miR-326靶向PHB2对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探讨微小RNA-326(miR-326)靶向PHB2对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及其分子机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,共分为对照组、高糖组、高糖+anti-miR-NC组、高糖+anti-miR-326组、高糖+pcDNA组、高糖+pcDNA-PHB2组、高糖+anti-miR-326+si-NC组、高糖+anti-miR-326+si-PHB2组。采用qRT-PCR与Western印迹分别检测miR-326、PHB2的表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-326与PHB2的靶向作用。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞中miR-326表达水平显著升高(P<0.05),PHB2 mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.05),对照组比较,高糖组IL-6及TNF-α水平均显著升高(P<0.05);与高糖+anti-miR-NC组比较,高糖+anti-miR-326组IL-6、TNF-α水平均显著降低。与对照组比较,高糖组凋亡率及Bax水平均显著升高(P<0.05),而Bcl-2水平显著降低(P<0.05);与高糖+anti-miR-NC组比较,高糖+anti-miR-326组凋亡率及Bax水平均显著降低(P<0.05),而Bcl-2水平显著升高(P<0.05),与高糖+pcDNA组相比,高糖+pcDNA-PHB2组细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),IL-6和TNF-α水平、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05),与高糖+anti-miR-326+si-NC组相比,高糖+anti-miR-326+si-PHB2组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),IL-6和TNF-α水平、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论miR-326靶向干扰PHB2的表达从而促进高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡及炎症反应的发生。     

远志皂苷调控miR-325-5p/GADD45B对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响及其机制

目的探讨远志皂苷(TEN)对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞MPC5损伤的影响及分子作用机制。方法将MPC5细胞分为正常对照(NG)组、高糖刺激(HG)组、TEN低中高3个浓度实验组,NG组用5 mmol/L D-葡萄糖处理,HG组用30 mmol/L D-葡萄糖处理,实验组用低中高(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)TEN进行处理,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测MPC5细胞中miR-325-3p和GADD45BmRNA的表达,Western印迹检测GADD45B、podocin和nephrin蛋白表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-325-3p与GADD45B的关系。结果TEN可使高糖诱导的小鼠足细胞MPC5中miR-325-3p、podocin、nephrin和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2含量显著升高(P<0.05),GADD45B、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量及细胞凋亡率显著降低(P<0.05),抑制高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤和凋亡;miR-325-3p靶向负调控GADD45B的表达;过表达miR-325-3p可抑制高糖诱导的MPC5损伤,并抑制细胞凋亡;抑制miR-325-3p表达逆转了TEN对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的作用。结论远志皂苷通过调控miR-325-3p/GADD45B减轻高糖诱导的小鼠肾脏足细胞MPC5的损伤,抑制细胞凋亡。     

miR-127-5p靶向IRAK4对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的探究miR-127-5p靶向白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响方法首先分为对照组和感染组,感染组用肺炎链球菌感染A549细胞,感染组细胞分别转染miR-127-5p mimic、si-IRAK4及阴性对照质粒,qRT-PCR检测A549细胞中miR-127-5p的表达水平,western blot检测IRAK4、Bax、Bcl-2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平,双荧光素酶报告基因检测miR-127-5p与IRAK4的靶向关系。结果与对照组比较,肺炎链球菌感染后A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著降低,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高(P<0.05);与感染+miR-NC组比较,过表达miR-127-5p后,A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著升高,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6显著降低;与感染+si-NC组比较,抑制IRAK4表达后,A549细胞中细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著降低,Bcl-2、IL-10水平显著升高;双荧光素酶报告基因及Western blot结果显示,miR-127-5p可通过与IRAK4特异性结合负向调控IRAK4的表达;与感染+miR-127-5p+pcDNA组比较,感染+miR-127-5p+pcDNA-IRAK4组A549细胞中凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高,Bcl-2、IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论miR-127-5p靶向IRAK4调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子IL-10、IL-6的表达。     

荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响

目的探讨荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及其对LncRNA FENDRR/miR-146b-3p分子轴的调控作用。方法采用高糖诱导人晶状体上皮细胞建立细胞损伤模型(Model组),分别加入不同剂量的荞麦花叶芦丁处理细胞;实验分组:Con组、Model+si-NC组、Model+si-FENDRR组、Model+miR-NC组、Model+miR-146b-3p组、Model+荞麦花叶芦丁+anti-miR-NC组、Model+荞麦花叶芦丁+anti-miR-146b-3p组;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;根据试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;采用qRT-PCR法检测FENDRR与miR-146b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测FENDRR与miR-146b-3p的靶向关系;采用Western印迹检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果与Con组比较,Model组细胞凋亡率、Bax、MDA、FENDRR表达水平升高(P<0.05),miR-146b-3p、Bcl-2水平与SOD的活性降低(P<0.05);与Model组比较,荞麦花叶芦丁不同剂量组细胞凋亡率、Bax、MDA、FENDRR水平降低(P<0.05),miR-146b-3p、Bcl-2、SOD水平升高(P<0.05);与Model组、Model+si-NC组比较,Model+si-FENDRR组细胞凋亡率与Bax、MDA的水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平与SOD的活性及miR-146b-3p表达水平升高(P<0.05);FENDRR可靶向调控miR-146b-3p;与Model组、Model+miR-NC组比较,Model+miR-146b-3p组细胞凋亡率、Bax、MDA水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平与SOD的活性升高(P<0.05),而抑制miR-146b-3p可逆转荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡及氧化应激的作用。结论荞麦花叶芦丁可通过下调FENDRR的表达而上调miR-146b-3p的表达从而抑制细胞凋亡及氧化应激进而减轻高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤。     

IL-29通过调控lncRNA DLEU1/miR-149-5p通路影响结肠癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨白介素-29(IL-29)对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 IL-29诱导SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测lncRNA DLEU1和miR-149-5p表达,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶实验验证lncRNA DLEU1和miR-149-5p靶向关系。转染DLEU1小干扰RNA或miR-149-5p模拟物至SW480细胞,上述相同方法观察抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果 IL-29、抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p均可降低SW480细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达(P 0. 05),提高细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达(P 0. 05)。IL-29可降低SW480细胞DLEU1表达(P 0. 05),促进miR-149-5p表达(P 0. 05)。DLEU1靶向负调控miR-149-5p表达。过表达DLEU1可逆转IL-29对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结论 IL-29可能通过调控DLEU1/miR-149-5p通路抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

miR-499a-5p通过靶向APC减轻氧化应激对心肌细胞的损伤

目的研究miR-499a-5p对过氧化氢(H_2O_2)诱导的心肌细胞H9c2增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度H_2O_2(100、200、400、800μmol/L)处理6 h的H9c2细胞的存活率,筛选400μmol/L H_2O_2处理的H9c2细胞作为模型组。将模型组细胞分为miR-NC组、miR-499a-5p组、si-NC组、si-APC组、miR-499a-5p+pcDNA组、miR-499a-5p+pcDNA-APC组,用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞的存活率、凋亡率、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及增殖凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(P21)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关的X基因(Bax)的表达。结果 H_2O_2(100、200、400、800μmol/L)呈浓度依赖性抑制H9c2细胞的存活,最适浓度为400μmol/L。模型组细胞中miR-499a-5p表达显著降低,APC表达显著升高;过表达miR-499a-5p、抑制APC均可明显减轻H_2O_2诱导的H9c2细胞的增殖抑制、凋亡促进和氧化应激作用,并且miR-499a-5p还可靶向抑制APC。过表达APC逆转了miR-499a-5p对H_2O_2诱导的心肌细胞损伤。结论 miR-499a-5p可调控H_2O_2诱导的心肌细胞增殖、凋亡和氧化应激,其机制与靶向抑制APC有关,将可为氧化应激引起的心肌细胞损伤的治疗提供新靶点。     

miR-376b-3p通过靶向FGF21加重缺氧复氧心肌细胞的损伤

目的 探讨miR-376b-3p对缺氧复氧(H/R)心肌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 培养心肌细胞H9c2,缺氧复氧法体外模拟H/R细胞损伤,建立心肌细胞损伤模型。用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附(ELISA)检测正常对照组、H/R组、anti-miR-NC组、anti-miR-376b-3p组、anti-miR-376b-3p+si-NC组、anti-miR-376b-3p+si-成纤维细胞生长因子21(FGF21)组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)情况。双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果 成功建立缺氧复氧损伤的细胞模型;模型组细胞中miR-376b-3p表达显著升高,FGF21表达显著降低,并且抑制miR-376b-3p可以减轻损伤细胞的凋亡和TNF-α、IL-6、IL-17的含量,以及上调Bcl-2,下调Bax。此外,miR-376b-3p还可靶向FGF21 mRNA。抑制FGF21后,抑制miR-376b-3p对缺氧复氧损伤的H9c2细胞的保护作用被减弱。结论 miR-376b-3p可促进缺氧复氧心肌细胞的凋亡和炎性反应,其机制与靶向FGF21 mRNA相关。     

川芎嗪抑制大鼠脑缺血再灌注损伤的机制

目的探讨川芎嗪(TMP)抑制脑缺血再灌注损伤(CIRI)的分子机制。方法选择清洁级健康成年雄性SD大鼠,采用改良的Zea Longa栓线法构建大脑中动脉梗塞(MCAO)模型,并将大鼠随机分为三组(n=20):假手术组、模型组、TMP治疗组。假手术组大鼠不插入线栓,其余操作均同模型组;TMP治疗组大鼠在被拔出线栓再灌注时,腹腔注射TMP 20 mg/kg。再灌注24 h后,各组大鼠进行神经功能评分,然后麻醉处死,取材检测。干湿称重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基氮化四氮唑(TTC)染色法检测大鼠脑梗死面积,HE染色观察脑组织形态;荧光定量PCR检测大鼠梗死侧脑皮层中miR-199a-5p、Bax、Bcl-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6 mRNA的表达水平;酶联免疫法检测大鼠血清中炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;免疫组化法观察大鼠梗死侧脑皮质核转录因子(NF)-κB p65及磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)的表达。结果 TMP治疗可显著改善神经缺陷评分(P<0.05),降低脑组织含水量(P<0.05),减少梗死体积(P<0.01),减轻脑组织破坏。模型组miR-199a-5p、Bax、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达明显升高(P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。而TMP治疗可显著降低miR-199a-5p、Bax、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平(P<0.05),增加Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)。与模型组比较,TMP治疗组大鼠脑皮质和血清中TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子含量均显著降低(P<0.05)。IHC结果显示,TMP治疗组中NF-κB p-p65阳性细胞数明显减少(P<0.05)。结论 TMP可减轻CIRI,其机制可能为抑制miR-199a-5p的表达,减少凋亡,降低炎症反应,且可降低NF-κB的活化。     

外泌体介导miR-199a-3p靶向ARPC2基因对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨外泌体介导miR-199a-3p对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法提取HK-2、786-O细胞培养液中的外泌体,电镜下观察外泌体形态;将miR-NC、miR-199a-3p转染至786-O细胞后用去除外泌体的DMEM培养液培养48 h,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测外泌体中miR-199a-3p表达水平,Western印迹检测外泌体表面标志物CD63、CD81。将miR-NC、miR-199a-3p转染至786-O细胞中后加入外泌体进行培养,记为EXO-miR-NC组、EXO-miR-199a-3p组;将miR-199a-3p分别与pcDNA-NC、pcDNA-ARPC2共转染至786-O细胞中后加入外泌体进行培养,记为EXO-miR-199a-3p+pcDNA-NC组、EXO-miR-199a-3p+pcDNA-ARPC2组;将miR-NC、anti-miR-NC、miR-199a-3p、anti-miR-199a-3p、si-ARPC2、si-NC、分别转染至786-O细胞中,分别记为miR-NC组、anti-miR-NC组、miR-199a-3p组、anti-miR-199a-3p组、si-ARPC2组、si-NC组。qRT-PCR检测786-O细胞中miR-199a-3p表达水平;Western印迹检测786-O细胞中肌动蛋白相关蛋白2/3复合亚基(ARPC)2蛋白表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;荧光素酶报告实验检测miR-199a-3p和ARPC2的靶向关系。结果HK-2和786-O细胞均有外泌体,miR-199a-3p在786-O细胞外泌体中低表达;过表达miR-199a-3p后786-O细胞外泌体中miR-199a-3p表达水平显著升高(P<0.05)。外泌体介导miR-199a-3p的肾癌细胞786-O细胞迁移数、存活率、侵袭数显著降低(P<0.05);敲减ARPC2肾癌细胞786-O细胞迁移数、存活率、侵袭数显著降低(P<0.05)。miR-199a-3p靶向调控ARPC2,高表达ARPC2部分逆转了外泌体介导的miR-199a-3p对786-O增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论外泌体介导的miR-199a-3p可抑制肾癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与ARPC2有关。     

miR-138-5p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞间充质转化的影响

目的研究miR-138-5p对高糖诱导的人肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)的影响。方法将HK-2细胞分为正常组(NG,5mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(HG,30mmol/L D-葡萄糖)、HG+miR-138-5p抑制剂转染组及HG+抑制剂对照转染组。RT-PCR检测高糖处理对miR-138-5p表达的影响;Western blot检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、同源盒蛋白A13(HOXA13)、骨形成蛋白7(BMP-7)、转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad7等的表达;荧光素酶活性实验检测miR-138-5p与HOXA13的靶向关系。结果高糖刺激后,miR-138-5p表达升高约1.5倍(P0.05),α-SMA表达升高1.8倍,而E-cadherin表达下降;高糖促进TGF-β1的表达,抑制HOXA13、BMP-7和Smad7的表达(P0.05)。miR-138-5p抑制剂转染组α-SMA和E-cadherin的表达均接近NG组,且miR-138-5p抑制剂转染组TGF-β1表达下降约1.1倍,同时HOXA13、BMP-7和Smad7表达升高(P0.05)。结论抑制MiR-138-5p表达可通过靶向调节HOXA13的表达,提高BMP-7和Smad7水平,抑制TGF-β1信号通路,进而抑制高糖诱导的HK-2细胞EMT的发生。     

miR-181a-5p靶向PIAS1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)引起的急性炎症对人们健康的危害性极大,严重时会危及生命.其发病机制复杂,尚未完全清楚,研究发现miRNA参与了AP的发病过程.研究发现miR-181a-5p可抑制癌细胞迁移、侵袭和血管生成; miR-181a-5p还能抑制胃癌细胞增殖、侵袭,转移和上皮间充质转化.抑制miR-181a-5p表达可通过负向靶向INPP5A抑制细胞增殖和侵袭,增强宫颈癌细胞凋亡. miR-181a可抑制胰腺癌细胞系的生长、减少迁移,增加凋亡.但miR-181a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-181a-5p对AP腺泡细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法用100nmol/L的雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J和MPC-83构建AP模型,设置Con组、Caerulein组、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-181a-5p组(转染miR-181a-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Caerulein+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p后进行Caerulein处)、Caerulein+pcDNA组(转染pcDNA后进行Caerulein处理)、Caerulein+pcDNA-PIAS1组(转染pcDNA-PIAS1后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-NC组(anti-miR-181a-5p和si-NC共转染后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+siPIAS1组(anti-miR-181a-5p和si-PIAS1共转染后进行Caerulein处理),用脂质体法转染至AR42J和MPC-83细胞.酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达;qRT-PCR检测AR42J和MPC-83细胞中miR-181a-5p、PIAS1mRNA的表达水平; Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞后, TNF-α和IL-6的表达显著升高; miR-181a-5p的表达水平显著升高;PIAS1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低. miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达抑制TNF-α和IL-6的表达,抑制细胞凋亡. miR-181a-5p靶向负调控PIAS1;抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用.结论抑制miR-181a-5p表达可以抑制雨蛙肽诱导的AP腺泡细胞损伤,其机制可能与靶向调控PIAS1有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

MiR-193a-3p通过调控S100A4表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤影响

目的 探讨miR-193a-3p对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其作用机制。方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞株(EVC-304),使用oxLDL处理EVC-304细胞。采用qRT-PCR与Western blot分别检测miR-193a-3p、S100钙结合蛋白A4(S100A4)的表达水平。分别将miR-NC、miR-193a-3p mimics、si-NC、si-S100A4、miR-193a-3p mimics与pcDNA、miR-193a-3p mimics与pcDNA-S100A4转染至oxLDL诱导的EVC-304细胞。采用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,检测GSH-Px活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-193a-3p与S100A4的靶向关系;Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量。结果 OxLDL处理后miR-193a-3p的表达水平降低(P0.05),S100A4的表达水平升高(P0.05),MDA的含量升高(P0.05),SOD、GSH-Px的活性降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),Bax蛋白水平升高(P0.05);转染miR-193a-3p mimics后可降低MDA含量、细胞凋亡率及Bax蛋白水平(P0.05),提高SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平(P0.05),而转染si-S100A4与其作用相似;双荧光素酶报告实验证实miR-193a-3p能够靶向结合S100A4;S100A4过表达能够明显减弱miR-193a-3p过表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤的作用。结论 MiR-193a-3p可能通过靶向调控S100A4表达而减轻oxLDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤,并抑制细胞凋亡。     

miR-24-3p靶向HAP1基因对STZ诱导胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨微小RNA-24-3p(miR-24-3p)靶向亨廷顿蛋白相关蛋白(HAP)1基因表达对链脲佐菌(STZ)诱导胰岛β细胞凋亡的影响。方法培养小鼠胰岛β细胞NIT,分别将anti-miR-NC、anti-miR-24-3p、pcDNA、pcDNA-HAP1转染入NIT细胞,加入STZ诱导细胞;不做任何处理为Con组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24-3p及HAP1 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹(Western印迹)实验检测HAP1及B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验验证miR-24-3p的靶基因。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 STZ处理后胰岛β细胞中miR-24-3p相对表达量明显高于Con组(P0.05),而HAP1 mRNA及蛋白表达均明显降低(P0.05);STZ可增加胰岛β细胞凋亡率,抑制miR-24-3p表达可降低胰岛β细胞凋亡率,还可上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3表达;HAP1过表达与抑制miR-24-3p表达均可抑制STZ诱导的胰岛β细胞凋亡;HAP1是miR-24-3p的靶基因,miR-24-3p可负向调节HAP1表达;抑制HAP1表达可促进胰岛β细胞凋亡。结论 miR-24-3p表达可通过抑制靶基因HAP1表达进而促进STZ诱导的胰岛β细胞凋亡。     

miR-217靶向SPRY1调控血管内皮细胞增殖和凋亡的分子机制

目的探讨miR-217对血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法运用25μmol/ml高糖建立血管内皮细胞EAhy926损伤;运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-217、软脂酰化磷蛋白(SPRY1)的表达;将HG+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、HG+anti-miR-217组(转染anti-miR-217)、HG+pcDNA组(转染pcDNA)、HG+pcDNA-SPRY1组(转染pcDNA-SPRY1)、HG+anti-miR-217+si-con组(共转染anti-miR-217和si-con)、HG+anti-miR-217+si-SPRY1组(共转染anti-miR-217和si-SPRY1)用脂质体法转染至EAhy926细胞,再用高糖处理;Western印迹检测细胞中SPRY1、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测miR-217与SPRY1的靶向结合关系。结果成功建立高糖诱导的血管内皮细胞EAhy926;与NG组相比,HG组细胞中miR-217表达明显上调,SPRY1表达明显下调(P 0.05);抑制miR-217、过表达SPRY1均可促进高糖诱导的EAhy926细胞增殖,抑制凋亡,上调p21、Bcl-2,下调Bax;miR-217可抑制野生型SPRY1细胞的荧光活性,负向调控SPRY1表达;敲减SPRY1可逆转抑制miR-217对高糖诱导的EAhy926细胞增殖、凋亡的调控及相关蛋白表达的影响。结论 miR-217可调控血管内皮细胞的增殖、凋亡,其机制可能与靶向SPRY1有关,可为高糖引起的心血管疾病的治疗提供新方向。     

miR-424靶向IGF1R调控高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞凋亡和氧化应激的机制

目的研究miR-424是否通过靶向胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)影响高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡和氧化应激。方法随机将大鼠肾小球系膜细胞(HBZY)-1分为正常糖浓度组、高糖组和高糖+转染组。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-424和IGF1R mRNA表达,Western印迹检测细胞中IGF1R、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,比色法检测细胞上清培养液中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,酶标法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424对IGF1R转录活性的影响。结果与正常糖浓度组比较,高糖组人肾小球系膜细胞中miR-424及Bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05),IGF1R mRNA、蛋白及Bax蛋白表达明显升高,细胞凋亡率明显升高(P0.05),细胞中LDH、MDA活性明显增强(P0.05),SOD活性明显降低(P0.05);上调miR-424和沉默IGF1R后,均明显抑制了高糖诱导的细胞凋亡和氧化应激水平;双荧光素酶报告基因实验证实miR-424靶向负调控IGF1R的表达;过表达IGF1R逆转上调miR-424对高糖诱导的细胞凋亡和氧化应激的抑制作用。结论 miR-424靶向负调控IGF1R的表达,抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡和氧化应激。     

TIMP1基因对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞HEPApiC凋亡的影响及机制研究

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)基因对肺炎链球菌诱导的人肺泡上皮细胞HEPApiC凋亡的影响及其可能的机制。方法体外培养人肺泡上皮细胞HEPApiC,采用肺炎链球菌感染HEPApiC细胞,实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blot检测细胞中TIMP1的表达水平。将HEPApiC细胞分为4组,空白对照组(未做任何处理的细胞)、感染组(肺炎链球菌感染的细胞)、阴性对照组(转染siRNA control+肺炎链球菌感染的细胞)和干扰组(转染TIMP1 siRNA+肺炎链球菌感染的细胞)。CCK-8法检测各组HEPApiC细胞活力,流式细胞术检测各组HEPApiC细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,ELISA检测上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量。结果肺炎链球菌感染后HEPApiC细胞中TIMP1 mRNA和蛋白表达水平均明显上调。转染TIMP1 siRNA后HEPApiC细胞中TIMP1 mRNA和蛋白表达水平均明显下调。感染组细胞凋亡率、Bax表达水平、TNF-α、IL-1β和IL-6含量均明显高于空白对照组(P0.05),而细胞活力和Bcl-2表达水平低于空白对照组(P0.05);干扰组细胞凋亡率、Bax表达水平、TNF-α、IL-1β和IL-6含量均明显低于感染组和阴性对照组(P0.05),而细胞活力和Bcl-2表达水平高于感染组和阴性对照组(P0.05)。结论敲低TIMP1基因表达能够抑制肺炎链球菌诱导的HEPApiC细胞凋亡,其作用机制可能与抑制炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达有关。     

miR-877靶向TRIM72调控脂多糖诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡

目的研究miR-877对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应和细胞凋亡的影响及潜在的分子机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测miR-877和三重基序(TRIM)72 mRNA的表达,Western印迹测定TRIM72蛋白、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定LPS诱导心肌细胞H9c2后培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-877与TRIM72的调控关系。结果 LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2中miR-877表达量显著上升(P0.05),TRIM72 mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05);LPS可诱导H9c2细胞大量产生炎症因子TNF-α和IL-6,诱导细胞凋亡;抑制miR-877表达或过表达TRIM72均可减轻LPS诱导的心肌细胞H9c2炎症反应,降低TNF-α和IL-6的产生,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-877靶向负调控TRIM72的表达;抑制TRIM72表达可逆转下调miR-877对LPS诱导的H9c2细胞炎症因子表达和细胞凋亡的作用。结论 miR-877通过靶向TRIM72以减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应,抑制细胞凋亡。     

miR-423-5p通过调控UCHL1表达对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响

目的探讨miR-423-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及作用机制。方法采用H₂O₂诱导人晶状体上皮细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-423-5p和泛素羧基末端水解酶(UCH)L1 mRNA表达水平,Western印迹检测UCHL1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡。转染miR-423-5p抑制剂或UCHL1过表达载体至人晶状体上皮细胞,上述相同方法检测干扰miR-423-5p表达或UCHL1过表达对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激及凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-423-5p与UCHL1靶向关系。结果H₂O₂诱导可促进人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和miR-423-5p表达及Bax蛋白表达(P<0.05),抑制细胞SOD和GSH-Px表达、UCHL1 mRNA和蛋白表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。干扰miR-423-5p或过表达UCHL1均可抑制人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达(P<0.05),促进细胞SOD和GSH-Px表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。miR-423-5p靶向负调控UCHL1表达,抑制UCHL1表达逆转了干扰miR-423-5p表达对人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达的抑制作用及对SOD、GSH-Px和Bcl-2蛋白表达的促进作用。结论miR-423-5p可能通过抑制UCHL1表达促进H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡,保护人晶状体上皮细胞免受H₂O₂损伤。     

杜仲多糖抑制高糖诱导HK-2细胞损伤的研究

目的 探讨杜仲多糖（EP）对肾小管上皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人肾小管上皮细胞HK-2随机分为正常对照（NC）组、高糖组（HG）,HG+EP 10组、HG+EP 20组、HG+EP 40组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-1207-5p组、HG+miR-1207-5p组、HG+EP+miR-1207-5p组。细胞计数试剂盒8法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡，ELISA法检测TNF-α、IL-6含量，实时荧光定量PCR检测miR-1207-5p表达。结果 HG+EP 10、HG+EP 20、HG+EP 40组细胞活性依次升高（P<0.05），细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达、IL-6、TNF-α含量、miR-1207-5p表达依次降低（P<0.05）。与HG组比较，HG+miR-1207-5p组miR-1207-5p、细胞凋亡率及Cleaved-caspase3蛋白表达、IL-6、TNF-α升高（P<0.05），细胞活性降低（P<0.05）。与HG+EP 40组比较，HG+EP+miR-1207-5p组m...