眼针对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠AQP8调节机制的研究

[目的]研究眼针对腹泻型肠易激综合征（D-IBS）模型大鼠结肠组织水通道蛋白8（AQP8）的表达的影响,探讨眼针对D-IBS模型大鼠结肠组织水液代谢的调控及其机制.[方法]32只雄性Wistar大鼠随机分成对照组、D-IBS模型组、眼针组、眼针＋VIP受体拮抗组（针抗组）,采用慢性应激与束缚相结合的方法建立D-IBS模型,免疫组织化学SABC法检测大鼠结肠组织AQP8的蛋白表达.[结果]与正常组相比,模型组AQP8的蛋白表达明显降低（P＜0.01）;与模型组相比,眼针组AQP8的蛋白表达显著升高（P＜0.01）;与眼针组相比,针抗组AQP8的蛋白表达显著下降（P＜0.01）.[结论]眼针治疗D-IBS的机制之一可能是通过上调结肠组织AQP8的蛋白表达,进而调控了结肠的水液代谢,其中AQP8的调控可能是通过VIP通路实现的.     

脾虚模型大鼠结肠上皮细胞水通道蛋白8表达变化

[目的]探讨脾虚大鼠结肠上皮细胞水通道蛋白8（AQP8）表达的变化规律，为脾虚泄泻的发生机制提供实验依据。[方法]以RT-PCR及免疫组化等方法检测脾虚模型大鼠结肠AQP8mRNA表达及蛋白含量，光镜观察黏膜组织改变。[结果]脾虚模型组大鼠出现腹泻、少食、消瘦等表现；结肠黏膜上皮不完整，细胞排列疏松；AQP8 mRNA表达及蛋白含量均比正常对照组减少（P〈0．05，〈0．01）。[结论]AQP8表达下调可能是脾虚大鼠产生泄泻病理生理机制之一。     

痛泻要方对醋酸-电刺激大鼠实验性肠易激综合征作用的研究

[目的]探讨痛泻要方对醋酸-电刺激大鼠实验性肠易激综合征（IBS）的作用及其机制。[方法]给予大鼠慢性反复直结肠灌注醋酸造成炎症刺激,炎症恢复后予小量电刺激诱发高敏感性的肠道发生应激反应,模拟人类IBS,观察痛泻要方对刺激期间大鼠排便量、粪便含水量、血浆P物质（SP）和血管活性肠肽（VIP）水平等各项指标的影响。[结果]模型组与正常组比较,大鼠排便量、粪便含水量增加（P〈0.01）,血浆SP和VIP减少（P〈0.05）;痛泻要方高剂量组与模型组比较,大鼠的排便量、粪便含水量减少（P〈0.05）,血浆SP和VIP增加（P〈0.05）。[结论]醋酸-电刺激大鼠模型可有效模拟人类IBS,痛泻要方能够改善该模型的排便加速、粪便含水量增加、血浆SP和VIP水平紊乱等症状。     

眼针对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠水通道蛋白3表达的影响

目的:研究眼针对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠结肠血管活性肠肽(VIP)和水通道蛋白3(AQP3)表达的影响,探讨眼针对D-IBS模型大鼠结肠水液代谢的调控作用和机制.方法:SPF级Wistar大鼠30只,随机分为对照组、D-IBS模型组和眼针组,每组10只.采用慢性应激结合束缚方法建立D-IBS大鼠模型.采...     

肝郁脾虚证腹泻型IBS模型大鼠结肠紧密连接蛋白、AQP3及AQO4的变化

目的 研究肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠在模型复制过程中腹泻症状及结肠紧密连接蛋白、水通道蛋白(AQP)3及AQP4的变化。方法 采用给予番泻叶联合束缚应激的方法复制D-IBS大鼠模型，并设立单纯灌服番泻叶组及单纯束缚组作为对照，分别于实验前、实验第7、14、21及28天检测各组稀便级及模型大鼠结肠紧密连接蛋白、AQP3及AQP4表达。应用免疫组化法和Western印迹检测结肠紧密连接蛋白、AQP3及AQP4表达。结果 与正常组比较，除肝郁1组外，各建模组灌服番泻叶后5 h内稀便级显著升高，结肠紧密连接蛋白、AQP3、AQP4阳性表达及表达量均显著下调(P<0.05,P<0.01);与脾虚3组、肝郁1组比较，肝郁脾虚1组稀便级显著增加，结肠紧密连接蛋白、AQP3、AQP4阳性表达及表达量均显著下降(P<0.05,P<0.01);与脾虚4组、胆郁2组比较，肝郁脾虚2组稀便级显著增加，结肠紧密连接蛋白、AQP3、AQP4阳性表达及表达量均显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论 紧密连接蛋白、AQP3、AQP4与肝郁脾虚证D-IB...     

痛泻要方治疗功能性脾虚腹泻的实验研究

[目的]制备功能性脾虚腹泻小鼠模型，观察痛泻要方的止泻作用，探索其健脾止泻机制。[方法]番泻叶灌胃造脾虚腹泻的小鼠模型，用痛泻要方进行治疗，观察各组间的腹泻指数、体重变化率及血浆P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）变化。[结果]模型组的腹泻指数、体重增长率、血浆VIP水平与正常组比较差异均有统计学意义（P〈0．05，〈0．01），痛泻要方高剂量组的腹泻指数、体重增长率、血浆VIP水平与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．05，〈0．01），匹维溴铵组与模型组比较能显著改善腹泻指数和血浆VIP水平，对体重变化率无显著性改善。[结论]痛泻要方的作用机制可能与促进Na^＋从肠腔转运至细胞，使大肠内水分减少、蠕动减缓而止泻有关，或者通过调节紊乱的胃肠激素水平而达到止泻作用。     

针刺联合痛泻要方治疗肠易激综合征患者临床疗效及对免疫功能的影响

[目的]观察针刺联合痛泻要方治疗肠易激综合征腹泻型（D-IBS）患者的临床疗效。[方法]选择我院治疗的D-IBS患者104例,随机分为2组各52例,对照组给予西医常规治疗,观察组给予针刺联合痛泻要方治疗,观察2组临床疗效。[结果]观察组患者治疗后总有效率优于对照组（P〈0．05）。观察组患者治疗后白细胞介素18（IL-18）、IL-23、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平降低的幅度优于对照组,经统计学分析比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。2组患者治疗期间不良反应发生率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。[结论]采用针刺联合痛泻要方治疗D-IBS患者疗效可靠,可以下调血IL-18、IL-23、TNF-α水平,不良反应少,值得临床推广使用。     

痛泻要方对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织中NF-κBp65基因和蛋白表达的影响

目的探讨痛泻要方对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠结肠组织中NF-κB p65蛋白和基因表达的疗效及作用机制。方法将实验动物分为6组,采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法造模,肉眼观察结肠大体形态损伤并进行评分。以大鼠结肠组织中NF-κB p65为观察指标,采用RT-PCR和免疫组化法检测NF-κB p65蛋白和基因表达水平。结果肉眼观察模型组大鼠结肠组织黏膜层可见炎症和溃疡形成,与空白组比较P<0.05,证实模型成功。模型组大鼠结肠组织NF-κB p65基因和蛋白的表达量均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后,痛泻要方高剂量组、中剂量组NF-κB p65基因和蛋白的表达量均较模型组降低(P<0.05、P<0.01)。结论痛泻要方对TNBS/乙醇法UC大鼠模型结肠黏膜NF-κB p65基因和蛋白的表达量有下调作用,提示痛泻要方治疗UC的作用机制之一可能是与NF-κB信号通路被激活有关。     

痛泻要方治疗溃疡性结肠炎模型大鼠的药效学机制

目的探讨痛泻要方治疗溃疡性结肠炎(UC)大鼠的疗效及其机制。方法将实验动物分为3组:空白组、模型组、痛泻要方组,采用TNBS/乙醇溶液灌肠加束缚法制作UC肝郁脾虚证大鼠模型,光镜观察结肠组织病理形态变化,免疫组化法观察结肠组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)蛋白表达变化,并以大鼠胸腺指数、脾脏指数、结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(TAOC)为观察指标。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠组织损伤程度严重(P0.01),大鼠结肠组织PPAR-γ蛋白表达下调(P0.01),脾脏和胸腺指数降低(P0.05),MPO和T-AOC活性降低(P0.05,P0.01),SOD活性升高(P0.05),MDA含量下降(P0.01);与模型组比较,痛泻要方组的结肠损伤明显修复(P0.05),大鼠结肠组织PPAR-γ蛋白表达上调(P0.01);脾脏和胸腺指数升高,MPO和T-AOC活性升高(P0.05),SOD活性降低(P0.05),MDA含量增加(P0.05)。结论痛泻要方能够有效治疗实验性UC,其药效作用可能是通过提高结肠组织抗氧化能力和调节结肠组织紊乱的免疫功能以及提高结肠组织PPAR-γ的表达实现。     

洛哌丁胺对腹泻模型大鼠结肠水通道蛋白4表达的影响

目的 研究腹泻模型大鼠在给予洛哌丁胺处理后结肠黏膜水通道蛋白4（AQP4）表达的变化,探讨洛哌丁胺治疗腹泻分子作用机制以及AQP4与结肠水代谢紊乱之间的关系.方法 采用免疫组化酶标抗体技术检测各组之间大鼠升、降结肠黏膜细胞AQP4蛋白表达变化.结果 大鼠升、降结肠均有AQP4蛋白表达.正常对照组及模型对照组升降结肠AQP4蛋白表达量均低于洛哌丁胺治疗组（P〈0.01）.模型对照组升结肠AQP4蛋白表达量低于正常对照组（P〈0.05）,而降结肠表达差异无统计学意义 （P＞0.05）.结论 洛派丁胺可上调腹泻大鼠结肠黏膜AQP4蛋白表达,促进肠腔内水分的吸收.     

腹泻型肠易激综合征患者临床特征与结肠黏膜水通道蛋白8的表达

目的检测腹泻型肠易激综合征(IBS)患者升结肠和降结肠黏膜水通道蛋白8(AQP8)的表达情况,研究IBS与AQP8的关系及IBS的发病机制。方法采用荧光定量RT-PCR方法对人结肠黏膜细胞的AQP8mRNA进行定量分析研究,探讨AQP8的表达与IBS的发生及临床特征的关系。结果正常人和IBS患者升结肠和降结肠组织标本中均有AQP8mRNA表达。腹泻型IBS患者升结肠和降结肠的AQP8mRNA表达显著低于正常对照组(中位数3·1×104拷贝/μgRNA和2·8×104拷贝/μgRNA比8·2×104拷贝/μgRNA和3·8×104拷贝/μgRNA),AQP8mRNA在结肠的表达水平与患者年龄和始发病年龄均无相关性,但与病程长短、排便频率及排便性状密切相关,病程越长,排便频率越高,大便含水量越多,其结肠黏膜AQP8mRNA的表达量就越低。结论腹泻型IBS患者AQP8表达下降,提示结肠吸收功能发生障碍,水吸收量减少,导致粪便稀薄形成腹泻。AQP8的变化与IBS的发生可能存在一定相关性。     

RNA干扰对XWLC-05肺癌细胞水通道蛋白3表达的影响

目的构建靶向水通道蛋白3（AQP3）的siRNA表达载体,探讨其对XWLC-05肺癌细胞系AQP3表达的影响。方法构建AQP3特异性siRNA表达载体和对照组表达载体,以脂质体法转染XWLC-05肺癌细胞,用RT—PCR检测AQP3mRNA的表达,用Westernblot方法检测APQ3蛋白的表达。结果成功构建靶向AQP3的siRNA表达载体1和2,分别命名为pAQP3-siRNAl、pAQP3-siRNA2。转染48h后pAQP3-siRNA1和pAQP3．siRNA2转染组AQP3 mRNA的表达量分别是对照组的65％和79％,组间比较有统计学差异（P〈0．05）;pAQP3-siRNAI和pAQP3-siRNA2转染后的蛋白表达量分别是对照组的53％和。73％,pAQP3-siRNA1干扰效果明显高于pAQP3-siR—NA2（P〈0．05）。结论AQP3特异性siRNA能够有效地抑制XWLC-05肺癌细胞系AQP3的表达。     

结直肠息肉水通道蛋白3、4的表达

目的:观察水通道蛋白(aquaporin,AQP)3、4蛋白在结直肠息肉中的表达.方法:选择结直肠息肉患者103例,肠镜下收集115个息肉组织样本和10例正常人结直肠黏膜组织样本,采用免疫组织化学方法检测AQP3、4的蛋白表达.结果:AQP3、4蛋白在人结直肠黏膜上皮细胞呈阳性表达,均表达在细胞的基底部与侧面.AQP3、4蛋白在炎性息肉中的表达均明显高于正常组,差异有显著性意义(P<0.01,P<0.05);增生性息肉AQP3蛋白表达低于正常组,差异有显著性意义(P<0.01);腺瘤AQP4蛋白表达低于正常组,差异有显著性意义(P<0.01).AQP3与AQP4在结直肠息肉及正常结直肠黏膜中的表达呈正相关(r=0.61,P=0.000).结论:AQP3、4蛋白在结直肠息肉中存在异常表达,二者之间呈正相关.     

三七总皂甙对脑出血后大鼠脑水肿及水通道蛋白-4表达的影响

目的观察三七总皂甙对脑出血大鼠脑水肿形成及水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响。方法Wistar大鼠198只随机分为A、B、C 3个部分,分别检测脑含水量、AQP4蛋白和AQP4 mRNA,每部分又随机分为假手术组,模型组,治疗组,采用干湿重法、免疫组织化学染色、逆转录聚合酶链反应技术分别测定脑含水量、AQP4蛋白和AQP4 mRNA的表达。结果治疗组和模型组12 h之后脑含水量增加(P<0.05),1天时脑含水量明显增加(P<0.01),3天时脑含水量达到高峰并持续到5天,在相同的时间点,治疗组脑含水量比模型组明显少(P<0.05);模型组和治疗组12 h之后AQP4蛋白和AQP4 mRNA表达水平增加(P<0.05),1天时明显升高(P<0.01),3天达到高峰持续至5天,以后逐渐下降,与模型组比较,治疗组大鼠在各时间点AQP4蛋白、AQP4 mRNA均在低水平表达(P<0.05),1-5天表达水平明显下降(P<0.01)。结论三七总皂甙可能通过抑制AQP4的表达减轻脑出血后脑水肿的形成。     

Auphen and dibutyryl cAMP suppress growth of hepatocellular carcinoma by regulating expression of aquaporins 3 and 9 in vivo

AIM: To investigate whether the regulation of aquaporin 3(AQP3) and AQP9 induced by Auphen and dibutyryl c AMP(dbc AMP) inhibits hepatic tumorigenesis. METHODS: Expression of AQP3 and AQP9 was detected by Western blot, immunohistochemistry(IHC), and RT-PCR in HCC samples and paired non-cancerous liver tissue samples from 30 hepatocellular carcinoma(HCC) patients. A xenograft tumor model was used in vivo. Nine nude mice were divided into control, Auphen-treated, and dbc AMP-treated groups(n = 3 for each group). AQP3 and AQP9 protein expression after induction of xenograft tumors was detected by IHC and m RNA by RT-PCR analysis. The terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP nick end labeling assay and histological evaluation were used to detect apoptosis of tumor cells, and the concentration of serum α-fetoprotein(AFP) was measured using RTPCR and an ELISA kit.RESULTS: The volumes and weights of tumors decreased significantly in the Auphen- and dbc AMP-treated mice compared with the control mice(P 0.01). The levels of AQP3 were significantly lower in the Auphen treatment group, and levels of AQP9 were significantly higher in thedbc AMP treatment mice than in the control mice(P 0.01). The reduction of AQP3 by Auphen and increase of AQP9 by dbc AMP in nude mice suppressed tumor growth of HCC, which resulted in reduced AFP levels in serum and tissues, and apoptosis of tumor cells in the Auphen- and dbc AMP-treated mice, when compared with control mice(P 0.01). Compared with para-carcinoma tissues, AQP3 expression increased in tumor tissues whereas the expression of AQP9 decreased. By correlating clinicopathological and expression levels, we demonstrated that the expression of AQP3 and AQP9 was correlated with clinical progression of HCC and disease outcomes. CONCLUSION: AQP3 increases in HCC while AQP9 decreases. Regulation of AQP3 and AQP9 expression by Auphen and dbc AMP inhibits the development and growth of HCC.