脂质体介导VEGF反义寡核苷酸对肺癌微血管密度及VEGF表达的抑制作用

背景与目的血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在肿瘤的血管形成和瘤细胞浸润等生物学行为中发挥了重要作用。本研究的目的是探讨脂质体介导的VEGF反义硫代寡核苷酸对C57BL/6小鼠Lewis肺癌微血管密度及VEGF表达的抑制作用。方法40只C57BL/6小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞后,随机分为4组:VEGF反义寡核苷酸组(ASODN)、VEGF正义寡核苷酸组(SODN)、VEGF错义寡核苷酸组(MODN)及对照组,前三组分别皮下注射经脂质体包裹的ASODN、SODN及MODN进行治疗,对照组只注射脂质体,每周2次,连续4周。观察各组小鼠肿瘤的生长情况,测量肿瘤体积。光学显微镜和电子显微镜下观察肿瘤组织形态学改变及超微结构变化。免疫组化及RT-PCR法检测微血管密度、VEGF蛋白及VEGFmRNA表达水平。结果对照组瘤重为(7.83±0.78)g,ASODN组瘤重为(4.49±0.43)g(P<0.01);SODN组瘤重为(7.73±0.69)g,MODN组为(7.78±0.75)g,与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ASODN组、SODN组、MODN组抑瘤率分别为42.6%、5.1%、3.2%。ASODN组VEGF蛋白、VEGFmRNA表达水平和MVD均明显低于对照组、SODN组及MODN组(P<0.01)。结论肿瘤原位注射反义VEGF硫代寡核苷酸能降低肺癌微血管密度及VEGF的表达,进而抑制肿瘤的生长。     

VEGF反义寡核苷酸对Lewis肺癌细胞的抑制作用

目的:〖HT5"SS〗 探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）反义寡核苷酸对C57BL/6小鼠肺癌细胞的抑制作用。〖HT5W〗方法:〖HT5"SS〗 制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型40只,分为VEGF反义寡核苷酸（ASODN）治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组、VEGF错义寡核苷酸（MODN）治疗组及对照组。接种Lewis肺癌细胞后24 h内,用ASODN、SODN及MODN皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况以及组织形态学改变,标本常规石蜡切片,HE染色,用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达。〖HT5W〗结果:〖HT5"SS〗 对照组、ASODN组、SODN组、MODN组平均瘤重分别为（7.33±0.71）g、（4.56±0.38）g、(7.59±0.32)g和（7.62±0.39）g,ASODN组、SODN组、MODN组抑瘤率分别为43.8%、5.5%、3.1%。光镜下观察, VEGFASODN 能明显抑制肿瘤细胞生长,降低增殖活性。 免疫组化结果表明,ASODN组VEGF的表达水平明显低于SODN组、MODN组及对照组（P<0.05）。CD34免疫组化结果表明,ASODN组MVD为8.25±2.12,与对照组(14.78±3.51)、SODN组(13.71±3.62)及MODN组(12.81±2.56)比较,ASODN组MVD明显减少（P<0.01）。〖HT5W〗结论: 〖HT5"SS〗原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长。     

硫代修饰脂质体包裹反义VEGF寡核苷酸对肺癌血流的影响

目的：探讨硫代修饰脂质体包裹的反义VEGF寡核苷酸对肺癌血流的抑制作用。方法：40只C57BL／6小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞后，随机分为4组：VEGF反义寡核苷酸组（ASODN）、VEGF正义寡核苷酸组（SODN）、VEGF错义寡核苷酸组（MODN）及对照组。接种24h内，4组小鼠分别皮下注射经脂质体包裹的ASODN、SODN及MODN进行治疗，对照组只注射脂质体，每周2次，连续4周。观察各组小鼠肿瘤的生长情况，超声检测肿瘤血管的收缩期峰值速度（Ps）及阻力指数（砌），原位杂交法及RT—PCR法对肿瘤内VEGFmRNA表达水平进行检测。结果：ASODN组小鼠肿瘤生长受到显著抑制，PS、RI与其它各组相比有明显差异（P〈0．01），VEGF mRNA表达水平亦有明显降低。结论：硫代反义VEGF寡核苷酸能明显抑制肺癌血流，从而抑制肿瘤生长。     

端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制裸鼠移植瘤生长的研究

背景与目的许多研究已证明:端粒酶的激活在肺癌的发生、发展中具有重要作用,因而成为肺癌基因治疗的重要靶点之一。本研究旨在探讨针对人端粒酶RNA成分的反义寡核苷酸对裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法应用人肺腺癌细胞株A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,18只荷瘤裸鼠随机分为反义寡核苷酸组(Antisense Oligodeoxynucleotide Group,Group ASODN)、正义寡核苷酸组(Sense Oligodeoxynucleotide Group,Group SODN)和生理盐水对照组(Normal Saline Group,Group NS),每组6只,瘤体内分别注射反义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物、正义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物和生理盐水,均为每日1次,共14次,观察移植瘤的生长情况。结果反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组的体积抑瘤率分别是43.94%、6.91%,统计学检验有非常显著性差异(t=6.17,P<0.001)。治疗过程中裸鼠对药物耐受良好,无恶心、呕吐等消化道症状,未见皮下出血,治疗结束时各组裸鼠的体重较治疗开始时略有增加。结论瘤体内注射脂质体包封的端粒酶RNA的反义寡核苷酸能够明显抑制裸鼠体内移植瘤的生长。     

hTERT反义寡核苷酸对脊索瘤细胞周期及增殖的影响

目的:探讨hTERT反义寡核苷酸(ASODN)抑制CM-319细胞端粒酶活性对脊索瘤细胞的细胞周期及增殖的影响。方法:用脂质体介导hTERT正义寡核苷酸(SODN)和反义寡核苷酸(ASODN)转染CM-319脊索瘤细胞株72小时后,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化。结果:hTERT的ASODN转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测显示:ASODN组细胞出现早期凋亡峰,细胞阻滞于S期,而hTERT的SODN则无此作用。ASODN组细胞凋亡率为16.01%,而hTERT的SODN组为2.3%。结论:端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制脊索瘤细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

反义寡核苷酸对 Lewis肺癌细胞合成VEGF的抑制作用

背景与目的 血管内皮生长因子(VEGF)是一种特异地作用于血管内皮细胞的生长因子,它能促进血管内皮细胞增殖及新生血管的生成.本研究的目的是探讨脂质体介导的VEGF反义硫代寡核苷酸(ASODN)对培养的Lewis肺癌细胞合成VEGF的影响.方法 将经脂质体包裹并经部分硫代修饰后的VEGF ASODN、正义寡核苷酸(SODN)加入培养的Lewis肺癌细胞中,采用RT-PCR技术和免疫组织化学SP法检测肺癌细胞中VEGF mRNA和VEGF蛋白表达,同时测定各上清液刺激下血管内皮细胞生长的受抑情况.结果 VEGF ASODN能明显抑制Lewis肺癌细胞VEGF mRNA和VEGF蛋白表达,而且可以显著抑制内皮细胞的生长.结论 VEGF ASODN能抑制肺癌细胞表达VEGF,可以成为肺癌基因治疗的一种新的途径.     

hTERT反义寡核苷酸对脊索瘤细胞周期及增殖的影响

目的：探讨hTERT反义寡核苷酸（ASODN）抑制CM-319细胞端粒酶活性对脊索瘤细胞的细胞周期及增殖的影响。方法：用脂质体介导hTERT正义寡核苷酸（SODN）和反义寡核苷酸（ASODN）转染CM-319脊索瘤细胞株72小时后,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化。结果：hTERT的ASODN转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测显示：ASODN组细胞出现早期凋亡峰,细胞阻滞于S期,而hTERT的SODN则无此作用。ASODN组细胞凋亡率为16.01%,而hTERT的SODN组为2.3%。结论：端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制脊索瘤细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

Tiam 1表达下调对胃癌细胞骨架及裸鼠体内成瘤转移影响的观察

目的:观察T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)反义寡核苷酸(ASODN)转染对胃癌细胞骨架及裸鼠体内成瘤转移能力的影响。方法:采用层粘连蛋白黏附法,由胃癌MKN-45细胞株中筛选获得高侵袭转移亚株(MH)。以脂质体介导将Tiam1ASODN转染至MH细胞中,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及定量细胞ELISA技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。采用细胞骨架蛋白染色及裸鼠接种法分别观察Tiam1ASODN转染后MH细胞在骨架结构和裸鼠体内成瘤转移能力方面的变化。结果:应用0.43μmol/LTiam 1 ASODN转染可特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam 1 mRNA和蛋白表达(0.162±0.018,0.982±0.119),与脂质体转染组(0.789±0.054,1.237±0.108)、正义寡核苷酸(SODN)-脂质体转染组(0.754±0.039,1.234±0.103)、未转染组(0.801±0.065,1.290±0.182)相比,分别为后3者的20.2%～21.5%、76.1%～79.6%(P=0.000、0.037)。同时ASODN转染组细胞在裸鼠体内的肺转移率25%(2/8)也较未转染组88%(7/8)、正义寡核苷酸组75%(6/8)显著下降(P=0.039),且其胞膜表面突起及伪足变稀疏或缩短、骨架结构紊乱程度减轻。结论:特异性ASODN转染可有效抑制Tiam 1在胃癌细胞中的表达并削弱其体内侵袭转移能力,这可能是通过调整胃癌细胞骨架结构重组,降低其变形、游走能力而实现的。     

反义技术封闭骨肉瘤细胞中Survivin基因表达的实验研究

目的:观测反义寡核苷酸(ASODN)抑制骨肉瘤细胞中Survivin基因表达的效应.方法:合成特异性靶向Survivin的ASODN,以不同浓度对骨肉瘤OS-732细胞进行转染,并设空白、正义(SODN)对照组进行比较.观察转染前后细胞生长状态,采用RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学技术检测各组细胞中Survivin mRNA、蛋白表达水平;进一步将各组细胞接种于裸鼠,观测细胞成瘤情况.结果:与空白对照组、SODN组相比,转染ASODN组细胞数量减少,生长延缓,Survivin mRNA和蛋白表达水平降低,裸鼠体内肿瘤发生时间延迟,瘤重显著小于对照组和SODN组.结论:ASODN能够特异性封闭骨肉瘤OS-732细胞中Survivin基因表达,抑制肿瘤细胞的存活与生长.     

Tiam 1反义寡核苷酸转染对胃癌细胞体内外侵袭转移能力的影响

背景与目的:作为细胞骨架结构调节因子,T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)与胃肠道肿瘤侵袭转移密切相关。本研究应用反义寡核苷酸(ASODN)转染技术,特异抑制胃癌细胞中Tiam1表达,进而观察对胃癌细胞体内、外侵袭转移能力的影响。方法:采用层粘连蛋白黏附法,由胃癌MKN-45细胞株(M0)中筛选获得高侵袭转移亚株(MH)。以脂质体介导将Tiam 1 ASODN转染至MH细胞中,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及定量细胞ELISA技术分别检测Tiam 1 mRNA和蛋白的表达。应用Boyden小室及裸鼠接种法分别观察ASODN转染后MH细胞在体内、外侵袭转移能力方面的改变。结果:应用0.43μmol/L Tiam 1 ASODN转染能特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam1 mRNA和蛋白表达(0.162±0.018,0.982±0.119),与脂质体转染组(0.789±0.054,1.237±0.108)、正义寡核苷酸(SODN)-脂质体转染组(0.754±0.039,1.234±0.103)、未转染组(0.801±0.065,1.290±0.182)相比,分别约为后三者的20.2%~21.5%、76.1%~79.6%(P<0.05)。ASODN转染组细胞的体外侵袭、移行能力(10±3、21±9)较SODN转染组(27±10、56±13)、未转染组(26±6、53±12)明显受抑制(P<0.05),同时ASODN转染组细胞在裸鼠体内的肺转移率(1/5=20%)也较SODN转染组(4/5=80%)、未转染组(4/5=80%)显著下降(P<0.05)。结论:特异性ASODN转染可有效抑制Tiam1在胃癌细胞中的表达并削弱其体内、外侵袭转移能力。