HBV所致终末期肝病患者肝组织胆管增生的研究

目的在乙型肝炎病毒（HBV）所致的终末期肝病患者肝组织内，常可见大量的胆管增生，但其发生机制及临床意义尚不清楚。为阐明该类患者胆管增生的发生机制及其与卵圆细胞增生及肝细胞再生的关系，我们对8例HBV相关的终末期肝病患者及2例正常人肝组织进行了免疫组化染色及图像分析。方法肝组织连续切片后进行免疫组化染色，观察指标为细胞角蛋白CK7、CK8、CK18、CK19、OV6、增殖细胞核抗原（PCNA）、谷胱甘肽S转移酶（GSTπ）、白蛋白（ALB）及甲胎蛋白（AFP）。结果在所有8例患者肝组织汇管区内均可见典型增生的胆管及非典型增生的胆管，且对CK7、CK8、CK9、CK19、OV6及PCNA染色呈阳性反应，但两种类型的胆管在染色强度上存在明显差异。一些非典型增生的胆管细胞表现出肝卵圆细胞的形态学及免疫组化特征。某些小型肝细胞样细胞在形态及免疫组化特征方面介于肝卵圆细胞及成熟肝细胞之间。结论在HBV相关的终末期肝病患者肝组织内，胆管增生可能存在不同起源。某些非典型增生的胆管细胞实际上就是活化的肝卵圆细胞。非典型增生的胆管细胞与肝细胞再生密切相关。小型肝细胞样细胞可能是肝卵圆细胞与成熟肝细胞之问的中间过渡细胞。     

肝卵圆细胞与肝脏疾病

肝卵圆细胞(Ｈｅｐａｔｉｃｏｖａｌｃｅｌｌ,ＨＯＣ)是在慢性肝病患者的肝脏中出现的一种具有多分化潜能的原始细胞,可分化为过渡细胞小肝细胞和成熟肝细胞,也可向胆管细胞分化[１,２]。ＨＯＣ参与了肝组织的再生,与肝肿瘤的发生有密切的关系。下面就ＨＯＣ与慢性肝病和肝肿瘤的关系作一综述。     

肝脏干细胞调控机制的研究进展

肝脏干细胞在正常肝脏中处于静息状态 ,但当肝脏受到严重损伤和或肝细胞的再生能力受到抑制时 ,肝脏干细胞便活化、增殖并分化为成熟肝细胞及胆管细胞以发挥代偿作用。尽管目前对肝脏干细胞的来源及肝组织内的准确定位还不明确 ,但众多研究己证实肝内肯定存在肝脏干细胞 ,其活化后的子代细胞为卵圆细胞 ,卵圆细胞具备多向分化潜能 ,体内外实验证实其可以分化为肝细胞、胆管细胞、胰腺及肠型上皮 ,1999年Ｐｅｔｅｒｓｏｎ研究证实骨髓细胞可以转化为肝细胞 ,其他学者对骨髓干细胞的体内移植及体外培养的研究中也证实了Ｐｅｔｅｒｓｏｎ的观点…     

肝卵圆细胞分化调控机制的研究进展

卵圆细胞是肝脏的干细胞，具备多向分化潜能，体内外实验证实其可以分化为肝细胞、胆管细胞、胰腺及肠型上皮细胞。在胚胎发育过程中，肝脏干细胞以肝细胞的形式存在，而在成年哺乳动物的肝组织中则以卵圆细胞的形式存在。对卵圆细胞分化调控机制的研究在基础理论和临床应用等方面均有重要意义，一方面，卯圆细胞可能参与肝脏损伤的修复与重建，研究其分化机制有助于阐明肝脏的发育机制；另一方面，卵圆细胞可分化为具有功能的成熟肝细胞，将为肝细胞移植和生物型人工肝提供重要的细胞来源，可能缓解供体肝脏严重缺乏的矛盾。但卵圆细胞的分化过程和机制非常复杂，分化异常可能导致肝细胞癌的发生。     

肝干细胞的基础及应用研究

肝脏具有强大的再生能力．很早就有人提出肝千细胞存在的假说。1958年Wilson和Leduc在研究小鼠营养性肝损伤的修复机制中发现，增殖的毛细血管细胞（终末胆管细胞）具有干细胞样特性，可分化为肝细胞及胆管细胞，于是首次提出原始肝细胞的概念。这一研究提示肝内可能存在具有双向或多向分化潜能的肝干细胞或肝祖细胞。从定义上讲，肝干细胞应当具有无限增殖能力及多向分化潜能。体内有多种细胞符合肝千细胞的特征，如肝脏胚胎发育过程中出现的胎肝干细胞及成肝细胞、成年肝内存在的兼件肝干细胞及其子代细胞卵圆细胞、特定情况下的成熟肝细胞和骨髓／造血干细胞等。     

大鼠肝卵圆细胞的分离培养及脾内移植研究

目的 观察肝卵圆细胞在同种异体大鼠脾内移植的演变结果,为肝干细胞移植治疗临床肝功能衰竭提供实验依据。方法 采用改进的梯度离心法分离肝卵圆细胞,体外培养鉴定后移植入2/3肝切除的同种异体大鼠脾脏内。结果 每只模型大鼠肝脏中可分离获得约1.69×10~5/ml肝卵圆细胞。体外培养的肝卵圆细胞呈现上皮细胞的生长特点,对OV6、细胞角蛋白19及甲胎蛋白染色呈阳性反应,对白细胞共同抗原染色呈阴性反应。肝卵圆细胞植入异体大鼠脾脏内可形成岛屿状肝组织结构,形成“肝化脾”。结论 大鼠肝卵圆细胞具有肝干细胞的生物学特征,在一定条件下可分化为肝细胞及胆管上皮细胞。     

肝卵圆细胞分子标志物的研究进展

肝干细胞是一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞,能产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞.起源于前肠内胚层,在胚胎发育过程中以肝细胞的形式存在,在成年哺乳动物肝中以小卵圆细胞存在,表现为核大而胞质小并具有特殊的细胞标记.正常情况下这类细胞处于静止期,增生分裂非常慢.当切除或药物损伤后,这类细胞开始活化增生,迅速从静止期进入增殖期.近年来的研究已经证实,肝卵圆细胞在肝细胞严重受损和分裂增生受抑制时呈现出向肝细胞和胆管上皮细胞双向分化的潜能,是一种肝脏的干细胞,目前已经成为热点.肝卵圆细胞不仅在急慢性肝功能不良、晚期肝硬化等肝脏病变,在胰腺病变引起的糖尿病等疾病研究中也开始引起兴趣.但如何发现和获得肝卵圆细胞始终是解决此类问题的关键.本文就肝卵圆细胞的分子标志物的研究进展作一综述.     

肝干细胞研究进展

尽管肝干细胞研究领域中尚有很多争议,但综合近年来的研究逐步形成以下共识:①肝干细胞定位于胆管系统;②正常肝脏的肝细胞更新和肝损伤修复过程均需肝干细胞参与;③以卵圆细胞为代表的多潜能肝干细胞的功能与肝内微生态平衡密切相关。本文综述肝干细胞领域近年来的有关研究进展。     

慢性肝病患者肝脏卵圆细胞的定位和定量研究--29例慢性肝病患者肝组织病理学分析

目的 观察慢性肝病患者肝脏卵圆细胞的形态学特征,并探讨卵圆细胞数量和肝纤维化分级的相关性。方法 以免疫组织化学染色法在３例正常人和２９例慢性肝病患者的肝脏切片中寻找卵圆细胞,对符合卵圆细胞的形态学特征并呈胞浆阳性染色的细胞进行计数。结果 正常肝脏组织中未见到卵圆细胞。在慢性肝病患者肝脏组织中,卵圆细胞主要存在于汇管区和纤维隔内,以细胞核呈卵圆形、细胞体积小和胞浆量少为特征。０～４期肝纤维化组的卵圆     

肝干细胞研究进展

尽管肝干细胞研究领域中尚有很多争议，但综合近年来的研究逐步形成以下共识：①肝干细胞定位于胆管系统；②正常肝脏的肝细胞更新和肝损伤修复过程均需肝干细胞参与；③以卵圆细胞为代表的多潜能肝干细胞的功能与肝内微生态平衡密切相关。本综述肝干细胞领域近年来的有关研究进展。     

肝卵圆细胞——肝干细胞研究进展

<正>近年来对干细胞的研究不断深入,人们发现成年肝组织内存在具有干细胞特性的细胞,在特定环境因素作用下可向肝细胞和胆管细胞分化,甚至可向肝癌细胞方向分化,该细胞被称为肝卵圆细胞或肝前体细胞,是具有一定共性的干细胞群体,与其分化的上下游细胞难以区分,本文就     

重视肝干细胞的基础研究与临床应用

肝干细胞（1iverstemcell，LSC）的存在并参与肝脏生长、发育与再生的观点已被广泛接受，利用LSC进行细胞移植与生物人工肝治疗各种终末期肝病被认为是最有前途的方法之一。最新研究证实，肝脏卵圆细胞（ovalcell，OVC）是LSC在某种条件下被激活后分化所产生的、具有双向分化潜能的干细胞，又叫肝祖细胞（progenitor cell），主要分布于闰管、门管和胆管树状分支区。     

慢性重型肝炎患者肝组织内胆管增生的免疫组织化学研究

在慢性重型肝炎患者的肝组织切片中,除肝细胞大面积坏死、纤维组织增生、炎症细胞浸润及不同程度的肝细胞再生等病理特征外,还常有明显的胆管增生现象,但这种胆管增生的本质及意义尚不清楚。新近提出肝组织内胆管增生与肝干细胞     

肝脏干细胞研究进展

干细胞是不分化而长期生存,具有自我更新能力且保持多种分化潜能的一种细胞群。从功能上定义,肝脏干细胞（hepatic stemcell,HSC）是指在特定的条件下能增殖分化为有功能的肝脏组织的细胞。根据肝脏干细胞的存在位置,分为内源性肝脏干细胞和外源性肝脏干细胞2种。内源性肝脏干细胞存在于肝脏组织本身,是未分化的、多潜能的、具有干细胞以及肝细胞或胆管细胞标记的、非肝实质细胞的上皮细胞前体细胞,目前认为卵圆细胞和小肝细胞属于这一类。外源性肝脏干细胞,本身不存在于肝脏内,包括：骨髓细胞、胰腺细胞、胚胎干细胞、脐带血细胞等,但在特定的微环境中可以分化为肝细胞和（或）胆管上皮细胞。     

丁酸钠诱导体外培养的大鼠肝卵圆细胞分化为成熟肝细胞

目的探讨分化刺激剂丁酸钠对体外培养的大鼠肝卵圆细胞分化的影响。方法从喂养含0．1%乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食4～6周的人鼠肝脏中分离出盱卵圆细胞,用免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法对其进行鉴定。用0．75mmol/L酸钠处理大鼠肝卵圆细咆后．姬姆萨染色观察细胞表型改变,western blot检测细胞白蛋白的表达水平。结果免疫细胞化学结果显示分离出的细胞既表达成熟肝细咆的标志物白蛋白,也表达胆管细胞的标志物细胞角蛋白19,RT-PCR结果显示这些细胞还表达干细胞的标志物c-kit,但不表达造血干细胞的标志物CD34,表明这些细胞是大鼠肝前体细胞——肝卵圆细胞。0．75mmol/L丁酸钠能诱导大鼠肝卵圆细胞出现明显的表型改变,细胞变大,变圆,核浆比减小,且双核细胞数增多,约占总细胞数的50%左右,同时western blot的结果显示0．75mmol/L丁酸钠能够提高大鼠肝卵圆细胞白蛋白的表达水平。。结论分化刺激剂丁酸钠能诱导体外培养的大鼠肝卵圆细胞向成熟肝细胞分化。     

人胚胎肝干细胞的形态特点

目的:观察胚胎发育早期肝干细胞的形态特征、时空分布及分化,以探讨肝干细胞的生物学特征．方法:运用发育第3-12 wk人胚标本47例(其中 3．5 wk各8例;6-8 wk各5例,9-12 wk各2例),石蜡切片,连续切片,免疫组化染色,光镜下观察人胚肝及肝干细胞的发育及其AFP、c-Met和 CK19的时空表达．结果:发育第3 wk,肝芽形成,第4 wk形成肝索,第5 wk出现原始肝血窦．第3-5 wk人胚肝芽和肝索细胞排列紧密,较小,形态不规则,核圆形或卵圆形,核质比例大,核深染,胞质颜色较淡,偏蓝色,显示出幼稚细胞的形态学特征,并呈甲胎蛋白(α-Fetoprotein,AFP)、c-Met 阳性反应．第6 wk,肝索内出现了体积大、核大、淡染的细胞,呈AFP、c-Met阴性反应．随胚龄增加,这类细胞数量增加．10-12 wk． AFP、c-Met阳性细胞主要分布于汇管区周围． CK19阳性反应在7 wk时开始出现于一些与 AFP、c-Met阳性反应的细胞形态类似的肝索细胞中．10-11 wk时,CK19阳性反应主要位于汇管区附近的肝索细胞、胆管板细胞及胆管上皮细胞,12 wk时,CK19阳性信号仅见于胆管板和胆管上皮细胞．此时所有的胆管板细胞及胆管上皮细胞均呈AFP、c-Met和CK19阳性．结论:人胚发育3-5 wk肝实质由肝干细胞组成,其表型为AFP /c-Met ．6 wk,肝干细胞开始向肝细胞系分化,7 wk向胆管系分化,10-12 wk,肝干细胞主要局限于汇管区周围的肝索, 与成年肝中卵圆细胞(成年肝干细胞)的分布一致．AFP ／c-Met／ CK19 细胞可能为胆管祖细胞．     

肝卵圆细胞调控机制研究进展

肝卵圆细胞是一类存在于成年肝脏、具有自我更新和多向分化潜能的肝干细胞。当肝脏发生严重损伤且肝细胞再生障碍时,卵圆细胞被激活并大量增殖,参与肝脏损伤的修复与重建。肝卵圆细胞增殖分化是多因素作用的结果。现就肝卵圆细胞的定位、来源及调控机制的研究进展作一概述。     

大鼠脐带间充质干细胞对肝细胞及卵圆细胞体外增殖与功能的影响

目的：探讨大鼠脐带间充质干细胞（UMSC）对原代大鼠肝细胞及肝卵圆细胞增殖与功能的影响。方法采用2-乙酰氨基芴加肝脏三分之二切除术建立肝卵圆细胞增殖模型,通过原位二步胶原酶灌流法分离到单个肝脏细胞,再经过 Percoll 密度梯度离心分离到肝卵圆细胞。原代大鼠肝细胞/肝卵圆细胞各分为3组：UMSC 组、原代大鼠肝细胞组/肝卵圆细胞组及 UMSC 与原代大鼠肝细胞共培养组/UMSC 与肝卵圆细胞共培养组,分别于第1、3、6、8天通过MTT 法检测各组细胞增殖能力,于第3天通过 ELISA 法检测各组细胞培养上清液中白蛋白含量。结果UMSC 与原代大鼠肝细胞共培养组在第3、6、8天的 A 值均比相应时间点的 UMSC 组 A 值与原代大鼠肝细胞组 A 值之和大（P ＜0．05）;UMSC 与肝卵圆细胞共培养组在第3、6、8、10天的 A 值均比相应时间点的 UMSC 组 A 值与肝卵圆细胞组 A 值之和大（P ＜0．05）。UMSC 无白蛋白分泌能力,UMSC 与原代大鼠肝细胞共培养组培养上清液中白蛋白水平为（266．21±50．44）ng/mL,较原代大鼠肝细胞组（130．79±22．10）ng/mL 高（P ＝0．013）;UMSC 与肝卵圆细胞共培养组培养上清液中白蛋白水平（（49．64±3．56）ng/mL）较肝卵圆细胞组（13．54±1．53）ng/mL 高（P ＝0．000）。结论UMSC 在体外可以促进原代大鼠肝细胞及肝卵圆细胞的存活和增殖,并可增强其分泌白蛋白的作用。     

Polo样激酶1基因在大鼠肝再生和肝卵圆细胞增殖中的差异表达

肝脏具有很强的再生能力,当发生轻、中度肝损害时,肝细胞可经增殖和分化等复杂过程完成肝再生;而在肝细胞大量损害或肝细胞增殖能力被抑制时,卵圆细胞可增殖并分化为肝细胞或胆管细胞.然而,目前研究结果已初步证实肝细胞癌的发生也源起于卵圆细胞,其分子机制仍有待深入研究[1-3]. Polo样激酶1(Plk1)属于保守的丝氨酸/苏氨酸激酶家族,在调控细胞周期进程和细胞分裂方面起着十分重要的作用[4-6].研究结果表明,Plk1在肝癌中的表达增强[7-8].我们在前期研究中也发现Plk1基因在肝细胞癌中差异表达[9].但是Plk1在肝卵圆细胞中的表达及其病理意义鲜见报道.本研究以二乙酰胺基芴(2-AAF)为致癌物诱导大鼠肝卵圆细胞增殖,与单纯肝再生组织进行对比分析,探讨Plk1在肝卵圆细胞中的表达及其与癌前状态的关系.     

黄芪汤对肝硬化大鼠肝脏卵圆细胞肝向分化的作用

目的:研究黄芪汤对肝硬化大鼠肝脏卵圆细胞肝向分化的作用机制。方法:应用二甲基亚硝胺制备大鼠肝硬化模型,用黄芪汤治疗,进行肝功能、肝脏病理学检测;应用共聚焦免疫荧光技术检测肝脏卵圆细胞与肝细胞及胆管细胞共定位染色。结果:黄芪汤能显著降低模型大鼠血清AST、TBil水平和肝组织Hyp含量,减少肝组织α-SMA的表达,在模型大鼠肝纤维化逆转过程中,黄芪汤可使Thy1.1与CK19共定位细胞数量显著增加,使肝脏卵圆细胞(HOC)表型和功能发生改变。结论:黄芪汤通过诱导肝脏卵圆细胞肝向分化作用来促进肝硬化逆转。