调肝理脾方对酒精性大鼠肝纤维化的抑制作用及其方证探讨

目的：探讨调肝理脾方对酒精性大鼠肝纤维化的抑制作用。方法：Wistar雄性大鼠以“酒精-吡唑-玉米油”混合液灌胃16周，制备酒精性肝纤维化大鼠模型，将存活动物随机分成3组：模型对照组、调肝理脾方治疗组、西药对照（安珐特）治疗组，另设正常对照组。4周后检测大鼠血清中肝纤维化指标，观测肝组织病理学及肝组织中TGF—β1蛋白表达变化。结果：16周末模型大鼠肝功能显著异常，肝纤维化明显；经4周治疗，与模型组比较，治疗组及对照组大鼠血清中HA含量均有显著下降趋势（P〈0．01），且调肝理脾方能显著下调大鼠肝组织中TGF—β1蛋白含量，其效果优于西药对照组。结论：调肝理脾方能有效阻止和逆转酒精性肝纤维化的进程，疗效优于西药对照组，方证相关有其病理学基础。     

调肝理脾方抑制酒精性肝纤维化的实验研究

[目的]探讨调肝理脾方对实验性酒精性肝纤维化大鼠的抑制作用及其机制。[方法]Wistar雄性大鼠以“白酒-吡唑-玉米油”混合液灌胃16周制备酒精性肝纤维化大鼠模型,给药后检测肝功能、肝组织病理学变化、肝组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）蛋白表达。[结果]酒精性肝纤维化模型大鼠肝功能显著异常,肝纤维化明显;经4周治疗,与模型组比较,中药组及西药组血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸转氨酶、透明质酸水平均有显著下降（P〈0．01）,且中药组能显著下调大鼠肝组织中TGF-β1蛋白。[结论]调肝理脾方能够有效阻止和逆转酒精性肝纤维化的进程。     

软肝冲剂对CCl4肝纤维化大鼠TGFβ1 mRNA表达的影响

研究软肝冲剂对CCl4肝纤维化大鼠转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA表达的影响,从分子水平探讨软肝冲剂促进肝细胞再生、阻止肝纤维化、肝硬化形成的作用机制.方法:采用Northern-blot方法检测CCl4肝纤维化大鼠TGFβ1mRNA表达.结果:Northern-blot杂交显示,实验第45、90天,模型组、中药各组和西药秋水仙碱组大鼠肝脏TGFβ1 mRNA表达均较正常组增强(P＜0.01).但中药各组和西药秋水仙碱组TGFβ1 mRNA表达水平均低于模型组(P＜0.01).其中中药高剂量组TGFβ1 mRNA表达水平均低于中药低剂量组和西药秋水仙碱组(P＜0.01).结论:软肝冲剂能调节CCl4肝纤维化大鼠TGFβ1mRNA表达,促进肝细胞再生,抑制肝纤维化、肝硬化的形成.     

复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝脏低氧诱导因子1α及其下游分子mRNA表达的影响

[目的]观察复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)及其下游分子血管内皮生长因子(VEGF)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响,探讨复方鳖甲软肝片抗肝纤维化的作用机制.[方法]采用40％ CCL4 诱导大鼠肝纤维化模型,同时以1 g/(kg·d)的复方鳖甲软肝片灌胃干预6周,常规苏木精-伊红和Masson染色观察大鼠肝组织炎症和纤维化程度,RT-PCR法检测肝组织HIF-lα、VEGF、CTGF基因mRNA表达.[结果]模型组大鼠肝组织炎症和纤维化程度计分较正常组明显增高(P＜0.01),肝组织HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA的表达较正常组明显增强(P＜0.01,＜0.05),肝组织纤维化程度与HIF-1αmRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA表达均呈明显正相关(均＜0.01),肝组织HIF-1α mRNA与VEGF mRNA、CTGF mRNA表达也呈明显的正相关(均P＜0.01);应用复方鳖甲软肝片干预后,大鼠肝组织炎症和纤维化程度显著减轻(P＜0.01,＜0.05),肝组织HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及CTGF mRNA表达明显下降(P＜0.05).[结论]复方鳖甲软肝片下调肝纤维化大鼠肝组织HIF-1α及其下游分子 mRNA 表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一.     

护肝解纤汤对肝纤维化大鼠血清学指标的影响

目的 观察护肝解纤汤对肝纤维化大鼠肝功能、肝纤维化指标的影响,探讨其对肝纤维化的治疗作用.方法 以四氯化碳腹腔内注射的方法建立大鼠肝纤维化模型,造模后施以由低、中、高剂量姜黄及其他中药组成的护肝解纤汤,以小柴胡汤和复方鳖甲软肝片为阳性对照.12周后最大量取血并处死大鼠.检测血清肝功能、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)含量.结果 模型组大鼠血清中ALT、AST含量升高,而ALB含量有所降低,各药物处理组ALT、AST较模型组降低,ALB较模型组升高,以复方鳖甲软肝片组更明显(P<0.05).模型组大鼠肝纤维化指标较正常组明显升高,各药物处理组纤维化指标均较模型组降低,尤以低姜黄组和复方鳖甲软肝片组降低明显(P<0.05).结论 护肝解纤汤可改善肝纤维化大鼠肝功能,显著降低肝纤维化指标,具有治疗肝纤维化的作用.     

软肝煎对非酒精性脂肪肝大鼠肝纤维化的预防作用

目的：观察软肝煎对非酒精性脂肪肝大鼠肝纤维化的预防作用，并探讨其作用机制。方法：将38只SD大鼠随机分为4组，除正常组（N）外，其余3组即模型组（M）、软肝煎低剂量组（L）、软肝煎高剂量组（H）大鼠用高脂饲料喂养共16周，制备大鼠非酒精性脂肪肝模型。L组、H组大鼠以软肝煎低、高剂量灌胃，1次/d，共12周；N、M组大鼠以等量生理盐水灌胃。观察各组大鼠肝组织病理变化及TGF—β1阳性表达情况，检测血清PCⅢ、CⅣ、HA、LN水平，并进行比较。结果：M组大鼠肝组织呈脂肪变、炎性细胞浸润、肝细胞坏死、纤维组织明显增生，L、H组大鼠肝组织病理表现较M组明显减轻；M组大鼠TGF—β1阳性表达较N组增高（P〈0．05），而H组较M组则降低（P〈0.05）；M组大鼠各项血清学指标较N组明显升高（P〈0．05），而L、H组较M则明显降低（均P〈0．05），且此4项指标与肝纤维化存在正相关。结论：软肝煎不仅可以治疗脂肪肝、高脂血症，而且还具有确切地预防非酒精性脂肪肝纤维化作用。     

复方鳖甲软肝片治疗免疫性肝纤维化大鼠肝细胞质膜蛋白质组分的变化

目的研究复方鳖甲软肝片治疗肝纤维化大鼠肝细胞质膜蛋白质组分的变化,以寻找与肝纤维化逆转相关的质膜蛋白质。方法以猪血清腹腔注射大鼠8周制备肝纤维化模型,再以复方鳖甲软肝片灌胃治疗8周。采用蔗糖密度梯度离心获得肝组织匀浆和质膜组分,采用免疫印迹法检测质膜的纯度,分析差异蛋白质组学变化。结果病理学检查发现实验8周后,大鼠肝脏发生中度肝纤维化;经鳖甲软肝片治疗8周后肝纤维化程度减轻,基本恢复到正常水平;免疫印迹检测显示质膜组分得到了较好的富集,其中线粒体等其他细胞器蛋白减少;通过差异蛋白质组学分析发现,治疗组中有22个3倍以上差异蛋白质点,准确鉴定了9个蛋白质,通过免疫印迹验证发现了Ⅱ型细胞支架蛋白8和膜联蛋白A2的差异表达。结论鳖甲软肝片治疗后,大鼠肝纤维化发生了逆转,并伴随一些质膜蛋白质的表达变化。     

肝力克对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1 mRNA表达的影响

[目的 ]探讨中药复方肝力克对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子 β1(TGF β1)mRNA表达的影响。 [方法 ]用 4 0 ?l4皮下注射建立SD大鼠肝纤维化模型。造模结束后 ,给予不同剂量的肝力克和秋水仙碱灌胃治疗 9周。采用原位杂交法观察大鼠肝组织中TGF β1mRNA的表达情况。 [结果 ]肝纤维化模型组大鼠肝组织TGF β1mRNA阳性表达较正常对照组明显升高 (P <0 .0 1) ;应用肝力克大、中、小剂量和秋水仙碱治疗后 ,大鼠肝组织TGF β1mRNA阳性表达均较肝纤维化模型组明显降低 (P <0 .0 1,<0 .0 5 )。肝纤维化模型组大鼠肝组织纤维化计分与TGF β1表达程度呈明显正相关 (r =0 .80 1,P <0 .0 1)。 [结论 ]肝纤维化大鼠肝组织TGF β1mRNA表达程度与肝纤维化的发生发展有密切关系 ;中药肝力克降低肝纤维化大鼠肝组织TGF β1mRNA的表达可能是其抗肝纤维化的作用途径之一。     

中药软肝饮对CCl4诱导的肝纤维化大鼠模型Smad3表达的影响

目的研究中药软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型Smad3表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法 40只Wistar大鼠,随机分成正常对照组、模型组、软肝饮组和复方鳖甲软肝片组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,进行HE和Van-Gieson染色,光镜下观察肝组织纤维化程度。同时以免疫组织化学SABC法检测各组Smad3的表达。结果与正常对照组相比,模型组Smad3表达明显增强,软肝饮组大鼠肝脏Smad3的表达显著下调(0.279±0.085vs0.885±0.904,P<0.05)。另外,软肝饮组大鼠肝脏纤维化病理变化显著改善。结论软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝脏纤维化模型肝脏Smad3表达有明显的下调作用,可能是其抗肝纤维化主要作用机制之一。     

活血渗湿方对实验性肝纤维化大鼠转化生长因子β1及其受体表达的影响

[目的]探讨活血渗湿方抗肝纤维化的作用机制.[方法]应用40CCl4 油剂诱导50只SD大鼠形成肝纤维化模型,随机分成3组,即模型组、渗湿方组和软肝片组,分别灌服0.85%氯化钠、活血渗湿方水煎剂、复方鳖甲软肝片水溶液.另设正常大鼠20只,作为正常组.药物干预12周后,处死大鼠,行肝组织苦味酸-天狼红染色,观察肝纤维化程度;免疫组织化学法检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体(TβR-Ⅰ)的表达,放射免疫法检测血清透明质酸(HA)水平.[结果]与模型组相比,渗湿方组和软肝片组大鼠血清HA水平明显降低(P＜0.05).模型组大鼠肝纤维化程度较重,渗湿方组与软肝片组大鼠肝脏纤维化程度较模型组显著改善(P＜0.05).与模型组相比,渗湿方组和软肝片组大鼠肝组织TGF-β1、TβR-Ⅰ的阳性表达面积明显减少(P＜0.01,＜0.05).[结论]活血渗湿方具有明显抗肝纤维化作用,其机制可能是抑制肝组织TGF-β1、TβR-Ⅰ的表达.     

参七内金散对肝纤维化模型大鼠肝组织转化生长因子-β1表达的影响

目的：探讨参七内金散抗大鼠肝纤维化的作用机制。方法：雄性SD大鼠32只随机分为3组：正常组、模型组、参七内金散组。除正常组外所有大鼠以CCl4皮下注射造模,首次注射100％CCl4 5ml／kg体重,之后40％CCl4-橄榄油溶液3ml／kg皮下注射,2次／周,连续注射6周。造模成功后参七内金散组以0．8g／kg的参七内金散灌胃大鼠,正常组与模型组大鼠则予以等量生理盐水灌胃,共2周。以盐酸水解法测定3组大鼠肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,分别以HE、天狼猩红染色观察大鼠肝组织的炎症与纤维化病理;以Real-time PCR及免疫印迹法检测大鼠肝组织TGF（转化生长因子）-β1 mRNA及蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠肝组织可见大量肝组织脂肪变性及胶原病理沉积,并可见纤维间隔形成;参七内金散能显著改善模型大鼠肝组织脂肪变性与胶原病理沉积,降低肝组织Hyp含量;正常组大鼠肝组织可见少量TGF-β1mRNA及蛋白表达,模型组大鼠肝组织TGF-β1表达在mRNA和蛋白水平均显著性升高（P〈0．01）,参七内金散组大鼠肝组织TGF-β1mRNA及蛋白表达明显下调（P〈0．01）。结论：参七内金散具有抗肝纤维化作用;下调TGF-β1的表达可能是参七内金散抗肝纤维化的机理之一。     

膜联蛋白I在大鼠肝纤维化组织中的表达及意义

目的检测膜联蛋白Ⅰ（AnnexinⅠ）、转化生长因子（TGF）β1、α–平滑肌肌动蛋白（α–SMA）在大鼠肝纤维化组织中的表达,阐明AnnexinⅠ在肝纤维化中的作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为健康对照组6只,肝纤维化模型组24只,采用二甲基亚硝胺（DMN）腹腔注射制备肝纤维化模型。肝纤维化模型组2、4、6、8周各6只大鼠门静脉采血检测血清ALT、AST,采用HE及Masson染色观察肝组织学变化,应用反转录聚合酶链反应（RT–PCR）检测肝组织AnnexinⅠ、TGFβ1、α–SMA mRNA表达,Western Blot法检测肝组织AnnexinⅠ表达。结果与对照组比较,肝纤维化模型组血清ALT、AST水平随损伤时间延长逐渐升高,4周达高峰,6周下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;正常肝组织有AnnexinⅠ、TGFβ1、αSMA低表达,2周即升高,4、6周较明显,8周下降,肝纤维化模型组与对照组在2、4、6、8周各时间点差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 AnnexinⅠ对肝脏可能有保护作用,为临床肝纤维化的防治提供新策略     

维药小茴香抗肝纤维化作用及对TGF-β/smad信号转导通路的影响

目的探讨小茴香提取物抗肝纤维化的作用及其对TGF-β/smad信号转导通路和肝星状细胞活化的影响。方法选择44只SD大鼠给予40%四氯化碳(CCl4)橄榄油溶液4 ml/(kg·体重)皮下注射5周制备肝纤维化模型,成模后随机分成治疗组和模型对照组,同时取6只正常大鼠做空白对照。治疗组给予小茴香提取物灌胃,模型对照组给予生理盐水灌胃,4周末处死大鼠检测血清ALT、AST、HA、LN,肝石蜡切片行Masson染色和抗α平滑肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β受体Ⅰ型(TGF-βRⅠ)、TGF-β1免疫组织化学染色,反转录实时荧光定量PCR分析肝组织TGF-β1、smad2 mRNA相对内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的表达量。结果小茴香提取物治疗组血清ALT、AST、HA水平,肝组织内胶原纤维含量、α-SMA、TGF-βRⅠ、TGF-β1表达以及TGF-β1、smad2 mRNA相对表达量均明显低于模型对照组。结论小茴香提取物可通过抑制TGF-β/smad信号转导通路抑制肝星状细胞活化,从而减轻大鼠肝纤维化。     

贝那普利对肝纤维化大鼠胰岛素样生长因子-I受体的影响

目的研究血管紧张素转换酶抑制剂贝那普利对大鼠肝纤维化模型的疗效,以及对其肝组织胰岛素样生长因子-1受体（IGF—IR）的影响。方法取Wistar雄性大鼠42只随机分为3组,正常对照组12只,模型组15只,贝那普利治疗组15只。制备四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,同时应用贝那普利灌胃,共8周。对肝组织进行苏木精伊红染色及马松三色染色,观察各组肝纤维化的程度,并测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平,采用SABC免疫组织化学方法检测大鼠肝组织中IGF—IR的表达水平。结果贝那普利治疗组的肝纤维化程度明显较同期模型组轻（P〈0．05）;与对照组相比,模型组体重降低（P〈0．05）及血清ALT升高（P〈0．05）,IGF-IR在肝组织中表达明显增多（P〈0．05）,贝那普利治疗组IGF—IR表达减少（P〈0．05）。结论贝那普利可改善肝纤维化程度,可能与肝组织IGF—IR的表达减少有关。     

双环醇对慢性乙型肝炎患者肝星状细胞活化和胶原合成的影响

目的:观察双环醇对慢性乙型肝炎(乙肝)患者肝组织炎症、纤维化程度、肝星状细胞活化和胶原合成的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:20例慢性乙肝患者以双环醇150mg/d治疗24周,治疗前、后分别行肝穿刺活体组织病理学检查,评估治疗前、后肝组织炎症及纤维化程度;并应用免疫组织化学技术和彩色病理图文分析系统观察治疗前、后肝组织内α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达状况和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的变化。结果:慢性乙肝患者经双环醇治疗后,其血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和γ谷氨酰转移酶(γ-GT)水平可显著降低,复常率分别达95%和70%,不仅肝组织炎症和纤维化程度明显改善,且肝组织内α-SMA和TGF-β1的表达强度明显减弱,同时Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量也较治疗前明显降低。结论:双环醇治疗可减轻慢性乙肝患者肝脏炎症反应和纤维化程度,同时明显降低肝组织内TGF-β1、α-SMA的表达,阻止肝星状细胞活化和Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,从而发挥抗纤维化作用。     

胡黄连苦苷Ⅱ抗大鼠肝纤维化的作用研究

背景：胡黄连苦苷Ⅱ可治疗急性肝损伤,但对肝纤维化的作用尚不明。目的：探讨胡黄连苦苷Ⅱ对CCl4致大鼠肝纤维化的治疗作用及其机制。方法：采用CCl4腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,56只大鼠分为正常对照组、模型组、胡黄连苦苷Ⅱ治疗组和胡黄连苦苷Ⅱ对照组。造模第8周,处死大鼠：以HE染色和Masson染色观察肝组织改变和肝纤维化程度,以电子显微镜观察超微结构变化,检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、白蛋白（ALB）以及组织丙二醛（MDA）水平,以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组化法分别检测肝组织转化生长因子（TGF）-β1、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达。结果：与正常对照组相比,模型组肝组织炎症和纤维化程度、血清ALT、AST以及肝组织MDA水平、TGF—β1和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达显著增高,血清ALB水平显著降低,超微结构发生显著改变。经胡黄连苦苷Ⅱ治疗后,上述指标均显著改善,但与正常对照组相比差异仍有统计学意义。胡黄连苦苷Ⅱ对照组上述各项指标与正常对照组无明显差异：结论：胡黄连苦苷Ⅱ可通过改善肝功能、抑制脂质过氧化反应、下调TGF-β1和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达而抑制肝纤维化的形成。     

蓝莓对大鼠肝纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的观察蓝莓对大鼠肝纤维化的预防作用及对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子（transforminggrowthfactor,TGF）-β1／Smads信号通路的影响。方法45只健康sD大鼠被随机分为正常对照组、模型组、蓝莓预防组、丹芍化纤胶囊预防组、蓝莓＋丹芍化纤胶囊预防组。每组9只。用四氯化碳（cch）制作大鼠肝纤维化模型,共8周。测定肝脏指数及血清ALT、AST并进行肝组织病理学检查,采用实时荧光定量RT—PCR检测TGF-β1、Smad4mRNA的表达,免疫组织化学法检测肝脏组织TGF-β1、Smad4及Smad7蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1及Smad4的表达增高（P〈0．05）,而Smad7的表达降低（P〈0．05）。与模型组比较,各预防组血清ALT及AST均明显降低（P〈0．05）,TGF-β1及Smad4的表达均降低（P〈0．05）,而Smad7的表达均增高（P〈0．05）。结论蓝莓对GEL所致大鼠肝纤维化有一定的预防保护作用,其机制可能与蓝莓影响TGF-β1／Smads信号转导通路,从而下调TGF-β1及smad4的表达,同时上调Smad7的表达有关。     

四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的形成

目的：观察四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化过程中肝窦毛细血管化的形成过程,探讨其与肝纤维化的关系。方法32只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组,肝纤维化模型组,正常对照组大鼠腹腔注射0．9％氯化钠溶液2 mL/kg ,模型组大鼠腹腔注射50％ CCl4-蓖麻油混合液2 mL/kg ,每周2次,共8周;分别于造模第2、4、6、8周处死大鼠,观察肝组织炎症及纤维化程度,放射免疫法检测血清中透明质酸（HA）的含量,透射电镜观察肝窦窦壁结构,S-P 免疫组织化学检测各组大鼠肝组织CD31、层黏连蛋白（LN）、IV型胶原（Col-IV）的表达。结果肝脏组织学证实CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型构建成功,6周可见纤维间隔形成;透射电镜显示,CCl4诱导2周时,部分肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells ,LSEC）窗孔减少,内皮下未见基底膜（Basement membrane,BM）,随着造模的进程,LSEC 窗孔进一步减少,部分甚至消失,第6、8周时局部肝窦内皮下形成连续的BM。同时,随着肝纤维化的进程,HA浓度逐渐升高,肝窦内皮细胞表面标志物CD31及基底膜主要成分Col-IV、LN表达逐渐增强。结论在CCl4诱导大鼠肝纤维化过程中,肝窦毛细血管化是逐渐形成的,LSEC失窗孔早于纤维间隔的形成,而肝窦内皮下基底膜出现在纤维间隔形成以后。     

多烯磷脂酰胆碱对慢性乙型肝炎患者细胞因子及肝纤维化指标影响

目的研究多烯磷脂酰胆碱对慢性乙型肝炎(CHB)患者肝纤维化指标及细胞因子的影响。方法选择98例CHB患者随机分为治疗组(50例)和对照组(48例),治疗前后检测患者血清转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、层粘连蛋白(LN)以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。结果治疗组患者血清ALT、AST、HA、C-Ⅳ、LN和TGF-β1、TNF-α水平较治疗前及对照组比较,均显著降低(P<0.01),差异均有统计学意义。结论多烯磷脂酰胆碱具有很强的抗氧化、保护肝细胞、抗感染及抗肝纤维化作用。