分泌独特型免疫球蛋白BALB/c小鼠B细胞淋巴瘤模型的建立

目的： 构建分泌独特型免疫球蛋白(idiotype, Id) 的BALB/c小鼠B细胞淋巴瘤细胞株，建立动物模型，为进一步开展Id树突状细胞(dendritic cell, DC)疫苗的免疫治疗提供物质基础。 方法： 采用降植烷和不完全弗氏佐剂间隔致敏6～8周龄BALB/c小鼠，继而采用细胞融合技术、ELISA法、免疫荧光标记和流式细胞术(flow cytometry, FCM) 筛选获得分泌Id的阳性克隆；体内诱生腹水和体外无血清培养法制备Id，优球蛋白沉淀法结合凝胶Suphecray200过滤纯化Id；建立荷瘤模型，从荷瘤小鼠骨髓前体细胞诱导DC。 结果：获得2株稳定分泌Id的BALB/c小鼠B细胞淋巴瘤细胞SB4和SB5，Id均为IgM/κ；成瘤率均为100%，荷瘤小鼠平均生存期为（30±4） d。 结论： SB4和SB5能持续稳定分泌非自身反应性Id，具有良好的成瘤性和高转移率。     

体外CIK细胞分泌细胞因子水平动态观察

目的：探讨CIK细胞在培养诱导过程中分泌的细胞因子水平。方法：Ficoll分离人脐血获得单个核细胞，体外经IL-1、IL-2、IFN-γ、OKT3诱导分化为CIK细胞，流式细胞仪鉴定其表型及细胞增殖情况，ELISA检测其分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF—α水平。结果：CIK的主要效应细胞CD；CD56细胞大量增殖，其相对百分率增长147倍（从0．21％到31％），绝对数增殖倍数为678．7倍，增殖高峰期在第12天。CIK细胞能分泌IL-2、IFN-γ、TNF—α，从第4天开始稳定分泌，分泌IL-2的高峰期在第12天，而IFN-γ、TNF—α分泌高峰在第17天。结论：CIK细胞能分泌多种细胞因子，发挥免疫调节作用。     

人——鼠杂交瘤制备抗肿瘤人单抗的研究:一株分泌抗肿瘤相关抗原人单抗杂交瘤的建立

本文用人-鼠杂交技术获得一株稳定分泌人单抗的人-鼠杂交瘤HMG-1,并对其有关特性进行了研究。 取自一例胃腺癌患者引流区淋巴结分离的淋巴细胞与NS-1融合。获得一株分泌人IgM杂交瘤,经三次克隆化,迄今体外连续培养已近8个月仍继续稳定     

Serglycin稳定干扰对鼻咽癌高转移细胞顺铂敏感性的影响及机制研究

目的：观察鼻咽癌高转移细胞5－8f的顺铂敏感性受Serglycin稳定干扰的影响，并对干扰机制进行初步探究。方法：建立Serglycin 稳定干扰的鼻咽癌高转移细胞株，分为三组：实验组5－8f KDA和5－8f KDC及对照组5－8f scrambled。测定Serglycin蛋白的表达情况；观察亲代及稳定株细胞形态；MTT法检测吸光度，绘制顺铂作用下的增殖曲线；测定细胞存活率；测定干细胞基因表达量；测定Vimentin 与 E－cadherin 含量。结果：实验组Serglycin基因表达被抑制，对照组Serglycin基因表达较多，差异具有统计学意义（P＜0．05）。实验组的分泌性Serglycin蛋白明显减少，对照组的Serglycin分泌蛋白表达较多。稳定组细胞形态呈圆形或多边形，对照组细胞为长梭形。MTT检测发现癌细胞受顺铂作用后第三天开始，对照组细胞吸光度增加较稳定组细胞明显快，差异有统计学意义（P＜0．05）。与5－8f scrambled组相比，实验组的细胞存活率明显下降，差异具有统计学意义（P＜0．05）。稳定组细胞干细胞基因表达明显降低，差异具有统计学意义（P＜0．05）。肿瘤组织中 Serglycin 能促进Vimentin 蛋白的表达，抑制E－cadherin 蛋白的表达。结论：Serglycin 稳定干扰可以增加鼻咽癌高转移细胞对顺铂的敏感性。     

LASS2基因抑制HCCLM3肝癌细胞的转移

目的：探讨LASS2基因对HCCLM3肝癌细胞转移的影响。方法：Northern blot分析高转移潜能肝癌细胞系HCCLM3和低转移潜能肝癌细胞系MHCC97-L中LASS2基因的mRNA水平。构建包含LASS2基因编码框的真核表达载体pCMV—HA2-LASS2，通过脂质体转染HCCLM3细胞，经G418筛选，建立稳定表达LASS2基因的HCCLM3细胞株。通过分析LASS2在HCCLM3中过表达后，HCCLM3细胞在迁移、侵袭等转移能力上的改变，Western blot、明胶酶谱及原位酶谱分析MMP-2合成、分泌、激活的变化。结果：Northern blot显示，HCCLM3细胞中LASS2基因的表达水平低于MHCC97-L细胞。当LASS2基因过表达后，HCCLM3细胞的迁移及侵袭能力受到显著抑制（P〈0．001），虽然细胞内MMP-2的合成未改变，但细胞MMP-2的分泌及MMP-2的激活均受抑制。结论：LASS2基因可下调MMP-2的分泌及激活，可使肝癌细胞HCCLM3的转移能力受到明显抑制，提示LASS2基因对肝癌细胞HCCLM3的转移具有抑制作用。     

人结肠高分化腺癌裸小鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性

将人结肠高分化腺癌手术标本，接种于裸小鼠体内建成移植瘤ＴＨＣＮ－８９０１，已传１４代，历时２年多，生长稳定，可移植性成功率高。组织学及超微结构形态观察，均保持了原病人肿瘤的结构，并且有分泌功能，染色体分析证实为人染色体，众数在６３～９４之间，该瘤株具有稳定产生ＣＥＡ的生物学特性，用＾１１１Ｉｎ－ＣＥＡＭｃＡｂ能使裸小鼠移植瘤清晰显像。此瘤株的建立为结肠癌癌变基础及实验性基因治疗研究，提供了较为理想     

分泌肿瘤坏死因子的基因工程细胞对HepG2细胞的抑制作用

目的自行建立分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞,将其与肝癌细胞共培养,观察体外培养中分泌肿瘤坏死因子hTNF/293基因细胞表达的情况及对人肝癌细胞的抑制作用。方法(1)建立可稳定分泌人肿瘤坏死因子α/293细胞;采用RT-PCR、Western blot、ELISA和流式细胞仪等技术检测人肿瘤坏死因子表达和分泌;(2)观察体外培养中分泌肿瘤坏死因子hTNF/293基因细胞对人肝癌细胞的抑制作用,于不同的时间点,用MTT法检测490 nm下的吸光度值。结果RT-PCR、Western blot和ELISA等技术检测表明hTNFα/293 细胞组和TNFα阳性组对共培养的HepG2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且具有良好的量效关系。结论提示TNF-α/293基因细胞可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外;体外培养的人肿瘤坏死因子基因的工程细胞,所分泌肿瘤坏死因子α对人肝癌细胞增殖有明显抑制效应,且呈现出良好的数量依赖关系。     

鼻咽癌放射治疗后分泌性中耳炎的临床观察

目的 探讨鼻咽癌患者放射治疗后分泌性中耳炎的发生，寻找有效的防治措施。方法 观察104例（208只耳）鼻咽癌患者放疗前后分泌性中耳炎的发生。结果 鼻咽癌患者放疗后分泌性中耳炎的发生率为44.1%(64/145只耳），放冶后6个月，分泌性中耳炎的发生率达高峰，为50.1%(33/64只耳）。放疗所致分泌性中耳炎与电离辐射对中耳的直接损伤和放疗前中耳负压升高有密切关系。结论 改进放射治疗设野技术，使用有效药物，采取鼓膜置管和鼓膜切开等方法对防治分泌性中耳炎的发生有一定用处，但其耳瘘发生率很高。     

2型糖尿病胰岛素双相分泌的研究进展

2型糖尿病的发病机制是胰岛素（INS）抵抗和INS分泌缺陷。研究表明，糖尿病患者出现高血糖之前已有INS分泌改变，胰岛β细胞分泌功能异常主要包括第一和第二时相的异常以及胰岛β细胞脉冲分泌缺陷。二相的INS分泌在维持正常血糖稳态中起重要作用，并具有重要的临床意义。     

结肠癌单克隆抗体MC3、5、7、10的制备及其相应抗原免疫组化定位的研究

本文报导用结肠癌转移淋巴结分离之癌细胞免疫小鼠制得4株单克隆抗体即MC 3、5、7、10。杂交瘤细胞已经过150余天的连续培养,至今分泌抗体稳定,抗体效价高。能直接用于福尔马林固定石蜡包埋的切     

抗前列腺癌多肽APP216的体外活性

目的：探讨抗前列腺癌多肽APP216对体外培养的前列腺癌细胞的杀伤作用，为抗前列腺癌新药的研究奠定基础。方法：利用MTT实验、细胞凋亡染色及流式细胞仪，检测包含有BH3、K237、DG2结构域和能被PSA特异性水解的短肽序列的多肽药物APP216对分泌PSA的前列腺癌细胞系LNCaP、22RV1及不分泌PSA的前列腺癌细胞系PC3m、DU145的杀伤作用。结果：APP216（270 μg／mL）处理48h后，前列腺癌细胞系LNCaP、22RV。的细胞生存率分别为22％和34％，72h后为10％和8％；前列腺癌细胞系PC3m、DU145的细胞生存率分别为90％和95％，72h后为87％和92％。APP216作用后，分泌PSA的前列腺癌细胞胞核呈致密浓染，或呈碎块状，有凋亡小体出现；不分泌PSA的PC3m细胞则未发现改变。APP216（270 μg／ml）处理48h后，分泌PSA的LNCaP细胞凋亡率为36．26％，不分泌PSA的PC3m细胞凋亡率仅为1．63％。结论：APP216多肽对分泌PSA的前列腺癌细胞有杀伤作用，可诱导肿瘤细胞发生凋亡；而对于不分泌PSA的前列腺癌细胞则效果不佳。证实了该多肽可被PSA特异性酶切；同时，BH3结构域可通过HIV-TAT的转导作用转入细胞内诱导凋亡。     

Canstatin分泌增强体系的建立及其抗肺癌作用

目的:评估canstatin分泌增强体系在不同氧条件下的生物学效应,观察其对裸鼠肺癌模型的抗肿瘤作用。方法:基因重组技术构建canstatin分泌型载体,将其转染肿瘤细胞观察其在不同氧条件下的canstatin mRNA表达量,稳定转染的肺癌细胞与人脐静脉内皮细胞混合培养,观察混合培养对内皮细胞增殖、凋亡的效应。建立裸鼠肺癌移植瘤模型,将此体系转染荷瘤裸鼠,观察其对裸鼠移植瘤血管生成的作用,及肿瘤体积重量等指标,评估其抗肺癌效果。结果:成功构建canstatin缺氧增强分泌体系。缺氧条件下其转染的肺腺癌A549细胞canstatin mR-NA的表达显著增加。其稳定转染的A549细胞与人脐静脉内皮细胞HUVEC混合培养可使HUVEC生长增殖缓慢并大量凋亡,此体系转染的裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤重、瘤体积及血管生成均显著低于对照组。(P<0.01)。结论:canstatin分泌增强体系在缺氧条件下能显著增加目的基因表达量及其生物学效应,并具有显著抑制肺癌生长和血管生成的作用。     

抗人肺腺鳞癌单克隆抗体的研制

将人肺腺癌细胞ＳＰＣ、Ａ５４９、Ａ４２７序贯免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合。获得一株稳定分泌抗肺腺鳞癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株──Ｓ５Ａ１０─２，制备了小鼠腹水抗体并进行了纯化，腹水效价为１．０２×１０７，亚型测定为ＩｇＧ１．免疫组化分析ｓ５Ａ１０－２单抗与肺腺、鳞癌和肺鳞癌有较好的选择反应性，与正常组织无交叉反应，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ测定Ｓ５Ａｌ０─２在ＳＰＣ细胞膜上的抗原分子量为４０Ｋｄ、５０Ｋｄ和８０Ｋｄ，在Ａ５４９，细胞膜上的抗原分子量为４３Ｋｄ，而与Ａ４２７细胞膜蛋白无明显反应。该抗体的亲和常数为８．４３×１０１０Ｍ－１，Ｓ５Ａ１０－２杂交瘤细胞株，经液氮冻存后复苏，其分泌抗体能力不受影响。     

体外CK细胞分泌细胞因子水平动态观察

目的:探讨CIK细胞在培养诱导过程中分泌的细胞因子水平。方法:Ficoll分离人脐血获得单个核细胞,体外经IL-1、IL-2、IFN-γ、OKT3诱导分化为CIK细胞,流式细胞仪鉴定其表型及细胞增殖情况,ELISA检测其分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α水平。结果:CIK的主要效应细胞CD3 CD5 6细胞大量增殖,其相对百分率增长147倍(从0·21%到31%),绝对数增殖倍数为678·7倍,增殖高峰期在第12天。CIK细胞能分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α,从第4天开始稳定分泌,分泌IL-2的高峰期在第12天,而IFN-γ、TNF-α分泌高峰在第17天。结论:CIK细胞能分泌多种细胞因子,发挥免疫调节作用。     

胃肠神经内分泌肿瘤诊治现状

胃肠神经内分泌肿瘤起源于胃肠神经内分泌细胞，能分泌多种激素，可引发相应的临床症状。多数神经内分泌肿瘤以瘤细胞分泌的活性物质命名，是一组异质群。这类肿瘤在其激素合成机制、超微结构等方面有着密切关系，但在形态学、内分泌活性和生物学行为等方面存在明显差异。胃肠神经内分泌肿瘤可为正分泌性（激素分泌量高于正常）或异位分泌性（分泌的激素并非源于肿瘤细胞），也可为非功能性的，或是形态学上虽然证实为肿瘤性神经内分泌细胞，但并不呈现相应的临床表现。正分泌性肿瘤的恶性度低于异位分泌性肿瘤。手术切除是可治愈神经内分泌…     

抗人胃癌3H11人-鼠嵌合抗体的构建及表达

为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重链表达载体。应用Lipofectin方法先将嵌合轻链表达载体转染到Sp2/0细胞中,经用含霉酚酸的选择培养基筛选及克隆化培养,获得稳定分泌3H11人-鼠嵌合轻链的转染细胞株。再将嵌合重链表达载体转染该细胞系,用含有组氨醇的选择培养基筛选,获得组氨醇抗性细胞株,经亚克隆后得到可稳定分泌人k链和人IgGl的转染细胞系,经ELISA检测该细胞系所分泌的上清含有可与人胃癌细胞系803结合的人IgG抗体活性,RT-PCR结果显示该细胞株有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录,证明已获得分泌3H11人-鼠嵌合抗体的细胞系。     

大肠癌和癌旁粘膜中胃泌素,生长抑素变化的研究

临床观察大肠癌和癌旁粘膜中胃泌素，生长抑素及其分泌细胞的变化 ，探讨病人体内胃泌素、ＳＳ变化的原因和意义。方法：采用放射免疫法测定２６例大肠癌病人肿瘤和癌旁粘膜中胃泌素，生长抑素水平，并对其分泌细胞行免疫细胞化学观察。     

体内诱导巨噬细胞分泌细胞毒因子对肿瘤肺转移的控制

活化的巨噬细胞(Mφ)可通过分泌细胞毒因子(CF)介导杀伤多种肿瘤细胞。肺内富含肺泡巨噬细胞(AM)，如果提供某种信号，有效活化AM并诱导其分泌大量的CF，对转移瘤可能会有控制作用。BCG、康赛宁(A群溶血壮链球菌弱毒株菌苗)均可激活Mφ，本研究旨在探讨使用这两种激活剂合并rIL-2在体内诱导AM分泌CF的可能以及对肿瘤肺转移的抑制作用。     

减重手术改善代谢的机制

减重手术是治疗肥胖及相关合并症的有效措施。减重手术改善代谢的机制尚不十分明确。减重术式造成的胃肠 道解剖结构改变是术后代谢改善的基础，通过限制食物摄入、减少食物吸收来降低患者体重、改善代谢。此外，术后胃肠道激 素胰高血糖素样肽‑1、YY肽的分泌增加和生长激素释放肽分泌减少可抑制胃肠道蠕动、消化液分泌减少、摄食减少；术后可引 起胆汁酸的增加和肝肠循环的缩短；术后肠道菌群中的厚壁菌减少、变形菌和拟杆菌增加可引起体内脂肪储备下降、脂肪酸结 构改变；术后脂肪因子瘦素分泌减少导致摄食减少，脂联素分泌增加可改善胰岛素敏感性；术后中枢神经系统的改变可降低食 物奖赏反应活性，减少摄食。以上这些改变均能改善术后的代谢状况。而且减重术后代谢改善的原因不是单一方面的作用， 是相互影响、共同变化的结果。本文就目前关于减重手术改善代谢相关机制的研究进展做简要综述。     

AS2O3对多发性骨髓瘤细胞凋亡及其对自分泌VEGF的影响

目的研究三氧化二砷(AS2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3凋亡及其对自分泌VEGF的影响。方法不同浓度AS2O3分别作用于KM3细胞24、48及72小时，用锥虫蓝拒染法检测细胞生长抑制率，经形态学(光镜，透射电镜)和DNA电泳观察KM3细胞凋亡；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液上清血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果AS2O3可抑制KM3细胞的生长，诱导KM3细胞凋亡；AS2O3对KM3细胞白分泌VEGF的抑制作用具有代偿机制，且与时间浓度有关。24小时时，随着AS2O3浓度的增加，VEGF分泌逐渐增强；48和72小时时，随着AS2O3浓度的增加，VEGF分泌则先上升后下降。结论AS2O3可诱导MM细胞凋亡，同时可抑制MM细胞自分泌VEGF。