白细胞介素-23刺激的类风湿关节炎成纤维细胞对人破骨样细胞形成的研究

目的 探讨向细胞介素(IL)-23刺激的类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)在人破骨样细胞形成中的作用.方法 用不同浓度(1、5和10 ng/ml)的IL-23刺激RA和骨关节炎(OA)患者滑膜FLS 72 h,实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)检测RA和OA滑膜FLS核因子κB受体激活剂配体(RANKL)mRNA表达.分离人外周血单核细胞(MN),与IL-23刺激的RA和OA滑膜FLS共培养,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察是否有破骨样细胞形成;同时,real time-PCR法检测破骨样细胞形成的分子标志.结果 不同浓度的IL-23均能上调RA滑膜FLS RANKL的表达;但几乎不诱导OA滑膜细胞RANKL的表达.在IL-23刺激的RA FLS和MN共培养体系中能观察到TRAP染色阳性的破骨样细胞形成;并且破骨样细胞形成的分子标志表达增高.而无IL-23刺激的RA FLS或IL-23刺激的OAFLS和MN共培养体系中未见TRAP染色阳性的破骨样细胞的形成.结论 IL-23通过诱导RA滑膜细胞RANKL的表达促进人MN分化衍生为破骨样细胞.     

IL-1β和TNF-α诱导RA成纤维样滑膜细胞ICAM-1和VCAM-1表达调控的机制研究

目的探讨酪氨酸激酶在白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)细胞间黏附分子(ICAM-1)和血管细胞黏附分子(VCAM-1)表达中的作用。方法原代培养RA成纤维样滑膜细胞，用Western blot方法检测IL-1β和TNF-α短时间内引起RA FLS蛋白质酪氨酸磷酸化状态改变，并应用genistein，蛋白质酪氨酸激酶(PTK)抑制剂观察对ICAM-1和VCAM-1表达影响。结果IL-1β和TNF—α可以瞬时引起RA FLS蛋白质酪氨酸磷酸化程度增加：IL-1β和TNF-α在1—100U／ml之间呈浓度依赖性促进ICAM-1和VCAM-1的表达；genistein显著抑制两种炎性因子刺激下的VCAM-1表达，而对。ICAM-1的表达仅起中度抑制作用。结论IL-1β和TNF-α在RAFLS信号转导中，可以瞬时导致蛋白质酪氨酸磷酸化程度增加．在炎性因子诱导ICAM-1和VCAM-1的表达调控中蛋白酪氨酸激酶作用不同。     

NF-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡与炎症的影响

目的探讨核因子(NF)-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞凋亡与炎症的影响。方法分离正常滑膜组织及RA滑膜组织中成纤维滑膜细胞(FLS),分为正常FLS组(正常组),RA FLS组(模型组),NF-κB抑制剂(PDTC)低、中、高剂量组(2,5,10μmol/L)(PDTC组)。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测PDTC对RA FLS细胞活力的影响,Annexin V-FITC流式双染检测各组细胞凋亡情况,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α,白介素(IL)-1β含量,Western印迹检测各组细胞中环氧化酶(COX)-2,Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组能显著抑制RA FLS活力,诱导RA FLS凋亡,抑制RA FLS细胞释放TNF-α、IL-1β因子,下调COX-2和Bcl-2表达,上调Bax表达(均P0.05)。结论阻断NF-κB信号通路能够显著抑制RA FLS细胞炎症并诱导细胞凋亡。     

类风湿关节炎患者关节滑膜滑液中结缔组织生长因子表达及其意义研究

目的检测结缔组织生长因子(connectivetissue growth factor,CTGF)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者关节滑液及滑膜中的表达,探索CTGF在RA关节病变中可能发挥的作用。方法采用酶联免疫法(enzyme-linked imm-unosorbent assay,ELISA)方法检测中国医科大学附属第一医院2013年1月至12月收治的10例RA患者和8例骨关节炎(osteoar thritis,OA)患者关节滑液CTGF水平;免疫组化法检测3例RA患者和2例OA患者关节滑膜CTGF的表达;Real-time PCR检测向体外培养的成纤维样滑膜细胞(FLS)中加入外源性肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)后对CTGF表达的影响。结果 RA组的关节滑液CTGF水平高于OA组[(21.00±10.20)μg/L对(8.53±7.71)μg/L)],差异有统计学意义(P0.05);CTGF在RA滑膜组织主要表达于滑膜衬里细胞及衬里下层细胞,而OA滑膜组织仅少量CTGF表达;TNF-α可以上调FLS表达CTGF。结论 RA患者滑液CTGF水平升高,滑膜组织CTGF高表达,提示CTGF可能参与了RA关节炎症的发生发展。TNF-α上调FLS的CTGF表达,这可能是导致RA关节病变的重要因素之一。     

成纤维滑膜细胞p53基因表达对类风湿关节炎患者CD4+T淋巴细胞的调节

目的 研究人成纤维滑膜细胞(FLS)p53基因表达对类风湿关节炎(RA)患者CD4+T淋巴细胞的调节作用.方法 采用小分子干扰RNA(siRNA)转染抑制FKS内p53基因表达,并与RA患者外周血CD4+T淋巴细胞共同培养.检测转染后FLS中骨保护素(OPG)表达及白细胞介素(IL)-6分泌.并对与之共培养的CD4+细胞膜胞质内蛋白干扰素(IFN)-γ、IL-17、IL-4和CD25以及IFN-γ孤儿核受体γt(RORγt)、IL-17、Foxp3 RNA水平进行测定.结果 p53基因被抑制后,FLS分泌IL-6减少,但OPG表达未受影响.p53基因被抑制的FLS使共培养的CD4+T淋巴细胞内IL-17及IFN-γ蛋白和RNA表达上调,但对CD4+T淋巴细胞RORγt RNA影响不大.虽可上调Foxp3表达,但CD4+CD25high细胞阳性率并无明显变化.结论 FKS内D53表达对RA外周血Th1、Th17有调节作用.     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学的方法,比较正常人及早期活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)蛋白质的差异表达,寻找RA疾病相关致病蛋白质.方法 选取9例早期活动期RA患者以及9名健康成年志愿者,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,抽提PBMCs中的蛋白,采用同相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质.凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证部分差异蛋白质.结果 获得RA患者及正常人PBMCs蛋白质双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为556和579,匹配率分别为89.4%和 88.5%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为23,选取18个点进行质谱鉴定,成功鉴定14个蛋白质,其中a-肌动蛋白、纤维蛋白素原a-链、载脂蛋白A-I(ApoA-I)等9个蛋白质点在RA中表达上调,硫氧还蛋白-2、谷胱甘肽S-转移酶等6个蛋白质点在RA中表达下调,这些差异蛋白质的功能涉及物质代谢、抗氧化、信号传导、能量产生及细胞骨架.并用RT-PCR方法验证差异蛋白质ApoA-I.其结果与上述蛋白质差异表达结果相符.结论 在RA患者PBMCs中存在着差异表达蛋白质,这些差异蛋白质可能是RA发病的内在因素.其RT-PCR结果与蛋白质差异表达相符,证明蛋白质组研究的可靠性.     

燃煤污染型砷中毒肝损伤患者血清差异蛋白质的筛选

目的 对比分析燃煤污染型砷中毒肝损伤患者和健康人血清中差异表达的蛋白,筛选与燃煤污染型砷中毒致肝损伤发生密切相关的血清蛋白质.方法 6例血清标本来自于贵州省兴仁县交乐病区燃煤型砷中毒肝损伤患者及病区健康人(对照组),采用双向凝胶电泳(2-DE)分离血清中总蛋白,硝酸银染色后经图像分析识别差异表达的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质点,寻找与燃煤污染型砷中毒致肝损伤有关的蛋白质.结果成功地建立了血清2-DE图谱.差异蛋白分析显示,砷中毒肝损伤组平均蛋白点数为(824±31)个,对照组为(782±42)个,两组血清2-DE图谱的匹配率为94.9%(782/824).筛选出两组间的差异蛋白点49个,对其中表达量差异3倍以上的30个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析,鉴定出相关蛋白10个.与对照组比较,其中α2-巨球蛋白、B细胞受体相关蛋白31、细胞角蛋白1、载脂蛋白A-I在砷中毒肝损伤组表达上调,触珠蛋白、α2-HS-糖蛋白、细胞外信号调节激酶4、锌指蛋白323、ZAP-70、SP40表达下调.结论成功地建立了分辨率高、重复性较好的燃煤污染型砷中毒肝损伤患者血清2-DE图谱,并筛选出一些与健康人血清中差异表达的蛋白质,这些蛋白质能否作为燃煤污染型砷中毒肝损伤诊断的血清标志物还有待于进一步验证.     

肝纤维化患者血清差异蛋白质的筛选

目的: 对比分析肝纤维化患者和健康人血清中差异表达的蛋白质, 筛选与肝纤维化发生密切相关的血清蛋白质.方法: 肝纤维化患者和健康人空腹血清标本各6例分别等量混合成2个样本, 去除血清中的白蛋白和IgG. 利用双向凝胶电泳(2-DE)分离肝纤维化血清和健康人血清总蛋白质后, 硝酸银染色, 经图像分析筛选差异表达的蛋白点. 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)鉴定差异表达的蛋白点, 并用ELISA法对其中部分差异蛋白的表达水平进行验证.结果: 筛选出2组间的差异蛋白点共517个, 对其中表达量差异3倍以上的24个蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析, 鉴定出包括触珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅳ、转铁蛋白、T细胞受体b链、血清白蛋白及血清白蛋白前体等8个蛋白质, 其中3个蛋白质在肝纤维化血清中表达上调, 5个蛋白质在肝纤维化血清中表达下调. 与健康人血清比较, ELISA法检测肝纤维化血清中触珠蛋白、载脂蛋白A-Ⅳ表达均下调, 结果与双向凝胶电泳一致.结论: 肝纤维化血清与健康人血清的蛋白质表达谱表现出一定差异, 这些差异表达的血清蛋白质有望成为肝纤维化诊断与判定预后的血清标志物.     

雷公藤多甙对胶原诱导关节炎大鼠的治疗作用及其作用机制

目的探讨雷公藤多甙对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型,胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮生长因子(vascuoar endothelial cell growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-1、2、9表达的影响,及对成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)ERK信号转导通路的影响,研究雷公藤多甙治疗RA的可能机制。方法采用Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型;观察雷公藤多甙治疗后模型大鼠关节肿胀情况,用免疫组化法观察大鼠关节炎症及滑膜微血管密度;用Western blot法检测CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-1、2、9的表达,并用胶原酶消化法分离培养正常大鼠及CIA大鼠原代FLS;用Western blot法检测不同浓度雷公藤多甙治疗后CIA大鼠FLS中ERK和p-ERK的表达。结果 CIA大鼠造模成功,雷公藤多甙治疗能降低CIA大鼠血清炎症因子及血管新生相关因子表达(P0.05);免疫组化结果显示雷公藤多甙能抑制CIA大鼠关节滑膜血管新生(P0.05);不同浓度雷公藤多甙对FLS中ERK蛋白表达无明显影响,但可降低FLS的p-ERK表达(P0.05)。结论雷公藤多甙对CIA大鼠抗炎及抑制血管新生的作用可能与调节ERK信号转导通路有关。     

类风湿性关节炎细胞水平建模四种方法比较

目的 比较四种方法 在培养类风湿性关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)中的异同,为研究RA提供较好的体外实验模型建模方法 .方法 20例滑膜组织标本均用组织块法、单胶原酶消化法、单胰酶温消化法和双酶消化法四种方法 分离、培养RA FLS,均取培养第7日细胞计数,取第4代细胞鉴定,免疫组化鉴定细胞,测定分离细胞的数量和纯度.结果 四种培养方法 的培养时间比较,单胶原酶法>双酶消化法>组织块法>单胰酶法(P＜0.05).组织块法及双酶消化法所得细胞数较单胶原酶法及双酶消化法少(P＜0.05).第4代细胞均以FLS为主(>95%).结论 四种方法 体外培养可获得生物学特性稳定的RA FLS细胞系,其中组织块法是细胞水平建立RA体外实验模型成功率较高的方法 ,单纯胰酶法是较快速的方法 .     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7?, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20?, MUC2?). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

Demonstration of the mechanism of action of biguanides

Summary Palmitic acid oxidation in rat diaphragm homogenate is depressed by biguanide concentrations that are still incapable of inhibiting oxidative phosphorylation. Glucose oxidation is not directly effected by the same biguanide concentrations: however, the inhibitory effect of palmitic acid on glucose oxidation is partly removed by biguanides. Inhibition of fatty acid oxidation, which accounts for most of the metabolic effects caused by these drugs, can be regarded as the fundamental mechanism of action of biguanides. There is some evidence suggesting that these drugs might interact with carnitine, thus preventing long-chain fatty acids from being transported across the mitochondrial membrane to the site of oxidation. Traduzione a cura degli AA.     

胰岛素瘤的解剖分布特点分析

目的胰岛素瘤是最常见的胰腺神经内分泌肿瘤，因其临床表现多样，导致诊断困难。影像学诊断尤其是超声内镜(EUS)在胰岛素瘤的诊断中起着重要作用，拥有较高的敏感性和特异性。本研究拟通过明确胰岛素瘤的解剖分布特点，以期有助于提高影像学的诊断准确率和降低漏诊率，尤其是在教育和培训实践中对于EUS的学习者更具有指导价值。 方法回顾性分析解放军总医院第一医学中心病案资料数据库1993年1月至2019年11月经外科手术、病理确诊为胰岛素瘤的患者的临床资料，检索方法采取搜索术后病理诊断为"胰岛素瘤"的病例，通过查阅病例的方法，提取出胰岛素瘤的大小和解剖分布等数据，进一步分析其特点。 结果共检索到确诊为胰岛素瘤的患者116例，其中，男45例、女71例，年龄13～76岁，平均年龄(44.4±14.85)岁。胰岛素瘤单发110例(94.8%)、多发6例(5.2%)。位置分布：头颈部46例(39.7%)，单发45例、多发1例；体尾部68例(58.6%)，单发65例、多发3例；全胰腺多发2例(1.7%)。病变大小特点：最大径0.4～3.4 cm，平均大小(1.53±0.58)cm。≤1 cm 29例、>1 cm而≤1.5 cm41例、>1.5 cm而≤2.0 cm28例，≤3 cm 15例，>3 cm 3例。年龄与肿瘤的大小相关，≤44岁患者肿瘤平均大小为(1.36±0.51)cm、>44岁患者肿瘤平均大小为(1.70±0.60)cm，P<0.05。头颈部的肿瘤大于体尾部的肿瘤，头颈部肿瘤平均大小(1.66±0.63)cm，体尾部(1.42±0.52)cm，P<0.05。 结论胰岛素瘤在胰腺体尾部较头颈部更好发；绝大多数单发，但可以全胰腺多发；多数小于1.5 cm，肿瘤的大小与患者年龄和肿瘤的解剖分布相关。     

氯硝柳胺悬浮剂的毒性评价

目的评价氯硝柳胺悬浮剂的毒性，为现场大规模应用灭螺提供依据。方法按照中华人民共和国国家标准GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》和鱼类毒性试验方法进行。结果经口、经皮肤的LDso雌、雄性大鼠均>5 000 mg/kg，经呼吸道的LCso雌、雄性大鼠均>5 000mg/m3，该药经口、经皮肤、经呼吸道毒性均属微毒类药物；兔眼用药后，观察期内无不良反应，对眼无刺激性；皮肤用药后对皮肤无刺激性。与氯硝柳胺原药、氯硝柳胺乙醇胺盐原药和氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂相比，氯硝柳胺悬浮剂对鱼急性毒性最低。结论氯硝柳胺悬浮剂属微毒类药物，对鱼的毒性低于其乙醇胺盐可湿性粉剂，适合于现场应用。     

急性肺动脉栓塞心电图多指标关联时变模式研究

目的:研究急性肺动脉栓塞(APE)的临床心电图动态演化规律,阐明其多样性表现的机制。方法:收集42个APE病例的心电图系列,每一例按记录时间顺序对7个特征性指标(心率,SⅠ、QⅢ、TⅢ、TV1,、STV、RV1或r'V1波)采样。分析该7个特征指标的时变特征,并总结归纳出APE心电图的多指标关联时变模式。结果:该时变理论模式表明,典型APE患者心电图随病程的动态变化,以TV1波倒置达峰时间为界,可化分为3个阶段。发病至TV1波倒置达峰前为第一阶段,TV1波倒置逐渐加深,表现为下降线,其它各指标在该阶段即已迅速完成上升或下降的演变而进入快速回复期,其时变模式曲线呈"反S"型或"S"型;第二阶段即为TV1波倒置达峰阶段,其时间大概处于TVI波总演变时间的前1/3处;自TVI波倒置达峰后至回复发病前水平为第三阶段。结论:临床APE心电图表现之多样性,是不同阶段各指标的联合表现特征和形式多样性的反映。该时变模式曲线可应用于临床判断疾病阶段。     

115例布鲁菌病临床特点分析

目的 探索布鲁菌病(布病)患者临床特征及治疗转归情况,为临床诊治提供参考。方法 收集并分析115例成人布病患者的人口学和流行病学资料、临床表现、血液学指标及治疗与转归情况。结果 布病患者常常伴有发热、乏力、多汗、关节疼痛、肝脾肿大等临床症状,其HGB、红细胞压积(hematocrit,HCT)、嗜酸性粒细胞(eosinophil,EO)、红细胞分布宽度(red blood cell distribution width,RDW)和CRP异常率较高。而WBC、PLT、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数、平均细胞体积、血小板分布宽度、ESR和降钙素原的异常率较低。治疗上大部分患者[53.04%(61/115)]接受利福平联合多西环素治疗,部分患者尤其是合并骨质侵犯患者常使用三联抗菌素治疗。其中47例并发骨关节痛患者,经规范足疗程治疗后皆好转或痊愈。结论 布病患者常伴有发热、乏力、多汗、关节疼痛、肝脾肿大等临床症状,其HGB、HCT、EO、RDW和CRP异常率较高,可作为布病的辅助诊断指标。布病临床表现多样,明确诊断后应尽早给予规范的抗菌治疗,抑制疾病进展,减少并发症发生。     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.     

补阳还五汤注射液对脑梗死体积和脑电图的影响

目的:评价补阳还五汤注射液对脑梗死的治疗效果。方法:40只Wistar大鼠用线栓法造成大脑中动脉供血区梗死模型后，随机分为对照组和补阳还五汤组，每组20只。分别评价神经功能缺损评分、梗死灶体积和脑电图的改变。结果:补阳还五汤注射液能减少梗死灶体积，减轻神经功能缺损程度，增加梗死侧脑电图波幅。结论:补阳还五汤注射液是一种值得进一步研究的治疗脑梗死的药物。     

血吸虫童虫生长发育及其机制的研究进展

血吸虫童虫是宿主免疫系统攻击的重要靶标,包括皮肤型、肺型和肝门型童虫。宿主分子对童虫生长发育具有重要作用。童虫生长发育机制包括免疫调节、信号转导、性别发育及凋亡等。肌动蛋白、组织蛋白酶、烯醇化酶和葡萄糖基转移酶等分子为血吸虫童虫生长发育的重要分子。本文对血吸虫童虫生长发育及其机制的研究进展做一综述。