DNA扩增制备探针并用于临床白色念珠菌感染鉴定

目的应用聚合酶链反应技术扩增特异DNA片段,并制备成为可应用于临床鉴定白色念珠菌的基因探针. 方法采用聚合酶链反应技术特异地扩增白色念珠菌标准株DNA EO3 125 bp基因片段,然后用半抗原地高辛配基标记,在完成基因探针显色敏感度检测之后,应用该基因探针分别对血液病病房分离的白色念珠菌、热带念珠菌及大肠埃希菌等多种细菌进行斑点杂交测试. 结果基因扩增制备Dig-125 bp DNA探针显色敏感度为0.01 pg,具有白色念珠菌特异性,与其他念珠菌和细菌不发生杂交. 结论基因扩增制备EO3 125 bp DNA探针方法简便可靠,具有很强特异性,可应用于临床鉴定白色念珠菌感染.     

应用DNA探针鉴定临床分离的念珠菌

[目的]制备念株菌DNA探针并应用于临床诊断。[方法]应用聚合酶链反应扩增白念珠菌标准株的EO3基因125bp片段,同时合成EO3的25bp特异寡核苷酸,扩增产物用半抗原地高辛标记,合成寡核苷酸用生物素标记制备成探针,检测两种探针显色敏感度,并与23株临床分离的白念珠菌、热带念珠菌,近平滑念珠菌及大肠杆菌等细菌进行斑点杂交试验。[结果]Dig-125bpDNA探针显色敏感度为0.01pg,仅与白念珠菌杂交;Bio-/25bpDNA探针显色敏感度为20pg;与白念珠菌,热带念珠菌及近平滑念珠菌杂交。[结论]Dig-/25bpDNA探针,可用于白念珠菌鉴定;Bio-25bpDNA探针,可用于念珠菌初步鉴定。     

应用长臂光敏生物素核酸探针检测医学真菌的研究

[目的]建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法。[方法]首先合成医学真菌通用引物，用PCR扩增白色念珠菌18S rRNA基因，用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针，然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southern杂交检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染人鼠，建立念珠菌病的实验动物模型，验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性。[结果]通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种医学常见真菌的18S rRNA基因，扩增片段长度为621-687bp。此引物只扩增真菌DNA，不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度，实验证明后者的敏感性最高。[结论]本方法快速、敏感、不需放射性同位素，有较好的临床应用前景。     

显色培养基在念珠菌鉴定中的应用评价

[目的]评价科玛嘉念珠菌显色培养基在念珠菌鉴定中的应用价值。[方法]用酵母样真菌生化编码系统与科玛嘉念珠菌显色培养基鉴定49株念珠菌。[结果]酵母样真菌生化编码系统鉴别结果为37株白色念珠菌,3株光滑念珠菌,2株热带念珠菌,1株克柔假丝酵母菌,2株近平滑念珠菌,2株葡萄牙念珠菌,1株效用念珠菌,1株乳酒念珠菌;科玛嘉显色培养基鉴别结果为37株白色念珠菌,4株光滑念珠菌,4株热带念珠菌,1株克柔假丝酵母菌,3株其它念珠菌。[结论]显色培养基鉴别念珠菌特别是白色念珠菌有很高的准确性,但在其它念珠菌的鉴定中会出现假阳性或假阴性,应予注意。     

常见深部念珠菌感染快速基因诊断

目的 研究快速、准确的常见病原念珠菌基因诊断方法，为临床深部念珠菌感染的分子诊断奠定基础。方法收集常见深部念珠菌感染临床株，应用多重聚合酶链反应(PCIR)技术扩增念珠菌rDNA的内部转录间隔区ITS1～ITS2，根据PCR产物片段的大小进行快速基因鉴定。结果依据多重PCR电泳图谱将53株常见医院感染念珠菌分为5型：(1)热带念珠菌14株，单一条带，大小约350bp；(2)白色念珠菌25株，2条带，大小约150bp和550bp；(3)光滑念珠菌8株，单一条带，大小约900bp；(4)克柔念珠菌5株，单一条带，大小约550bp；(5)乳酒念珠菌1株，单一条带，大小约700 bp。常见病原菌经PCR扩增均无产物。结论快速多重引物PCR诊断结果与常规生化鉴定一致，检出率100％，无假阳性。此方法简单、快速灵敏、特异性高、重复性好，有助于临床对真菌的早期快速诊断。     

43株念珠菌分离鉴定和药敏试验研究

[目的]了解皮肤病、性病门诊就诊者念珠菌感染状况及其对抗真菌药物敏感性，为该菌的防治提供依据。[方法]用VITEK32细菌鉴定仪对念珠菌进行鉴定，用MTT法进行药物敏感性试验。[结果]从85份临床标本分离到43株念珠菌，阳性分离率为50．6％。其中白念珠菌30株（69．8％）、近平滑念珠菌6株（14．0％）、光滑念珠菌4株（9．3％）、季也蒙念珠菌2株（4．7％）、丛生丝孢酵母菌1株（2．3％）。MTT法测定念珠菌对氟康唑和伊曲康唑的总敏感率分别为93．0％和67．4％，与常规法比较差异无统计学（P〉0．05）。[结论]白念珠菌仍是最常见的致病念珠菌。念珠菌对氪康唑的总敏感率略高于伊曲康唑，对氟康唑耐药的菌株往往对伊曲康唑也耐药。     

血液病念珠菌感染基因扩增检测技术建立及临床应用

目的 针对血液病真菌感染日益严重趋势，建立念珠菌基因扩增技术并应用于临床。方法 本研究应用Lyticase破真菌壁提取DNA，采用二对引物分别对白色念珠菌EO3 125bpDNA和念珠菌细胞色素P450 L1A1 243bpDNA进行基因扩增；并分别对白色念珠菌标准株、临床样本株、其他念珠菌和不同细菌菌株进行基因扩增特异性比较，同时应用该技术检测血液病患者痰液和血液中念珠菌。结果 基因扩增显示EO3 125bpDNA只有标准株和临床样本白色念珠菌阳性，细胞色素P450 L1A1 243bpDNA具有念珠菌种的特异性，临床血液和痰液标本检测阳性率显著提高，与临床病情一致。结论 血液病念珠菌感染基因扩增技术敏感性、特异性显著增强，而且耗时显著缩短，临床应用取得良好效果。     

氟康唑对念珠菌的体外抗菌活性

[目的]了解氟康唑对临床常见念珠菌的敏感性。[方法]对临床怀疑真菌感染的标本中分离出的念珠菌采用法国科玛嘉念珠菌显色培养基和自动微生物鉴定系统VITEK-60鉴定菌种,依据美国临床实验室标准委员会（NCCLS）酵母菌纸片扩散法敏感试验2003年版方案进行药敏试验。[结果]氟康唑对166株念珠菌的总敏感率为88．6％,其中白色念珠菌敏感率最高,为95．6％,其次是热带念珠菌,敏感率90．0%,克柔念珠菌敏感率仅14．3％。[结论]临床分离的常见念珠菌对氟康唑仍保持较高的抗菌活性,但不同的菌种对氟康唑敏感性存在差异。酵母菌纸片扩散法操作简便,可作为氟康唑耐药株检测的常规方法。     

临床标本的真菌培养和药敏分析

目的 研究本院真菌感染现状与耐药情况。方法 各种临床标本经分离培养，用ATB Expression细菌鉴定仪鉴定，采用ATB FUNGUS进行药敏试验。结果 13974份临床标本共分离真菌1535株，检出率为10．9％；分离真菌15种，白色念珠菌仍为主要菌种；各种真菌对6种抗真菌药物均出现了不同程度的耐药。结论 真菌感染在临床上呈上升趋势且产生了耐药株，临床微生物实验室不仅应做好真菌的分离培养鉴定，而且要对分离的菌株进行药敏试验，以指导临床合理选择抗真菌药物。     

福州地区女性阴道念珠菌病流行病学调查

[目的]了解福州地区女性阴道念珠菌病流行状况。[方法]采用科玛嘉念珠菌显色培养基和YBC平板对市皮肤病院门诊就诊患者阴道分泌物培养分离与菌种鉴定,按药敏结果治疗并分析。[结果]800例患者共分离到133株念珠菌(例),检出率16.6%,未发现2种以上念珠菌合并感染,合并性病感染55.6%。念珠菌中白色念珠菌占84.2%,光滑念珠菌9.0%,热带念珠菌占3.0%,克柔念珠菌占2.3%,其他念珠菌占1.5%。患者平均29.5岁。[结论]福州地区女性念珠菌性阴道炎以年青人为主,病原菌以白色念珠菌为主。