山茱萸多糖对HDF细胞β-半乳糖苷酶及p16表达的影响

目的探讨山茱萸多糖对抗HDF细胞衰老的作用及其可能的调控机制。方法体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF),实验组从40代开始加多糖含药血清,观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,分光光度法检测β-半乳糖苷酶活性,免疫组化法检测p16蛋白的表达。结果衰老组细胞活力下降,β-半乳糖苷酶含量升高,p16蛋白表达阳性细胞数升高;山茱萸多糖可提高细胞活力、降低β-半乳糖苷酶含量,p16蛋白表达阳性细胞数下降。结论山茱萸多糖可通过改变p16的表达而发挥其抗HDF细胞衰老作用。     

D-半乳糖诱发的衰老对大鼠下颌下腺端粒酶活性的影响

目的观察D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺抗氧化能力和端粒酶活性的改变。方法选用8周龄清洁级SD雌性大鼠10只,体重180²20 g,随机分为正常组和模型组,每组5只。采用D-半乳糖诱导大鼠衰老模型,观察下颌下腺谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)改变及采用端粒重复扩增-微孔板杂交法检测下颌下腺细胞端粒酶活性。结果衰老模型组大鼠下颌下腺GSH-Px、T-AOC及端粒酶OD值表达最低,正常组最高(P<0.01)。结论 D-半乳糖所致的大鼠下颌下腺细胞衰老与端粒酶活性降低相关。     

D-半乳糖引起人正常二倍体细胞衰老的机制

目的 研究D-半乳糖处理后引起人正常二倍体细胞衰老的机制.方法 MTT法检测细胞存活率,衰老相关的β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基水平,免疫印迹法检测衰老相关蛋白的表达.结果 D-半乳糖处理人胚胎肺细胞和肝细胞,均能抑制细胞的增殖.被处理的细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶染为蓝色,细胞内活性氧自由基水平明显升高,衰老信号通路相关蛋白p53、p21、caviolin-1的表达均升高.结论 D-半乳糖引起人正常二倍体细胞出现典型的细胞衰老表型,可以作为衰老的可靠模型.     

阿司匹林抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用

目的 探讨阿司匹林是否具有抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用及其机制。方法 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分别于正常糖浓度培养液 （5.5 mmol/L）、高糖培养液和高糖（33 mmol/L）＋阿司匹林（0.01、0.1、1及3 mmol/L）培养液中培养48 h,观察细胞形态、采用β-半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞,PCR-ELISA检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞内活性氧水平。结果 高糖培养液作用HUVEC 48 h后,细胞呈现衰老状态,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数明显增加,端粒酶活性明显减低,细胞周期停滞于G0/G1期,S期显著减少,细胞内活性氧水平显著增加。0.01、0.1和1 mmol/L阿司匹林作用后细胞形态改善,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著减少,端粒酶活性增强,S期细胞显著增加,细胞内活性氧水平降低（P<0.05）。而3 mmol/L阿司匹林作用后与高糖组相比差异无显著性。结论 高糖环境下阿司匹林（0.01、0.1和1 mmol/L）具有抗内皮细胞衰老的作用,其作用机制可能与氧化应激有关。     

硫化氢通过SIRT1抗内皮细胞衰老

目的探讨外源性硫化氢在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老中的作用及分子机制。方法用25μmol/L H2O2诱导HUVEC衰老,通过检测β-半乳糖苷酶计算细胞衰老率。检测不同浓度(15、30、60及120μmol/L)的硫氢化钠作用下内皮细胞衰老标志物β-半乳糖苷酶的表达,Western blot分析沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白的表达。结果 HUVEC经25μmol/L H2O2处理1 h后,β-半乳糖苷酶阳性细胞率为12.2%±1.30%;经60μmol/L硫氢化钠干预48 h后,β-半乳糖苷酶阳性细胞率显著降低,为4.6%±1.14%,两组相比差异显著(P<0.05);与对照组比较,60μmol/L硫氢化钠干预48 h后SIRT1蛋白表达显著上调(P<0.05),而用SIRT1抑制剂(NAM)可减弱硫氢化钠此作用(β-半乳糖苷酶阳性细胞率为12.0%±1.58%)。结论硫化氢能通过上调SIRT1表达抵抗H2O2诱导HUVEC衰老。     

何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶表达的影响

目的 通过观察何首乌饮干预的衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶(β-gal)表达的改变,探讨何首乌饮的抗衰老作用.方法 用D-半乳糖制造衰老大鼠模型,何首乌饮的干预作用分治疗和预防两部分,检测β-半乳糖苷酶活性,观察下颌下腺衰老细胞数目改变.结果 预防性实验部分:模型组衰老细胞数目多于正常组和各预防性用药组;治疗性实验部分:用药各组与自然恢复组相比,衰老细胞数目明显减少,其中治疗中剂量组最低.结论 何首乌饮具有抗模型大鼠下颌下腺细胞衰老的作用.     

Valsartan延缓血管内皮细胞衰老及p16INK4a表达变化的研究

目的 探讨Valsartan对血管内皮细胞衰老与p16INK4a表达变化的影响,为寻求廷缓内皮细胞衰老途径提供理论和实验依据.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,子血管紧张素Ⅱ及Valsartan干预,实验分为空白对照组、血管紧张素Ⅱ诱导组及Valsartan组,采用β-半乳糖苷酶(β-gal)染色鉴定细胞衰老;流式细胞术分析细胞周期变化;免疫细胞化学染色法、Western blot分析各组细胞p16INK4a蛋白的表达.结果 与对照组比较,血管紧张素Ⅱ诱导组β-半乳糖苷酶阳性染色率显著增多81.24％±6.46％,细胞周期停滞于G0-G1(88.36％±6.45％),p16INK4a 蛋白表达水平上调(P＜0.05);予以Valsartan干预后,β-半乳糖苷酶阳性细胞染色率减少,G0-G1细胞减少,p16INK4a蛋白表达水平下调(P＜0.05).结论 血管内皮细胞衰老分子机制可能通过下调p16INK4a的表达,使细胞周期停滞于G1期有关,Valsartan对血管内皮细胞衰老有一定保护作用,可能通过调控p16INK4a的表达发挥其延缓3血管内皮细胞衰老的作用.     

黄芪多糖对衰老HDFβ-半乳糖苷酶活性影响的实验研究

目的 探讨黄芪多糖（APS）对衰老人胚肺二倍体成纤维细胞（HDF）衰老相关β-半乳糖苷酶（SAβ-gal）活性的影响.方法 MTT法测细胞活力;免疫组化法测衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数.结果 黄芪多糖可以增强细胞活力,降低SAβ-gal染色阳性细胞数.结论 黄芪多糖延缓HDF细胞衰老的机制之一可能是减少了SAβ-gal的表达.     

外源性基因在血管球囊损伤后新生内膜中的表达

目的：应用重组腺病毒载体介导的β-半乳糖苷酶基因（LacZ）标记基因,探讨外源性基因在股动脉血管球囊损伤后,新生内膜中的表达。方法：用犬的股动脉内皮损伤模型,4周后经犬颈外动脉插管至股动脉内皮损伤处,并导入重组腺病毒载体介导的LacZ标记基因。转基因7天后,处死动物。β-半乳糖苷酶表达由x-Gal染色评价。经显微镜观察：在血管球囊损伤后,新生内膜中所见的蓝染细胞即为β-半乳糖苷酶表达阳性。结果：β-半乳糖苷酶表达出现在新生内膜、部分中膜和部分修复的内皮细胞。血管损伤后,新生内膜中平滑肌细胞转染率为100％。对照血管和远处脏器未显示β-半乳糖苷酶的表达。结论：在重组腺病毒载体的介导下,外源性基因可以在新生内膜中高效率地表达,新生内膜中的平滑肌细胞为基因治疗的靶细胞。