过表达KLF17对结直肠癌细胞SW480上皮-间质转化和体外侵袭能力的影响

目的研究KLF17基因转染对人结直肠癌细胞株SW480上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和体外侵袭能力的影响.方法将带有绿色荧光蛋白的重组KLF17表达质粒PIRES-EGFP-KLF17转染至SW480细胞中,以未转染质粒的SW480细胞作为对照,转染空载质粒的S W480细胞作为阴性对照.荧光定量PCR和Western blot法检测转染前后KLF17 mRNA和蛋白表达水平.采用QPCR和Western blot检测转染前后SW480细胞EMT上皮标志物E钙黏素(E-cadherin)和间质标志物波形蛋白(Vimentin)的表达变化.用Transwell小室实验检测KLF17基因转染对SW480细胞的体外侵袭能力的影响.结果 KLF17转染48 h后S W480细胞中KLF17mRNA和蛋白表达水平(2.5087±0.0288;0.6 1 0 0±0.0 5 7 9 0)均较对照组(1.0 0 0 0±0.0 1 9 8;0.3 5 4 3±0.0 3 4 0)明显升高(均P0.01);转染KLF17基因后,SW480细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达量(2.0704±0.0620;0.5446±0.0245)较对照组均(1.0000±0.0106;0.3952±0.0430)均显著升高(均P0.01),Vimentin mRNA和蛋白的表达量(0.4622±0.0279;0.3290±0.0367)较对照组(1.0000±0.0780;0.5229±0.0496)均显著降低(均P0.01);转染KLF17基因后SW480细胞的体外侵袭能力(86.67个±10.97个)较对照组(145.30个±11.37个)及阴性对照组(135.33个±12.66个)均显著降低(均P0.01).结论 KLF17基因可能通过抑制结直肠癌细胞EMT而降低其侵袭能力.     

HNF3β对SW480细胞株增殖、侵袭和转移的影响

目的 探究HNF3β对结直肠癌SW480细胞株细胞增殖、侵袭和转移的机制。方法 体外培养结直肠癌SW480细胞株细胞,并分为对照组、HNF3β转染组和空转质粒组;构建包含HNF3β蛋白全长的peDNA3. 1质粒对HNF3β转染组进行质粒转染,空转质粒组使用空白质粒转染;使用蛋白质印记检测各组细胞HNF3β蛋白表达情况;使用克隆形成实验检测细胞生长情况;使用Transwell小室检和划痕实验法测各组细胞运动能力;使用蛋白质印记检测增殖、侵袭转移相关蛋白质及JAK/STA信号通路相关蛋白表达情况。结果 与对照组相比,HNF3β转染组HNF3β蛋白表达、E-cadherin蛋白表达显著升高(P 0. 01),细胞克隆形成率、PCNA蛋白表达、Ki67蛋白表达、单位面积侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达、Vimentin蛋白表达、JAK1蛋白表达、STAT3蛋白表达水平显著降低(P 0. 01);相比HNF3β转染组,空转质粒组HNF3β蛋白表达、E-cadherin蛋白表达显著降低(P 0. 01),细胞克隆形成率、PCNA蛋白表达、Ki67蛋白表达、单位面积侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达、Vimentin蛋白表达、JAK1蛋白表达、STAT3蛋白表达水平显著升高(P 0. 01)。结论 HNF3β是结直肠癌的抑癌基因,可能通过调控JAK/STAT3信号通路抑制SW480细胞的增殖、侵袭和转移。     

藤梨根提取物通过调控miR-192-5p/ARPP19轴影响结直肠癌细胞的增殖和凋亡

背景藤梨根提取物(rattan root extract,RRE)可抑制胃癌、肺癌等肿瘤细胞增殖,具有一定抗肿瘤作用,但其是否影响结直肠癌细胞的恶性表型还未知.miR-192-5p在结直肠癌组织中表达降低,且其低表达与肿瘤大小等临床病理特征相关,可作为结直肠癌诊治的潜在生物学标志物.StarBase生物信息学软件预测显示,环腺苷酸调节的磷酸化蛋白19(cAMP-regulated phosphoprotein 19,ARPP19)可能是miR-192-5p的靶基因.本研究假设RRE可通过调控miR-192-5p/ARPP19轴影响结直肠癌细胞增殖和凋亡.目的探讨RRE对结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法RRE干预SW480细胞后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、C-caspase-3和ARPP19蛋白水平,RT-qPCR检测细胞中miR-192-5p和ARPP19 mRNA水平.转染miR-192-5p模拟物或ARPP19小干扰RNA至SW480细胞,上述相同方法观察过表达miR-192-5p或抑制ARPP19表达对SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p和ARPP19调控关系.结果RRE可降低SW480细胞存活率及ARPP19 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),增加SW480细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白和miR-192-5p的表达(P<0.05).过表达miR-192-5p或抑制ARPP19表达均可降低SW480细胞存活率及CyclinD1蛋白表达(P<0.05),而提高SW480细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白表达(P<0.05).miR-192-5p在SW480细胞中靶向负调控ARPP19表达.抑制miR-192-5p表达可逆转RRE对SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.抑制ARPP19表达可逆转抑制miR-192-5p表达对RRE处理的SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.结论RRE可有效抑制结直肠癌SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与调miR-192-5p/ARPP19轴有关.     

miR-23a/SATB2信号通路对结直肠癌SW480细胞凋亡和转移的影响

目的探讨miR-23a/SATB2信号通路对结直肠癌SW480细胞凋亡和转移的影响。方法在结直肠癌SW480细胞中转染miR-23a抑制剂(inhibitor),采用定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测miR-23a mRNA相对表达量,CCK-8法检测细胞增殖,平板克隆法检测细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、剪切的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(C-Caspase-3)蛋白表达水平。靶基因预测软件预测SATB2可能成为miR-23a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在细胞中共转染SATB2小干扰RNA(siRNA)和miR-23a inhibitor,采用上述方法检测细胞增殖、克隆、凋亡、侵袭、迁移和MMP-2、C-Caspase-3蛋白表达水平的变化。结果转染miR-23a inhibitor可明显降低结直肠癌SW480细胞中miR-23a mRNA的相对表达量,抑制细胞增殖、克隆、侵袭、迁移和MMP-2蛋白表达,促进细胞凋亡和C-Caspase-3蛋白表达。SATB2受到miR-23a的靶向负调控作用。SATB2 siRNA可逆转下调miR-23a表达对结直肠癌SW480细胞增殖、克隆、侵袭、迁移的抑制作用和凋亡诱导作用。结论 miR-23a/SATB2信号通路具有调控结直肠癌SW480细胞凋亡和转移的潜能。     

长链非编码RNA CASC2通过靶基因miR-514b-5p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用机制

目的探讨肿瘤易感候选基因(CASC)2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480中CASC2和miR-514b-5p的表达水平;将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CASC2组(转染pcDNA-CASC2 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-CASC2组(转染si-CASC2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-514b-5p组(转染anti-miR-514b-5p)、pcDNA-CASC2+miR-NC组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-NC)、pcDNA-CASC2+miR-514b-5p组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-514b-5p)、WT-CASC2+miR-NC组(共转染WT-CASC2和miR-NC)、WT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染WT-CASC2和miR-514b-5p mimics)、MUT-CASC2+miR-NC组(共转染MUT-UCA1和miR-NC)、MUT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染MUT-CASC2和miR-514b-5p mimics)均用脂质体法转染至SW480细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果结直肠癌SW480细胞于正常结肠黏膜上皮细胞NCM460、CASC2的表达水平显著降低,miR-514b-5p的表达水平显著升高(P0.05);过表达CASC2、抑制表达miR-514b-5p均可抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭;CASC2可靶向调控miR-514b-5p的表达。miR-514b-5p过表达可部分逆转CASC2过表达对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论长链非编码RNA CASC2可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-514b-5p基因有关,将可为结直肠癌的预防和治疗提供新靶点。     

LncRNA SOX21-AS1靶向调控miR-202-5p影响结直肠癌细胞生物学行为的实验研究

背景:长链非编码RNA(lncRNA)可通过调控miRNA的表达来参与肿瘤发生、发展过程,但lncRNA在结直肠癌发展和转移中的分子机制尚未阐明。目的:探讨lncRNA SOX21-AS1通过调控微小RNA-202-5p(miR-202-5p)的表达影响结直肠癌细胞生物学过程的分子机制。方法:以SOX21-AS1小分子干扰RNA(si-SOX21-AS1)、miR-202-5p模拟物及其抑制剂转染结直肠癌HCT116、SW480细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株SOX21-AS1、miR-202-5p mRNA表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况,双萤光素酶报告实验检测SOX21-AS1与miR-202-5p的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、MMP-2、cleaved caspase-3蛋白表达。结果:结直肠癌细胞中SOX21-AS1 mRNA表达显著高于人正常结肠黏膜上皮细胞(P 0. 05),miR-202-5p mRNA表达显著降低(P 0. 05)。沉默SOX21-AS1或上调miR-202-5p表达可显著抑制HCT116、SW480细胞增殖、迁移和侵袭,细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),并可抑制cyclin D1、MMP-2蛋白表达(P 0. 05),促进cleaved caspase-3蛋白表达(P 0. 05)。SOX21-AS1可靶向结合miR-202-5p,并可负向调控miR-202-5p的表达和活性;抑制miR-202-5p表达可逆转沉默SOX21-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:沉默SOX21-AS1表达可通过上调miR-202-5p的表达从而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞凋亡。     

下调VEGF基因表达对人大肠癌细胞株SW480的增殖抑制作用

目的利用RNA干扰技术特异性抑制人大肠癌细胞株SW480的VEGF基因表达,并进行大肠癌的基因治疗。方法体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段、转录针对VEGF mRNA的siRNA、利用脂质体转染法导入SW480细胞内,MTT染色法观察转染后的SW480细胞增殖抑制率,ELISA法检测蛋白表达水平。RT-PCR检测转染后VEGF mRNA表达水平的变化。结果设计的两个靶位点siRNA能有效抑制SW480细胞生长,VEGF mRNAR的表达受到有效抑制,而阴性对照的错义序列组siRNA细胞生长良好。结论体外合成的VEGF siRNA可有效抑制SW480细胞增殖和VEGF mRNA蛋白表达水平。     

miR-613靶向KLF4对结肠癌增殖及迁移的影响及其分子机制

[目的]确定miR-613在结肠癌组织和结肠癌细胞系中的表达以及miR-613靶向KrüPPel样因子4(KLF4)对人结肠癌细胞增殖、迁移的影响。[方法]采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测35例结肠癌组织及其癌旁组织中miR-613和KLF4的表达水平,并进行相关性分析。并采用qRT-PCR检测miR-613在结肠癌细胞系(SW480,SW620,HCT116,DLD1,LOVO,NCM460,RKO)中的表达。在HCT116和SW480中分别转染miR-613模拟物和抑制剂。CCK8及EDU实验用于检测转染前后细胞增殖能力的改变。Transwell实验检测细胞迁移能力的改变。使用双荧光素酶报告基因测量miR-613与KLF4的相互作用关系。功能回复实验用于确定miR-613靶向KLF4对结肠癌细胞增殖、迁移的影响。[结果]miR-613 mRNA在结肠癌组织中表达明显高于其癌旁组织(P0.05);KLF4在结肠癌组织中表达明显低于其癌旁组织(P0.05);miR-613与KLF4表达呈负相关(R~2=0.74,P0.001)。在结肠癌细胞系中,HCT116中miR-613的表达水平最低,SW480中miR-613的表达水平最高。在HCT116中,miR-613的表达上调后,细胞增殖活性显著于阴性对照组(P0.05);细胞迁移能力明显升高(P0.05);KLF4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。SW480细胞中,抑制miR-613表达后,增殖活性明显低于阴性对照组(P0.05);细胞迁移能力明显降低(P0.05);KLF4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。在HCT116细胞中,miR-613模拟物与KLF4 3'UTR野生型质粒共转染,与阴性对照组比较,荧光素酶活性显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。miR-613抑制剂和si-KLF4共转染至结肠癌细胞后,si-KLF4可挽救由于miR-613低表达导致的细胞增殖、迁移能力的降低。[结论]miR-613在结肠癌组织中高表达;miR-613通过靶向KLF4基因调控结肠癌细胞的增殖和迁移。     

桩蛋白表达下调对结直肠癌细胞SW480侵袭力的影响

目的:探讨下调桩蛋白(paxillin)的表达对结直肠癌细胞SW480体外侵袭的影响.方法:筛选常见结直肠癌细胞株中paxillin 的表达,发现SW480中表达最多.构建干扰paxillin表达的特异性短发夹RNA(shRNA),转染结直肠癌细胞SW480.将SW480细胞分为3组:正常SW480组、阴性对照组及pa...     

RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响

目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞NucleosteminmRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-timePCR和Westernblot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降;NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P<0.05;1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P<0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P>0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.     

miR-128-3p靶向xCT基因在结直肠癌中的分子机制及其与肠癌患者临床病理特征的相关性

背景结直肠癌(colorectal carcinoma, CRC)是临床上最为常见的消化系统恶性肿瘤,但结直肠癌细胞增殖和迁移的分子机制并为完全阐明.胱氨酸/谷氨酸反转运体X(cystine/glutamate antiporter, x CT)被证实在多种肿瘤中高表达并与细胞的铁死亡有关.目的探讨mi R-128-3p靶向x CT基因抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭的分子机制及其与患者临床病理特征关系.方法癌症基因图谱(the cancer genome atlas, TCGA)、Oncomine数据库中比较胱氨酸/x CT基因在人结直肠癌及多种实体肿瘤中的表达.肿瘤免疫(tumor immune estimationresource, TIMER)数据库中分析x CT表达水平与淋巴细胞浸润程度关系.基因表达综合(gene expression omnibus, GEO)数据库下载结直肠癌患者癌组织vs癌旁组织差异表达mi RNA数据集GSE18392,筛序癌组织与癌旁组织差异表达mi RNA,筛选条件为Log2FC1, adj P0.05. micro RNA靶基因在线预测算法(Targetscan, mi RDB和Star Base)预测x CT上游靶mi RNA.GSE18392差异表达mi RNA和预测靶基因取交集得到mi R-128-3p.并采用双荧光素酶报告实验验证mi R-128-3p与x CT靶向调控关系.实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chainreaction,RT-PCR)检测人正常肠上皮细胞及人结直肠癌细胞系、38例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中x CT及mi R-128-3p表达水平.溴化噻唑蓝四氮唑[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)]实验和划痕实验观察转染外源性mi R-128-3p-mimic后人结癌细胞(SW480)增殖和迁移能力有无改变.结果结直肠癌组织x CT表达水平显著高于癌旁正常组织(P 0.05).筛选并预测mi R-128-3p为x CT上游靶向调控基因.荧光素酶报告基因显示, mi R-128-3p可靶向结合x CT基因3’UTR区域. x CT在人结直肠癌细胞系(HT-29,SW480,Lo Vo及SW620)中的表达水平显著高于正常肠上皮细胞(NCM460),(P0.05),而mi R-128-3p在人结直肠癌细胞系中的表达水平显著低于正常肠上皮细胞异(P0.05).转染外源性mi R-128-3p mimic可显著下调SW480细胞中x CT表达水平,并抑制SW480细胞增殖和迁移能力. x CT在38例结直肠癌患者癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P0.05),而mi R-128-3p在癌组织中相对表达水平显著低于癌旁组织(P0.05).癌组织中mi R-128-3p与x CT表达负相关(rpearson=-0.43,P 0.05).免疫组化显示x CT阳性表达于细胞膜,呈棕黄色颗粒,在癌组织中阳性率63.2%. x CT阳性表达与肿瘤分化(P0.05)和脉管浸润(P0.05)有关. x CT表达水平与结肠癌CD8+T细胞,中性粒细胞,树突状细胞浸润有关(P0.05),与直肠癌CD8+T细胞和中性粒细胞浸润有关(P0.05),而于其他淋巴细胞浸润水平无关(P0.05).结论x C T在结直肠癌中表达上调,m i R-128-3p可通过与x C T基因3’ U T R结合抑制肠癌细胞的增殖和迁移,mi R-128-3p/x CT通路有望成为肠癌靶向治疗新的潜在靶点.     

野生型p53基因对肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究人野生型p53基因对肠癌细胞系SW480增殖及凋亡的影响。方法阳离子脂质体介导转染人野生型p53基因至SW480细胞系,利用MTT检测该基因对SW480细胞增殖的影响;利用Western blot检测CyclinD1及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果与对照组比较,转染人野生型p53基因后的SW480细胞的增殖能力受到抑制;Cy-clinD1蛋白水平下调,Bcl-2、Bax表达呈负相关趋势。结论野生型p53基因在一定程度上可诱导肿瘤细胞凋亡。     

桂皮醛通过TGF-beta信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移研究

目的研究桂皮醛通过转化生长因子-β(TGF-β)信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移的机制。方法用不同浓度桂皮醛处理人结肠癌SW480细胞,观察SW480细胞增殖活性、细胞凋亡、侵袭、转移能力及凋亡、上皮间质转化(EMT)、TGF-β/Smad3信号途径关键蛋白表达情况;用10 ng/m L的TGF-β1处理诱导SW480细胞EMT,并用80 mg/L的桂皮醇进行干预,观察SW480细胞中EMT、TGF-β/Smad3信号途径关键蛋白表达。结果桂皮醛处理后SW480细胞Bcl-2/Bax比率、细胞侵袭率、划痕愈合率、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TGF-β、Smad3、Snail蛋白表达降低,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达升高,差异有统计学意义(P 0. 05);桂皮醛干预后能够缓解TGF-β1处理后诱导的Vimentin、N-cadherin、MMP-9、Smad3、Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论桂皮醛可能通过抑制人结肠癌细胞系SW480中TGF-beta/Smad3信号途径来抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制EMT,降低其侵袭转移能力。     

敲减SATB1抑制结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的研究慢病毒介导敲减核基质结合区结合蛋白质(SATB)1对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法结肠癌SW480细胞感染阴性对照慢病毒和SATB1 shRNA重组慢病毒设置为SW480-sh-NC、SW480-sh-SATB1组,将不进行慢病毒感染的SW480细胞设置为SW480-WT组。Realtime PCR和Western印迹检测敲减效果,噻唑蓝(MTT)方法检测增殖和黏附变化,平板克隆实验检测克隆能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕愈合实验检测迁徙运动能力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western印迹检测钙黏附蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和侵袭迁移蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及凋亡蛋白SW480-sh-SATB1组剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9表达变化。结果与SW480-sh-NC组比较,SW480-sh-SATB组细胞中SATB1 mRNA和蛋白水平均降低,细胞增殖和克隆能力均下降,细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高,细胞黏附和迁徙运动能力下降,细胞侵袭迁移和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,细胞中上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物Vimentin表达水平降低。结论慢病毒介导SATB1敲减抑制结肠癌细胞增殖迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

Syndecan-1对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景:Syndecan-1是表达于上皮细胞表面的一种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖,在多种肿瘤细胞中的表达下降,与肿瘤的多种生物学行为密切相关,但其在细胞水平上对结直肠癌发展的作用目前尚无深入的研究。目的:评估Syndecan-1对人结肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨可能的分子机制。方法:分别将Syndecan-1高表达质粒和Syndecan-1 siRNA转染人结肠癌细胞株SW620和SW480,分别以转染空载质粒或无关序列作为阴性对照。采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell细胞迁移实验和Matrigel细胞侵袭实验分别检测细胞迁移、侵袭能力,蛋白质印迹法检测上皮细胞间质转化主要分子标记物E-cadherin的蛋白表达。结果:与阴性对照组相比,转染Syndecan-1高表达质粒的SW620细胞生长速度、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显降低,同时E-cadherin表达升高;转染Syndecan-1 siRNA的SW480细胞生长速度、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显升高,同时E-cadherin表达降低。结论:Syndecan-1能抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与上皮细胞间质转化有关。     

IL-29通过调控lncRNA DLEU1/miR-149-5p通路影响结肠癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨白介素-29(IL-29)对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 IL-29诱导SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测lncRNA DLEU1和miR-149-5p表达,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶实验验证lncRNA DLEU1和miR-149-5p靶向关系。转染DLEU1小干扰RNA或miR-149-5p模拟物至SW480细胞,上述相同方法观察抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果 IL-29、抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p均可降低SW480细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达(P 0. 05),提高细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达(P 0. 05)。IL-29可降低SW480细胞DLEU1表达(P 0. 05),促进miR-149-5p表达(P 0. 05)。DLEU1靶向负调控miR-149-5p表达。过表达DLEU1可逆转IL-29对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结论 IL-29可能通过调控DLEU1/miR-149-5p通路抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

miR-567靶向TRPM8调控结直肠癌细胞增殖凋亡的分子机制

背景mi RNA在癌症中的作用日益成为研究的热点, miR-567在癌症中的研究相对较少,其在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)中的功能作用尚缺乏参考.目的研究mi R-567对CRC细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法运用qRT-PCR法检测CRC细胞SW480、SW1116、HT29和正常结直黏膜上皮细胞NCM460中miR-567、瞬时受体电位8(transient receptor potential melastatin8,TRPM8)的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、m i R-567组(转染m i R-567m i m i c s)、s i-N C组(转染si-NC)、si-TRPM8组(转染si-TRPM8)、mi R-567+pcDNA组(共转染miR-567和pcDNA)、miR-567+pcDNA-TRPM8组(共转染miR-567和pcDNATRPM8),用脂质体法转染至SW480细胞.MTT法检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡; Western blot检测细胞中TRPM8、CyclinD1、p21、p23、Bcl-2、Bax、Cleaved-capase-3的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性.结果与正常结直黏膜上皮细胞NCM460相比, CRC细胞中miR-567的表达明显降低,TRPM8的表达明显升高;过表达miR-567或抑制TRPM8均可抑制SW480细胞的增殖,促进其凋亡; miR-567可抑制野生型TRPM8细胞的荧光活性,并负向调控TRPM8的表达;过表达TRPM8逆转了过表达miR-567对SW480细胞的增殖抑制和凋亡促进作用.结论mi R-567可抑制CRC细胞的增殖,促进凋亡,其机制与靶向TRPM8有关,将可为CRC的预防和治疗提供新方向.     

CTHRC1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的观察胶原三股螺旋重复蛋白(CTHRC)1对结直肠癌HT29细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中CTHRC1的表达情况。采用电穿孔转染法,将pc DNA3.1-CTHRC1和CTHRC1 si RNA转染HT29细胞中,通过克隆形成实验检测CTHRC1对HT29细胞增殖的影响;通过伤口愈合实验和Boyden小室检测CTHRC1对HT29细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和免疫组织化学检测显示,CTHRC1在结直肠癌组织中的表达显著高于正常对照组织。增殖、迁移和侵袭实验结果显示,对照组、转染CTHRC1和转染CTHRC1 si RNA的结直肠癌HT29细胞克隆形成数分别为(147.34±15.86)、(234.17±27.86)和(66.03±8.95);伤口宽度百分比分别为(1.00±0.00)、(0.37±0.12)和(1.48±0.35);发生侵袭的细胞数分别为(201.24±33.54)、(415.36±45.63)和(96.13±15.46);转染CTHRC1可显著促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;而转染si-CTHRC1可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 CTHRC1可明显增加HT29细胞增殖、迁移和侵袭能力,这可能是CTHRC1参与结直肠癌发生发展的机制。     

抑制干扰素诱导蛋白p204表达促进大鼠血管外膜成纤维细胞生长与迁移

目的观察干扰素诱导蛋白p204表达抑制后对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)凋亡、增殖与迁移的影响及其部分机制。方法应用Ifi204小干扰RNA(si RNA)转染VAF使Ifi204基因沉默(Ifi204-si RNA组),以非特异性si RNA转染作为其转染阴性对照组(Con-si RNA组)和未经处理的VAF作为未干预阴性对照组(Neg组)。用MTT法检测VAF细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,应用实时荧光q RT-PCR和Western blot分别检测p204、p53及p21的m RNA和蛋白表达。结果与Con-si RNA组和(或)Neg组相比,Ifi204-si RNA组的p204、p53及p21的m RNA和蛋白表达减少(P0.05),细胞凋亡率下降(P0.05),细胞增殖及迁移速度提高(P0.05)。结论抑制p204表达可减少大鼠VAF细胞凋亡,促进其增殖与迁移,其机制可能部分与抑制p53及p21表达有关。     

干预膜联蛋白A4表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的探讨干预膜联蛋白(ANX) A4表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、黏附、剥脱和侵袭的影响及机制。方法采用RT-PCR和Western印迹检测结直肠癌HCT116细胞和正常结肠上皮NCM460细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达情况。将HCT116细胞分为Control组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和ANXA4组(转染si RNA-ANXA4),脂质体lipofectamineTM2000转染HCT116细胞,RT-PCR检测各组细胞中ANXA4 m RNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HCT116细胞增殖能力,黏附实验、剥脱实验和侵袭实验分别检测HCT116细胞的黏附能力、剥脱能力和侵袭能力,Western印迹检测ANXA4、埃兹蛋白(Ezrin)、骨桥蛋白(OPN)和细胞表面黏附分子(CD44v6)蛋白的表达。结果 HCT116细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达水平均显著低于NCM460细胞;与Control组相比,干扰ANXA4表达后,HCT116细胞的增殖能力受到抑制,同时黏附能力、剥脱能力和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P0. 05); ANXA4组细胞中ANXA4 m RNA表达水平及ANXA4、Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达水平较Control组均显著减弱,差异有统计学意义(P0. 05);而NC组与Control组各指标差异无统计学意义(P0. 05)。结论干预ANXA4表达能够抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖、黏附、剥脱和侵袭能力,其分子机制可能与下调Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达有关。