双重荧光定量PCR法检测正常人及系统性红斑狼疮患者白细胞介素18基因的表达

目的建立双重荧光定量PCR方法研究人白细胞介素18基因(IL-18)的表达。方法分别用FAM和VIC两种不同荧光素标记IL-18基因和β-actin基因的MGB-TaqMan探针,在一个反应通道中,双重荧光RT-PCR定量测定PBMC中IL-18mRNA的量,并进行方法学评价。结果比较双重荧光定量PCR与单通道荧光定量PCR,发现没有差异。系统性红斑狼疮患者PBMC中IL-18mRNA含量高于正常人,有显著统计学意义(P<0.05)。结论双重荧光定量PCR技术具有敏感、特异、快速等特点,可用于人外周血IL-18mRNA的定量检测。     

实时荧光定量PCR技术进展

实时荧光定量PCR(real_time quantitative PCR)技术是一种新型的核酸定量检测、分析技术,它通过在PCR扩增反应过程中加入荧光物质,使得对反应过程的实时监控成为可能。它具有实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点,已逐步成为分子生物学研究中的重要工具。     

荧光定量PCR技术检测结核杆菌临床应用分析

目的 探讨荧光定量PCR技术在检测结核杆菌的临床应用价值. 方法 将本院临床诊断确诊为肺结核的68例患者为研究对象,采用荧光PCR技术测定两组痰液及外周血中的结核杆菌,以临床诊断结果为金标准,采用x2检验对结果进行分析比较. 结果 68例结核病患者中痰涂片、痰定量PCR、外周血定量PCR检测的阳性率为14.7％、41.2％、44.1％,定量PCR检测的阳性率显著高于痰涂片(P＜0.05).痰涂片阴性的58例患者中痰及外周血定量PCR检测阳性率为31.0％、41.3％.痰及外周血定量PCR配对检测两种标本同时检测的符合率为44.1％. 结论 荧光PCR技术检测结核杆菌的效果要显著优于传统涂片,其可证实、鉴定涂片阳性结果,同时对痰和外周血进行定量PCR检测,可.增强互补作用,提高检测的准确率.     

荧光定量PCR和FISH技术诊断肺结核的价值比较

目的比较荧光定量PCR和FISH技术对肺结核诊断的敏感性和特异性。方法共收集300例明确诊断为肺结核的患者作为阳性对照组,以及收集300例健康志愿者(明确排除肺结核患者)做为阴性对照组。收集800例新收临床疑似肺结核患者做为研究组。收集该800例患者的肺活检标本以及同期的痰液标本,其中痰液进行涂片、结核杆菌分离培养以及结核杆菌DNA荧光定量PCR检测和FISH检测。比较荧光定量PCR和FISH技术对肺结核诊断阳性符合率和阴性符合率。结果 1FISH技术检测结核杆菌阳性符合率为99.3%;荧光定量PCR检测结核杆菌阳性符合率为97.3%。两者阳性符合率存在统计学差别(p=0.015)。2FISH技术检测结核杆菌阴性符合率为98.2%,荧光定量PCR技术检测结核杆菌阴性符合率为96.9%。两者阴性符合率存在统计学差别(p=0.007)。结论与荧光定量PCR比较,FISH对肺结核诊断具有较高的阳性符合率和阴性符合率。     

实时荧光定量 PCR 仪原理与技术关键点分析

本文主要阐述实时荧光定量PCR技术的基本构成、测量原理,以及实时荧光定量PCR仪的部件构成、质量控制和影响其检测精密度的因素.     

荧光定量PCR快速检测幽门螺杆菌的研究

目的:建立一种快速检测幽门螺杆菌的荧光定量PCR方法。方法:根据每个幽门螺杆菌有一个拷贝的尿素酶A基因,设计并优化SYBGReen荧光定量PCR条件,评价荧光定量PCR的灵敏度与重复性;收集胃粘膜标本65份,并对其同时进行培养和荧光定量PCR检测。结果:该方法连续8个浓度模板良好线性关系(相关系数,0.997),灵敏度达1拷贝/微升;随机选取两个浓度的样本做重复试验,结果显示具有较高的重复性。65份标本中采用荧光定量PCR方法检出幽门螺杆菌42例(64.62%);细菌培养方法检出31例HP(47.69%)。结论:荧光定量PCR技术能够快速、准确检测幽门螺杆菌,适合于临床检测及科学研究。     

呼吸道病原体多重实时荧光定量PCR的检测

目的 建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测.方法 采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测.结果 多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳性及假阴性,特异性强.结论 多重实时荧光定量PCR具有经济、快速、特异性强等优点,在呼吸道病原体检测方面有巨大应用价值.     

应用荧光定量PCR检测生殖道沙眼衣原体

目的 探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)检测技术在泌尿生殖道沙眼衣原体的应用.方法 用荧光定量PCR法和抗原检测法对怀疑有沙眼衣原体感染的65例门诊患者分别进行检测.结果 两种方法阴性符合率为97.73%,阳性符合率为76.19%,差异有统计学意义.结论 荧光定量PCR法作为一种核酸定量技术,具有高特异性、高敏感性的特点,不仅可以准确诊断,而且其定量技术可指导临床用药,值得推广.     

数字PCR和荧光定量PCR诊断急性期布鲁菌病的灵敏度比较初步研究

目的　建立用于布鲁菌检测的数字PCR技术,初步用小样本开展研究,比较数字PCR和荧光定量PCR的灵敏度差异,验证数字PCR作为急性期布鲁菌病诊断技术的可行性。方法　选取符合我国急性期布鲁菌病诊断标准的20例患者的血清标本,分别用数字PCR和荧光定量PCR技术进行检测,初步比较2者在急性期布鲁菌病诊断中的灵敏度差异,并分析差异原因。结果　20例急性期布鲁菌病患者血清样本中,数字PCR检测阳性20例,荧光定量PCR检测阳性0例。结论　初步证实在急性期布鲁菌病患者血清标本检测中,数字PCR检测灵敏度高于荧光定量PCR,有良好的临床应用前景,但也存在一定局限性,尚须进一步扩大样本完成实验诊断技术临床研究,并进行多实验室验证。     

细菌16S rRNA在诊断非中性粒细胞性腹水自发性细菌性腹膜炎中的应用

目的 评价荧光定量PCR检测腹水细菌16S rRNA基因在诊断非中性粒细胞性腹水自发性细菌性腹膜炎患者中的临床应用价值.方法 用细菌16S rRNA基因荧光定量PCR法检测64例非中性粒细胞性腹水疑似自发性细菌性腹膜炎患者及6例慢性肝病伴非感染性腹水患者腹水中的细菌DNA,同时与腹水细菌培养结果进行对比.结果 细菌16S rRNA荧光定量PCR最低可检测到10个拷贝的DNA复制,检测细菌的阳性率明显高于细菌培养的阳性率,分别为15.63%和3.13%,两组差异有统计学意义(x2=5.52,P＜0.05).6例非感染性腹水荧光定量PCR及细菌培养均阴性.结论 腹水细菌16S rRNA荧光定量PCR检测细菌的特异性强、敏感性高,在诊断非中性粒细胞性腹水自发性细菌性腹膜炎患者中具有重要的临床应用价值.     

荧光定量检测HBV—DNA临床分析

目的了解乙肝患者HBVDNA含量及HBV DNA阳性患者用药前后的疗效观察。方法应用荧光PCR扩增病毒核酸免疫技术定量检测6018例血清标本的HBVDNA含量。结果荧光定量PCR的特点与定性PCR主要区别在于荧光PCR即时反映扩增过程,采用内标法全封闭减少污染,高灵敏的自动化仪器对荧光的收集和分析能达到对原始模板量定量检测。结论用此方法可较准确及时地为临床提供科学的诊断依据,并对HBVDNA阳性病人用药前后提供可靠数据。     

荧光定量PCR仪的边缘效应与实验误差分析

目的:探讨荧光定量PCR分析仪边缘效应及实验误差的原因.方法:通过比较部分国外知名品牌荧光定量PCR仪的光路系统及加热模块设计原理,分析边缘效应及实验误差产生的原因.结果:传统荧光定量PCR仪光路设计缺陷和加热模块的孔间温度均一性不足会导致边缘效应和实验误差,是影响荧光定量PCR结果重复性的重要原因.结论:了解不同品牌荧光定量PCR仪的检测原理,选购性能优良的荧光定量PCR仪,尽量避免实验误差,以保证实验结果的准确性.     

荧光定量PCR仪的选购

荧光定量PCR技术已成为临床分子检测的重要手段之一,其以敏感性、特异性而被越来越多的科研人员所看好,荧光定量PCR仪的性能与检测结果的准确性密切相关.现将PCR仪选购过程中需注意的几点问题做一简单介绍.     

荧光定量PCR在病原微生物检测中的应用

<正>常规PCR检测技术是一种特异、敏感的分子检测技术,在病原微生物的快速诊断方面发挥出了重要作用。但是普通PCR技术在实际工作中问题较多,尤其是机械化程度比较低,在PCR后处理方面基本需要依靠人工操作来实现。另外,普通PCR技术还有不能实现定量、PCR扩增产物易受污染等不足。荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上发展起来的核酸定量新技术,其基本原理相同,仅在PCR反应体系中加入荧光基团,利用     

荧光定量基因检测系统的设计

本文对荧光定量PCR原理进行了简要叙述 ,介绍了荧光定量基因检测系统的总体设计过程 ,该系统采用基因扩增技术与计算机技术相结合的方法 ,能实现对PCR扩增过程进行实时检测 ,并可对扩增过程中的数据进行实时采集、后期处理等操作。     

应用荧光定量PCR检测阴道加特纳菌

目的:确定荧光定量PCR方法检测细菌性阴道病相关细菌阴道加特纳菌的可行性。方法:采用SYBR Green方法建立了阴道加特纳菌荧光定量PCR方法,评价荧光PCR方法的特异性、灵敏度、重复性;并对568例临床分泌物样本进行检测。结果:本实验所建立的荧光定量PCR方法可准确、特异的检测阴道加特纳菌;该方法的灵敏度可达到1拷贝/μl;194例细菌性阴道病患者分泌物标本中荧光定量PCR法检出116例(59.79%)阴道加特纳菌;而在374例非细菌性阴道病患者分泌物标本中荧光定量PCR法检出35例(9.36%)阴道加特纳菌;荧光定量PCR法检出率明显高于细菌培养方法,差异具有显著性,χ2=24.89,P<0.01。结论:荧光定量PCR方法能够应该用于临床分泌物标本中的阴道加特纳菌的检测。     

ABI-7000 PCR仪对血清HBV DNA含量的定量分析

目的检验ABI-7000荧光定量PCR仪对血清HBV DNA检测的灵敏性和重复性,探讨HBV DNA定量与血清标志物的关系,比较荧光定量PCR与定性PCR的敏感性差异。方法对乙肝标志物已明确的305例血清进行HBV DNA定量检测,其中67例同时做HBV DNA定性,并对结果进行统计分析。结果ABI-7000荧光定量PCR仪检测HBV DNA的灵敏性高,可检测低至1000copies/ml血清,批内及批间cv值分别为9.16%及12.66%;各种血清标志物组合HBV DNA含量分布情况表明:HBeAg阳性组HBV DNA阳性率高于其它组合(p<0.05);荧光定量PCR组HBV DNA阳性率与定性PCR组比较,有显著性差异(p<0.05)。结论ABI-7000PCR仪定量检测HBV DNA,灵敏度高,重复性好,优于传统定性PCR;HBV DNA定量可准确反映体内HBV复制情况,具有重要临床意义。     

荧光定量PCR技术检测肠道志贺菌的临床应用

目的:比较荧光定量PCR技术和传统培养方法检测肠道志贺菌的效果。方法:利用中山大学达安基因股份有限公司研制开发的志贺菌核酸检测试剂盒,检测我院诊治的腹泻病人332份大便中的志贺菌核酸,并以传统的沙门志贺菌(SS)培养基进行细菌培养的结果作为对比。结果:332份腹泻病人大便标本,用培养方法检测,志贺菌阳性59例;用志贺菌核酸试剂盒检测有107例阳性。荧光定量PCR检测方法与培养方法对比,敏感度为100.00%,特异性为82.43%。结论:荧光定量PCR技术敏感度高、特异性强、适合于临床大标本量的检测。     

实时荧光定量PCR技术及其在生命科学领域中的应用(一)

实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术是在PCR定性技术基础上发展起来的用不同荧光定量核酸的技术,具有敏感性高、重复性好、速度快、操作简便和污染少等优点。本文综述FQ-PCR技术的原理、特点、目前常用FQ-PCR仪、定量方法、实验条件及实验中的主要影响因素及FQ-PCR技术在生命科学领域中的应用和研究进展。     

实时荧光定量PCR技术及其在生命科学领域中的应用(二)

实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术是在PCR定性技术基础上诞生起来的用不同荧光定量核酸的技术,具有敏感性高、重复性好、速度快、操作简便和污染少等优点。本文综述了FQ-PCR技术的原理、特点、目前常用FQ-PCR仪、定量方法、实验条件及实验中的主要影响因素及FQ-PCR技术在生命科学领域中的应用和研究进展。