VEGF反义寡核苷酸对体外生长的大肠癌HT-29细胞的抑制作用

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的抑制作用.方法:实验设空白对照组、脂质体转染组、错义链转染组(SODN组)和不同浓度反义链转染组(ASODN组).用LipofectamineTM2000介导的VEGF ASODN和错义寡核苷酸(SODN)转染人大肠癌细胞株HT-29,半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF mRNA的表达:Western blot测定转染48、72 h后VEGF蛋白表达:MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡.结果:转染48 h后,ASOND组的VEGF mRNA表达水平明显低于脂质体对照组和SODN组(0.455±0.032 vs 0.934±0.031,0.915±0.004,p<0.01);脂质体对照组与SODN组之间无显著差异.细胞转染48、72 h后,ASODN组蛋白表达明显弱于脂质体对照组和SODN组,且72h弱于48 h.与对照组比较.VEGF ASODN对HT-29细胞有明显的生长抑制作用,并且抑制呈剂量和时间依赖性(P<0.05).结论:VEGF ASODN通过抑制VEGF的基因表达,对体外生长的人大肠癌HT-29细胞的增殖进行抑制.     

c-Src在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的研究c-Src蛋白对卵巢癌细胞SKOV-3的活性及血管生成相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法卵巢癌细胞SKOV-3转染针对c-Src的siRNA mimic后,分别用real-time PCR和Western blot检测细胞内c-Src mRNA及蛋白的表达;用流式细胞术观察c-Src敲除后细胞周期的改变;同时检测细胞内VEGF的表达情况。结果转染c-Src siRNA后,卵巢癌细胞SKOV-3内c-Src mRNA和蛋白的表达降低(P均<0.05);转染c-SrcsiRNA 48 h后,卵巢癌细胞SKOV-3的S期明显下降;敲减c-Src后,与空白对照组及阴性对照组比较,细胞内VEGF的含量及蛋白表达量也显著下降(P均<0.05)。结论 c-Src敲除后可以抑制卵巢癌细胞SKOV-3的细胞增殖能力,同时抑制细胞血管生成相关蛋白VEGF的表达。     

睾酮通过上调血管内皮生长因子表达促进外周血内皮祖细胞增殖

目的 探讨雄激素对外周血内皮祖细胞(PB-EPC,)增殖能力的影响及其可能机制.方法 将健康志愿者外周血经密度梯度离心法分离的单个核细胞接种至人纤维连接蛋白包被的培养板中,EGM-2MV培养7天后,多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记的荆豆凝集素和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白双染色阳性为PB-EPC.将贴壁细胞分为5组,前4组分别加入0、1、10、100nmol/L睾酮,第5组加入10 nmol/L雄激素受体阻断剂氟他胺干预3h后,再加10 nmol/L睾酮干预.培养48 h后,MTT比色法检测各组PB-EPC的增殖能力.实时定量PCR检测血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达变化,ELISA检测VEGF分泌量的变化.结果 睾酮呈浓度依赖性促进EPC增殖,雄激素受体阻断剂氟他胺完全阻断睾酮对EPC的促进作用.与空白对照组相比,睾酮在mRNA和蛋白水平上调PB-EPC的VEGF表达,氟他胺可阻断此作用.结论 睾酮通过雄激素受体途径上调VEGF的表达,促进PB-EPC增殖.     

不同浓度的血管紧张素Ⅱ、血管紧张素-(1-7)对THP-1巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达的影响

目的观察不同浓度血管紧张素Ⅱ、血管紧张素-(1-7)对单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达的影响。方法体外培养原代THP-1细胞,取5~8代细胞用佛波酯诱导分化为巨噬细胞,将细胞分成空白对照组(不加任何处理因素)、不同浓度(0.1、1、10μmol/L)血管紧张素-(1-7)组和不同浓度(0.1、1、5和10μmol/L)血管紧张素Ⅱ组加入相应处理因素培养48 h后,RT-PCR法和免疫印迹法分别检测过氧化体增殖物激活型受体γ的mRNA和蛋白表达。结果不同浓度血管紧张素-(1-7)组过氧化体增殖物激活型受体γ的mRNA及蛋白表达均比空白对照组显著升高(P<0.05),而且随着血管紧张素-(1-7)浓度的升高,其mRNA及蛋白的表达也升高(P<0.05);而不同浓度血管紧张素Ⅱ组过氧化体增殖物激活型受体γ的mRNA及蛋白表达均较空白对照组降低(P<0.05),且过氧化体增殖物激活型受体γ的mRNA及蛋白表达随着血管紧张素Ⅱ浓度的升高而降低(P<0.05)。结论血管紧张素-(1-7)呈浓度依赖性促进THP-1巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ的表达;血管紧张素Ⅱ呈浓度依赖性抑制THP-1巨噬细胞过氧...     

氟伐他汀对诱导分化的HL-60细胞VEGF mRNA表达的抑制作用

目的 探讨氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对诱导分化的HL-60人早幼粒细胞白血病细胞(HL-60细胞)血管内皮生长因子 (VEGF) mRNA表达的抑制作用及其机制.方法 将体外培养的HL-60细胞随机分为空白对照组、阳性对照组、Flu处理组和Flu+ 甲羟戊酸(Mev)处理组.Flu处理组和Flu+Mev处理组加入终浓度为20 μmol/L的Flu,Flu+ Mev处理组在加入Flu的同时加入终浓度Mev 100 μmol/L,阳性对照组加入终浓度ATRA 10 μmol/L,空白对照组加入等体积二甲基亚砜(DMSO),作用72 h后收获细胞.细胞处理72 h后检测NBT还原能力;应用RT-PCR检测各组HL-60细胞VEGF mRNA表达水平.结果 Flu处理组细胞NBT还原能力(0.63±0.09)较对照组(0.22±0.06)显著升高(P＜0.01),Flu+ Mev处理组细胞NBT还原能力明显降低(0.34±0.04)(P＜0.01),表明Flu已诱导HL-60细胞分化,而加入甲羟戊酸可以逆转Flu的诱导分化作用.阳性对照组和Flu处理组VEGF mRNA表达水平分别为1.51±0.02和1.58±0.04,均较空白对照组(1.87±0.05)明显下调(P＜0.01);Flu+ Mev处理组逆转由Flu诱导VEGF mRNA表达的下调(1.76±0.06),与Flu处理组比较具有统计学意义(P<0.05).结论 Flu能抑制已分化的HL-60细胞VEGF基因表达,这种作用可能是通过"甲羟戊酸途径"介导的.     

高糖培养的视网膜Muller细胞中embelin对VEGF蛋白质表达的抑制作用

目的研究高糖培养的视网膜Müller细胞中embelin对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质表达的调控作用。方法原代培养的大鼠视网膜Müller细胞在不同糖浓度的培养液中培养,加入X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的特异性抑制剂emblin培养72 h后,利用Western印迹技术检测细胞内VEGF蛋白质的表达情况。结果高糖条件下,在视网膜Müller细胞中VEGF蛋白质表达上调。并且,XIAP的抑制剂emblin加入高糖培养环境后VEGF蛋白质表达下降。结论 XIAP的特异性抑制剂emblin对糖尿病性视网膜病变中VEGF引起的新生血管具有潜在治疗作用。     

肾上腺髓质素和内皮素在糖尿病大鼠肾组织的表达

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)、内皮素-1(ET-1)及其受体在糖尿病肾病(DN)发病过程中的动态变化.方法 单侧肾切除大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发实验性糖尿病模型,大鼠随机分为对照组(A组)和糖尿病组(B组),分别在注射STZ后第2、4和6周取材.采用免疫组化检测ADM、ET-1及其受体的表达,Western印迹检测肾上腺髓质素受体(ADMR)和内皮素受体A(EDNR-A)蛋白的表达,RT-PCR检测ADM和ET-1 mRNA的表达.结果 B组较A组ADM的表达先升高后降低,ADMR、ET-1和EDNR-A表达增强.结论 ADM和ET-1及其受体等血管活性物质在DN发病过程发挥着重要的作用.     

黄连素对人肝癌HepG2细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

[目的]研究黄连素对人肝癌HepG2细胞增殖和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.[方法]分别以不同浓度(10、25、50、100μmol/L)的黄连素作用HepG2细胞24 h后,采用MTT法观察细胞增殖变化、实时定量PCR(Real-time PCR)检测VEGF mRNA表达水平变化、Western blot检测VEGF蛋白水平变化.[结果]黄连素可抑制HepG2细胞的增殖,并呈浓度依赖性;不同浓度的黄连素作用细胞24h后,HepG2细胞VEGF mRNA和蛋白表达均有所下降,且呈现出一定的量效关系.[结论]黄连素可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖和VEGF的表达,抗血管生成可能是黄连素抗肝肿瘤的作用机制之一.     

小干扰RNA对大鼠血管内皮细胞ICAM-1表达的抑制作用

目的:探讨小干扰RNA对大鼠血管内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的抑制作用.方法:使用 ICAM-1siRNA及错配siRNA转染肿瘤坏死因子-α刺激过的大鼠血管内皮细胞,聚合酶链反应和蛋白印迹检测转染后48 h ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平.结果:与空白对照组比较,大鼠血管内皮细胞在转染48 h后ICAM-1 mRNA表达减少90.0％,蛋白表达减少83.0％.结论:使用小干扰RNA能有效抑制大鼠血管内皮细胞ICAM-1表达.     

肾上腺髓质素和其受体在肾细胞癌组织中的表达和意义

目的探讨肾细胞癌(RCC)组织中肾上腺髓质素(ADM)和肾上腺髓质素受体(ADMR)的表达及意义。方法采用流式细胞学方法检测33例肾细胞癌组织及癌旁组织中ADM和ADMR的表达,并计数肾癌组织微血管密度(MVD),并分析其相关性。结果 ADM、ADMR及MVD在肾细胞癌组织中表达明显高于正常肾组织(P均<0.05);ADM、ADMR在肾细胞癌组织中表达具有相关性(r=0.929,P<0.05),ADM及ADMR表达与MVD具有明显相关性(r分别为0.969、0.946,P均<0.05)。结论肾上腺髓质素在肾肿瘤的发生和发展过程中起一定作用,可能参与肿瘤血管的生成。     

重组蜂毒肽对胶质瘤SHG44细胞的抑制作用及对STAT3、VEGF表达的影响

目的 探讨重组蜂毒肽对胶质瘤SHG44细胞生长的抑制作用及对细胞信号转导和转录活化蛋白3(STAT3)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 对人胶质瘤SHG44细胞株进行体外培养后,分为对照组及重组蜂毒肽低、中、高剂量组,治疗组分别给予相应浓度的重组蜂毒肽(20、40、80 mg/L),采用MMT法于24、48、72 h分别测定SHG44细胞的生长情况；并采用Western印迹法测定不同浓度重组蜂毒肽作用72 h后SHG44细胞STAT3及VEGF蛋白表达的情况.结果 与对照组比较,不同浓度的重组蜂毒肽作用于细胞24h后,细胞生长情况无明显变化；但48、72 h后,低、中、高剂量组细胞的生殖活性均有不同程度的降低,生长抑制率增高(P＜0.01,P＜0.05)；同时,中、高剂量重组蜂毒肽作用72 h后,胶质瘤细胞的STAT3、VEGF蛋白表达水平均有不同程度的降低(P＜0.01,P＜0.05).结论 重组蜂毒肽对SHG44胶质瘤细胞的生长和STAT3、VEGF蛋白的表达均有明显的抑制作用,因此重组蜂毒肽可能通过抑制STAT3、VEGF的表达来抑制胶质瘤的生长.     

低氧刺激对肾肿瘤细胞ADM基因表达的影响及意义

目的探讨低氧刺激对肾上腺髓质素(ADM)在肾肿瘤细胞表达的影响。方法将生长良好的人肾肿瘤细胞786-o分为两组,实验组细胞低氧条件下培养3、6、12 h,对照组培养0 h,采用Westen-blot法检测四组ADM蛋白表达、RT-PCR法检测ADM mRNA表达。结果实验组3、6、12 h ADM蛋白和ADM mRNA均明显高于对照组,且呈时间依赖性。结论低氧刺激可诱导ADM在人肾肿瘤细胞中表达水平升高。     

肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ促血管外膜成纤维细胞胶原生成作用的影响

目的探讨肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管外膜成纤维细胞胶原生成的影响及机制。方法体外培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞,通过放射免疫法测定培养上清中ADM含量,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）及Western印迹法检测转化生长因子β1（TGFβ1）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA及蛋白的表达。结果AngII呈剂量依赖性地刺激血管外膜成纤维细胞分泌ADM,在AngⅡ（10^-6mol／L）刺激前30min加入氯沙坦或（和）PD123319,氯沙坦（10^-5mol／L）可明显降低AngⅡ刺激的ADM分泌,其抑制率为45％（P〈0．01）,而PD123319（10mmol／L）作用后抑制率仅为3％（P〉0．05）,氯沙坦＋PD123319组与单独氯沙坦组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;AngⅡ显著增加培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,ADM呈剂量依赖地抑制AngⅡ上述作用,其中ADM（10“mol／L）组中I、Ⅲ型胶原合成分别抑制了30％和31％（P〈0．01）,ADM（10^-7mol／L）组则分别抑制了43％和42％（P〈0．01）。ADM受体拈抗剂ADM22-52可增强AngII上述作用,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分别增加了38％和43％（P〈0．01）;ADM呈剂量依赖性抑制AngⅡ刺激的TGFβ1mRNA及蛋白表达,其中ADM（10^-8mol／L）组中TGFβ1mRNA及蛋白表达分别抑制了55％和45％（P〈0．01）,ADM（10^-7mol／L）组则分别抑制了70％和59％（P〈0．01）;AngⅡ明显下调细胞内MMP-2mRNA及蛋白表达,ADM呈剂量依赖性抑制上述作用,其中10^-8mol／LADM组细胞内MMP-2mRNA及蛋白表达分别增加了1．0和0．9倍。结论AngⅡ可刺激血管外膜成纤维细胞释放ADM,而自分泌旁分泌的ADM可能通过下调细胞内TGFN表达和上调MMP-2表达,抑制AngⅡ刺激的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白生成,从而发挥有效的抗血管重构作用。     

人参皂甙对食管癌细胞VEGF表达的影响

目的 探讨人参皂甙(Rg3)抑制人食管癌鳞癌细胞血管生成的机制.方法 将75 μmol/L的二氧化钴单独或联合30、60 μg/ml的Rg3作用于食管癌EC9706细胞24 h和48 h,分别收取细胞培养上清液,用 ELISA法检测其中血管内皮生长因子(VEGF)水平,以含10%胎牛血清RPMI1640培养基做空白对照.结果 与空白组对比,二氯化钴作用24、48 h后,VEGF表达明显升高;二氯化钴与Rg3联合作用后VEGF表达明显下降,并与Rg3的剂量和作用时间密切相关.结论 Rg3可抑制二氯化钴诱导的EC9706细胞血管生成;其可能机制是抑制VEGF表达.     

诺帝抑制胃癌细胞系SGC-7901血管生成因子表达的实验观察

目的探讨诺帝(Nordy)对胃癌细胞血管生成因子VEGF、EphrinB2及其受体EphB4表达的影响及其意义。方法采用细胞培养、透射电镜、免疫细胞化学和图像分析等方法观测诺帝作用前后人胃腺癌细胞系SGC-7901细胞形态及VEGF、EphrinB2和EphB4蛋白表达的变化。结果100μmol/L诺帝处理48h后,胃癌细胞核异型性降低,细胞器减少;VEGF、EphrinB2和EphB4蛋白表达水平降低。结论诺帝可抑制胃癌细胞VEGF、EphrinB2和EphB4蛋白表达,此作用可能是诺帝抗血管生成作用的重要分子基础。     

从血管内皮生长因子及其受体调控角度探讨地黄梓醇促血管新生作用及分子机制研究

背景血管新生是目前缺血后脑保护研究的新方向之一,地黄主要有效成分梓醇具有促血管新生作用,但其具体作用机制尚未完全明确。目的从血管内皮生长因子(VEGF)及其受体调控角度探讨地黄梓醇促血管新生作用及分子机制。方法实验时间为2019年4—8月,将采用0.9%氯化钠溶液处理的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为对照组,将采用终浓度为1 mg/ml的梓醇溶液处理的HUVECs作为实验组。采用MTT法检测细胞增殖能力,采用细胞迁移实验检测细胞迁移能力,另分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹法检测HUVECs的VEGF、血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)mRNA及蛋白表达情况。结果(1)对照组HUVECs的OD值低于实验组(P<0.05);与对照组相比,实验组HUVECs相对增殖率为(1.871±0.152)%。(2)以培养0 h为对照,实验组培养12、24 h迁移细胞数量多于对照组(P<0.05);两组HUVECs培养24 h迁移细胞数量均多于培养12 h(P<0.05)。(3)两组HUVECs的VEGFR-1 mRNA及蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组HUVECs的VEGF、VEGFR-2 mRNA及蛋白相对表达量均高于对照组(P<0.05)。结论地黄梓醇通过上调VEGF、VEGFR-2表达而促进HUVECs增殖、迁移,进而发挥促血管新生作用。     

姜黄素对人肝癌细胞中血管内皮生长因子表达的影响

姜黄素属于天然酚类抗氧化剂，可作为抗突变剂和抗促癌剂Ⅲ，具有安全、无显著不良反应等特点，美国国立肿瘤所已将其列为第三代癌化学预防药物。姜黄素的抗肿瘤机制是多方面的，其中抑制肿瘤新生血管的生成是姜黄素抗肿瘤作用的重要机制。血管内皮生长因子（VEGF）是肿瘤诱导产生新生血管最主要的细胞因子。而肝癌为富含血管的肿瘤，且VEGF在肝癌中有高表达，对姜黄素是否能抑制人肝癌细胞BEL-7402中VEGF蛋白和mRNA的表达，值得我们深入探讨。     

血管生成素1对高糖培养内皮细胞血管生成调控因子表达的影响研究

目的观察高糖培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管生成调控因子表达变化,探讨血管生成素1(Ang-1)对血管生成调控因子的影响。方法将HUVECs随机分为正常组(NC)、甘露醇组(MT)、高糖组(HG)和Ang-1组。加入不同处理因素后培养24、48h,采用免疫组织化学法及RT-PCR检测血管生成素2(Ang-2)、色素上皮衍生因子(PEDF)、血管内皮生成因子(VEGF)蛋白及mRNA表达水平。结果与NC组比较,24h时HG组Ang-2、VEGF的蛋白及mRNA表达均上调[(26.99±1.69)vs(23.22±1.51),P0.05;(37.32±1.39)vs (29.29±0.78),P0.05;(165.00±32.08)vs(108.00±9.64),P0.05;(185.33±14.44)vs(113.33±16.48),P0.05],且48h上调明显,PEDF两时点蛋白及mRNA表达下调[(30.72±1.32)vs(37.81±1.43),(26.73±0.86)vs(37.43±1.48),P0.05;(69.00±12.12)vs(129.33±19.74),(30.33±6.69)vs (122.67±20.88),P0.05]。与同时点HG组比较,Ang-1组的Ang-2、VEGF蛋白及mRNA降低,PEDF蛋白及mRNA升高(P0.05)。结论高糖培养HUVECs导致血管生成调控因子VEGF、Ang-2、PEDF表达异常。外源性给予Ang-1可缓解高糖导致血管生成调控因子的异常表达。     

miR-184靶向TNFAIP2调控肺癌血管新生的分子机制

目的 探讨微小RNA(miR)-184靶向肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导蛋白(TNFAIP)2对肺癌增殖、血管新生的调控作用及其分子机制。方法 聚合酶链式反应(PCR)检测正常人及非小细胞肺癌患者血清miR-184与TNFAIP2 mRNA的表达，qRT-PCR及Western印迹分别检测人支气管黏膜上皮细胞(BEAS-2B)、肺癌A549细胞miR-184与TNFAIP2 mRNA及蛋白的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血管内皮生长因子(VEGF)蛋白，血管形成实验检查各组血管新生能力。过表达miR-184及干扰TNFAIP2后，观察各组细胞增殖及血管新生能力，双荧光色素酶试验验证miR-184与TNFAIP2的结合位点。结果 miR-184在肺癌组表达水平显著降低，VEGF蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。A549细胞miR-184表达水平显著低于BEAS-2B细胞，而TNFAIP、VEGF蛋白表达水平显著高于BESA-2B细胞(P<0.05)。与miR-NC组相比，miR-184组血管新生能力明显减弱，而干扰TNFAIP2表达后，si-TNFAIP2组...     

食管癌高发区食管癌组织中VEGF,Angiopoietin及其受体的表达及意义

目的血管生成在肿瘤生长和转移中起重要作用。VEGF和Angiopoietin是目前已知特异性作用血管内皮细胞的促血管生成因子。本研究采用RNA酶保护性分析和免疫组织化学的方法对30例食管癌高发区食管癌的癌组织和癌旁组织VEGF,An-giopoietin及其受体的mRNA和蛋白表达水平进行检测。食管癌组织中VEGF及其受体Flt-1,淋巴内皮特异性受体Flt-4,Angiopoietin受体Tie-2以及血管内皮标志物CD31和CD105mRNA较其癌旁组织显著升高(P<0.05),Angiopoietin-1无显著变化。VEGF和An-giopoietin-1分别与其受体Flt-1和Tie-2mRNA上调具有显著的正相关(r分别为0.54和0.71,P<0.05),与CD31和CD105mRNA也具有显著的正相关(P<0.05)。免疫组织化学显示VEGF和Angiopoietin-2在食管癌组织中过度表达,提示食管癌组织中存在血管内皮和淋巴内皮的活跃增殖。联合抑制VEGF,Angiopoietin和淋巴内皮生长因子或其受体可能抑制肿瘤新生血管和淋巴管的形成,从而降低淋巴及血行转移的潜能。