体外siRNA靶向抑制PI3Kp85α基因对人胃癌AGS细胞株的作用

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）技术沉默PI3Kp85α基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 设计3条靶向抑制PI3Kp85α基因的siRNA片段（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3）,分别转染人胃癌AGS细胞,并设阴性对照组及空白组。Western blotting检测siRNA序列对PI3Kp85α蛋白表达的影响。利用MTT实验、划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测下调PI3Kp85α水平对AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 转染siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3的AGS细胞中PI3Kp85α蛋白水平均低于阴性对照组及空白组（P＜0.05）。转染siRNA-3的AGS细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达80％,故选择siRNA-3进行后续实验。转染24h后,PI3Kp85α siRNA转染组细胞增殖能力明显低于对照组细胞（P＜0.05）。24h体外划痕实验显示,PI3Kp85α siRNA转染组的划痕愈合能力明显低于对照组（P＜0.05）。Transwell实验显示,PI3Kp85α siRNA转染组细胞的细胞穿膜数明显低于对照组（P＜0.05）。结论 通过siRNA能明显下调PI3Kp85α蛋白在胃癌细胞AGS中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

siRNA干扰蛋白质精氨酸甲基转移酶5表达对人胃癌SGC7901细胞增殖和克隆形成能力的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）表达后对人胃癌SGC7901细胞增殖和克隆形成能力的影响。方法 设计靶向抑制PRMT5表达的特异siRNA（siRNA-1、siRNA-2）,瞬时转染胃癌SGC7901细胞（干扰组）,同时设置转染无义序列的阴性对照组。在瞬时转染48 h后采用Western blotting实验评估siRNA对PRMT5的干扰效果;采用CCK-8法检测siRNA抑制PRMT5表达后胃癌SGC7901细胞的增殖情况;采用EdU法检测siRNA抑制PRMT5表达后胃癌SGC7901细胞的DNA复制情况;采用平板克隆形成实验检测siRNA抑制PRMT5表达后对胃癌SGC7901细胞克隆形成能力的影响。结果 在胃癌SGC7901细胞中,瞬时转染siRNA-1和siRNA-2后PRMT5蛋白的表达水平均显著低于阴性对照组（P＜0.01）,表明两个siRNA具有良好的干扰效果,可用于后续实验。与阴性对照组相比,PRMT5表达干扰后的胃癌SGC7901细胞增殖速率显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。转染siRNA序列后,PRMT5干扰组（siRNA-1和siRNA-2）的EdU阳性细胞百分比为（16.0±2.0）％和（19.5±3.0）％,远低于阴性对照组的（38.0±4.0）％,差异有统计学意义（P＜0.01）。PRMT5干扰组（siRNA-1和siRNA-2）的克隆形成数分别为（50±6）个和（68±7）个,远低于阴性对照组的（120±11）个,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 通过siRNA抑制PRMT5表达后可显著抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和克隆形成能力,为胃癌的临床治疗提供新的策略和理论依据。     

siRNA干扰TWSG1 基因表达对胃癌MGC-803 细胞增殖及凋亡的影响

[摘要] 目的：探讨扭转原肠胚形成同系物1 基因（twisted gastrulation protein homolog 1,TWSG1）对胃癌MGC-803 细胞增殖及凋亡的影响。方法：设计3 条TWSG1 基因相关的siRNA,将对数生长期MGC-803 细胞分为空白对照组、阴性对照组、siRNA1干扰组、siRNA2 干扰组和siRNA3 干扰组,待细胞汇合率达70%～80%时分别转染空载体、连接siRNA1、siRNA2 和siRNA3 的载体。采用qPCR 和Western blotting 检测各组细胞TWSG1 mRNA和TWSG1 蛋白的表达水平,筛选干扰效率最高的稳定细胞株。用CCK-8 法检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果：各转染组细胞中siRNA1 干扰效率最高。与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA干扰组细胞TWSG1 表达下调（P<0.05）,其细胞增殖显著增加（P<0.05）,凋亡显著减少（P<0.05）。结论：siRNA干扰MGC-803 细胞中TWSG1基因的表达后,可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。     

siRNA介导RRM2沉默对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响研究

目的：探讨小干扰RNA（siRNA）介导的核糖核苷酸小亚基M2（ribonucleotidereductaseM2,RRM2）沉默对顺铂（DDP）诱导的卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP敏感性的影响。方法：采用间歇浓度梯度递增法诱导SKOV3／DDP;将RRM2基因的特异性siRNA转染SKOVa／DDP细胞,另设空白组和SKOV3／DDP-RRM2-neg（阴性组）做为对照;荧光PCR技术和蛋白质印迹法分别检测转染后各组细胞中RRM2基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测RNAi对SK-0v3／DDP细胞药物敏感性的影响。结果：成功诱导出卵巢癌DDP耐药细胞株SKOV3／DDP细胞,其耐药系数达到3．6,属低度耐药,但对吉西他滨（Gem）仍敏感。DDP对干扰组、阴性组和空白组细胞48h的ICso分别为（3．00±0．11）、（9．88±0．37）和（10．35±0．03）μg／mL,3者间差异有统计学意义,P〈0．001。干扰组细胞对DDP的敏感度提高了约3倍,其RF为3．3。SKOV3／DDP-RRM2-RNAi667（I）组RRM2mRNA水平下调为74．1％,P=0．010;SKOV3／DDP-RRM2-RNAi480（1I）组RRM2ITIRNA水平下调为55．9％,P=0．016;SKOV3／DDP-RRM2-RNAill79（Ⅲ）组RRM2mRNA水平下调为43．1％,P=0．001。其中,以转染l组基因沉默率（82．33％）最高,P〈0．001;阴性组（0．0086％）与空白组（0．0082％）比较,差异无统计学意义,P=0．133。转染RRM2的不同靶序列72h后RRM2蛋白的表达量最低,I组为0．062±0．006,Ⅱ组为0．314±0．002,Ⅲ组为0．123±0．002,与阴性组（0．715±0．034）和空白组（0．516±0．040）比较均明显降低,但以转染I组细胞的蛋白相对表达量下降最明显,F=658．6,P=0．0033。Gem和DDP联合作用72h时,转染组细胞凋亡率为（96±3．0）％,与其各组比较,差异均有统计学意义,P值均〈0．001。结论：通过RNAi技术可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的转录和翻译水平,增加DDP耐药细胞的药物敏感性,并促进DDP诱导的卵巢癌耐药细胞凋亡,在-定程度上逆转DDP耐药性;RNAi技术联合Gem及DDP作用可有效提高卵巢癌DDP耐药细胞的凋亡率,有望成为铂类耐药的卵巢癌晚期患者-线治疗方案。     

ING4基因表达上调对卵巢上皮性癌OVCAR细胞顺铂耐药性的影响

目的：探讨ING4基因在表达上调的卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞系OVCAR细胞中对顺铂耐药性的影响。方法：脂质体介导的ING4-Ad及相应阴性对照片段转染人卵巢癌细胞OVCAR,实验分为3组：转染组、阴性对照组、空白对照组。实时荧光定量PCR技术检测3组细胞中ING4基因的表达;采用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定各组细胞增殖抑制率和绘制细胞生长曲线,集落形成实验测定细胞生长能力,检测3组细胞对顺铂的敏感性,及不同浓度顺铂和作用不同时间后3组细胞生长的抑制率和凋亡率及细胞周期变化。结果：转染组、阴性对照组及空白对照组OVCAR细胞中ING4的表达量分别为66.76±11.40、1.28±0.09、1.22     

Galectin-3表达抑制对BT-549细胞系增殖和凋亡影响观察

目的：观察抑制Galectin-3表达与BT-549细胞系增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为三阴性乳腺癌基因治疗方法的可行性。方法：设计并化学合成Galectin-3小干扰片段并顺势转染乳腺癌细胞系BT-549（为Galec—tin-3siRNA组）,以未转染细胞为空白对照,以转染阴性干扰为阴性对照,荧光倒置显微镜和实时定量PCR验证干扰结果,XTT方法观察干扰后24、48、72和96h各组细胞增殖吸光度（A值）,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,划痕实验和Tral2swell实验比较不同组间细胞迁移和侵袭情况,以上实验均重复3次。结果：空白对照组、阴性对照组和Galectin一3siRNA组Galectin-3mRNA相对含量分别为（0．078±0．003）、（0．069±0．004）和（0．015±0．001）,差异有统计学意义,F=486．97,P〈O．001。XTT法检测结果显示,同一组不同时间点之间差异有统计学意义,P值均〈O．00l;同一时间点各组之间差异亦有统计学意义,P值均〈O．001。随着时间推移,空白组和阴性对照组细胞继续生长,Galectin-3siRNA组细胞生长抑制,数量逐渐减少,干扰时间和实验分组之间存在交互效应,F=26．43,P〈0．001。流式细胞仪检测结果显示,Galectin-3siRNA组、空白对照组和阴性对照组凋亡率分别为（26．83±2．15）％、（2．73土0．18）％和（5．86土0．51）％,差异有统计学意义,F=24537．92,P〈0．00l。空白对熙组、阴性对照组和Galectin-3siRNA组愈合率分别为（91．47±4．39）％、（82．36土3．68）％和（52．26士1．95）％,差异有统计学意义,F=213．71,P〈0。001。转染Galectin-3siRNA的乳腺癌细胞浸润穿过Matrigel膜的细胞数（169．36±23．71）要比空白对照组（480．80土30．80）和阴性对照组（320．70±28．12）的细胞数显著减少,差异有统计学意义,F=115．20,P〈0．001。结论：Galectin-3siRNA成功转染入BT-549细胞,并抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低其迁移侵袭能力,为三阴性乳腺癌基因治疗提供实验依据。     

AKR1C1 在非小细胞肺癌的表达及功能分析

目的 探讨醛酮还原酶家族1成员C1（AKR1C1）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织和细胞株中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化SP法检测50例NSCLC组织芯片中肿瘤及癌旁组织中AKR1C1的表达。选取NCI-H460细胞分别转染AKR1C1 siRNA（AKR1C1干扰组）和AKR1C阴性对照siRNA（阴性对照组）慢病毒载体,Western blotting验证转染效率, MTT法、低密度细胞集落形成实验、Transwell实验和划痕试验检测干扰AKR1C1表达对细胞增殖、集落形成、侵袭能力的影响,同时另设空白对照组（未转染慢病毒）。结果 NSCLC组织中AKR1C1的高表达率为94.0％（47／50）,高于癌旁组织的6.0％（3／50）,差异有统计学意义（P＜0.05）。AKR1C1干扰组细胞中AKR1C1表达量较阴性对照组下调（P＜0.05）。MTT法显示AKR1C1干扰组与阴性对照组细胞增殖率无显著性差异（P＞0.05）;AKR1C1干扰组、阴性对照组和空白对照组NCI-H460细胞的克隆数分别为69.60±4.03、69.00±1.63和70.33±2.05,组间差异无统计学意义（P＞0.05）;Transwell实验显示,AKR1C1干扰组穿膜细胞数为15.30±2.50,低于阴性对照组的30.00±2.20和空白对照组的31.30±2.40,差异有统计学意义（P＜0.05）。划痕试验显示,AKR1C1干扰组细胞迁移相对距离为0.13±0.05,低于阴性对照组的0.56±0.05和空白对照组的0.60±0.08,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 AKR1C1在NSCLC组织中高表达,其可能与NSCLC转移相关。     

RNA干扰乙醛脱氢酶1A1表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 研究小RNA干扰乙醛脱氢酶1A1基因（ALDH1A1）表达对胃癌细胞生物学行为包括增殖、克隆形成和侵袭能力的影响。方法 构建表达ALDH1A1的siRNA的PGPU6／GFP／Neo-ALDH1A1真核细胞表达载体,转染人胃癌细胞系MKN-45细胞为实验组,同时设阴性对照组和空白对照组,Western blotting检测干扰ALDH1A1基因表达的效果。MTT法、克隆形成实验、Transwell 小室侵袭实验检测ALDH1A1表达下降后MKN-45细胞增殖、克隆形成和侵袭能力的情况。结果 Western blotting检测显示实验组MKN-45细胞ALDH1A1蛋白表达低于阴性对照组（0.36±0.04 vs. 0.72±0.08,P＜0.05）;MTT法显示实验组MKN-45细胞的增殖抑制率高于阴性对照组［（52.56±1.81）％ vs.（30.32±2.23）％,P＜0.05］;克隆形成实验显示实验组MKN-45细胞的克隆形成能力低于阴性对照组（21.67±2.00 vs. 36.78±3.53,P＜0.05）;Transwell 小室侵袭实验显示实验组胃癌细胞的侵袭能力低于阴性对照组（55.11±7.98 vs. 84.78±6.00,P＜0.05）。结论 通过RNA干扰技术可明显下调ALDH1A1蛋白在MKN-45细胞中表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力。ALDH1A1有望成为胃癌治疗的一个新的靶点。     

siRNA靶向抑制CDCA5基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制细胞分裂周期相关蛋白5（CDCA5）基因表达对人肝癌HepG2细胞株增殖及凋亡的影响。方法 优化siRNA转染条件,将3条靶向抑制CDCA5基因的siRNA载体片段（序列1、2和3）分别高效转染人肝癌HepG2细胞（A、B和C组）,并设阴性对照组（NC组）及空白组。免疫印迹法检测转染72h各组CDCA5蛋白的表达水平。CCK-8法检测转染24、48、72、96、120h各组细胞的增殖能力,Annexin V-FITC／PI 双标记流式细胞术检测各组转染48h的凋亡情况。结果 A、B和C组的CDCA5蛋白水平均低于NC组和空白组（P＜0.05）,其中B组的表达率最低,抑制率最高,达89.3％,故选择序列2进行后续实验。自转染48h起,B组的相对增殖率均低于NC组和空白组（P＜0.05）;B组转染72h的相对增殖率为（66.58±2.58）％,均低于其他观察时间点（P＜0.05）。B组转染48h的早期和晚期凋亡率分别为（17.43±2.31）％和（22.37±2.21）％,均高于NC组和空白组（P＜0.05）。 结论 通过siRNA能够降低HepG2细胞的CDCA5表达水平,有效抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。     

羧基末端结合蛋白1对肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的 研究羧基末端结合蛋白1（C-terminal binding protein1,CtBP1）对人肝癌细胞HepG2增殖的影响及机制。 方法 采用CtBP1 siRNA转染HepG2细胞,实验分为4个组：空白对照组、转染试剂对照组、阴性序列对照组与干扰组。于转染后不同的时间收集细胞,用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果 CtBP1 siRNA转染有效抑制了HepG2细胞中CtBP1蛋白表达,与空白对照组比较,转染后72 h后,CtBP1蛋白下调了57.80%。 CtBP1沉默后细胞生长受到抑制（P＜0.05）,转染后24、48、72、96 h生长抑制率分别为22.34%、52.15%、53.97%和54.77%;而对细胞周期分布无明显影响（P＞0.05）; 但CtBP1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。结论 CtBP1沉默能抑制HepG2细胞增殖,其机制是通过促凋亡来实现的。CtBP1能促进肿瘤生长和抑制凋亡,是潜在的肿瘤治疗靶点。     

YKL-40调控子宫内膜癌顺铂化疗耐药性的实验研究

目的 探讨沉默甲壳质酶蛋白 40（YKL-40）表达对子宫内膜癌顺铂（DDP）耐药细胞株Ishikawa／DDP的影响。方法 采用DDP长期浓度梯度递增法体外建立Ishikawa／DDP耐药细胞株，并检测多药耐药相关基因（MDR1）和Bcl-2、Bax和caspase-3的表达，采用MTT法检测Ishikawa细胞和Ishikawa／DDP细胞的增殖活性，计算半数抑制浓度（IC50）。Ishikawa／DDP分别转染NC阴性序列（NC组）和siRNA YKL-40（si-YKL-40组），另设未转染细胞作为对照组，采用MTT法、划痕实验和Annexin V／PE双染法检测DDP对si-YKL-40组Ishikawa／DDP细胞增殖、迁移能力和凋亡的影响。结果 体外成功建立Ishikawa／DDP耐药细胞株，3.125、6.25、12.5、25、50、100 μmol／L DDP对Ishikawa／DDP细胞的增殖抑制率分别为（6.93±2.45）％、（8.14±4.50）％、（11.37±4.62）％、（15.18±3.97）％、（26.29±5.08）％、（41.32±7.64）％，明显低于Ishikawa细胞（P＜0.05）。DDP对Ishikawa和Ishikawa／DDP的IC50分别为14.58 μmol／L和116.70 μmol／L，Ishikawa／DDP的耐药指数为8.004。QPCR检测结果显示，Ishikawa细胞YKL-40、MDR1、Bcl-2、Bax、caspase-3 mRNA表达量分别为0.82±0.15、0.43±0.11、1.05±0.23、1.17±0.20、0.96±0.18，而Ishikawa／DDP细胞分别为1.87±0.40、2.34±0.46、1.52±0.28、0.72±0.21、0.49±0.17，差异有统计学意义（P＜0.05）。3.125、6.25、12.5、25、50、100 μmol／L DDP对si-YKL-40组细胞的增殖抑制率分别为（10.95±2.74）％、（18.73±5.30）％、（32.79±5.47）％、（52.28±6.58）％、（61.73±5.26）％、（65.45±7.33）％，明显高于对照组和NC组，差异有统计学意义（P＜0.05）。DDP对si-YKL-40组细胞的IC50为22.19 μmol／L。与对照组和NC组比较， si-YKL-40组细胞凋亡率升高、愈合率下降；YKL-40、MDR1、Bcl-2蛋白表达量下调， Bax和caspase-3蛋白表达量上调，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 沉默YKL-40可显著提高Ishikawa／DDP细胞株对DDP的敏感性，并促进细胞凋亡，其具体机制可能与下调MDR1、Bcl-2表达，及上调Bax和caspase-3表达有关。     

光辉霉素对胃癌细胞周期、凋亡的影响及可能机制

目的 探讨光辉霉素（MTM）对胃癌细胞周期、凋亡的影响及可能的机制。方法 体外培养胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-28、AGS和正常胃黏膜GES-1细胞，采用实时荧光定量（QPCR） 和Western blotting检测SP1 mRNA和蛋白表达。0、25、50、100 nmol／L MTM处理BGC-823细胞24 h，QPCR和Western blotting检测SP1、p53、p21 mRNA和蛋白表达。流式细胞术检测50 nmol／L MTM处理BGC-823细胞周期和凋亡的变化。结果 QPCR检测胃癌BGC-823、 SGC-7901、MKN-28、AGS细胞系中SP1 mRNA表达量为6.12±0.15，5.42±0.24，3.33±0.21，3.01±0.12，均显著高于GES-1细胞（P＜0.05）；Western blotting检测SP1 蛋白表达与mRNA表达一致。0、25、50、100 nmol／L MTM处理BGC-823细胞，SP1 mRNA和蛋白表达逐渐降低， p53、p21 mRNA和蛋白表达逐渐升高。50 nmol／L MTM组SP1表达量最低（mRNA：0.48±0.12；蛋白：0.28±0.09）， p53表达量最高（mRNA：5.37±0.45；蛋白：1.29±0.20）；100 nmol／L MTM组p21表达量最高（mRNA：4.92±0.53；蛋白：0.86±0.15）；与0 nmol／L MTM组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。流式细胞术结果显示，50 nmol／L MTM组BGC-823细胞G0／G1比例为（63.71±2.14）％和凋亡率为（24.68±1.09）％，均明显高于0 nmol／L MTM组［（57.39±1.83）％和（9.23±0.75）％］，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 MTM通过降低SP1、上调p53、p21表达水平来增加胃癌细胞周期阻滞，诱导凋亡。     

miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

异隐丹参酮对胃癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨异隐丹参酮（ICTS）对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖、周期、凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901,采用0、5、10、20 μmol／L ICTS处理24、48、72 h后, CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;确定ICTS抑制BGC-823和SGC-7901细胞的最佳浓度和最佳作用时间后,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡率。Western blotting检测ICTS处理后胃癌细胞中Cyclin D1、Bcl-2、p53、p21蛋白的表达。结果 0、5、10、20 μmol／L ICTS处理BGC-823细胞24 h的增殖抑制率分别为（0.789±0.048）％、（16.74±1.55）％、（33.58±2.26）％、（54.62±2.61）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）;0、5、10、20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24 h的增殖抑制率分别为（-0.184±0.023）％、（12.76±1.73）％、（32.95±2.47）％、（53.80±2.65）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS 处理BGC-823细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（54.62±2.61）％、（55.08±2.35）％、（59.72±2.53）％,差异无统计学意义（P＞0.05）;20 μmol／L ICTS 处理SGC-7901细胞24、48、72 h的增殖抑制率分别为（53.80±2.65）％、（55.76±2.47）％、（61.83±2.82）％,差异无统计学意义（P＞0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后G0／G1期细胞比例为（78.34±7.13）％和（79.57±7.34）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。ICTS处理组BGC-823、SGC-7901凋亡率分别为（24.78±3.42）％和（28.76±4.21）％,均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。20 μmol／L ICTS处理BGC-823、SGC-7901细胞24 h后Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达量均显著低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;p53和p21蛋白表达量显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ICTS通过增加p53、p21表达,降低Cyclin D1和Bcl-2表达,进而抑制细胞增殖,增加细胞G0／G1阻滞和凋亡,发挥抗胃癌的作用。     

miRNA-93对结肠癌HT-29细胞株化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-93与结肠癌HT-29细胞株对氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的影响及可能机制。方法 miR-93抑制物转染HT-29细胞,同时设置空白对照组和阴性对照组（NC）,采用MTT法检测细胞增殖活性。流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验和划痕实验分别检测miR-93抑制物组、空白对照组和NC组HT-29细胞凋亡、侵袭和迁移。双荧光素酶报告实验验证PTEN与miR-93的关系。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测3组细胞miR-93表达,以及对p-VEGFR2、p-Akt、PTEN mRNA表达的影响。结果 miR-93抑制物组中miR-93的相对表达量为0.40±0.05,显著低于空白对照组和NC组的1.13±0.08、1.12±0.09,差异有统计学意义（P＜0.05）。经1、4、16、64、256 μg／ml的5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞的增殖抑制率高于同浓度下NC组和空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。经16 μg／ml 5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞凋亡率、侵袭率和愈合率分别为（52.75±7.44）％、（45.76±15.85）％、（12.64±3.29）％,与空白对照组和NC组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验分析PTEN可能是miR-93的下游靶基因。miR-93抑制物组p-VEGFR2、p-Akt和PTEN表达水平分别为1.28±0.09、0.85±0.08、1.22±0.09,与空白对照组和NC组比较,VEGFR2和Akt磷酸化水平下调,PTEN表达上调。结论 下调miR-93可以增加PTEN的表达,抑制VEGFR-2和Akt磷酸化水平,从而提高结肠癌细胞对5-FU的敏感性。     

CXCL12对宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验研究

目的 探讨趋化因子12（CXCL12）在调控宫颈癌放疗敏感性中的作用。方法 采用阳离子脂质体法将CXCL12 siRNA转染至宫颈癌HeLa细胞（siRNA转染组）,另设置空白对照组和阴性对照组。采用不同剂量（4、8 Gy）照射上述各组HeLa细胞, CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法和实时荧光定量PCR（QPCR）检测CXCL12表达变化,流式细胞仪检测CD44表达。结果 接受4 、8 Gy照射后siRNA转染组的细胞存活率分别为62.0％和44.0％,低于阴性对照组的79.0％和59.0％,差异有统计学意义（P＜0.05）;接受4 、8 Gy照射后siRNA转染组的细胞凋亡率分别为28.0％和51.0％,高于阴性对照组的21.0％和39.0％,差异有统计学意义（P＜0.05）。接受4 、8 Gy照射后siRNA转染组的CD44蛋白表达量为1.33±0.02和1.40±0.01,低于阴性对照组的1.55±0.02和1.85±0.02,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 沉默CXCL12可通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡来增加宫颈癌细胞的放射敏感性,CXCL12可能为宫颈癌放疗提供新的增敏靶点。     

索拉非尼、奥沙利铂单药及不同联合方案对人肝癌细胞HepG2的抑制作用

【摘 要】目的 探讨索拉非尼、奥沙利铂单药和两药联合应用对人肝癌细胞株HepG2增殖、迁移和侵袭的影响。方法 选择人肝癌细胞株HepG2并分为6组处理：奥沙利铂（0.5 μg／ml）组（O）、索拉非尼（2.0 μmol／L）组（S）、同时联合用药（奥沙利铂 0.5 μg／ml,索拉非尼2.0 μmol／L）组（O+S）、奥沙利铂（0.5 μg／ml）序贯索拉非尼（2.0 μmol／L）组（OS）、索拉非尼（2.0 μmol／L）序贯奥沙利铂（0.5 μg／ml）组（SO）和加入100 μl普通培养液的阴性对照组（C）;分别采用MTT法、流式细胞术、免疫荧光技术、迁移与侵袭实验,观察奥沙利铂、索拉非尼单药和两药联合应用对HepG2细胞增殖、侵袭与转移的作用。结果 MTT法显示,48 h后用药组对HepG2细胞增殖均有显著的抑制作用,O+S组的细胞抑制率最高,为（72.13±0.99）％,均明显高于O组、S组和SO组（P＜0.01）,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;流式细胞术及荧光显微镜观察显示,O+S组处理HepG2细胞48 h的凋亡率最高,达65.33％,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;细胞迁移实验表明,O+S组的细胞迁移抑制率为（71.67±6.66）％,均明显高于O组、S组和SO组（P＜0.01）,但与OS组的差异无统计学意义（P＞0.05）;O+S组和OS组均表现为两药协同作用（P＜0.01）,SO组则表现为两药相加作用（P＜0.05）。细胞侵袭实验表明,O+S组的细胞侵袭抑制率为（76.00±5.57）％,明显高于O组、S组（P＜0.01）;O+S组与OS组均表现为两药协同作用。结论 同时联用奥沙利铂和索拉非尼或序贯应用两药较其各自单药对人肝癌HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭抑制作用更强,其中先用奥沙利铂序贯索拉非尼与同时联用奥沙利铂和索拉非尼的协同增效作用相似,均优于先用索拉非尼序贯奥沙利铂。