芹菜素对实验室兔膝关节软骨缺损的影响观察

目的 研究芹菜素对于转骨形态发生蛋白(BMP-7)软骨细胞修复关节软骨缺损的作用.方法 IL-1β体外诱导兔软骨细胞分泌白细胞介素-8(IL-8)和可溶性细胞黏附因子-1(sICAM-1).在培养系统中加入不同浓度芹菜素(10 μmol/L、25 μmol/L和50 μmol/L),采用酶联免疫吸附法检测芹菜素对诱导兔软骨细胞分泌IL-8和sICAM-1的影响.将软骨细胞种植于Matrigel胶支架上,将体外培养出的软骨膜块植入家兔关节软骨缺损模型中,采用随机数字表法分为3组(n=4):假手术组、转BMP-7组和转BMP-7+芹菜素组.5周后进行组织学观察和Wakitani评分.结果 10 μmol/L、25 μmol/L和50 μmol/L芹菜素能显著抑制IL-1β诱导兔软骨细胞分泌IL-8和sICAM-1的作用[(6803.63±162.31) ng/g、(6005.74±201.49) ng/g、(5202.34 ±271.67) ng/g比(10011.84±239.29)ng/g,P=0.00],并促进软骨细胞增殖.转BMP-7组和转BMP-7+芹菜素组的Wakitani评分显著低于假手术组[(3.68±0.86)比(8.25 ±0.90),P=0.00;(3.21 ±0.78)比(8.25 ±0.90),P=0.00].另外,还发现芹菜素可减少修复过程中的炎症反应发生.结论 芹菜素可促进转BMP-7软骨细胞膜块构建以及关节软骨缺损的修复.     

BMSCs复合壳聚糖-胶原蛋白修复兔大块关节软骨缺损

目的使用同种兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复关节软骨缺损。方法体外培养扩增兔BMSCs。采用软骨诱导分化培养基对P2代细胞进行成软骨诱导,同时制备兔关节软骨缺损模型。诱导后细胞与事先制备好的"壳聚糖-胶原蛋白"支架复合,移植到软骨缺损区。术后于2、4、8、16周进行组织学评分并杀死动物行组织学染色。结果术后16周移植的细胞一致分化为软骨细胞,大部分软骨缺损区被新生软骨修复。结论应用BMSCs结合"壳聚糖-胶原蛋白"复合物可以修复关节软骨缺损。     

BMSCs复合壳聚糖-胶原蛋白修复兔大块关节软骨缺损

目的使用同种兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）修复关节软骨缺损。方法体外培养扩增兔BMSCs。采用软骨诱导分化培养基对P2代细胞进行成软骨诱导，同时制备兔关节软骨缺损模型。诱导后细胞与事先制备好的“壳聚糖-胶原蛋白”支架复合，移植到软骨缺损区。术后于2、4、8、16周进行组织学评分并杀死动物行组织学染色。结果术后16周移植的细胞一致分化为软骨细胞，大部分软骨缺损区被新生软骨修复。结论应用BMSCs结合“壳聚糖-胶原蛋白”复合物可以修复关节软骨缺损。     

丹参注射液联合自体骨软骨移植术修复关节软骨缺损的临床观察

目的探讨丹参注射液联合自体骨软骨移植治疗关节软骨缺损的疗效。方法选择关节软骨缺损患者26例,采用自体骨软骨移植术联合丹参注射液对关节软骨缺损进行修复。结果26例患者术后行MRI检查原软骨缺损区软骨表面光滑,移植物位置良好;美国特种医院膝关节评分及Brittberg—Petenson功能评分均较好。结论丹参注射液联合自体骨软骨移植术对修复关节软骨缺损疗效满意,而且也比较安全。     

间充质干细胞应用于软骨组织工程的研究进展

外伤、软骨变性或老龄化均可引起骨关节炎,软骨细胞修复能力较差因而治疗效果很不理想,为此人们开创了许多新型治疗手段。软骨细胞已广泛应用于软骨组织工程,但考虑到提取软骨细胞引起的供点坏死、软骨细胞易去分化及细胞寿命有限等,因此有必要引入间充质干细胞（MSCs）。近20年来,间充质干细胞成为结缔组织工程和再生医学关注的焦点,已是优化软骨组织工程的细胞来源,如应用于自体软骨移植（ACT）中。再生医学中,复合新发展的可植入支架,作为靶细胞或运载细胞的间充质干细胞被认为是一种理想的细胞来源。至今,动物模型中MSCs在软骨修复中取得很好效果,也是自体软骨细胞的替代细胞源,这种全新的方法还在不断研究中,但要实现临床应用还需更多的可行性研究。     

软骨修复相关细胞因子的作用及其研究进展

介绍了关节软骨损伤缺损疾病,对比分析了几种主要的关节软骨修复的手术治疗方法,对如何提高关节软骨修复能力进行了分析研究,提出了组织工程在软骨缺损修复方面的重要性。介绍了软骨修复相关的生长因子,如骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）、胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors,IGFs）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factors,FGFs）,并对各生长因子在软骨损伤修复中起的作用及研究进展做一综述。     

微骨折技术与骨软骨移植在关节软骨缺损中的应用

目的了解微骨折技术与骨软骨移植在关节软骨缺损中的应用。方法选取2014年7月至2015年7月关节软骨缺损患者24例,按照外科修复方式平均分为2组,即骨软骨移植组和微骨折组。分别采用自体骨软骨移植修复和微骨折方法修复膝关节软骨缺损。结果应用微骨折治疗患者,关节清理术结合软骨缺损区微骨折术总有效率89.7%。应用自体骨软骨移植治疗患者,关节疼痛、肿胀的症状改善,关节活动度正常,偶有关节静息痛或活动后轻微疼痛,影像学检查移植骨软骨位置良好,修复愈合良好。结论关节软骨缺损应用同种异体骨软骨移植治疗,关节活动度正常,移植关节面光整,关节软骨被透明软骨覆盖,细胞有序排列,软骨基质分泌,修复软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色强阳性。     

组织工程修复关节软骨损伤研究进展

关节软骨损伤后修复能力有限,组织工程为软骨疾病的治疗开辟新的途径。现从关节软骨的结构和功能、组织工程的种子细胞、支架材料、体外培养以及修复机理等方面阐述国内外在软骨组织工程领域的研究进展,并指出软骨组织工程存在和需要解决的问题。     

软骨组织工程概况和发展

软骨自身修复的有限性,成为关节软骨缺损治疗的一大难题。随着组织工程学科的发展,运用组织工程技术对软骨组织损伤进行治疗成为一种新的模式。本文就软骨组织工程研究的主要方面及发展作一综述。     

富血小板血浆复合物在牙槽局部缺损中的应用研究

目的观察富血小板血浆复合物对牙槽骨局部缺损的修复影响方法抽取兔的静脉血进行富血小板血浆的制备;将体外培养扩增的兔BMSCs(bone marrow stromal cells)成骨诱导后的细胞滴加到bio-oss载体;制备兔牙槽骨缺损的动物模型,制备的富血小板血浆与bio-oss-细胞混合,植入骨缺损区,以单纯bio-oss植入作对照。术后2、4周和8周取材,通过组织学观察,评价成骨情况。结果组织学观察显示:术后4周和8周,富血小板血浆复合物修复区有大量的软骨及骨形成,以软骨内成骨的方式成骨;对照组组骨缺损区未见软骨或骨形成。结论用PRP复合物构建方法简便,并具有良好异位成骨能力,可用于牙槽局部缺损治疗。     

纤维蛋白胶促进乳腺癌术后创面愈合的研究

目的 探讨纤维蛋白胶在减少乳腺癌术后并发症中的作用.方法 将45例乳腺癌患者随机分成实验组(24例)和对照组(21例).实验组行乳腺癌改良根治术同时在手术创面喷涂纤维蛋白胶5mL,对照组仅行乳腺癌改良根治术.观察两组术后3天皮下引流量、拔管时间、皮下积液、皮瓣坏死和术后住院日的情况.结果 实验组术后第1、2天引流量少于对照组(P＜0.05),在术后第3天两组间存在明显差异(P＜0.01).术后拔管时间、皮下积液发生率和术后住院日少于对照组(P＜0.05).两组间皮瓣坏死发生率无明显差别(P＞0.05).结论 应用纤维蛋白胶可有效地减少乳腺癌术后创面渗液,促进创面愈合.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇致幼鼠成年鼠骨及关节软骨损伤差异的实验研究

目的观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)致Wistar幼鼠、成年鼠膝关节骨与软骨损伤的异同。方法 24只健康雄性Wistar幼鼠(20日龄)和24只健康雄性Wistar成鼠(60日龄),分别随机分为正常对照组、DON低剂量组、DON高剂量组,每组各8只,共6组;幼鼠和成鼠的低剂量组和高剂量组均通过灌胃的方式隔日染毒,低剂量灌胃剂量为0.06 mg/kg,高剂量灌胃剂量为0.25 mg/kg;对照组使用相同体积的生理盐水。作用80 d后,取双侧膝关节,进行光镜和电镜病理形态学观测。结果对照组关节软骨基质较均匀、致密,骺板软骨从骨骺到干骺端结构完好,软骨基质呈弱嗜酸性,细胞排列保持良好的层次;幼鼠低剂量组可见软骨细胞变性,坏死,排列紊乱。高剂量组可见软骨细胞溶解、甚至消失。健康细胞与受损细胞交互排列,呈现DLD现象。骨小梁数目减少,且骨小梁变细、连接中断,立体网状结构破坏,且随剂量的增加骨小梁的破坏也愈加严重,甚至骨小梁大片消失;成年鼠可见软骨细胞变性坏死,高剂量组有的细胞核溶解、消失。电镜可见基质内有较小的、大小均匀的、电子密度高的颗粒状物质,线粒体肿胀和固缩兼有,并见大小不等的空泡,脊破坏或消失。高剂量情况下,细胞核形态不规则、固缩,染色质边聚,关节软骨胶原网络结构破坏。结论 DON可导致Wistar大鼠骨和软骨损伤,其损伤结局与骨的发育阶段有关:在干骺闭合前,DON除可致软骨损伤外,还可致骨发育障碍,甚至停滞;在干骺闭合以后其损伤仅表现在软骨上,提示DON可能是大骨节病和骨关节炎等骨关节病的原因。     

骨膜细胞联合BMP成骨作用的实验研究

目的 观察骨膜细胞联合BMP协同成骨作用及其效果，探索骨缺损后骨再生的新方法。方法 采用自体骨膜细胞体外培养、扩增、传代，观察兔骨膜细胞活细胞形态学和功能变化；兔24只随机分四组，切除双侧连同骨膜桡骨1cm，分别置入骨膜细胞＋BMP、骨膜细胞、BMP、空白对照，术后定期进行X线拍片、组织学检查。结果 兔骨膜培养活细胞形态分三期：细胞分裂期、细胞发展期、细胞功能期，细胞传代进化后，其结构与原代细胞无明显差异；骨膜细胞体外培养，大量增殖，其细胞悬液自体移植至骨缺损区能形成骨组织；修复骨缺损能力骨膜细胞＋BMP〉BMP〉骨膜细胞，骨膜细胞移植后表现为在骨缺损端形成骨样组织。类似膜内化骨形成新骨，BMP类似软骨内化骨形成新骨，骨膜细胞＋BMP表现膜内化骨和软骨内化骨两种机制，以前者明显。结论 骨膜细胞或BMP两者均有修复骨缺损的能力，骨膜细胞联合BMP有协同成骨作用，为修复骨缺损的一种理想方法。     

宫腔镜介导下生物蛋白胶在未足月胎膜早破中的应用

目的:探讨妊娠未足月胎膜早破者延长孕周的途径。方法:取未足月胎膜早破孕妇39例分成2组,治疗组21例采用生物蛋白胶封闭,18例未采用者为对照组。结果:治疗组孕周较对照组延长,差异有显著意义(P<0.05)。结论:妊娠未足月胎膜早破者采用生物蛋白胶封闭可适当延长孕周。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人胚胎膝关节软骨细胞的毒性及作用机制

目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人胚胎膝关节软骨细胞的毒性及作用机制.方法 取原代培养人胚胎膝关节软骨,用DMEM/F12培养基进行培养和传代,在培养基中加入DON,建立以下DON染毒浓度:0.1、0.2、0.4、1.0 μg/ml组和空白对照组.在处理72 h后进行相关研究指标的检测:分别用ELISA法检测培养上清基质金属蛋白酶13(MMP-13)、前列腺素E2(PGE2)含量,硝酸还原酶法检测上清液的一氧化氮(NO)含量,流式细胞术法检测软骨细胞凋亡情况、软骨细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和Ⅱ型胶原表达的情况,RT-PCR法分析iNOS mRNA和Ⅱ型胶原mRNA的表达.结果 DON组凋亡率为6.78%～19.05%,高于对照组的1.20%,凋亡率随DON浓度增高而增加(F=174.761,P<0.05).DON组上清液NO含量为20.8～40.7 μmol/L,高于对照组的10.2 μmol/L(F=91.966,P<0.05);MMP-13含量为0.25～0.56 μmol/L,高于对照组的0 μmol/L(F=78.420,P<0.05);PGE2含量为3.2～20.6 μmol/L,高于对照组的1.6 μmol/L(F=276.453,P<0.05).DON组软骨细胞iNOS表达强度为14.8%～56.8%,高于对照组7.1%(F=214.614,P<0.05).高剂量DON组(0.4 μg/ml和1.0 μg/ml)Ⅱ型胶原表达强度分别为56.7%和52.7%,低于对照组的62.2%(F=5.134,P<0.05).DON组软骨细胞内iNOS mRNA表达的吸光度值(A值)为1.07～1.33,高于对照组的0.62(F=8.358,P<0.05).高剂量DON组(0.4、1.0 μg/ml)软骨细胞内Ⅱ型胶原mRNA表达量分别为0.83和0.82,低于对照组的1.14(F=7.887,P<0.05).结论 DON导致人软骨细胞合成NO增加,并通过NO调节MMP-13和PGE2等促进Ⅱ型胶原等软骨基质的降解和软骨毒性损伤;DON可促进软骨细胞的凋亡.

Abstract：

Objective This study was to explore the cytotoxic effect and the related injury mechanism of deoxynivalenol(DON)on articular chondrocytes in human embryo.Methods Articular cartilage cells were isolated from knees of human embryo and cultured in DMEM/F12 medium.The cells of the 4th generation were divided into five groups and incubated with varying concentrations of DON as the followings: control group and group with DON of 0.1,0.2,0.4,1.0 μg/ml.The effects of DON were observed 72 hours after incubation.Cell apoptosis was assayed by flow cytometry(FCM) with Annexin V-FITC/PI staining; MMP-13 and PGE2 were detected by ELISA kits;NO was measured by Griess assay with spectrophotometer.Inducible nitric oxide synthase(iNOS) and collagen Ⅱ in cells were detected by FCM.The expression levels of iNOS,mRNA and collagen Ⅱ mRNA were measured with RT-PCR.Results The rates of cell apoptosis in DON groups were 6.78%-19.05%,which were significantly higher than that in control(1.20%,F=174.761,P<0.05).The levels of NO in DON groups were 20.8-40.7 μmol/L,which were significantly higher than that in control(10.2 μmol/L,F=91.966,P<0.05).The levels of MMP-13 in DON groups were 0.25-0.56 μmol/L,which were significantly higher than that in control(0 μmol/L,F=78.420,P<0.05).The levels of PGE2 in DON groups were 3.2-20.6 μmol/L,which were significantly higher than that in control(11.6 μmol/L,F=276.453,P<0.05).The proportions of cells with positive iNOS in DON groups were 14.8%-56.8% which were significantly higher than that in controls (7.1%,F=214.614,P<0.05).The proportions of cells with positive collagen Ⅱ in groups with DON of 0.4 μg/ml and 1.0 μg/ml were 56.7% and 52.7%,which were significantly lower than that in control(62.2%,F=5.134,P<0.05).The relative absorbance values of iNOS mRNA in DON groups were 1.07-1.33,which were significantly higher than that in control(0.62,F=8.358,P<0.05).The levels of collagen Ⅱ mRNA in groups with DON of 0.4 μg/ml and 1.0 μg/ml were 0.83 and 0.82,which were significantly lower than that in control (1.14,F=7.887,P<0.05).Conclusion DON could promote anabolism of NO in articular cartilage cells by which up-regulated the expression of PGE2 and MMP-13,which both promoted resolution of articular cartilage matrix such as collagen Ⅱ.DON induced apoptosis in articular cartilage cells.     

多西环素对兔膝关节骨关节炎软骨及滑膜中MMP-3和TIMP-1mRNA表达的影响

目的探讨多西环素对骨关节炎软骨退变的保护机制,为临床防治退行性骨关节病、治疗创伤性骨关节炎提供实验依据。方法（1）模型制作：成年新西兰大白兔16只,行右侧膝关节前交叉韧带切断术（ACLT）,术后不固定右膝关节。分笼饲养,每笼1只。予以青霉素（40万单位）肌注预防感染,11次／d,注射3d。术后第4天,驱赶实验动物以强制膝关节活动,每天60min,持续30d。术后4周,右膝关节创伤性关节炎模型建立完成。（2）动物分组：将动物随机分为两组,每组8只,实验组注射多西环素[1．33％多西环素溶液0．3ml（总量0．4mg）],对照组注射生理盐水（0．3m1）,所有动物均分笼饲养,不再强制活动。总共注射时间为4周。（3）采集标本及数据分析：用空气栓塞的方法处死所有实验动物,采集髌骨关节面软骨及关节内滑膜标本,应用Brittberg软骨退变分级标准进行大体评分。用RT—PCR的方法检测MMP-3mRNA及TIMP-1mRNA的表达。结果大体评分显示实验组髁软骨评分0级6例,1级2例,髌软骨评分0级5例,1级3例。对照组髁软骨退变程度较轻,髌软骨评分0级2例,I级6例。实验组和对照组中,在术后8周都有MMP-3mRNA及TIMP-1mRNA的表达。实验组MMP-3mRNA表达（1．20±0．32）较对照组（1．97±0．54）明显降低（t=3．47,P〈0．05）,而实验组中TIMP-1mRNA表达（3．22±0．42）较之对照组（1．90±0．33）有显著缯强（t=6．99,P〈0。01）,两者比较差异均有统计学意义。结论关节内注射多西环素后,抑制了关节软骨和滑膜中MMP-3mRNA的表达、上调TIMP-1mRNA的表达,从而减轻关节软骨退变程度。     

胃镜下喷洒生物蛋白胶治疗十二指肠球部溃疡并出血的疗效

目的探讨胃镜下喷洒生物蛋白胶治疗十二指肠球部溃疡并出血的疗效。方法将158例无严重并发症的十二指肠球部溃疡并出血的患者随机分为研究组和对照组两组,治疗组溃疡局部喷洒生物蛋白胶+常规治疗,对照组常规治疗,比较两组疗效。结果治疗组患者止血时间、再出血率、输血量和手术率明显示低于对照组(P0.05),两组住院总费用无明显差异(P0.05)。结论胃镜下喷洒生物蛋白胶治疗十二指肠球部溃疡并出血成功率高,止血效果明显,预后较好。