用及机制探讨

目的为探讨有机磷酸酯对血管内皮细胞和血管内皮功能是否有直接的损伤作用。方法用不同浓度的对氧磷分别与大鼠离体血管环和培养的人脐静脉单层内皮细胞共孵不同的时间,以乙酰胆碱引起的血管内皮依赖性舒张反应和单层内皮细胞通透性等为观察指标,检测对氧磷对血管内皮的损伤作用。结果对氧磷（36.3nmol/L-36.3μmol/L）与血管环共孵,呈浓度和时间依赖性地显著抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应,而对硝普钠引起的非内皮依赖性舒张反应没有明显的影响。对氧磷与内皮细胞共孵不同的时间,呈浓度和时间依赖性地显著增加单层内皮细胞的通透性。对氧磷在损伤血管内皮的同时也导致了血管组织及细胞培养液中一氧化氮浓度和超氧化物歧化酶活性的降低、脂质过氧化代谢产物丙二醛浓度的升高。加入左旋精氨酸能部分拮抗对氧磷对血管内皮功能的损伤作用,用阿托品预处理则不影响对氧磷的作用。结论该研究提示对氧磷对血管内皮细胞有直接损伤作用,其机制可能与对氧磷诱发氧化应激,进而导致脂质过氧化反应发生和增加内皮细胞的通透性有关。     

高浓度葡萄糖促脂质氧化效应及其与低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的协同作用

以培养的人脐静脉内皮细胞株内皮细胞V30 4为对象 ,研究高浓度葡萄糖有无促进细胞介导的低密度脂蛋白脂质过氧化效应及高浓度葡萄糖和低密度脂蛋白协同诱导凋亡及其可能机制。采用TBARS法检测培养基丙二醛含量 ;Giemsa染色后采用光镜及电镜对凋亡细胞定性观察 ,流式细胞仪检测凋亡率。结果显示 ,高浓度葡萄糖促进细胞介导的低密度脂蛋白脂质过氧化效应 ,并呈量—效关系 ;高浓度葡萄糖和低密度脂蛋白协同诱导血管内皮细胞凋亡 ,很可能与前述效应以及通过产生氧化应激而延长细胞周期转换有关。结果提示 ,高浓度葡萄糖和低密度脂蛋白协同诱导血管内皮细胞凋亡作用促进了糖尿病状态下动脉粥样硬化的发生发展 ,可能是糖尿病易发生动脉粥样硬化的部分机制     

氨氯地平对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的为研究氨氯地平独立于降压外的血管保护作用,观察其对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响,进一步明确其抗动脉粥样硬化作用的可能机制。方法用不同浓度氨氯地平预处理人脐静脉内皮细胞1h,与氧化型低密度脂蛋白共同孵育24h后,采用逆转录聚合酶链反应检测氨氯地平对体外培养的人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的影响,酶联免疫试剂盒检测培养基中单核细胞趋化蛋白1活性。结果氧化型低密度脂蛋白上调人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的表达,各浓度氨氯地平处理组人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA与蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论氨氯地平呈浓度依赖性抑制氧化型低密度脂蛋白刺激导致的人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达上调。     

L-精氨酸抑制内皮细胞粘附分子-1表达与氧化型低密度脂蛋白促单核细胞粘附作用下降有关

用氧化型低密度脂蛋白处理培养的猪主动脉内皮细胞，以Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈａｐａｑｕｅ分离液密度梯度离心分离人外周血单核细胞，观察Ｌ－精氨酸对内皮细胞－单核细胞粘附率的影响；采用反转录－多聚酶链反应技术检测氧化型低密度脂蛋白和Ｌ－精氨酸对内皮细胞血管细胞粘附分子－１表达的影响。结果显示：Ｌ－精氨酸具有剂量和时间依赖性地抑制氧化型低密度脂蛋白的促内皮细胞－单核细胞粘附作用。氧化型低密度脂蛋白处理内皮细胞能明显增加内皮血管细胞粘附分子。－１的表达，而Ｌ－精氨酸阻抑氧化型低密度脂蛋白的此种作用。结果提示Ｌ－精氨酸可能通过抑制血管细胞粘附分子－１表达阻抑氧化型低密度脂蛋白的促内皮细胞—单核细胞粘附作用。     

氧化型低密度脂蛋白对血管内皮细胞ICAM-1 mRNA表达的影响

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人血管内皮细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。方法 采用血管内皮细胞株EAhy926培养，观察150mg／L的氧化型低密度脂蛋白作用在不同时程(0～36h)及不同终浓度(0～300mg／L)的氧化型低密度脂蛋白作用24h对细胞间粘附分子-1mRNA表达的影响。RT-PCR测定ICAM-1基因表达水平。结果 氧化型低密度脂蛋白可诱导培养血管内皮细胞表达细胞间粘附分子-1mRNA，并呈时间和剂量依赖性增加。结论 ox-LDL可以促进EAhy926细胞间粘附分子-1表达，ICAM-1可能参与氧化型低密度脂蛋白所致的动脉粥样硬化进程。     

氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞基因表达谱的改变

通过对氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞基因表达谱改变的研究，为阐明氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞功能障碍及动脉粥样硬化形成的分子机制提供科学依据。采用含有4000条全长已知人类基因cDNA以及96条参照基因cDNA克隆制作的基因表达谱芯片，筛查氧化型低密度脂蛋白（100mg/L)作为24h对人脐静脉血管内皮细胞的基因表达谱改变的影响。结果显示，氧化型低密度脂蛋白可诱导1条基因表达下调（泛肽激活酶），3条基因表达上调（血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶、热休克蛋白70和KDRF）。结果发现，在氧化型低密度脂蛋白作用的早期阶段可诱导内皮细胞相关基因的表达改变；首次发现氧化型低密度脂蛋白可诱导内皮细胞KDRF、泛肽激活酶和血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶基因表达改变，为揭示氧化型低密度脂蛋白引起血管内皮细胞功能障碍的机制提供了研究成果。     

沥水调脂胶囊对轻度修饰低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化因子1及内皮细胞P选择素表达的影响

探讨健脾祛痰化瘀方药(沥水调脂胶囊)含药血清对轻度修饰低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞表达单核细胞趋化因子1及内皮细胞表达P选择素的影响。用细胞酶联免疫法测定内皮细胞P选择素的表达，酶联免疫法测定培养血管平滑肌细胞上清液中单核细胞趋化因子1的含量。结果发现，20％沥水调脂胶囊除蛋白含药血清组对轻度修饰低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化因子1表达的升高具有一定的抑制作用。10％含药血清组对轻度修饰低密度脂蛋白诱导的内皮细胞表达P选择素已具有抑制作用，当含药血清浓度达20％时其抑制作用更为明显。由此可见，通过抑制细胞炎性因子单核细胞趋化因子1和血小板活化因子P选择素，减轻血管炎性反应和血栓形成，是健脾祛痰化瘀方药沥水调脂胶囊抗氧化损伤、防治动脉粥样硬化发生发展及痰瘀互结的机制之一。     

脂质过氧化作用对血管内皮细胞源性增殖因子产生的影响

脂质过氧化作用对血管内皮细胞源性增殖因子产生的影响杨向红，陈铁镇（中国医科大学实验病理学研究室，沈阳１１０００１）近几年的研究表明，脂质过氧化作用与动脉粥样硬化的发生关系密切，它可以导致血管内皮细胞的损伤和机能变化，并且可以促进体内动脉粥样硬化病变的...     

脂质过氧化对培养的内皮细胞表达细胞粘附分子的影响

为观察脂质过氧化损伤对细胞粘附分子表达的影响，用联胺诱发培养的人血管内皮细胞脂质过氧化后，检测其丙二醛含量及单核细胞粘附率，并用激光共聚焦显微镜观察细胞粘附分子表达的情况。结果发现，实验组较对照组内皮细胞丙二醛含量升高，单核细胞粘附率显著增加（P＜0．01），内皮细胞上有血管细胞粘附分子－1及内皮细胞白细胞粘附分子－1的表达，且其表达量均随时间增多。提示内皮细胞粘附分子的表达增加可能是脂质过氧化损伤导致单核细胞粘附增多的重要机制。     

L-精氨酸抑制内皮细胞粘附分子-1表达与氧化型低密度脂蛋白促单核细胞粘附作用下降有关

用经型低密度脂蛋白处理培养的猪主动脉内皮细胞，以Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈａｐａｑｕｅ分离浓密度梯度离心分离人外周血单核细胞，观察Ｌ－精氨酸对内皮细胞－单核细胞粘附率的影响，采用反转录－多聚酶链反应技术检测氧化型低密度脂蛋白和Ｌ－精氨酸对内皮细胞血管细胞粘附分子－１表达的影响。结果显示：Ｌ－精氨酸具有剂量和时间依赖性地抑制氧化型低密度脂白促内皮细胞－单核细胞粘附作用，结果提示Ｌ－精氨酸可能通过抑制血管细胞粘     

小颗粒致密低密度脂蛋白氧化特性及对血管内皮细胞脂质过氧化的影响

了解小颗粒致密低密度脂蛋白中抗氧化维生素含量、氧化特性 ,探讨其对血管内皮细胞脂质过氧化的影响。采用二次密度梯度超速离心的方法分离制备小颗粒致密低密度脂蛋白 ,高压液相色谱测定其抗氧化物质维生素A、E和 β 胡萝卜素 ;连续监测小颗粒致密低密度脂蛋白在 2 34nm的吸光度以测定其氧化敏感曲线 ;在血管内皮培养液中分别加入不同浓度的小颗粒致密低密度脂蛋白 ,培养后测定培养液丙二醛的浓度。实验成功分离小颗粒致密低密度脂蛋白 ,与大而轻低密度脂蛋白相比 ,维生素A、E和 β 胡萝卜素等抗氧化物质及总抗氧化能力明显减少 ,只有大而轻低密度脂蛋白的 6 5 %、39%和 2 4 % ,故小颗粒致密低密度脂蛋白氧化的延迟时间只有大而轻低密度脂蛋白的 37.5 % ,但硫代巴比妥酸反应物质值及氧化速率分别是大而轻低密度脂蛋白的 1 .7倍和 1 .2 8倍 ;培养液中丙二醛含量随加入脂蛋白的浓度和作用时间而增高 ,2 4h时小颗粒致密低密度脂蛋白 5 0mg组、1 0 0mg组、1 5 0mg组与相同剂量大而轻低密度脂蛋白组比较丙二醛显著增高 (P <0 .0 5 )。上述结果提示 :小颗粒致密低密度脂蛋白中抗氧化物质及抗氧化能力下降 ,氧化敏感性增高 ,并促进内皮细胞过氧化损伤     

差异显示法证实氧化型低密度脂蛋白刺激血管内皮细胞胸腺素β4的高表达

克隆、分离在致动脉粥样硬化因素作用下血管内皮细胞基因的差异表达对了解动脉粥样硬化发生的分子机制至关重要,用改进的差异显示－多聚酶链技术分离、克隆氧化型低密度脂蛋白刺激培养的内皮细胞有差异表达的基因,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法证实差异表达的基因。结果发现氧化型低密度脂蛋白诱导培养的人脐静脉内皮细胞中出现一个上调节的ｃＤＮＡ片段,长２８３ｂｐ,其序列与人胸腺素β４基因有１００％的同源性,具有完整的开放阅读框架。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析证实氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞胸腺素β４升调了３倍。从而提示氧化型低密度脂蛋白刺激血管内皮细胞胸腺素β４的高表达,进而调节血管内皮细胞的增殖、分化。改进的差异显示－多聚酶锭技术具有便捷、特异性高、重复性好的特点。     

外膜成纤维细胞在移植性血管病的早期被激活

目的依据动脉粥样硬化(As)的脂质浓度极化假说,以局部狭窄血管为研究对象,在体研究血流动力学变化和脂质浓度极化在As形成中的作用。方法兔左颈总动脉分别施以3个狭窄度(30%、40%和50%)的硅胶管环扎手术,从而改变局部血管的血流动力学状态,形成不同的流场环境,以右颈总动脉为假手术对照;术后饲喂含4种不同胆固醇浓度(0%、0.5%、1%及1.5%)的饲料以形成不同的脂质浓度极化水平;术前及术后4、8周测量血脂及血液粘度;术后8周彩色多?...     

氧化低密度脂蛋白与动脉粥样硬化关系研究进展

血管内皮细胞损伤及功能失词是导致动脉粥样硬化的一个重要环节。近年来的研究表明，化学修饰的脂蛋白，尤其是氧化低密度脂蛋白可通过内皮细胞内脂质过氧化损伤，加速泡沫细胞形成以及内皮源性舒张机制障碍等途径而在动脉粥样硬学的发生发展上起关键性的作用。针对氧化低密度脂蛋白的致动脉粥样硬化作用研究颇多，但方法结论不一，有些甚至得出相反的结论。本文就这一问题作一综述。     

金雀异黄素对低密度脂蛋白氧化修饰及氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞c-myc mRNA表达的抑制作用

为探讨大豆异黄酮（金雀异黄素和大豆甙元）在防止低密度脂蛋白氧化方面的作用以及对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞原癌基因c-myc表达的影响，采用Cu^2 介导的低密度脂蛋白体外氧化方法，通过测定硫代巴比妥酸反应物质生成和琼脂糖电泳迁移率的变化来观察大豆异黄酮对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用；采用Northern blot杂交技术，分析氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞c-myc原癌基因mRNA表达的作用以及金雀异黄素对此表达的影响。结果发现，金雀异黄素能够浓度依赖性减少硫代巴比妥酸反应物质生成，降低低密度脂蛋白的相对电泳迁移率（P＜0．05）；氧化型低密度脂蛋白（200mg/L)刺激人脐静脉内皮细胞c-myc mRNA在1－2h内表达增高，表达量为对照水平的3倍，4h回到对照水平以下；金雀异黄素（100μmol/L）能有效抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的c-myc mRNA表达增高。以上结果提示，金雀异黄素不仅能防止低密度脂蛋白发生氧化，而且能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞c-myc mRNA表过增高。     

糖基化低密度脂蛋白增加血管内皮对单核细胞的粘附作用

血管内皮细胞对单核细胞的粘附作用增加是动脉粥样硬化（ＡＳ）的重要病理过程之一，糖尿病患者高水平的糖基化低密度脂蛋白（ＧＬＤＬ）可通过改变脂质代谢途径，促进泡沫细胞形成和增强血小板聚集功能等促进或加速动脉粥样硬化的发生。但是，ＧＬＤＬ是否通过对内皮细胞...     

冠状动脉粥样硬化斑块组成成分与斑块破裂的关系

为观察氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞一氧化氮生成的影响,采用体外细胞培养方法将含不同浓度氧化型低密度脂蛋白的ＤＭＥＭ 培养液（ 氧化型低密度脂蛋白终浓度分别为０ ｍｇＬ、５０ ｍｇＬ 、１００ ｍｇＬ 、２００ ｍｇＬ）,与内皮细胞共同孵育（３７ ℃、５％ ＣＯ２）２４ ｈ 后,分别测上清液中乳酸脱氢酶活性和一氧化氮含量及细胞中一氧化氮合酶活性,并用细胞化学染色法记数各组细胞一氧化氮合酶阳性染色细胞数。结果发现,随着培养液中氧化型低密度脂蛋白浓度升高,上清液中乳酸脱氢酶活性增加和一氧化氮含量下降,细胞中一氧化氮合酶活性和一氧化氮合酶阳性染色细胞数下降,可见,氧化型低密度脂蛋白可损伤血管内皮细胞,降低细胞中一氧化氮合酶活性,抑制一氧化氮产生,这可能是氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化的原因之一。