HLA—DRB和ACE基因与肺结核的相关性分析

目的 探讨人类白细胞抗原（HLA）-DRB基因和血管紧张素转换酶（ACE）基因多态性与肺结核的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物法（PCR—SSP）对肺结核组和健康对照组进行HLA—DRB和ACE基因分型。结果肺结核组HLA—DRB1＊15等位基因的频率显著高于对照组（P〈O．05）；复治和耐药肺结核组ACE基因的I／D基因型频率显著高于初治和无耐药组（P〈O．05）。结论HLA—DRB1＊15等位基因及ACE基因的I／D基因型与肺结核密切相关。     

GD药物引起粒细胞减少与等位基因的关系

采用多聚酶链式反应-序列特异引物（per—ssp）方法检测65例GD病人抗甲状腺药物引起粒细胞减少（1）组，65例GD病人并发粒细胞减少（2）组，65例非GD病人粒细胞减少（3）组，65例正常参照人群（4）组的HLA—DRB1＊08032 DRB1＊1501的等位基因频率。结果1：（1）组HLA—DRB1＊08032 DRB1＊1501的基因频率高于（2）组（P〈0．05）。2：（1）组HLA—DRB1＊08032 DRB1＊1501的基因频率明显高于（3）组（4）组，（P〈0．01）。3：（2）组HLA—DRB1＊08032 DRB1＊1501的基因频率高于（4）组（P〈0．05）。结论：GD病人应用抗甲状腺药物引起粒细胞减少与HLA—DRB1＊08032 DRB1＊1501等位基因频率增加有关。     

HLA-DRB和ACE基因与肺结核的相关性分析

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DRB基因和血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与肺结核的相关性。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)对肺结核组和健康对照组进行HLA-DRB和ACE基因分型。结果肺结核组HLA-DRB₁^*15等位基因的频率显著高于对照组(P＜0.05);复治和耐药肺结核组ACE基因的I/D基因型频率显著高于初治和无耐药组(P＜0.05)。结论HLA-DRB₁^*15等位基因及ACE基因的I/D基因型与肺结核密切相关。     

血管紧张素转换酶基因多态性与2型糖尿病肾病的相关性

应用PCR技术检测144例2型糖尿病患者（T2DM组）的血管紧张素转换酶（ACE）基因插入/缺失（I／D）多态性，并与67例健康人（对照组）比较，结果两组间ACE等位基因、基因型频率无显著性差异（P〉0．05）；T2DM组伴DN者（80例）DD基因型频率显著高于不伴DN者（64例）（P〈0．05）；DN患者中肾功能不全者DD基因型及D等位基因频率均明显高于肾功能稳定者（P〈0．05）。提示ACE基因I／D多态性与T2DM的易感性无关，与DN的发生、发展密切相关。     

血管紧张素I转换酶基因I／D多态性与特发性肺纤维化的相关性研究

目的探讨血管紧张素I转换酶（ACE）基因I／D多态性在特发性肺纤维化（IPF）发病中的作用。方法应用PCR技术检测42例IPF患者（IFP组）和90例健康查体者（对照组）ACE基因I／D多态性,并分析不同基因型和等位基因者IPF发病危险性。结果IPF组DD基因型和D等位基因频率均显著高于对照组（P〈0．05）;与Ⅱ基因型比较,携带DD型和D等位基因个体发生IPF的风险分别增加2．97倍（95％CI为1．13—7．73）和1．96倍（95％CI为1．16—3．32）,P均〈0．05。结论ACE基因I／D多态性与IPF发病有关,DD基因型和D等位基因可能增加IPF的患病风险。     

血管紧张素转换酶和血管紧张素原基因多态性与冠心病的关系

目的探讨血管紧张素转换酶（ACE）插入／缺失（I／D）多态性和血管紧张素原（AGT）M235T基因多态性与冠心病（CHD）的关系。方法应用多聚酶链反应结合限制性内切酶法（PCR—RFLP）对110例冠心病患者、62例冠状动脉造影正常者以及18名门诊常规体检无冠心病史者基因多态性进行分析。结果①CHD组ACE基因DD基因型及D等位基因频率明显高于健康对照组（分别为43．6％、60．5％比26．3％、44．4％）,差异有统计学意义‘P〈0．05）。CHD组AGT基因TT基因型及T等位基因频率明显高于对照组（分别为66．4％、78．6％比42．5％、60．6％）,差异有统计学意义（尸〈0．05）。②男性CHD组ACE基因DD基因型和D等位基因频率以及AGT基因TT基因型和T等位基因频率均显著高于对照组（均P〈O．05）。女性CHD组ACE基因DD基因型和D等位基因频率以及AGT基因‘rr基因型和T等位基因频率与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。③联合分析ACEDD型及AGTTr型罹患冠心病的相对风险,其比数~L（OR）为4．904,高于单基因ACEDD型（2．175）及AGTTT型（2．669）。结论ACE基因I／D多态性及AGT基因M235T多态性与CHD有显著相关性,同时具有ACEDD型及AGT TT型发生冠心病的相对风险显著高于单基因ACEDD型及单基因AGT‘丌型。性别也可作为冠心病的危险因素。     

人类白细胞抗原-DR及-G基因多态性与广西儿童哮喘发病的研究

目的探讨人类白细胞抗原（HLA）．DR及．G基因多态性与儿童哮喘的关系。方法以无血缘关系的84例哮喘儿童为哮喘组,168名无哮喘和特应性疾病的健康个体为对照组。采用PharmaciaUniCAP系统检测哮喘儿童的血清总IgE水平。应用基因芯片法检测HLA．DR的21个基因位点和基于基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱技术（MALDI-TOF）检测HLA-G的9个单核苷酸位点。结果（1）儿童哮喘组HLA-DRB1＊070X基因和HLA-DRB1＊11XX基因频率分别为2．98％和13．69％,对照组分别为0．3％和5．95％C=6．915,P〈0．05;X2=9．478,P〈0．01）。优势比（OR）分别为10．57（95％CI：1．215～91．986）和2．79（95％CI：1．429～5．449）。HLA—DRB3（52）＊010X基因频率在哮喘组为7．14％,低于对照组的13．99％（X2=5．854,P〈0．05）,OR为0．429（95％CI：0．214～0．862）。（2）HLA—DRB1＊15XX．HLA-G的rsl704和rsl063320位点的14bp缺失-G单体型（HLA—DRB1＊15XX．14bp缺失-G）携带者哮喘风险比未携带者降低（Wald值为13．419,P〈0．001）,锨值为0．198,95％CI为0．084—0．471;哮喘组中携带该单体型者血清IgE水平（365．0±943．1）KU／L,也较未携带者（977．8±14334．9）KU／L为低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HLA．DRB1＊070X基因和HLA—DRBl‘11XX基因与儿童哮喘易感性相关,HLA．DRB3（52）＊010X基因可能为保护性基因,HLA—DRB1＊15XX和HLA-G的rs1704和rs1063320位点的14bp缺失-G单体型是哮喘的保护性单体型。     

昆明地区汉族2型糖尿病肾病与血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性的相关性研究

应用多聚酶链反应（PCR）方法检测昆明地区汉族184名2型糖尿病（DM）患者（110名为2型DN，74名为非2型DN）和56名健康者ACE基因I／D多态性，比较各组间的基因频率。结果 （1）昆明地区汉族2型DN组DD基因型及D等位基因频率显著高于正常组和非2型DN组，（P〈0．05）。（2）2型DN组Ⅱ基因型及Ⅰ等位基因频率显著低于正常组和非2型DN组（P〈0．05）。结论（1）昆明地区汉族2型DN与ACE基因I/D多态性有关联。（2）DD基因型及D等位基因可能是2型DN的易感基因，Ⅱ基因型及Ⅰ等位基因可能为2型DN的保护基因。     

406例肾移植受者HLA-ABDR基因频率分析

目的：探讨湖北地区肾移植受者与HLA基因相关性。方法：运用PCR-SSP法对我院湖北地区406例肾移植受者（观察组）进行HLA-ABDR基因分型并计算其基因频率,并与4026例湖北骨髓库健康人（对照组）比较。结果：观察组中检出HLA-A32、B35、B44、B45、B52、B56、B64、B75、DRB1＊10、DRB1＊14、DRB1＊16,基因频率显著高于对照组（P〈0.05）,其中B35、DRB1＊14的基因频率〉0.05;检出B46、DRB1＊9、DRB1＊17基因频率显著低于对照组（P〈0.05）,其中B46、DRB1＊9基因频率〉0.1。结论：高频率基因与湖北地区健康人群基因频率基本一致,其中B35、DRB1＊14等位基因可能是湖北地区的易感基因;B46、DRB1＊9等位基因可能是保护基因。     

30例重症肌无力患者人类白细胞抗原-Ⅱ基因多态性测定及分析

目的 探讨人类白细胞抗原（HLA）-Ⅱ基因多态性在贵州汉族人群重症肌无力（MG）发病中的作用。方法选择本地区汉族人群中30例MG患者（MG组）、36例神经内科非自身免疫性疾病患者（疾病对照组）及30例健康查体者（正常对照组）,采用PCR-序列特异性引物（PCR-SSP）技术进行HLA-Ⅱ类基因DRB1、DQB1位点分型,并对其与Mc的相关性进行分析。结果MG组HLA-DRB1＊0901和DQB1＊0303等位基因频率显著高于其他两组（P〈0．05）,DQB1＊0601等位基因频率显著低于其他两组（P〈0．05）。结论HIA-DRB1＊0901及DQB1＊0303可能为MC的易感基因,而HLA—DQ＊0601为保护基因。     

基因芯片在痘病毒对宿主基因转录调控中的应用

痘病毒(Poxvirus)是病毒颗粒最大的一类 DNA 病毒,结构复杂;感染人和动物后常引起局部或全身化脓性皮肤损害,给畜牧业带来严重的经济损失同时也威胁着人类健康。痘病毒可通过多种策略调控宿主基因的转录进而影响其免疫应答。基因芯片通过对宿主细胞在病毒感染前后基因表达谱的检测,为病毒的致病机制及病毒感染对宿主的调控机制的研究提供了便利手段。本文综述了有关基因芯片在痘病毒研究中的应用。     

急性白血病ATM基因和BRCA2基因的杂合性缺失

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）与急性非淋巴细胞白血病（ANLL）ATM基因和BRCA2基因杂合性缺失及其相互关系。方法：应用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术检测ATM基因D11S2179位点和BRCA2基因D13S260位点的杂合性缺失（LOH）。结果：64例ALL患者中两位点LOH发生率为18.7%；D11S2179和D11S260两位点LOH的发生频率分别为12.5%和14.0%；两位点同时发生LOH的频率为7.8%。38例ANLL患者中两位点LOH的发生率为7.9%，D11S2179和D13S260两位点的LOH发生频率分别为2.6%和5.2%。两组总发生率比较差异有显著性意义（P＜0.05）。结论：ATM基因和BRCA2基因的LOH可能参与ALL的病理发生，而与ANLL无明显相关性。     

Fas基因转导胃癌细胞的表达

目的将Ｆａｓ基因导入胃癌细胞，建立Ｆａｓ基因表达株，并比较转导前后ｍＲＮＡ与蛋白的表达水平．方法采用分子克隆技术将Ｆａｓ基因插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的多克隆克隆位点之间，以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞ＳＧＣ７９０１，用Ｇ４１８筛选克隆细胞；以Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测Ｆａｓ基因的表达．结果成功地构建了真核表达载体ｐＢＫＦａｓｃＤＮＡ．转导细胞后，从１×１０５细胞中筛选出１００个抗性克隆以上，转导率大于０１％，随机挑选２个克隆扩增培养，获得了１株稳定的抗性细胞，从而有效地建立了Ｆａｓ基因表达株（ＳＧＣ７９０１Ｆａｓｃｅｌｓ）．杂交结果表明，转导株与非转导株均有ｃＤＮＡ的表达，但转导株在ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达均明显高于非转导株．结论Ｆａｓ基因在胃癌细胞中处于低表达状态；通过真核表达载体的介导，Ｆａｓ基因导入胃癌细胞后，能有效地表达ＦａｓｍＲＮＡ及其蛋白．     

凋亡相关性基因bcl—2和bax在肺癌中的表达及意义

为探讨B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）基因及其同源类似物bax基因的表达与肺癌发生的关系,应用免疫组化SP法检测了51例肺癌患者的肺癌标本及其癌旁组织中bcl-2、bax的表达。结果显示,bcl-2在肺癌中染色比在癌旁组织中深,bax在肺癌中染色比在癌旁组织中浅,两者之间均有极显著差异（P＜0.01）;bcl-2、bax表达与肺癌的组织分型、患者的性别、吸烟史、临床分型、分期及淋巴结转移无关（P＞0.05）。提示①bcl-2、bax在肺癌发生中具有重要作用。②在癌前病变组织中检测并比较bcl-2和bax的表达,有利于肺癌的早期诊断。③可通过药物使bcl-2表达降低,促进凋亡,提高患者对放、化疗的敏感性。     

人Parkin基因重组质粒的构建

目的应用分子生物学技术构建人Parkin基因重组质粒。方法从人类胎儿黑质组织中提取总RNA,以RT—PCR法扩增Parkin的cDNA片段;将此片段克隆于pUCm。T载体中,经过特异性限制性内切酶酶切分析片段正确后,进行全序列分析。结果克隆的cDNA与GeneBank上的序列相比完全一致,得到了编码正确的人Parkin的cDNA全序列。结论成功构建了人Parkin基因重组质粒。     

共表达HIV-1的gag-gp120与IL-2的pGPIL-2诱导小鼠产生细胞毒性T细胞的研究

目的 研究HIV-1CN融合基因与IL-2基因共表达基因质粒pGPIL-2诱导产生细胞毒性T细胞（CTL）。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1gag-gp120基因与IL-2基因的基因疫苗质粒pGPIL-2转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。结果 杀伤实验结果证明,经基因免疫获得的 CTL效应细胞,可杀伤 HIV-1CN 融合基因转染的靶细胞。结论 pGPIL-2可有效地诱导 CTL的产生,该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1基因疫苗提供了重要实验依据。     

Development of gene therapy for blood disorders by gene transfer into haematopoietic stem cells

Haematopoietic stem cells (HSCs) are important target cells for gene therapy of blood disorders due to their pluripotency and ability to reconstitute haematopoiesis following myeloablation and transplantation. HSCs can 'self-renew' and generate new stem cells. Genetically modified stem cells are therefore expected to last a lifetime in the recipient following blood and marrow transplantation, and can potentially cure haematological disorders. Oncoretroviral vectors have been the main vectors used for HSCs because of their ability to integrate into the chromosomes of their target cells. Because oncoretroviral vectors require dividing target cells for successful localization of the preintegration complex and subsequent chromosomal integration of the provirus, only the dividing fraction of the target cells can be transduced. As only a small fraction of haematopoietic stem cells is dividing at any one time, oncoretroviral vector transduction of human HSCs has been low in clinical trials. However, patients with severe combined immune deficiency-X1 (SCID-X1) have recently been treated successfully by gene therapy of autologous bone marrow cells using oncoretroviral vectors containing the common gamma chain gene. While several additional disorders may potentially be treated successfully using oncoretroviral gene transfer to HSCs, many disorders may require much higher gene transfer efficiency than was achieved in the SCID-X1 study. Therefore, lentiviral vectors have recently emerged as promising vectors for human HSCs because they can transduce dividing and nondividing HSCs efficiently, and may become the vectors of choice in the future for treatment of blood disorders where a large fraction of HSCs has to be corrected.     

中缅边境恶性疟原虫pfmdr1基因多态性及pfmsp1等位基因分型研究

目的 分析中缅边境恶性疟原虫多抗药基因1(riamoaium Jaicipparum mumarug resustance1,pfmdr1)基因编码蛋白86位点多态性及裂殖子表面蛋白1(P.falciparum merozoite surface protein 1 gene,pfmsp1)等位基因的分型特征.方法 采用chelex-100法提取DNA,PCR扩增pfmdr1基因编码蛋白86位点及pfmsp1基因第2区与第3区部分片段,并对其进行DNA测序,对扩增片段基因的结构、同源性进行分析.结果 检测的50份血样中,49份成功扩增pfmdr1基因,49份在第25位氨基酸均发生缺失,且在第27～29位氨基酸由STA都突变为EYR,9份在第35位氨基酸缺失,第86位氨基酸均未发生点突变.50份恶性疟患者样本中有49份共扩增出72个pfmsp1基因片段,以MAD20型为主导型占93.88％,K1、RO33型为次之,并存在不同基因株混合感染现象.结论 中缅边境恶性疟原虫株pfmdr1基因第86位氨基酸点无突变,pfmsp1存在MAD20型、K1型和RO33型3种等位基因型,以MAD20型为优势虫株.     

Case-only analysis of gene–gene interactions in inflammatory bowel disease

Abstract

Background

Gene–gene interactions (G?×?G) potentially play a role in the etiology of complex human diseases, including inflammatory bowel disease (IBD), and may partially explain their ‘missing heritability’.