Toll样受体4介导牙龈卟啉单胞菌感染血管内皮细胞过程中的炎性作用

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在牙龈卟啉单胞菌感染血管内皮细胞过程中所发挥的作用。方法用牙龈卟啉单胞菌分别感染正常EAhy926细胞和TLR4基因敲减的EAhy926细胞后,用RT-PCR和ELISA方法观察2种细胞产生白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)的能力,用单核细胞黏附实验检测内皮细胞黏附单核细胞的作用。结果牙龈卟啉单胞菌能诱导2种细胞过度表达IL-6和IL-8,促进U937细胞的黏附(P<0.05);敲减了TLR4基因的EAhy926细胞受到牙龈卟啉单胞菌感染后,IL-6和IL8的产生以及单核细胞黏附作用明显低于正常的EAhy926细胞(P<0.05)。结论 TLR4在牙龈卟啉单胞菌引起EAhy926细胞炎性反应过程中具有重要作用。     

细胞因子和脂多糖对人结肠癌细胞系HT-29 Toll样受体4表达和调控的影响

背景：正常肠上皮作为物理屏障能限制肠道微生物的入侵。肠上皮细胞极低表达Toll样受体（TLR）4和髓样分化蛋白（MD）-2，不与脂多糖（LPS）反应。目的：探讨以细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、干扰素（IFN）-γ和LPS刺激人结肠癌细胞系HT-29后，TLR4和MD-2的表达及其对LPS反应性的变化。方法：将FIT-29细胞分为8组，分别加入RPMI1640、TNF-α、IL-1β、IFN-γ、LPS、TNF-α＋LPS、IL-1β＋LPS、IFN-γ＋LPS干预；酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组细胞上清液内IL-8水平；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞TLR4和MD-2 mRNA的表达。结果：TNF-α、IL-1β和IFN-γ能显著上调HT-29细胞TLR4、MD-2 mRNA和IL-8的表达（P〈0．01）；HT-29细胞与，TNF-α、IL-β、IFN-γ预孵育后再以LPS刺激，IL-8的表达进一步上调（P〈0．01）。结论：细胞因子（TNF-α，IL-1β，IFN-γ）可增加肠上皮细胞TLR4和MD-2的表达，促进其对LPS的反应，引起肠上皮细胞对常驻菌的过度反应．从而启动或加重肠道炎症。     

脂多糖对大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达及炎性因子分泌的影响

目的 探讨脂多糖刺激大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)mRNA表达和炎性因子分泌的影响,以及MD-2小干扰RNA(MD-2 siRNA)对脂多糖刺激下NR8383细胞炎性因子分泌的作用.方法 体外培养NR8383细胞,以不同浓度脂多糖(0.01～10 mg/L)刺激2 h,以1 mg/L脂多糖刺激2～24 h.运用脂质体Lipofectamine 2000将MD-2siRNA转染至细胞.半定量RT-PCR方法检测细胞TLR4和MD-2 mRNA的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的含量.统计学处理采用单因素方差分析、独立样本t检验和Pearson相关分析.结果 对照组NR8383细胞TLR4和MD-2mRNA的相对表达量分别为0.52±0.05和0.44±0.09,0.01 mg/L浓度脂多糖刺激前后表达量无明显改变,0.1 mg/L浓度时表达增加,随脂多糖浓度的升高表达量进一步增加,10 mg/L刺激后相对表达量分别为0.72±0.06和0.65±0.10(F=17.26、6.04,P<0.01);TNF-αIL-6和IL-1β含量具有类似改变趋势,对照组分别为(25.8±3.4)ng/L、(62.4±4.7)ng/L和(31.6±1.7)ng/L;在10 mg/L脂多糖刺激下分别增加至(58.9±5.3)ng/L、(96.5±3.9)ng/L和(55.4±5.4)ng/L(F=29.55、54.47、31.45,P<0.01).在1 mr/L脂多糖刺激下,TLR4和MD-2 mRNA的表达量在2 h后明显增加,6 h达高峰,8 h开始回落,至24 h时仍高于基础值(F=5.28、4.11,P<0.01);TNF-α、IL-6和IL-1β含量具有类似变化(F=10.64、11.23、17.58,P<0.01),其中TNF-α和IL-1β含量在6 h达高峰,持续至8 h,IL-6含量在8 h达高峰,持续至12 h.TLR4和MD-2 mRNA表达呈正相关(r=0.513,P<0.01).MD-2 siRNA对NR8383细胞MD-2基因的干扰效率为67%,在脂多糖刺激下干扰组细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平未见明显升高.结论 高浓度脂多糖可较长时间上调大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞TLR4和MD-2基因的表达,并促进TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌.MD-2 siRNA可抑制脂多糖刺激下NR8383细胞分泌TNF-α、IL-1 β和IL-6.     

沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响

目的探讨沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并分为对照组、ox-LDL组、沙格列汀组、沙格列汀+miR-590抑制物组、NC模拟物组、miR-590模拟物组、NC抑制物组、miR-590抑制物组。检测细胞的增殖活力、细胞中miR-590/TLR4/NF-κB表达量及培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的含量。结果 ox-LDL组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于对照组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显低于对照组;沙格列汀组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显低于ox-LDL组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显高于ox-LDL组;沙格列汀+miR-590抑制物组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于沙格列汀组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显低于沙格列汀组;miR-590模拟物组细胞中TLR4、NF-κB p65的表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显低于NC模拟物组,miR-590抑制物组细胞中TLR4、NF-κB p65的表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于NC抑制物组。结论沙格列汀能够通过miR-590/TLR4/NF-κB通路减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤。     

血脉通颗粒对动脉粥样硬化小鼠外周血单核细胞TLR4、IL-6、TNF-α的影响

目的 观察血脉通颗粒对动脉粥样硬化（AS）小鼠外周血单核细胞Toll样受体4（TLR4）表达及血浆白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平的影响.方法 选择apo E基因敲除（apo E-/-）小鼠,采用高脂饮食法建立AS模型;造模成功后随机分为血脉通组和对照组,每组11只.血脉通组给予血脉通颗粒3.808 mg/（g·d）灌胃,对照组给予相同剂量生理盐水灌胃.6周后处死,眼眶静脉丛采血.采用RT-PCR法检测小鼠外周血单核细胞TLR4 mRNA,流式细胞术测算单核细胞表面TLR4平均荧光强度,ELISA法检测小鼠血浆IL-6和TNF-α.结果 血脉通组外周血单核细胞中TLR4 mRNA的相对表达量为0.22 ±0.07,TLR4荧光强度为25.45±8.30,血浆IL-6、TNF-α水平分别为（10.86 ±4.41）、（36.94±9.46） pg/mL;对照组分别为34.04 ±7.31、0.31±0.09及（18.24±8.21）、（52.82±13.78） pg/mL;两组比较,P均＜0.05.小鼠血浆IL-6、TNF-α水平与单核细胞表面TLR4的表达均呈正相关（r =4.86、0.509,P均＜0.05）.结论 血脉通颗粒可降低AS小鼠单核细胞TLR4表达和血浆IL-6、TNF-α水平,这可能是其抑制血管炎症、治疗AS的机制之一.     

卵巢癌患者血清TNF-α、IL-6、IL-8水平变化及其临床意义

研究证实,机体免疫功能调节障碍,而免疫功能,尤其是细胞免疫功能的状态与肿瘤的发生、发展和预后密切相关。TNF-α、IL-6、IL-8是单核巨噬细胞、内皮细胞和淋巴细胞所分泌的细胞因子,在机体的抗肿瘤免疫调节中起重要作用。2002年1月至2004年1月,我们测定了65例卵巢癌患者血清TNF-α、IL-6和IL-8变化,现探讨其临床意义。     

HCV感染患者免疫细胞部分细胞因子分泌情况的初步研究

目的研究与正常人比较丙型肝炎病毒（HCV）感染患者免疫细胞分泌γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白细胞介素4（IL-4）的细胞频数情况,了解HCV感染对其影响。方法分离外周血单核细胞（PBMCs）,应用IL-10、IFN-γ、TNF-α及IL-4流式抗体进行细胞内因子染色,应用FACSCalibur流式细胞仪及FACSCalibur软件进行检测分析。结果HCV感染患者分泌IL-10、IFN-γ、IL-4的细胞频数在CD4＋CD8-T细胞、CD4-CD8＋T细胞、NK细胞和NKT细胞均发生明显下降;分泌TNF-α的细胞频数在CD4-CD8＋T淋巴细胞及NK细胞出现下降;HCV感染患者NK细胞、NKT细胞分泌IL-10和IFN-γ的细胞频数较CD4＋CD8-T淋巴细胞、CD4-CD8＋T淋巴细胞下降得更加明显。结论HCV感染患者的细胞免疫功能受到明显的损害,细胞因子分泌能力明显减低;固有免疫细胞功能受损可能是HCV感染慢性化的重要原因;细胞因子分泌的调节是抗HCV感染免疫治疗过程中需要调节的方向。     

辛伐他汀通过抑制TLR4信号通路调节血管平滑肌细胞炎症因子的表达

目的通过检测血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）及相关炎症信号分子的表达,探讨辛伐他汀在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导VSMC炎症反应中的作用和机制。方法体外培养大鼠VSMC,经Toll样受体4（TLR4）阻断剂抗TLR4抗体及辛伐他汀预处理,使用ox-LDL进行干预,用逆转录聚合酶链反应检测TLR4mRNA的表达,通过酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-6及TNF-α的水平。结果ox-LDL可以增加VSMC对IL-6及TNF-α的表达,预先经TLR4阻断剂干预后,IL-6及TNF-α的表达明显下调,与未阻断剂组相比,差异皆有统计学意义（P<0.01）;不同浓度的辛伐他汀可以剂量依赖性的抑制TLR4mRNA的表达（P<0.01）,同时也可以剂量依赖性的抑制IL-6及TNF-α的表达（P<0.05）;预先经TLR4阻断剂干预后,辛伐他汀可以显著地抑制TLR4mRNA、IL-6及TNF-α的表达,与辛伐他汀组比较,差异有统计学意义（P<0.01）。结论辛伐他汀对ox-LDL诱导的VSMC炎症因子的表达具有抑制作用,可以通过抑制TLR4的表达,进而抑制ox-LDL-TLR4信号通路而发挥作用。     

微小RNA-126模拟物对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探究微小RNA(miR)-126模拟物在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用及可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机进行如下处理:无特殊处理(对照组);加100μg/L TNF-α(TNF-α组);转染Lipofectamine 2000+100μg/L TNF-α(miR-126阴性组);转染miR-126模拟物+100μg/L TNF-α(miR-126模拟物组),每组设置6个重复样品。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-126表达情况;MTT法检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附试验法检测细胞中白细胞介素(IL)6、IL-1β水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测细胞中内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达;双荧光霉素活性实验检测miR-126、HMGB1间的靶向关系。结果与对照组相比,TNF-α组、miR-126阴性组miR-126表达降低,细胞增殖率降低,IL-6、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,VCAM-1、ICAM-1、HMGB1蛋白表达升高(均P0.05);与TNF-α组、miR-126阴性组相比,miR-126模拟组miR-126表达升高,细胞增殖率升高,IL-6、IL-1β水平降低,细胞凋亡率降低,VCAM-1、ICAM-1、HMGB1蛋白表达降低(均P0.05)。与miR-126阴性组+HMGB1 3’非编码区(UTR)-携带野生型(Wt)组相比,miR-126模拟物+HMGB1 3’UTR-Wt组荧光素酶活性降低(0.43±0.05比1.06±0.15,P0.05)。结论 miR-126模拟物可能通过降低炎症反应缓解TNF-α诱导的细胞损伤,实现对血管内皮细胞损伤的保护。     

隐丹参酮通过TLR4/NF-κB/JNK信号通路减轻脂多糖对肺泡上皮细胞炎性损伤的作用研究

目的 本研究旨在探讨隐丹参酮(CTS)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(MLE-12)的影响。方法 通过CCK-8法检测细胞活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(q-PCR)检测IL-1β、IL-6、TNF-α含量及基因表达水平,筛选出具有最佳造模效果的LPS浓度;之后通过CCK-8考察CTS对细胞的非毒性剂量范围;将试验分为对照组、LPS组和CTS+LPS组3个组,ELISA检测细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,qPCR检测细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax和Bcl-2基因表达水平,Western Blot检测Bax、Bcl-2、TLR4、p-p65和p-JNK蛋白水平。结果 与对照组相比,LPS浓度≥1.0μg/mL时细胞活力显著下降(P<0.01);2.0和5.0μg/mL LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α含量及基因表达水平显著上升(P<0.05);CTS浓度为0～5.0μM时,细胞活力无显著变化(P>0.05),即药物的无毒范围。与LPS组相比,CTS+LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α含量及基...     

TLR4介导小鼠小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制研究

目的研究TLR4介导小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制。方法从C57BL/6J小鼠中提取分离原代小胶质细胞,分组1中,A组:小胶质细胞;B组:小胶质细胞+阴性siRNA转染;应用C组:小胶质细胞+TLR4-siRNA转染。应用Q-PCR和Western Blot检测分组1中TLR4的表达。分组2中,D组:小胶质细胞+等量的对照溶剂(0.9%NaCl);E组:小胶质细胞+自噬抑制剂(3-MA);F组:小胶质细胞+control-siRNA+3-MA;G组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+等量的对照溶剂(0.9%NaCl);H组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+3-MA。Western Blot检测LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TLR4、MyD88和核转录因子(NF-κB)蛋白表达。ELISA检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 (1)A组和B组TLR4 mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与B组相比,C组TLR4 mRNA和蛋白表达水平下调(P <0.05)。(2)D组、E组和F组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平无明显变化(P>0.05);与D组相比,G组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P <0.05);与F组相比,H组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P <0.05)。E组和F组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平无明显变化(P>0.05);与F组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P <0.05);与G组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P <0.05)。结论 TLR4-siRNA可抑制TLR4介导的小胶质细胞自噬,从而减轻自噬引起的脑出血炎症损伤。     

白藜芦醇抑制血管紧张素Ⅱ/TLR4/NF-KB调控鼠血管平滑肌细胞炎症和氧化应激损伤作用

目的探讨白藜芦醇(RES)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/TLR4/NF-KB调控大鼠血管平滑肌细胞炎症和氧化应激损伤的作用。方法采用大鼠胸主动脉平滑肌A7r5细胞株为主要受试物,分为对照组、RES组(30μmol/L)、AngⅡ组(10-4μmol/L)和实验组(30μmol/L RES预处理2 h+10-4μmol/L AngⅡ)。CCK-8法检测A7r5细胞的存活率;ELISA法检测细胞上清液中TNF-α和IL-6表达;采用试剂盒检测ROS和iNOS活性;Western blot法检测A7r5细胞AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白表达水平。结果与对照组相比,AngⅡ组A7r5细胞株存活率显著升高,RES组和实验组A7r5细胞株存活率显著降低(P0.05);AngⅡ组A7r5细胞株TNF-α和IL-6表达显著升高,ROS和iNOS活性显著升高,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著升高,RES组和实验组TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,RES组和实验组A7r5细胞株存活率显著降低,实验组A7r5细胞株存活率下降更为明显(P0.05);AngⅡ组A7r5细胞株TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著降低,RES组和实验组TNF-α和IL-6表达显著降低,ROS和iNOS活性显著降低,AngⅡ、TLR4、P-P65,P-IKB蛋白含量显著降低(P0.05)。结论白藜芦醇可有效缓解大鼠血管平滑肌细胞的炎症和氧化应激损伤,主要通过抑制血管紧张素Ⅱ/TLR4/NF-KB信号通路。     

疏血通注射液对深静脉血栓患者血清炎性细胞因子水平的影响

目的研究疏血通注射液对下肢深静脉血栓患者血清白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、内皮素-1(ET-1)、血管细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的影响,探讨疏血通注射液保护血管内皮细胞的作用。方法将确诊为下肢深静脉血栓患者48例随机分为治疗组和对照组。每组各24例。治疗组采用疏血通注射液6mL,静脉输注,每日1次;对照组用低分子肝素0.4mL皮下注射,2周为一疗程,观察治疗前后血清IL-6、TNF-α、ET-1、ICAM-1水平的变化。结果治疗组与对照组相比较,治疗组患者血清IL-6、TNF-α、ET-1、ICAM-1水平下降明显,具有统计学意义(Р0.05)。结论疏血注射液能显著降低下肢深静脉血栓患者与血管内皮损伤密切相关的细胞因子水平,从而起到血管内皮保护作用,为临床上深静脉血栓的治疗提供理论依据。     

甲型副伤寒沙门氏菌cdtB亚基的原核表达及对巨噬细胞IL-6、IL-8、TNF-α分泌的影响

目的研究甲型副伤寒沙门氏菌感染过程中,cdtB对宿主巨噬细胞分泌促炎细胞因子的影响。NF-κB信号通路阻断剂对cdtB诱导的巨噬细胞分泌细胞因子的影响。方法对甲型副伤寒沙门氏菌cdtB亚基进行原核表达,制备并模型纯化重组蛋白,建立其刺激人THP-1巨噬细胞模型,ELISA检测THP-1分泌IL-6,IL-8和TNF-α等细胞因子。在共培养体系中加入NF-κB信号通路阻断剂,ELISA检测THP-1分泌IL-6,IL-8和TNF-α等细胞因子。结果成功构建甲型副伤寒沙门氏菌cdtB原核表达系统,表达并纯化重组cdtB蛋白,与空白对照相比,受到cdtB刺激的THP-1细胞上清中的IL-6,IL-8和TNF-α浓度显著上升,而在THP-1细胞培养基中加入NF-κB信号通路阻断剂SN50可以显著抑制重组cdtB诱导的IL-6、IL-8、TNF-α分泌。结论甲型副伤寒沙门氏菌cdtB能够通过NF-κB信号通路诱导巨噬细胞分泌IL-6、IL-8和TNF-α,在甲型副伤寒相关的炎症反应中发挥促进作用。     

TLR7在结核分枝杆菌感染中的作用研究

目的 将TLR7激活基序ssRNA加入结核分枝杆菌感染的小鼠巨噬细胞,研究TLR7被激活后在结核分枝杆菌感染中的作用。方法 结核分枝杆菌感染RAW264.7细胞,感染后加入化学合成的TLR7激活基序ssRNA,RT-PCR法检测感染不同时间之后细胞对细菌的吞噬率;无菌TritonX-100裂解细胞,罗氏培养基培养计数活细菌;电镜观察细胞内自噬小体;ELISA检测细胞上清中IL-12、TNF-α与IL-4的含量。结果 感染3 h后RAW264.7细胞吞噬率最高(P>0.05);处理3 h后电镜观察,ssRNA组细胞状态明显好于对照组;36 h后ssRNA组IL-12(P < 0.05)、IL-4(P < 0.05)水平高于对照组,细胞内活菌数量ssRNA组低于对照组(P < 0.05),48 h后IL-4(P <0.05)水平下降,TNF-α的含量上升(P < 0.05)。结论 TLR7能通过诱导细胞自噬、调节细胞因子产生等机制增强细胞杀结核分枝杆菌的能力,TLR7激活基序ssRNA可以用于治疗结核分枝杆菌感染。     

活化Toll样受体4诱导静脉血管内皮细胞介导非耐受性炎症反应

目的:通过分析活化Toll样受体4(TLR4)对人脐静脉内皮细胞分泌炎性细胞因子的影响,探讨静脉内皮细胞在炎症反应中的作用.方法:逆转录聚合酶链式反应检测TLR4和细胞因子信使核糖核酸(mRNA)在人脐静脉内皮细胞中的表达,流式细胞分析检测TLR4及其辅助受体CD14的蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中细胞因子的表达水平.结果:TLB4配体脂多糖诱导了人脐静脉内皮细胞中TLB4的基因和蛋白表达上调以及CD14的蛋白表达上调.活化TLR4显著上调人脐静脉内皮细胞中炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β和IL-8的基因表达以及IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的蛋白表达,并呈剂量依赖关系.活化TLR4诱导的细胞因子上调依赖NF-кB信号传导途径,信号传导阻滞剂能抑制细胞因子的表达上调.而且初次活化后,TLR4的再次活化仍然诱导高水平的炎性细胞因子.结论:活化TLR4诱导静脉内皮细胞分泌炎性细胞因子,介导非耐受性炎症反应,提示静脉内皮细胞是重要的炎症效应细胞.     

慢性阻塞性肺病患者的细胞免疫及细胞因子水平变化

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者细胞免疫功能和白介素(IL)-6,IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α的变化及其与肺功能参数的关系。方法以30名COPD患者为研究对象,30名健康志愿者为对照组,测定血清T细胞亚群,自然杀伤细胞(NK)细胞水平及治疗前后血清IL-6、IL-8、TNF-α水平,并与第1秒用力呼气容积(FEV1)做相关分析。结果 COPD组急性发作期血清CD3+、Th(CD3+CD4+)、Th/Ts,NK细胞水平均低于健康对照组,差异有统计学意义(P0.01),Ts(CD3+CD8+)在各组间均无统计学差异,血清T细胞亚群水平、NK细胞水平与FEV1无明显相关(P0.05);COPD患者治疗前后血清IL-6、IL-8及TNF-α水平均明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.01),且治疗前血清IL-6、IL-8及TNF-α水平又高于治疗后,差异有统计学意义(P0.05)。COPD急性发作期血清IL-8、IL-6、TNF-α与FEV1呈负相关(r=-0.72,P0.05;r=-0.74,P0.05;r=-0.75,P0.05);COPD急性发作期血清IL-6、IL-8水平与TNF-α水平呈正相关(r=0.60,P0.05;r=0.65,P0.05)。结论 COPD急性发作期细胞免疫功能显著降低,存在T细胞亚群失衡和NK细胞水平下降;血清中IL-6、IL-8、TNF-α过度分泌,这些变化在COPD的发展过程中起着重要的作用,可作为监测病情、观察疗效的重要指标。     

CCDC80对巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响及机制

目的探讨卷曲螺旋结合域蛋白80(CCDC80)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响及相关分子机制。方法体外培养的THP-1细胞用佛波酯(160 nmol/L)处理,诱导分化为巨噬细胞,然后使用氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)处理使其荷脂形成泡沫细胞,并进行常规细胞体外培养。ELISA检测细胞炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达,实时荧光定量PCR和Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、脂蛋白脂肪酶(LPL)和核因子κB(NF-κB)的表达。TLR4 siRNA和LPL siRNA分别处理泡沫细胞,采用荧光定量PCR和Western blot检测CCDC80对泡沫细胞TLR4、LPL、NF-κB和p-NF-κB表达的影响。结果 CCDC80显著增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子分泌以及p-NF-κB表达。TLR-4 siRNA处理细胞后,TLR4、LPL和p-NF-κB的表达显著降低。LPL siRNA处理泡沫细胞后,LPL和p-NF-κB的表达显著降低。结论 CCDC80通过TLR4/LPL途径促进NF-κB信号通路激活,从而增加细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1分泌。     

PCSK9降解ApoER2对ApoE/ApoER2抗炎作用的影响

[目的]探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对载脂蛋白E(ApoE)受体2(ApoER2)的降解作用与ApoE/ApoER2抗炎作用之间的关系。[方法]体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和HepG2细胞,采用Western blot和ELISA检测脂多糖(LPS)对HUVEC中Toll样受体(TLR4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和PCSK9表达及分泌的影响;ApoE3对LPS诱导的HUVEC中TNF-α、IL-6、PCSK9和ApoER2表达及分泌的影响;ApoE的三种亚型(ApoE2、ApoE3和ApoE4)对非炎症状态下HUVEC和HepG2细胞中PCSK9及ApoER2表达的影响;PCSK9对HUVEC中ApoER2、TNF-α和IL-6表达及分泌的影响。[结果] Western blot和ELISA检测结果显示,LPS可以上调HUVEC中TLR4、TNF-α、IL-6和PCSK9的表达及分泌。ApoE3抑制LPS诱导的炎症反应,并上调ApoER2的表达及分泌。ApoE的三种亚型(ApoE2、ApoE3和ApoE4)对非炎症状态下HUVEC...     

铜绿假单胞菌诱导不同分化和活化状态的U937细胞分泌TNF-α和IL-8的研究

目的探讨铜绿假单胞菌诱导单核吞噬细胞产生细胞因子,以及细胞因子在宿主防御铜绿假单胞菌感染中的调节作用。方法应用佛波酯(PMA)刺激人单核白血病细胞系-U937细胞分化成巨噬细胞样细胞,对铜绿假单胞菌诱导不同分化和活化状态的U937细胞产生TNF-α和IL-8进行研究。结果铜绿假单胞菌不能诱导U937细胞产生TNF-α,但可诱导U937细胞产生IL-8及PMA分化的U937细胞产生TNF-α和IL-8;重组IL-1β可增强铜绿假单胞菌诱导PMA分化的U937细胞产生TNF-α和IL-8。结论TNF-α和IL-8的产生可能与U937细胞的分化状态有关,而且TNF-α和IL-8的产生可能存在着不同的诱导机制;IL-1β对TNF-α和IL-8的产生具有调节作用。