附睾蛋白酶抑制剂(EPPIN)基因在男性不育患者精子中的表达情况分析

目的:探讨附睾蛋白酶抑制剂(epididymal protease inhibitor,EPPIN)基因在男性不育患者精子中的表达情况及其对男性生育力的影响。方法:收集少弱精子症组(n=8)、弱精子症组(n=12)及对照组(n=19)的精液标本,分别采用Western blotting、半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组精子中EPPIN的表达,并计算其相对表达量及与精液质量的相关性。结果:EPPIN基因在不同组精子中均有表达,在对照组、弱精子症组和少弱精子症组的EPPIN mRNA的相对表达量分别为0.09±0.02、0.29±0.08和1.00±0.18,各组间比较差异有显著统计学意义(P0.01)。EPPIN蛋白的相对表达量与mRNA类似。EPPIN mRNA表达量与精子浓度、前向运动精子(progressive motility,PR)百分率和活力呈显著负相关。结论:EPPIN可能与人类精子数量及活力有关,推测可能参与少弱精子症的发病机制。     

钾离子通道Slo及其调节亚基LRRC mRNA在不同活力男性精子中的水平差异

目的探讨电压调控的钾离子(K~+)通道Slo1、Slo3与其γ调节亚基LRRC26、LRRC52在不同活力男性精子中的mRNA水平。方法收集精液参数正常者与特发性弱精子症患者的精子提取物,采用实时荧光定量PCR技术测定电压调控的K~+通道Slo1、Slo3和其γ调节亚基LRRC26、LRRC52 mRNA相对表达量,并分析其与精子活力的相关性。结果 Slo1、LRRC26、LRRC52 mRNA在特发性弱精子症患者精子中的表达水平(0.47±0.14,0.56±0.08,0.55±0.14)明显低于参数正常男性(0.99±0.21,1.16±0.24,1.00±0.21),差异均具有统计学意义(P0.05);Slo3的表达在参数正常男性精子中(1.03±0.18)亦高于特发性弱精子症者(0.71±0.19),但差异无统计学意义(P0.05)。结论电压调控的K~+通道中Slo1与γ调节亚基LRRC26、LRRC52 mRNA的低表达与精子活力低下相关。     

不同质量精子线粒体DNA拷贝数及完整性的比较研究

目的探讨精子线粒体DNA（mtDNA）拷贝数与完整性与男性不育的相关性。方法选取正常精液样本18例,异常精液样本34例,采用Percoll液密度梯度离心将样本分为30%层和80%层精子,并采用实时荧光定量PCR技术测定精子mtDNA拷贝数及长链PCR技术测定mtDNA完整性。结果在80%层精子中,少精子症组mtDNA拷贝数[（1.52±0.68）个]和少弱精子症组[（1.93±0.65）个]与正常组[（0.80±0.45）个]比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;少弱精子症组mtDNA完整性（0.93±0.27）与正常组（2.70±1.74）、弱精子症组（3.24±2.18）及少精子症组（1.76±0.76）比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。在30%层精子中,少精子症组mtDNA拷贝数（13.33±9.96）和弱精子症组（1.92±1.29）与正常组（4.85±3.00）比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论质量差的精子中存在mtDNA拷贝数增加及完整性减弱,mtDNA的检测可能成为预测精子质量的一个指标。     

无精子症及少弱精子症2436例患者的细胞遗传学病因分析

目的:探讨无精子症、少弱精子症患者外周血染色体核型与男性精液异常的关系,为不育症的诊断和治疗提供临床理论依据。方法:对2010年至2015年在华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科门诊就诊的无精子症及少弱精子症患者进行外周血染色体核型分析(G显带)。结果:2436例患者中染色体核型异常者340例(13.96%),其中性染色体异常208例(61.18%),以克氏综合征最常见;常染色体异常132例(38.82%),以常染色体多态性、易位最为常见。1014例无精子症患者染色体核型异常179例(17.65%),主要表现为性染色体数目异常(81例,45.25%);1422例少弱精子症患者染色体核型异常161例(11.32%),主要表现为性染色体(69例,42.86%)、常染色体(84例,52.17%)结构异常。无精子症与少弱精子症患者染色体异常的构成类型不同,差异有统计学意义(P0.05)。结论:无精子症或少弱精子症的形成与染色体异常的类型密切相关,细胞遗传学分析对于明确不育症病因及指导进一步治疗有重要意义。     

男性染色体多态性对精子质量及体外受精/卵胞质内单精子显微注射结局的影响

目的研究男方染色体多态性对精子质量及体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法回顾性比较IVF/卵胞质内单精子显微注射(ICSI)-ET助孕治疗的男方染色体多态(n=131)和正常对照夫妇(n=160)的妊娠结局,观察男方的精子质量和受精情况、临床妊娠率、早期流产率。结果男方染色体多态组中严重少/弱精子症(19.85%)比例显著高于染色体正常组(5.00%,P0.001),Yqh+在严重少/弱精子症(38.46%)中的比例最高;Yqh-也高达15.38%,1qh+在严重少/弱精子症组是最常见的常染色体多态类型(19.23%);染色体多态组的女方年龄、体质量指数(BMI)、基础性激素水平均无统计学差异(P0.05),男方前向精子率(PR%)、精子正常率以及获卵数、移植胚胎数均无统计学差异(P0.05)。染色体多态组行IVF-ET助孕治疗后,其着床率(17.42%)、临床妊娠率(28.17%)均显著低于正常对照组(32.26%,59.38%)(P0.05);并且早期流产率(11.11%)高于对照组(2.04%),但差异无统计学意义(P0.05)。染色体多态组行ICSI-ET助孕治疗后与正常对照组妊娠结局无统计学差异(P0.05),优质胚胎率(75.24%±23.68%)还高于正常对照组(49.97%±29.31%)(P0.05)。行ICSI-ET助孕的男方染色体多态患者其着床率(34.78%)以及临床妊娠率(52.00%)显著高于行IVF-ET助孕的男方染色体多态患者(17.42%,28.17%)(P0.05)。结论男性染色体多态性患者中严重少/弱精子的比例增加,男性染色体多态不利于IVF妊娠结局,对ICSI影响较小。     

不同源性及不同参数精子对ICSI结局的影响

目的:研究不同源性精子、不同参数精子及冻融精子对ICSI结局的影响。方法:接受ICSI治疗的510对不育夫妇共进行了517个周期,分为6组。射出精液少弱畸精子症组(A组)82例,共进行85个周期;射出精液严重少弱精子症组(B组)170例,共进行174个周期;附睾细针穿刺抽吸精子组(C组)108例,共进行108个周期;睾丸细针穿刺抽吸精子组(D组)71例,共进行71个周期;冻融射出精子组(E组)34例,共进行34个周期;冻融附睾睾丸精子组(F组)45例,共进行45个周期;比较其妊娠结局。结果:6组患者一般情况比较无统计学差异(P>0.05),6组患者的受精率、优胚率、临床妊娠率、早期流产率无统计学差异(P>0.05)。结论:不同源性精子、不同参数精子及冻融精子对ICSI结局无明显影响。     

HBV感染胎盘BCRP的表达与IL-1β的相关性

目的:探讨乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在乙型肝炎病毒(HBV)感染胎盘组织中的表达及其意义.方法:选取被HBV感染的足月胎盘20例(乙肝组),同时选取未被HBV感染的足月胎盘20例(正常对照组).采用实时荧光定量(RT-PCR)分别检测两组胎盘组织BCRP mRNA表达.蛋白免疫印迹法分别检测两组胎盘组织BCRP的表达.ELISA分别检测两组胎盘中白细胞介素-1β(IL-1β)的表达.结果:①各组RT-PCR检测BCRP mRNA的相对表达量:乙肝组0.424±0.358,正常对照组0.144±0.116,两组相比,差异有高度统计学意义(P=0.003).②蛋白免疫印迹法检测BCRP表达量:乙肝组0.4250±0.3106,正常对照组0.1129±0.1045,两组相比,差异有高度统计学意义(P=0.000).③ELISA法分别检测胎盘中IL-1β的表达:乙肝组290.145±229.393 pg/ml;正常对照组66.522±61.832 pg/ml,两组相比,差异有高度统计学意义(P=0.000).④经Spearson相关分析,IL-1β与BCRP mRNA和BCRP表达呈正相关关系(r=0.930,P=0.000;r=0.887,P=0.000).结论:BCRP在HBV感染胎盘组织中表达的升高,可能与HBV感染胎盘组织中IL-1β表达的升高有关.     

妊娠肝内胆汁淤积症孕鼠肝细胞中水通道蛋白8的表达

目的 探讨孕鼠妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)时其肝细胞中水通道蛋白8(AQP8)蛋白及mRNA的表达情况.方法 将20只孕鼠(孕15 d)分成ICP组和对照组,每组10只.ICP组孕鼠皮下注射17-α-乙炔雌二醇2.5 mg·kg-1·d-1,连续5 d,建立ICP模型,对照组孕鼠皮下注射1,2-丙二醇2.5 ml·kg-1·d-1,连续5 d.采用免疫组化法检测两组孕鼠肝细胞AQP8的蛋白相对表达量和定位;RT-PCR技术检测肝细胞AQP8的mRNA相对表达量.结果 孕鼠ICP模型成功建立.两组孕鼠肝细胞均有AQP8蛋白和mRNA的表达.ICP组孕鼠肝细胞AQP8的蛋白相对表达量为10.8±2.4,对照组为17.1±2.2,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);ICP组孕鼠肝细胞AQP8的mRNA相对表达量为1.07±0.11,对照组为0.80±0.11,两组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).结论 ICP孕鼠肝细胞中AQP8的蛋白表达下调,mRNA表达上调,可能与ICP发病有关.     

不明原因重复性自然流产妇女配偶精子DNA完整性

目的:探讨精子DNA完整性与重复性自然流产(RSA)的关系。方法:85例不明原因RSA妇女配偶(RSA组)和50例已生育的成年健康男性(对照组)的精液,应用精子染色质扩散实验(SCD)检测精子DNA完整性。将RSA组根据1年后怀孕结果分为3个亚组:怀孕组(30例)、流产组(26例)、未孕组(29例)。结果:RSA妇女配偶DNA损伤精子的百分率(14.6±6.9)%与对照组的(12.9±3.8)%相比无统计学差异(P0.05)。DNA损伤精子百分率大于20%视为精子DNA完整性异常,则有17.6%的RSA患者配偶的精子DNA完整性异常,6%的正常生育男性精子DNA完整性异常,但差异无统计学意义(P0.05)。怀孕组、流产组、未孕组配偶的DNA损伤精子百分率分别为(12.4±5.3)%,(14.6±6.5)%和(16.8±8.1)%,未孕组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),怀孕组、流产组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:精子DNA完整性异常与RSA继发不育有关,有必要筛查RSA患者配偶的精子DNA完整性。     

MiR-204降调Caveolin-1表达降低HRGECs对大分子蛋白的通透性

目的:探讨miR-204对肾小球内皮细胞(HRGECs)通透性及Caveolin-1(CAV1)表达的影响。方法:利用生物信息学方法预测以CAV1为靶基因的miRNA,miR-204为CAV1表达的调节miRNA。分别用子痫前期(PE)患者血清和正常血清处理HRGECs,q PCR法检测miR-204表达水平。将体外培养肾小球内皮细胞(HRGECs)分为4组:过表达组(转染miR-204 mimic),降表达组(转染miR-204 inhibitor),转染miR-204mimic NC(mimic阴性对照组)和转染miR-204 inhibitor NC(inhibitor阴性对照组)。转染48h后,荧光定量PCR及Western blot法检测miR-204及CAV1 mRNA和蛋白表达水平,Evans-blue检测HRGECs单层细胞对大分子蛋白的通透性改变。结果:PE血清可抑制HRGEC中miR-204表达(P0.05)。荧光定量PCR和Western blot结果显示,与阴性对照组比较,miR-204过表达组中CAV1 mRNA表达量无明显差异,CAV1蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);miR-204降表达组中CAV1 mRNA表达量无明显差异,CAV1蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。与阴性对照组比较,miR-204过表达组中HRGECs对大分子蛋白的通透性降低,miR-204降表达组中HRGECs对大分子蛋白的通透性提高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:miR-204可能通过抑制CAV1转录后翻译从而调节其靶基因CAV1表达,进而影响肾小球内皮细胞通透性,miR-204可能参与PE患者肾小球内皮细胞尿蛋白形成的调节。     

淋巴管生成因子LYVE-1及Prox-1在宫颈鳞癌组织的表达及意义

目的:探讨淋巴管生成因子LYVE-1及Prox-1的定量表达与宫颈癌淋巴结转移的相关性。方法:收集宫颈鳞癌手术标本24例,运用半定量RT-PCR技术对淋巴管生成因子LYVE-1和Prox-1进行分析,分别比较这两种因子在切除标本的肿瘤组织、癌旁组织中表达的差异。结果:Prox-1在肿瘤及癌旁组织表达分别为1.52±0.26和0.46±0.19,LYVE-1在肿瘤及癌旁正常组织的表达分别为1.37±0.21和0.56±0.12。Prox-1及LYVE-1在肿瘤组织的表达均高于癌旁组织(P均<0.01),与肿瘤的发生有关。并且它们的表达与淋巴结转移有相关性(P<0.01)。结论:Prox-1及LYVE-1表达升高与宫颈癌发生及淋巴结转移有一定关系,检测该指标对了解宫颈癌的侵袭和转移具有一定价值。     

Egr1信号途径参与NDRG1表达调节的机制研究

目的:研究人宫颈癌细胞中早期生长反应基因1(Egr1)信号途径参与N-myc下游调节基因1(NDRG1)表达调节的机制。方法:以人宫颈癌细胞株SiHa为研究对象,利用siRNA干扰技术使Egr1基因沉默,用RT-PCR和W estern blot检测转染前后Egr1表达的变化。通过RT-PCR和W estern blot检测细胞在低氧条件下,以及转染siRNA-Egr1后在低氧或低氧模拟物(DFX)条件下,Egr1与NDRG1表达的变化。结果:siRNA能有效地抑制Egr1基因表达(P0.001)。低氧条件下,Egr1、NDRG1的蛋白水平均明显升高(P0.001)。转染siRNA-Egr1 48h后,细胞在低氧条件下作用1h,Egr1 mRNA表达显著下降(P0.05)。细胞转染siRNA-Egr1 48h后,在低氧及DFX条件下作用24h,结果显示DFX使NDRG1 mRNA的表达显著高于低氧条件(P0.05)。同时也显示siRNA-Egr1能够使NDRG1 mRNA水平明显减少(P0.05)。结论:体内环境因素如低氧、DFX等上调NDRG1基因的表达,通过Egr1信号途径参与NDRG1在宫颈癌细胞中表达的调节。     

缺氧适应相关基因在不同妊娠阶段滋养层组织中的表达

目的:探讨缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶1(HPH1/PHD1)和缺氧诱导因子-1抑制因子(FIH-1)在不同妊娠阶段中的作用。方法:采用RT-PCR和Western blotting方法从mRNA和蛋白水平比较分析14例10周以内妊娠者(早孕A组)、11例10-12周妊娠者(早孕B组)、8例中期妊娠者(中孕组)和24例正常晚期孕妇(晚孕组)滋养层组织中的HPH1/PHD1和FIH-1的表达差异。结果:①在不同妊娠时期滋养层组织中均有HPH1/PHD1和FIH-1 mRNA及蛋白的表达,且均是早孕A组最低,早孕B组明显升高并达到峰值,此后逐渐下降,但均高于早孕A组的水平(P均<0.01)。②在妊娠期的各个阶段,HPH1/PHD1的mRNA和蛋白表达水平均强于FIH-1的表达,并均呈显著正相关;PH1/PHD1 mRNA与其蛋白间和FIH-1 mRNA与其蛋白间也呈显著正相关。结论:HPH1/PHD1与FIH-1可能在妊娠进展过程中氧分压变化的情况下通过调节HIF-1的表达和翻译参与对滋养细胞浸润和增殖的调控,参与胎盘发育,对于妊娠成功起重要调节作用。     

振荡模式下TGF-β1基因转染成肌诱导化ADSCs构筑工程化平滑肌的研究

目的:分析工程化平滑肌的体外生物学行为,评估构筑工程化平滑肌的理想方法,为修复女性尿道损伤提供新的方法.方法:转化生长因子β<,1>腺病毒载体(Ad-TGF-β<,1>)转染兔脂肪基质细胞(ADSCs),观察细胞形态、转染效率及细胞周期变化.接种到壳聚糖/胶原(Cs/Col)支架,构建工程化平滑肌:A组:凝胶+生长因子+振荡种植静态培养,B组:凝胶+生长因子+静态种植静态培养,C组:凝胶+基因转染+振荡种植静态培养,D组:静态种植静态培养.第1天、4天、8天、12天、16天、20天、24天、28天,电镜、共聚焦观察,检测细胞存活率、细胞增殖、Ⅲ型胶原及DNA含量.结果:C组细胞骨架发育完善,生长旺盛、细胞外基质丰富,细胞存活率高于其他组(P<0.05),增殖活力、Ⅲ型胶原及DNA含量均高于其他组(P<0.05).结论:凝胶包埋基因与振荡模式能加速种子细胞扩增及优化工程化平滑肌构建质量.为细胞移植治疗尿道损伤开创了新的模式.     

Association of CYP1A1 and CYP1B1 polymorphisms with bone mineral density variations in postmenopausal Mexican-Mestizo women

Herein, we investigated potential associations between polymorphisms of genes related to estrogen metabolism and bone mineral density (BMD) in postmenopausal women. This was a cross-sectional study, in which two hundred and ninety postmenopausal Mexican-Mestizo women were studied. The BMD of the lumbar spine (LS), total hip (TH), and femoral neck (FN) was measured. The distribution of the genetic polymorphisms, including rs1799814 and rs1048943 at CYP1A1 as well as rs1056836 at CYP1B1, were analyzed by polymerase chain reaction–restriction fragment length polymorphism (PCR–RFLP), single-stranded conformational polymorphism (SSCP), and DNA sequencing. Deviations from Hardy–Weinberg equilibrium (HWE) were tested, and linkage disequilibrium (LD) was calculated by direct correlation (r²). Moreover, haplotype analysis was performed. All polymorphisms were in HWE. The genotype and allele distributions of the three single nucleotide polymorphisms (SNPs) studied showed no significant differences. However, statistical significance was reached when constructing haplotypes. The CG haplotype in CYP1A1 was associated with variations in LS and FN BMD after adjustment for covariates (p?=?0.021 and 0.045, respectively), but the association with TH BMD was not significant. These results suggested that the CG haplotype in CYP1A1 may play an important role in the mechanism of osteoporosis and may be useful as a genetic marker.     

Meis1在子宫内膜异位症不孕患者子宫内膜中的表达研究

目的:初步探索HOXA10的辅因子(Meis1)与子宫内膜异位症(EMs)患者不孕和发病的相关性。方法:采用免疫组织化学方法进行组织学定位并进行半定量分析,采用Westernblot-ting方法在蛋白水平上进行定量分析,检测EMs不孕患者异位和在位子宫内膜中Meis1的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,Meis1在异位内膜和在位内膜中仅有弱表达,而在正常同期内膜中呈较明显的阳性表达,差异显著(P<0.01);比较Meis1在分泌中期在位内膜与正常内膜中的表达,差异亦有显著性(P<0.01)。Westernblotting显示,Meis1在分泌中期在位内膜中仅有弱表达,而在同期正常内膜中呈高表达(P<0.001)。结论:Meis1在EMs患者分泌中期在位内膜中低表达,可能是影响子宫内膜容受性的建立,从而影响胚胎着床导致不孕的重要因素之一。同时,Meis1在异位内膜中的低表达说明异位内膜可能对体内雌、孕激素正常调控具有抵抗性,异位内膜细胞具备了对抗凋亡的能力,提示Meis1可能参与了EMs的发生与发展。