慢性乙型肝炎前C区G1896A基因变异对HBV复制及疾病严重程度的影响

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)前C区G1896A变异对乙型肝炎病毒复制及疾病严重程度的影响。方法选取43例慢性乙型肝炎及49例乙型肝炎肝硬化患者为研究对象。采用PCR技术检测HBV前C区G1896A位点变异及乙型肝炎基因分型。同时检测HBeAg、HBV DNA定量、肝功能血清生化指标。结果(1)发生HBV前C区G1896A变异患者的年龄大于野生株感染者(P0.01),发生肝硬化的可能性更大(P0.01)。(2)随着变异株感染率的增加,HBeAg阴性率较野生株组增加(P0.01),基因C型较野生株组增加(P0.05),HBV DNA水平降低差异意义(P0.05)。结论 HBV前C区G1896A变异与HBeAg的状态,HBV DNA的复制及疾病严重程度相关。     

HBeAg阳性慢性乙型肝炎初治患者BCP区A1762T/G1764A变异株定量检测结果分析

目的探讨HBeAg阳性慢性乙型肝炎初治患者BCP区A1762T/G1764A变异株定量检测的临床意义。方法通过单标记探针联合选择性阻断实时荧光定量PCR法精确定量检测97例HBV DNA阳性慢性乙型肝炎初治患者BCP区A1762T/G1764A变异株,并进行统计学分析。结果 97例HBeAg阳性患者变异株的含量会随着HBV DNA水平的升高而降低(P0.01)。变异株含量同时与HBeAg水平呈显著相关,随着HBeAg水平的升高,变异株含量降低(P0.01)。结论对HBV感染者的BCP区A1762T/G1764A变异株进行定量检测,可对患者病情的可能发展进行预测,从而可以采取有效的防治措施。     

HBeAg阴性乙型肝炎与前C/BCP区变异的相关性

通过对HBV基因的研究表明,HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)与HBV DNA中前C(PC)、基本核心启动子(BCP)区的基因突变相关,并指出PC/BCP区的突变不仅影响血清HBeAg的表达,也与机体内HBV DNA的低复制、疾病的进展和抗病毒治疗的应答反应密切相关,使得CHB的治疗变得更为复杂。就HBeAg阴性CHB目前治疗现状、HBV PC/BCP区基因的结构与变异、变异对HBeAg阴性CHB疾病进展以及对乙型肝炎抗病毒治疗的影响进行综述。     

HBV 1762／1764联合突变的研究

目的探讨乙肝病毒C基因启动子区1 762/1764联合突变的临床意义.方法随机选择HBV DNA、HBeAg阳性和HBV DNA、HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者各50例.用实时荧光定量PCR法,对两组患者进行HBV 1 762/1764双变异及HBV DNA定量测定.结果HBV 1 762/1764变异阳性率在HBeAg阳性组为24.0%,在HBeAg阴性组为70.0%,两组比较差异有显著性意义(P＜0.01);HBV DNA含量,HBV 1 762/1764突变者显著高于HBV 1 762/1764未突变者(P＜0.01).结论HBV 1 762/1764联合突变可能抑制HBeAg表达和导致HBV复制增强.     

重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒全基因克隆及测序

目的建立重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒（HBV）DNA克隆并测序，从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系。方法10例重型乙型肝炎患者血清提取HBV DNA，聚合酶链反应（PCR）扩增HBV全基因。PCR产物构建到PUCm-T载体上，转化至大肠杆菌感受态DH-5α细胞，经酶切鉴定，获得含3．2Kb HBVDNA的重组克隆菌，全基因测序，分析各读码框核苷酸和氨基酸变化。结果4例成功构建HBV DNA克隆，并完成全基因测序。其中3例在前C区发生G1896A变异，产生一个终止密码子，导致HBeAg缺失；1例在C启动子区1762、1764双位点出现突变；有多处点突变及缺失变异分布于PreS2区及C区已知细胞毒T淋巴细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞的细胞表位。结论该法可用于临床研究HBV病毒基因结构与重型乙型肝炎发病的关系，并为进一步研究其HBV基因功能奠定基础。     

基因芯片检测HBV基因突变的临床意义--81例慢性乙型肝炎患者HBV前C区和BCP区突变的临床资料分析

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组前C区变异和基本核心区启动子(basic core promoter.BCP)变异的临床意义以及基因芯片在慢性乙型肝炎(慢乙肝)临床检测中的应用.方法:用基因芯片法检测HBV DNA阳性慢乙肝患者的血清标本,根据HBV血清标志物的实验结果将受试者分为HBeAg( )组和HBeAg(-)组,比较分析两组患者的临床资料,并根据变异在不同类型慢乙肝患者中的检出状况,以评定HBV前C区和BCP区变异的临床意义.结果:81例血清HBV DNA阳性患者中检出前C区变异51例,突变检出率为63.0%,检出BCP区变异60例,突变检出率为74.1%,其中HBeAg(-)者变异的检出率均明显高于HBeAg( )者,突变株的检出以慢性重型肝炎最高,其次是慢乙肝重度、中度患者,慢乙肝轻度患者最低,表明HBV前C区突变与病情轻重及e系统血清标志有关,而与性别、年龄无关.结论:基因芯片定量检测HBV基因突变高效可靠,对于判断慢乙肝患者病情轻重、预后好坏和指导用药,具有一定临床参考价值.     

正确认识HBeAg的临床意义,建议废弃"大三阳"、"小三阳"不科学的名称

HBeAg(e抗原)是乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白基因组的前C区和C区段的基因产物,在细胞蛋白酶作用下,形成HBeAg分泌至血液中.所以一般认为HBeAg可反映HBV的复制.慢性乙型肝炎的自然史一般可分为:免疫耐受期、免疫清除期和非活动或低(非)复制期3个阶段.在慢性乙型肝炎的自然病程中,血清中HBeAg水平往往与HBV DNA载量相关.     

慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、HBV DNA与肝组织炎症关系的探讨

目的探讨慢性乙型肝炎血清HBeAg及HBV DNA水平和肝组织炎症损害的关系.方法采用微粒子免疫捕捉分析法和荧光定量聚合酶链反应分别对74例HBeAg阴性和73例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者进行血清HBeAg、HBV DNA定量检测和肝组织活检病理炎症分级,对比分析结果.结果74例HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者中27例（36%）血清HBV DNA＞105拷贝/ml,随着G1～G4肝组织炎症损害级别的增高其所占例数也相应增高,统计学分析HBV DNA水平与肝组织炎症病理分级的相关性有显著意义;血清HBeAg定量0～29 PEIU/ml,随肝组织炎症病理分级上升定量阳性（＞0.28 PEIU/ml）的病例比率增加,经统计学分析两者具有相关性.73例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者中有49例（67%）血清HBV DNA＞105拷贝/ml,血清HBeAg及HBV DNA水平与肝组织炎症分级无相关性.结论血清HBV DNA水平可作为判断HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝组织炎症损害程度的指标,血清HBV DNA水平愈高肝组织炎症损害往往愈重.36%的HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清HBeAg水平低下而HBV DNA复制活跃,可能存在HBV的前C区终止突变合并C区突变.血清HBV DNA水平不能反映HBeAg阳性慢性乙型肝炎肝组织炎症损害的程度.     

小分子乙型肝炎病毒基因组缺失突变体结构分析

目的 了解小分子HBV基因组缺失突变体的基因结构及特点.方法 采用一步法PCR从慢性乙型肝炎患者血清中扩增全基因组HBV DNA,回收并克隆＜1 kh的小分子HBV DNA,测序并以BioEdit及VectorNTI 6.0软件分析基因结构特点.结果 获得基因长度介于174～986 bp之间的64种、共124个小分子HBV缺失突变体DNA,按基因结构特点分为3类,即3种GT-AG剪接变异体、29种"常规"缺失突变体及32种基因组内部含polyA的缺失突变体.所有小分子基因组缺失突变体在HBV各编码区及基因调控区均存在不同程度缺失,其中66%(42/64种)保留与HBV复制(包装)相关的所有顺式调控序列,48%(31/64种)保留X编码区.结论 乙型肝炎患者血清中普遍存在小分子HBV基因组缺失突变体,深入了解这些变异体的结构和功能,有助于进一步探索HBV的致病机制.     

替比夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效观察

目的观察替比夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者HBeAg血清转换与HBV DNA应答快慢的相关性。方法在48例经替比夫定治疗48周的慢性乙型肝炎患者,常规观察应答反应。结果本组替比夫定治疗患者在治疗48周结束时,48例患者中有30例(62.5%)HBV DNA转阴,18例HBV DNA持续阳性。在30例HBV DNA转阴患者中,发生HBeAg血清转换16例(53.3%)。其中在12周内发生HBV DNA转阴的15例中,发生HBeAg血清学转换12例(80%);在24周以后发生HBV DNA持续转阴的15例患者中,仅有1例(6.7%)发生HBeAg血清学转换;发生HBeAg血清学转换的患者,谷丙转氨酶均恢复正常。结论 24周内HBV DNA快速下降到不可测水平是预测替比夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎发生HBeAg血清转换的重要预测因子。     

肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒感染者血清HBeAg及HBV DNA与肝组织病理改变的关系

目的了解肝功能正常的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者肝组织病理改变特征,并分析血清HBeAg及HBV DNA定量与肝组织病理改变的关系。方法选取肝功能正常的慢性HBV感染者90例,行肝穿刺病理检查,依据血清HBeAg及HBV DNA将患者分组,分别比较HBeAg阳性和阴性组及HBV DNA阳性和阴性组患者肝组织炎症分级和纤维化分期结果。结果90例患者100%存在肝组织损伤,其中肝硬化8例（8.9%）;慢性乙型肝炎轻度62例（68.9%）,中度8例（8.9%）,重度12例（13.3%）。82例病理诊断慢性乙型肝炎的患者中,炎症分级G≥2者30例（36.6%）;纤维化分期S≥2者28例（34.15%）。HBeAg阴性组病理炎症分级及纤维化分期均明显重于阳性组（P值均〈0.05）。HBV DNA阴性和阳性组肝组织炎症分级和纤维化分期差异均无统计学意义。结论肝功能正常的慢性HBV感染者,肝组织病理皆非＂正常＂;血清HBeAg、HBV DNA均不能反映肝脏损伤情况;对此类患者制定治疗方案时应考虑肝组织病理检查结果。     

慢性乙型肝炎患者临床和肝组织病理学特点及影响肝纤维化因素分析*

目的 分析HBeAg阴性与阳性慢性乙型肝炎（CHB）患者临床和肝组织病理学特点,探讨影响CHB患者发生明显肝纤维化的危险因素。方法 回顾性分析250例CHB患者血清HBV DNA水平、Fibroscan检测肝脏硬度（stiffness）值和肝穿刺组织病理学特点,应用多因素Logistic回归模型分析影响CHB患者发生明显肝纤维化的独立危险因素。结果 160例HBeAg阴性患者血清HBV DNA ≥1×10⁵ copies/ml者所占比例显著低于HBeAg阳性组（66.9%对99.4%,P<0.05）;HBeAg阴性组血清ALT和AST水平显著低于HBeAg阳性组（P<0.05）;血清HBeAg阴性组与阳性组肝组织炎症分级和纤维化分期总体分布差异无统计学意义（P>0.05）;多因素Logistic回归分析结果显示年龄≥40岁、HBV DNA水平高、PTA低和Stiffness水平高为CHB患者存在明显肝纤维化的独立危险因素。结论 血清HBeAg阴性与阳性CHB患者存在一些临床和肝组织病理学特征的差异,血清HBeAg阴性患者可能存在更为严重的临床和预后问题,需要给予特别的关注和管理。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA、HBeAg与肝组织HBcAg及炎症分级的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者血清HBV DNA、HBeAg与肝组织HBcAg及炎症分级的关系.方法 回顾性分析250例CHB肝穿刺患者,按血清HBV DNA水平,分为A组（＜3 log10 IU/ml）45例,B组（3～6 log10 IU/ml）138例,C组（＞6 log10 IU/ml）67例.按HBeAg阴阳性不同分为阳性组142例,阴性组108例.分别与肝组织中HBcAg水平、肝组织炎症分级进行比较,分析彼此的相关性,率的比较用卡方检验及确切概率法,相关性分析采用直线相关分析.结果 血清HBV DNA不同水平与肝组织HBcAg免疫组化比较差异有统计学意义（χ2=11.1,P=0.05）,两者之间呈正相关（r=0.75,P=0.001）;与肝组织炎症分级（G）比较差异无统计学意义（χ2=13.3,P=0.075）,两者之间也无相关性（r=0.04,P=0.325）.HBeAg阳性和阴性分组与肝组织中HBcAg水平比较差异有统计学意义（χ2=6.64,P=0.01）,两者之间呈正相关（r=0.56,P=0.001）;与肝组织炎症分级（G）比较差异无统计学意义（χ2=8.43,P=0 065）,两者之间也无相关性（r=0.06,P=0.415）.结论 CHB患者肝组织HBcAg表达更能反映出肝内HBV复制状态,患者血清中测不出病毒标志物时,可以考虑肝穿刺以观察肝组织中HBcAg表达来判断HBV复制状态具有重要意义.     

Assessment of chronic hepatitis B: the importance of hepatitis B virus DNA testing

Background: Chronic hepatitis B (CHB) has an estimated prevalence of 90 000 to 160 000 in Australia. Cirrhosis and hepatocellular carcinoma are important complications of CHB and appropriate evaluation of hepatitis B surface antigen (HBsAg)‐positive individuals is vital to identify treatment candidates. Methods: A review of the database of a tertiary hospital was performed and 348 HBsAg‐positive individuals with baseline demographic, virological, serological and biochemical variables were identified and evaluated cross‐sectionally. A small subgroup of hepatitis B e antigen (HBeAg)‐negative patients with normal alanine aminotransferase (ALT) at baseline were identified and followed longitudinally. Results: 175/348 (50%) of patients were in the HBeAg‐negative, chronic hepatitis phase of disease, 22% in the HBeAg‐positive immune clearance and 6% in the immune tolerant phases. HBeAg‐negative patients were older and more likely to be male than HBeAg‐positive patients. The correlation between hepatitis B virus (HBV) DNA and ALT levels was examined. ALT and HBV DNA levels showed no correlation in HBeAg‐positive CHB and only a weak correlation in HBeAg‐negative patients. Furthermore, 35% of HBeAg‐negative patients with detectable HBV DNA had a normal ALT. Conversely 38% of HBeAg‐negative patients with no detectable HBV DNA had an elevated ALT. A persistently normal ALT over 24 months was seen in five of nine HBeAg‐negative patients with normal initial ALT and detectable HBV DNA. Conclusion: Appropriate evaluation of HBeAg‐negative CHB must include HBV DNA because the ALT is not a reliable guide to underlying viral replication.     

234例慢性乙型肝炎患者HBV前C/BCP区突变分析

目的调查慢性乙型肝炎患者血清HBV前C/基本核心启动子（BCP）区的突变情况,分析各种突变对HBeAg表达的影响。方法抽提患者血清DNA,采用改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序。用NTI软件比对结果,根据文献报道,选取1753、1762、1764、1862、1896和1899共6个位点进行突变分析,并重点分析不同突变对患者血清HBeAg阳性率和病情的影响。结果在234例中6个位点均无突变者为74例（31.6%）,其血清HBeAg阳性率为74.3%（55/74）。在234例中6个位点检出至少1种突变的病例为160例（68.4%）,突变形式包括4种单一位点突变和21种组合形式的突变;检出G1896A突变73例（31.2%）,其中36例检出有共存未突变序列,37例仅检出突变序列,后者血清HBeAg的阳性率为18.9%（7/37）。检出G1896A以外其他形式突变的有87例,HBeAg阳性率为63.2%（55/87）;其中以A1762T＋G1764A最为常见,HBeAg阳性率为69.4%（34/49）。在1753、1862位点上检出4种特殊碱基突变,前C区有基因片段插入或缺失的有2例。结论多数慢性乙型肝炎患者在HBV前C/BCP区可检出突变,突变形式多样,其中G1896A突变样本血清HBeAg阳性率显著下降,而其他突变对其影响较小。应用DNA序列测定法分析HBV前C/BCP区基因突变,获得的信息全面,对临床评估病情进展和实施抗病毒治疗有参考价值。     

慢性乙型肝炎患者血清前S1抗原检测的意义

目的探讨PreS1抗原检测的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验法检测421例慢性乙型肝炎患者血清PreS1抗原和HBV标记物;采用荧光定量PCR法检测HBVDNA。结果在421例慢性乙型肝炎患者中,HBVDNA阳性者367例,其中PreS1Ag阳性者188例(51.2%),HBeAg阳性者119例(32.4%),后两者有显著性差异(P0.01);在高HBVDNA载量(105～107copies/ml和107copies/ml)组患者中,PreS1Ag阳性率(60.2%,60.0%)显著高于HBVDNA阴性组(33.3%)和低载量(103～105copies/ml)组(41.9%,P0.01);但在421例患者中,PreS1Ag阳性率(48.9%)低于HBVDNA(87.2%,P0.01)。结论 PreS1Ag能够较HBeAg更好地反映HBV在体内的复制状态,但尚不能代替HBVDNA的检测。     

联合拉米夫定继续治疗阿德福韦酯初治HBeAg阳性慢性乙型肝炎不应答患者3年疗效观察

目的观察阿德福韦酯初始治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎不应答患者加用拉米夫定治疗3年的临床疗效。方法 62例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者初始口服国产阿德福韦酯治疗,由于未出现病毒学应答,分别在治疗12周(A组18例)、24周(B组20例)和48周(C组24例)加用拉米夫定继续治疗,观察3年的疗效。结果在治疗3年末,A组、B组和C组患者HBV DNA转阴率分别为83.3%、60.0%和95.8%,A组和C组疗效明显高于B组(P<0.05);ALT复常率分别为94.4%、100.0%和100.0%,差异无显著性(P>0.05);HBeAg转阴率分别为66.7%、20.0%和41.7%,A组明显高于C组和B组;HBeAg血清学转换率分别为33.3%、5.0%和8.3%,A组明显高于B组和C组(P<0.05)。结论阿德福韦酯初治未出现病毒学应答的患者可随时加用拉米夫定联合治疗。     

慢性乙型肝炎患者血清与粪便HBV DNA水平对比研究

目的 分析慢性乙型肝炎（CHB）患者血清和粪便HBV DNA与血生化指标和肠道菌群的相关性。方法 2015年8月~2017年3月在我院就诊的CHB患者73例,常规检测血生化、HBV标记物和HBV DNA水平,同时收集粪便,测量HBV DNA及双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌、肠球菌、梭菌属、白色念珠菌、拟杆菌、普雷沃氏菌、瘤胃球菌等9种肠道菌群DNA,比较血清和粪便HBV DNA与肝功能和肠道菌群DNA的相关性。结果 48例血清HBeAg阳性患者粪便和血清HBV DNA水平分别为（5.9±1.6） copies/ml和（7.2±1.6） copies/ml,均显著高于25例血清HBeAg阴性组的（5.0±1.9） copies/ml和（6.1±1.3） copies/ml （t=4.401,P=0.024;t=5.936,P=0.008）;21例轻度、47例中度和5例重度CHB患者粪便和血清HBV DNA定量水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）;粪便HBV DNA与血清HBV DNA水平呈正相关（r=0.61,P=0.002）,与血清ALP和TBIL水平呈负相关（r=-0.49,r=-0.54,P<0.05）,而血清HBV DNA与血清ALT或AST水平呈负相关（r=-0.46,P=0.023;r=-0.52,P=0.008）;粪便HBV DNA与肠球菌呈正相关（r=0.49,P=0.005）,而血清HBV DNA与乳酸杆菌呈负相关（r=-0.53,P<0.001）,其余肠道菌群与HBV DNA无明显相关性（P>0.05）。结论 CHB患者粪便存在HBV DNA,其检测的意义还有待于进一步探讨。     

恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎患者疗效观察

目的观察恩替卡韦治疗CHB患者的疗效。方法 43例HBeAg阳性和18例HBeAg阴性患者接受恩替卡韦治疗,比较两组治疗24周和48周时的疗效。结果在治疗24周时,HBeAg阳性组HBV DNA转阴15例（34.9%）4,8周时转阴28例（65.1%）,而HBeAg阴性组分别转阴15例（83.3%）和17例（94.4%,P=0.001和0.018）;两组在24周和48周时ALT复常率均无显著性差异（P=0.713和0.138）;在34例HBV DNA定量〉10^7copies/ml与27例HBV DNA定量〈107copies/ml两组中,治疗24周时,HBV DNA转阴例数分别为11例（32%）和19例（70%,P=0.03）,治疗48周时,则分别为23例（68%）和22例（81%,P=0.22）。结论本研究提示恩替卡韦治疗CHB有很好的抗病毒活性。     

浙南地区HBV基因型分布特征及其与慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平和HBeAg表达的关系

目的分析浙南地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布特征,探讨不同基因型与患者血清中HBV DNA水平及HBeAg表达的关系。方法收集2011年6月-2012年3月161例就诊的HBV DNA阳性患者血清标本,采用型特异性引物PCR方法对HBV进行基因分型并用实时荧光定量PCR方法测量HBV DNA含量(拷贝/ml)和ELISA方法检测HBeAg;对HBV DNA含量进行对数转换使其符合正态分布后,运用χ2检验分析基因型与HBeAg阳性率的关系,t检验分析B、C基因型患者HBV DNA水平的差异。结果 161例患者中,B型41例,占25.5%;C型118例,占73.3%;BC混合型2例,占1.2%。C型患者HBV DNA水平和HBeAg阳性率分别为(5.84±1.40)log10拷贝/ml和64.4%,高于B型的(5.49±1.33)log10拷贝/ml和53.7%,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论浙南地区HBV基因型以C型为主,B型次之。C基因型HBV DNA水平与HBeAg阳性率均高于B基因型,肝硬化的发生与C基因型HBV密切相关。