子痫前期滋养细胞ABCG2表达的研究

目的探讨正常及子痫前期胎盘滋养细胞分化前、后胎盘表达的主动转运因子ATP结合匣式转运子G2 (ABCG2)mRNA及蛋白的表达变化。方法酶消化法原代培养正常及子痫前期胎盘绒毛滋养层细胞,经传代与纯化后免疫鉴定滋养细胞及其纯度。收集培养后72 h (未分化状态)及培养后6 d (分化状态)的细胞,裂解后应用实时荧光定量PCR及Western Blot检测各组细胞ABCG2 mRNA及蛋白的表达水平。结果成功自正常及子痫前期胎盘中原代培养人绒毛滋养层细胞,未分化状态下子痫前期滋养细胞ABCG2mRNA及蛋白的表达平均值为正常的2. 54及2. 06倍,分化状态下子痫前期滋养细胞ABCG2mRNA及蛋白的表达为正常的1. 65及1. 53倍;正常胎盘滋养细胞分化后ABCG2 mRNA及蛋白表达增高3. 55及4. 06倍,子痫前期组仅增加2. 31及3. 03倍。结论自子痫前期及正常胎盘原代培养滋养细胞区分不同分化状态,实时荧光定量PCR及Western Blot检测子痫前期滋养细胞不同分化时期ABCG2 mRNA及蛋白的表达均高于正常,但滋养细胞分化后子痫前期ABCG2 mRNA及蛋白表达增长的程度低于正常。     

IL-24、pY397FAK在子痫前期胎盘中的表达

目的:检测IL-24、pY397FAK在子痫前期胎盘中的表达及人类重组蛋白IL-24(rhIL-24)对TEV-1细胞pY397FAK蛋白表达的影响,探讨它们在子痫前期发病中的关系。方法:免疫组化SP法检测子痫前期组及正常足月组孕妇胎盘中IL-24和pY397FAK的分布与表达;Western blot检测不同浓度rhIL-24作用后TEV-1细胞的pY397FAK蛋白表达。结果:与正常足月组相比,子痫前期组胎盘组织中IL-24表达强度显著升高(P<0.05),pY397FAK表达强度显著降低(P<0.05)。当rhIL-24≥50ng/ml后,TEV-1细胞中pY397FAK蛋白表达逐渐降低(P<0.05),并呈一定的浓度依赖性。结论:胎盘组织中IL-24的异常升高导致pY397FAK磷酸化蛋白的产生减少,滋养细胞侵蚀能力下降,从而参与了子痫前期的发生。     

血清剥夺对滋养细胞生物行为的影响及其机制研究

目的:观察人滋养细胞(TEV-1)经血清剥夺刺激后,VEGF、Netrin-1的表达及分布,同时监测TEV-1增殖、凋亡及管腔形成等生物学行为的变化,探讨血清剥夺对滋养细胞生物行为的影响及其机制。方法:行早孕期滋养细胞株TEV-1培养,并随机分为实验组(无血清培养基处理)及对照组(15%胎牛血清培养基处理),应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)检测细胞增殖凋亡情况,并监测管腔形成的变化。同时利用免疫荧光细胞化学染色法及实时定量PCR检测VEGF、Ne-trin-1蛋白表达定位及mRNA变化情况。结果:MTT及FCM检测表明,血清剥夺能抑制TEV-1细胞增殖、诱导TEV-1凋亡。滋养细胞培养24 h后可出现管腔形成现象,且这一现象不受血清剥夺的抑制。VEGF、Netrin-1蛋白均表达于TEV-1细胞胞浆,此外,实验组TEV-1VEGF mRNA与Netrin-1mRNA的表达水平依次为对照组的(0.94±0.02)、(0.62±0.11)倍。结论:血清剥夺后,滋养细胞出现凋亡增加及增殖抑制现象,并且VEGF、Netrin-1表达减少。血清剥夺可能通过影响VEGF、Netrin-1的表达来参与对滋养细胞增殖凋亡的调控。     

胎盘组织KiSS-1及metastin表达在早发重度子痫前期发病中的作用及其与围生结局的相关研究

目的:探讨胎盘组织中KiSS-1及其蛋白肽metastin表达在早发重度子痫前期发病中的作用及其与围生结局的相关性。方法:采用RT-PCR、westernblot、免疫组化方法检测57例子痫前期患者(轻度15例和重度42例,其中早发重度12例,晚发重度30例)和30例正常晚期妊娠者胎盘组织中KiSS-1及其蛋白的表达水平和定位,并与围生结局进行相关性分析。结果:子痫前期胎盘组织中KiSS-1及蛋白肽metastin的表达定位与正常晚期胎盘组织相似,主要表达在绒毛的合体滋养细胞和细胞滋养细胞。子痫前期组胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白表达分别为(1.73±0.24)和(78.41±7.96)μg/100μg总蛋白,显著高于正常晚期妊娠组(P<0.01、P<0.01),以重度子痫前期组尤为显著,早发重度子痫前期组显著高于晚发重度子痫前期组。与正常晚期妊娠组相比,子痫前期组metastin平均光密度(0.64±0.02)显著增高(P<0.01),随着病情的加重而逐渐增高,早发重度子痫前期组显著高于晚发重度子痫前期组(P<0.01)。随着新生儿窒息程度的加重,KiSS-1mRNA及其蛋白表达水平呈升高趋势(P<0.05、P<0.05),且与窒息程度呈明显正相关,r分别为0.463(P=0.016)和0.587(P=0.027)。KiSS-1mRNA及其蛋白表达水平与新生儿体重呈显著负相关,r分别为-0.764(P=0.000)和-0.899(P=0.000)。结论:子痫前期存在KiSS-1基因及其表达增强,且早发重度子痫前期组表达显著高于晚发重度子痫前期组,与滋养细胞侵润能力下降和新生儿预后密切相关,其异常表达可能是早发重度子痫前期发病的主要原因之一且与围生结局密切相关。     

肺癌细胞在缺氧状态下体外侵润力的变化及分子基础

目的 探讨缺氧对肺癌细胞体外侵润力的影响及其分子基础。方法 将小细胞肺癌细胞H128分别置于常氧、低氧和无氧环境中培养48h后，用羊膜内皮细胞模型测定各组细胞的侵润能力。同时测定并分析了上皮钙粘附素、β1-整合素的表达量。结果 与常氧组相比，低氧组细胞侵润能力显著高于常氧组。低氧组E-钙粘附素表达显著降低及β1-整合素表达量显著增强，无氧组两者均显著降低。结论 适度缺氧可以下调肺癌细胞表达E-钙粘附素，增加β1-整合素表达，增强癌细胞侵润力。但是严重缺氧使癌细胞粘附分子表达及细胞侵润力均下降。     

Fas表达异常与重度子痫前期的关系研究

目的:探讨重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞Fas(又称APO-1,CD95)的表达及意义。方法:采用免疫组化法观察24例Fas在重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的表达,并与24例正常晚期妊娠胎盘比较。结果:Fas主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞的胞浆及胞膜内。与正常对照组比较,Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达水平显著增加(P<0.05),差异有显著性。Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达与新生儿出生体重和胎盘重量均有明显相关性。结论:Fas在重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞中表达失衡,通过免疫途径诱导滋养细胞发生级联凋亡反应及滋养细胞对螺旋小动脉的浸润过浅,影响“血管重铸”过程,导致胎盘缺血、缺氧,可能与重度子痫前期的病因及病理过程有关。     

子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白表达量及其与滋养细胞侵袭、胎盘缺氧的相关性

目的探讨子痫前期胎盘组织中层粘连蛋白α4链(LAMA4)蛋白表达量及其与滋养细胞侵袭、胎盘缺氧的相关性。方法收集2012年5月-2016年5月在该院接受治疗及分娩的子痫前期患者56例作为观察组;另选取同期进行产检及分娩的正常产妇50例作为正常对照组。根据胎盘组织中LAMA4蛋白表达中位数,观察组患者被分为高LAMA4蛋白组和低LAMA4蛋白组,每组各28例。采用Western-Blot法检测胎盘组织中LAMA4蛋白表达量;采用荧光定量PCR法检测胎盘组织中滋养细胞侵袭相关基因mRNA表达量;采用化学发光法检测脐血中胎盘缺氧相关指标含量。结果观察组胎盘组织LAMA4蛋白表达量低于正常对照组(P0.05);高LAMA4蛋白组、低LAMA4蛋白组胎盘组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PLGF)mRNA表达量低于正常对照组,可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1(sFlt1)mRNA表达量高于正常对照组,脐血胎盘缺氧指标,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶-1(HPH-1)、瘦素含量均高于正常对照组(P0.05);高LAMA4蛋白组胎盘组织中MMP-9、VEGF、PLGFmRNA表达量高于低LAMA4蛋白组,sFlt1mRNA表达量低于低LAMA4蛋白组,脐血胎盘缺氧指标HIF-1α、HPH-1、瘦素含量低于低LAMA4蛋白组(P0.05)。结论子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白表达量减少,具体LAMA4蛋白表达水平与滋养细胞侵袭呈正相关,与胎盘缺氧程度呈负相关。     

重度子痫前期胎盘细胞凋亡及其基因的表达

目的 探讨重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的凋亡情况及凋亡相关基因的表达.方法 选择重度子痫前期患者及正常以社会因素剖宫产者各12例,以TUNEL法检测胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率,免疫组化法检测Bcl-2、Bax和Fas的表达.结果 子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率明显高于对照组(F=22.65,P＜0.05);与正常对照组比较,Bax和Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达水平显著增加,差异有显著性(x2分别为4.1958、6.1714,均P＜0.05);Bcl-2在两组胎盘绒毛滋养细胞的表达无明显差异性.结论 子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的凋亡率增加及促凋亡基因Bax和Fas的高表达导致胎盘缺血和缺氧,可能与重度子痫前期的病因及病理过程有关.     

缺氧对滋养细胞小凹蛋白-1和内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨缺氧对滋养细胞小凹蛋白-1(Cav-1)和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的影响。方法采用CoCl_2诱导滋养细胞株HPT-8化学缺氧,根据CoCl_2浓度的不同将HPT-8分为4个组以建立不同类别的缺氧模型。采用RT-PCR和Western blotting法检测Cav-1和e NOS mRNA和蛋白表达。结果正常情况下滋养细胞内有Cav-1的表达,缺氧诱导滋养细胞Cav-1表达明显增高,而e NOS表达和NO分泌下降,且缺氧程度越重趋势越明显。结论缺氧诱导滋养细胞Cav-1增加,Cav-1通过负向调控e NOS及NO表达,导致NO合成减少,血管阻力持续增加,导致了子痫前期(PE)的形成。     

Notch家族蛋白、LCHAD在早发型重度子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨Notch家族蛋白、长链三羟基酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)的表达与早发型重度子痫前期发病的关系,揭示早发型重度子痫前期发病机理。方法选择早发型重度子痫前期患者45例、晚发型重度子痫前期患者42例为研究组,40例正常分娩者为对照组,免疫组化法检测Notch家族蛋白、LCHAD在胎盘绒毛组织中的分布和表达水平。结果各组胎盘组织的合体滋养细胞、血管内皮细胞、蜕膜细胞中均可以检测到Notch家族蛋白、LCHAD的表达。早发型重度子痫前期组Notch家族蛋白、LCHAD表达均显著低于晚发型重度子痫前期组及对照组。各组胎盘组织中Notch家族蛋白表达与LCHAD表达水平呈正相关。结论早发型重度子痫前期组胎盘中Notch家族蛋白、LCHAD低表达与疾病的发病发展密切相关。二者通过影响滋养细胞浸润,胎盘浅着床在早发型重度子痫前期发生发展中起重要作用。     

维生素C对缺氧诱导人滋养细胞凋亡的影响研究

目的:探讨外源性维生素C对缺氧诱导人滋养细胞凋亡的影响。方法:行实施人早孕期滋养细胞株TEV-1培养,经95%氮气处理30 min,行递增浓度的维生素C(0、1、5、50 ng/ml)继续孵育24 h后,各组细胞均应用噻唑兰(MTT)比色法、流式细胞术(FCM)法检测细胞增殖指数、凋亡率,同时利用黄嘌呤氧化酶法测定各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性变化。结果:滋养细胞经缺氧诱导30 min后,与对照组相比,添加不同浓度组(1、5及50 ng/ml)维生素C对其增殖行为无明显影响。但维生素C具有增强滋养细胞SOD活性,减弱其凋亡程度的作用(P<0.05)。结论:维生素C能明显提高缺氧损伤滋养细胞的抗氧化能力,可能参与了妊娠的病理生理过程。     

缺氧-复氧后HK-2细胞内OPA1的表达变化及rhEPO干预的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)干预对缺氧复氧后HK-2细胞内视神经萎缩症蛋白(optic atrophy 1,OPA1)表达变化及细胞凋亡率的影响。方法 体外培养HK-2细胞随机分为正常对照组、H/R组和rhEPO干预组。然后免疫组化检测各组细胞胞质内OPA1蛋白表达变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡数量差异。结果 与正常对照组比较,H/R组细胞数量减少,细胞凋亡率显著增加,同时细胞内OPA1表达减少;而与H/R组相比,rhEPO干预组细胞数量增加,细胞凋亡率下降,OPA1表达明显增强,但各指标仍未恢复至正常对照组水平。结论 rhEPO对缺氧-复氧所致肾小管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能通过抑制细胞内OPA1蛋白表达而实现。     

叶酸对体外缺氧神经干细胞保护作用的研究

目的研究叶酸(folate,Fol)对体外培养缺氧神经干细胞(neural stem cell,NSCs)增殖、凋亡和抗氧化能力的影响。方法采用无血清体外细胞培养方法,培养新生大鼠NSCs。将其分为4组,即正常对照(normal control,NC)、缺氧模型(hypoxia,Hyp)、缺氧叶酸缺乏(Hpy+Fol-D)和缺氧叶酸添加(Hpy+Fol)组。除NC组以外,其余三组放入缺氧环境中6h,造成缺氧损伤。采用MTT法检测缺氧后细胞增殖能力的变化;收集增殖6d的细胞,测定缺氧后NSCs超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性;采用Western blot方法检测caspase-3的活性表达水平。结果与NC组比较,缺氧干预后NSCs增殖明显下降,SOD和GSH-PX活性降低,caspase-3的活性表达增加;Hpy组细胞增殖能力、SOD和GSH-PX活性均显著高于Hpy+Fol-D组,低于Hpy+Fol组(P0.05),caspase-3的活性表达显著高于Hpy+Fol组,低于Hpy+Fol-D组(P0.05)。结论缺氧可造成NSCs损伤,叶酸缺乏能使缺氧后NSCs的损伤加重,补充叶酸能促进缺氧后NSCs增殖,提高其抗氧化能力,抑制NSCs凋亡,对体外大鼠NSCs的缺氧损伤恢复有促进作用。     

PI3K/Akt通路在滋养细胞侵蚀能力中的调控机制

目的:探讨PI3K/Akt信号转导通路在滋养细胞侵蚀能力中的调控机制。方法:体外培养滋养细胞系。应用Western blot法检测表皮生长因子(EGF)刺激EVT后Akt、磷酸化Akt及MMP9表达的变化。应用细胞侵蚀小室检测滋养细胞的侵蚀能力。使用PI3K选择性抑制剂LY294002处理细胞,检测以上各项结果的变化。结果:①随EGF浓度增高,滋养细胞的Akt表达无明显变化,磷酸化Akt表达升高,MMP9表达升高;②EGF能够显著促进滋养细胞的侵蚀运动能力;③PI3K抑制剂LY294002明显逆转EGF对EVT侵蚀力的促进效应。结论:表皮生长因子可以活化滋养细胞的PI3K/Akt信号通路,进而促进细胞侵蚀,使用PI3K抑制剂LY294002,上述作用被抑制。     

乙型肝炎病毒感染Bewo细胞模型的建立

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)感染人胎盘滋养层细胞系Bewo的细胞模型,为HBV母婴传播过程中胎盘细胞感染机制的研究提供体外细胞模型。方法:选择人胎盘滋养层细胞系Bewo进行体外培养,用高浓度HBV DNA阳性血清(5×106/拷贝.ml-1)与Bewo细胞共培养48 h后,采用选择性PCR技术检测培养细胞中HBVrcDNA和HBVcccDNA。结果:HBV DNA阳性血清与Bewo共培养48 h,Bewo细胞中HBV rcDNA和HBV cccDNA均呈现阳性结果(243 bp和373 bp)。HBVDNA阳性血清与Bewo共培养对细胞形态无明显影响。结论:HBV能够直接感染人胎盘滋养层细胞系Bewo,该细胞系可用于进行HBV母婴传播过程中胎盘细胞感染机制的研究。     

2-甲氧雌二醇诱导人子宫内膜癌细胞株凋亡的实验研究

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡的影响。方法:选用人子宫内膜癌细胞株KLE进行体外培养,实验组加入不同浓度2-ME,对照组不含2-ME。用电子显微镜(电镜)观察细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化,以及免疫组织化学方法检测P53和Bcl-2的表达强度。结果:2-ME作用后G0/G1期细胞增加,并伴随G0/G1期细胞的增加,出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高(P<0.05)。电镜下观察到KLE细胞染色体边集、核固缩、凋亡小体,P53和bc1-2阳性表达率明显下降。结论:2-ME对人子宫内膜癌KLE细胞株有诱导凋亡作用。     

子痫前期患者胎盘滋养细胞中一氧化碳及肿瘤坏死因子-a的水平变化

目的:探讨血红素氧合酶-一氧化碳系统在子痫前期发病机制中的作用。方法:采集妊娠晚期的子痫前期孕妇和正常孕妇的胎盘,制备胎盘匀浆,用分光光度计双波长法和ELISA方法分别检测胎盘组织中的CO和TNF-a的含量,并进行相关分析;分别用两组孕妇血清培养滋养细胞,对指标进行测定和比较分析;结果:子痫前期患者胎盘组织及其血清培养的滋养细胞中CO的含量明显降低、TNF-a含量显著增加(P<0.05),且两者之间存在负相关。结论:CO和TNF-a的表达异常引起胎盘缺血缺氧、内皮损伤,可能是子痫前期发病的重要因素之一。     

硒对人鼻咽癌细胞辐射效应的抑制作用

本文研究晒的体外辐射防护作用。硒以亚硒酸钠（Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３）形式溶于人鼻咽低分化鳞癌细胞株（ＣＮＥ－２）的培养液中（最终浓度０．５８ｍｍｏｌ／ＬＮａ＿２ＳｅＯ＿３），培养１５～１６ｈ，然后细胞接受２Ｇｘγ射线照射，将细胞接种于９６孔微量细胞培养板内，每孔５０个细胞，２４孔为一组，各加含硒或不含硒培养液。继续培养４８ｈ，在倒置显微镜下观察记录每孔内细胞克隆（≥８个细胞）数。结果发现加硒放射组与单纯放射组比较，克隆抑制率分别为３５．６８％和５０．７５％，两者差异显著（Ｐ＜０．０１），提示硒对体外培养细胞显然有辐射防护作用。