线粒体促凋亡因子Omi/HtrA2在肝癌中的表达及意义

丝氨酸蛋白酶Omi／HtrA2是最近发现的线粒体促凋亡因子。近期研究发现其在肿瘤的发生发展中起到某种作用，在肝癌中的表达及其可能的作用尚无报道。我们研究Omi／HtrA2在肝癌细胞及肝癌组织中的表达情况，探讨Omi／HtrA2在肝癌发生发展中的作用。     

HtrA1丝氨酸蛋白酶在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)中HtrA1丝氨酸蛋白酶(HtrA1 serine protease)的表达水平及其与临床病理特征之间的关系.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Realtime-PCR)检测手术切除的肝细胞癌患者的肝癌组织标本及癌旁肝组织标本中HtrA1 mRNA的表达.结果 肝癌组织中HtrA1 mRNA值为1.2729±0.9911,癌旁组织中的HtrA1 mRNA值3.8667±2.8099,肝癌组织中 HtrA1 mRNA明显低于相应的癌旁肝组织中的表达(P=0.000).多因素Logistic回归分析显示HtrA1 mRNA表达,肝内外转移及包膜是影响肝癌静脉浸润的独立因素.结论 HtrA1在肝癌中的表达可望作为判断肝癌预后或转移复发的指标之一.     

丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在肝癌细胞系中的表达及其促凋亡作用

目的：探讨Omi/HtrA2丝氨酸蛋白酶活性对肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法：检测O-mi/HtrA2在正常肝上皮细胞L02细胞系和肝癌细胞系HepG2、Hep3B、PLC中的表达。用脂质体法将Omi/HtrA2小干扰RNA表达载体（psiRNA-Omi/HtrA2）转染至人HepG2细胞中,以RT-PCR和Western Blot法评价psiRNA-Omi/HtrA2对Omi/HtrA2表达的沉默效应。用MTT法和流式细胞仪检测siRNA导致Omi/HtrA2基因沉默后HepG2细胞凋亡的变化。结果：在L02细胞系和3种肝癌细胞系中,所有细胞系在mRNA水平和蛋白质水平均表达Omi/HtrA2,在肝癌细胞系中的Omi/HtrA2 mRNA和蛋白质表达水平均高于正常肝上皮细胞L02。psiRNA-Omi/HtrA2载体可特异性抑制HepG2细胞中Omi/HtrA2的表达。转染psiRNA-Omi/HtrA2载体的HepG2细胞凋亡下调。结论：Omi/HtrA2在肝癌细胞系中表达增高,它可能在促进肝癌细胞凋亡中有重要作用,Omi/HtrA2为肝癌的治疗提供了一个新的选择靶点。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对Omi/HtrA2不同表达水平前列腺癌细胞的促凋亡作用

目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞(PC-3M)不同丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2表达水平的促凋亡作用.方法 构建其小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,辅助设计Omi/HtrA2特异性siRNA序列.合成后克隆入真核表达载体psiRNA-hH1neo.脂质体法转染psiRNA-Omi/HtrA2载体至PC-3M中,检测Omi/HtrA2在PC-3M细胞中的表达及psiRNA-Omi/HtrA2对Omi/HtrA2沉默效应后的转录和表达.用原位末端转移酶标记技术检测Omi/HtrA2基因沉默后,计算不同浓度TRAIL(50、100、200、500 μg/L)下PC-3M细胞凋亡指数(AI).结果 Omi/HtrA2在PC-3M细胞中高表达.酶切和DNA测序证实siRNA基因序列正确,且准确克隆入psiR-NA-hH1neo载体中.psiRNA-Omi/HtrA2载体可特异性抑制PC-3M细胞中Omi/HtrA2的表达.不同浓度TRAIL(50、100、200、500 μg/L)对转染psiRNA-Omi/HtrA2载体后PC-3M细胞AI分别为7.23、14.87、22.65、31.78.而未转染组分别为15.28、24.17、36.33、47.76.两组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 Omi/HtrA2在前列腺癌细胞凋亡过程中起重要作用,TRAIL促进前列腺癌细胞的凋亡,其效果与TRAIL浓度及Omi/HtrA2表达水平相关.     

胃癌组织中Omi/HtrA2的表达及与预后的关系

目的 探讨丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征及预后的关系.方法 采用免疫组化法检测68例胃癌组织、15例癌旁组织及15例正常胃黏膜组织中Omi/HtrA2的表达,并分析其表达与胃癌临床病理特征及预后的关系.结果 Omi/HtrA2在胃癌组织中的阳性表达率为73.5%（50/68）,高于癌旁组织（13.3%,2/15）和正常胃黏膜（6.7%,1/15）,差异有统计学意义（P＜0.05）.胃癌组织中Omi/HtrA2的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及浸润深度无关（P＞0.05） 与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和临床分期有关（P＜0.05）.本组胃癌患者5年总体生存率为63.3%,其中Omi/HtrA2表达阳性组和阴性组分别为72.0%和61.1%,两组比较,差异并无统计学意义（P＞0.05）.结论 Omi/HtrA2在胃癌组织中高表达,其表达与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关,但并不影响胃癌患者的预后.     

II型跨膜丝氨酸蛋白酶与人类肿瘤

Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSPs)属于S1类丝氨酸蛋白酶,表达在某些器官和肿瘤组织的细胞表面中.由于TISP家族定位于细胞表面的特征,具有潜在的降解细胞膜和细胞外基质的功能,从而有利于肿瘤细胞的扩散和转移.近年来,对TTSPs的功能研究在逐步深入.笔者从TTSPs的生物学功能出发,对其在人类肿瘤发生、发展过程中所起的作用进行综述.     

着床丝氨酸蛋白酶-1/2在胚胎着床过程中的作用

着床丝氨酸蛋白酶-1(ISP1)和着床丝氨酸蛋白酶-2(ISP2)是于2001年首次报道的S1丝氨酸蛋白酶家族的新成员,迄今仅在小鼠卵细胞、受精卵和早胚、以及子宫组织中发现这两种蛋白酶的表达,具有较高的细胞和组织特异性.在体和离体实验证实,ISP1和ISP2在小鼠胚胎着床过程中发挥关键作用,是潜在的抗着床药物靶分子.现就10年来对ISP1和ISP2的研究进展作一综述.     

纤溶酶原激活物抑制剂-1和肾脏疾病

纤溶酶原激活物抑制剂是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。最初被认为是一种血管内纤溶抑制剂,现证实PAI-1是一种具有多种功能的蛋白,其作用有依赖于和不依赖于蛋白酶抑制剂两种。不依赖蛋白酶抑制的作用与PAI-1和玻璃粘蛋白或尿激酶受体的相互作用有关。依赖蛋白酶抑制的作用,除纤溶作用外,还参与了细胞外基质的生成及几种酶原和潜在型生长因子的活化。PAI-1参与了几种肾脏病理生理过程,包括血栓性微血管病、增生性或新月体性肾小球疾病。最近,更证实PAI-1在肾脏疾病包括肾小球硬化和小管间质纤维化的进展中起关键作用。对PAI-1还有许多领域正在研究,相信不久还会有新的发现。     

纤溶酶原激活物抑制剂-1和肾脏疾病

纤溶酶原激活物抑制剂是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。最初被认为是一种血管内纤溶抑制剂，现证实PAI-1是一种具有多种功能的蛋白，其作用有依赖于和不依赖于蛋白酶抑制剂两种。不依赖蛋白酶抑制的作用与PAI-1和玻璃粘蛋白或尿激酶受体的相互作用有关。依赖蛋白酶抑制的作用，除纤溶作用外，还参与了细胞外基质的生成及几种酶原和潜在型生长因子的活化。PAI-1参与了几种肾脏病理生理过程，包括血栓性微血管病、增生性或新月体性肾小球疾病。最近，更证实PAI-1在肾脏疾病包括肾小球硬化和小管间质纤维化的进展中起关键作用。对PAI-1还有许多领域正在研究，相信不久还会有新的发现。     

丝氨酸蛋白酶抑制剂PI-9的研究进展

丝氨酸蛋白酶抑制剂-9(serine proteinase inhibitor9,PI-9)是丝氨酸蛋白酶抑制剂的重要成员,也是目前发现的颗粒蛋白酶B(granzyme B,GrB)唯一的内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂.近年研究发现,PI-9能抑制GrB所致的靶细胞DNA断裂而阻断其诱导的细胞凋亡.在生理状况下,PI-9能阻止细胞毒淋巴细胞之间的相互攻击,维持机体免疫豁免部位的功能.近年研究发现PI-9还涉及-多种病理过程,诸如调节炎性介质反应,移植免疫应答及介导肿瘤免疫耐受等多种功能.     

丝氨酸蛋白酶抑制剂PI-9的研究进展

丝氨酸蛋白酶抑制剂-9(serine proteinase inhibitor9,PI-9)是丝氨酸蛋白酶抑制剂的重要成员,也是目前发现的颗粒蛋白酶B(granzyme B,GrB)唯一的内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂.近年研究发现,PI-9能抑制GrB所致的靶细胞DNA断裂而阻断其诱导的细胞凋亡.在生理状况下,PI-9能阻止细胞毒淋巴细胞之间的相互攻击,维持机体免疫豁免部位的功能.近年研究发现PI-9还涉及-多种病理过程,诸如调节炎性介质反应,移植免疫应答及介导肿瘤免疫耐受等多种功能.     

Omi/HtrA2预测肝细胞癌预后中的作用及其与缺氧诱导因子-1α的相关性

目的 探讨Omi/HtrA2的表达水平在预测肝细胞癌预后中的作用及其与缺氧诱导因子(HIF)-1α的相关性.方法 采用免疫组化法检测43例原发肝癌组织标本中Omi/HtrA2和HIF-1α的表达水平,并结合随访资料进行分析.将重组质粒pTRE-HIF-1α转染到HepG2Tet-on细胞,以含0、0.02、0.20、1.00、2.00、5.00 mg/L浓度强力霉素的培养液体外培养已转染pTRE-HIF-1α的HepG2Tet-on细胞,应用RT-PCR法检测不同表达水平HIF-1α对Omi/HtrA2表达的影响.结果 Omi/HtrA2表达与肝细胞癌肝门淋巴结转移和术后2年内肝内复发相关.Omi/HtrA2表达阳性患者肝癌切除术后1、2、3、4、5年累积生存率明显高于Omi/HtrA2表达阴性患者(x2=6.13,P=0.013).HIF-1α和Omi/HtrA2在免疫组化染色的同一切片中,HIF-1 α表达阴性或者弱阳性标本中Omi/HtrA2多表达为阳性或强阳性,HIF-1α表达阳性或者强阳性标本中Omi/HtrA2多表达为阴性或弱阳性.RT-PCR方法检测结果显示,随着HIF-1α表达水平的增加,Omi/HtrA2基因的表达强度逐渐降低(F=106.766,P＜0.01).结论 Omi/HtrA2可能成为预测肝细胞癌预后的一个重要分子标记.肝癌组织中Omi/HtrA2与HIF -1α表达水平呈负相关,在Omi/HtrA2参与肝癌细胞凋亡过程中,HIF-1α可能参与调控了Omi/HtrA2的表达.     

丝氨酸蛋白酶抑制剂PI-9的研究进展

丝氨酸蛋白酶抑制剂-9(serine proteinase inhibitor9,PI-9)是丝氨酸蛋白酶抑制剂的重要成员,也是目前发现的颗粒蛋白酶B(granzyme B,GrB)唯一的内源性丝氨酸蛋白酶抑制剂.近年研究发现,PI-9能抑制GrB所致的靶细胞DNA断裂而阻断其诱导的细胞凋亡.在生理状况下,PI-9能阻止细胞毒淋巴细胞之间的相互攻击,维持机体免疫豁免部位的功能.近年研究发现PI-9还涉及-多种病理过程,诸如调节炎性介质反应,移植免疫应答及介导肿瘤免疫耐受等多种功能.     

抗凝血酶Ⅲ与肾损伤的相关研究进展

<正>抗凝血酶Ⅲ是凝血酶及因子Ⅻα、Ⅺα、Ⅸα、Ⅹα等丝氨酸的蛋白酶抑制剂。它与肾损伤及其相关疾病有一定相关性。本文针对抗凝血酶Ⅲ缺乏所导致的肾损害和抗凝血酶Ⅲ对某些肾脏相关疾病的诊断和治疗相关研究进行了总结阐述,以便为了解这一相关研究,以及为课题的开展提供便利条件。1抗凝血酶Ⅲ的基本概念抗凝血酶Ⅲ(antithrombinⅢ,ATⅢ)是凝血酶及因子Ⅻα、Ⅺα、Ⅸα、Ⅹα等丝氨酸的蛋白酶抑制剂。它与凝血酶通过精     

附睾相关WFDC型丝氨酸蛋白酶抑制剂研究进展

精子在附睾中的成熟是通过管腔离子浓度的改变及许多糖苷酶和蛋白酶对精子表面膜的修饰过程来调控的,而这些蛋白酶的活动是受存在于附睾特定区域的蛋白酶抑制剂控制的。其中WFDC型丝氨酸蛋白酶抑制剂是一种在附睾中高度表达的蛋白,它在天然免疫与男性生育方面发挥重要作用。本文就该蛋白的结构、功能特征及其在开发男性抗生殖道感染药物、免疫避孕药物等方面的应用前景进行了综述。     

休克与蛋白酶

一、蛋白酶休克中蛋白水解作用是很复杂的问题,因为它包含许多器官和机理。首先将描述蛋白酶的术语和分类,区别肽链内切酶与肽链外切酶。特别是肽链内切酶,也叫蛋白酶,更切合它本身的意义。可以鉴别为负责转换细胞蛋白的细胞内蛋白酶,和只引起有限的蛋白水解的血浆蛋白酶。蛋白酶分成四组(表1),每种各有不同的最适pH。休克中特别重要的是丝氨酸和金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶的主要代表是:胰蛋白酶、     

TMPRSS4与肿瘤侵袭转移的关系

Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶4（TMPRSS4）是一种新发现的Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白,目前研究发现它的表达与肿瘤的侵袭转移存在相关性,但具体作用机制目前尚不明确。本文就其基本结构、生物学功能及其在肿瘤侵袭转移方面的作用和机制作一综述。     

小鼠Omi/HtrA2基因克隆、测序及辐射诱导表达质粒pIRESEGR1p-Omi/HtrA2的构建

目的分别从小鼠肝脏脑组织克隆EGR-1基因启动子、Omi/HtrA2,并构建含EGR-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEGR1p-Omi/HtrA2。方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)法,以小鼠脑组织mRNA为模板,扩增获得全长Omi/HtrA2,与pMD-19T载体连接做全自动测序,以小鼠肝脏mRNA为模板,扩增获得EGR-1启动子,与pGEMT载体连接做全自动测序,并利用基因重组技术构建含EGR-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEGR1p-Omi/HtrA2。结果经测序证实获得的小鼠EGR-1启动子、Omi/HtrA2序列与文献报道完全一致,并构建了含EGR-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEGR1p-Omi/HtrA2。结论成功克隆了小鼠EGR-1基因启动子、Omi/HtrA2的cDNA序列,构建了辐射诱导表达质粒pIRESEGR1p-Omi/HtrA2。     

Omi/HtrA2短发夹siRNA对肺癌细胞凋亡的影响

目的检测肺癌组织中促凋亡因子Omi／HtrA2的表达,观察Omi／HtrA2的短发夹状小干扰RNA(shRNA-Omi／HtrA2)载体对肺癌细胞生长的影响。方法采用免疫组织化学SP法检测50例非小细胞肺癌和10例正常肺组织中Omi／HtrA2的表达;将shRNA-Omi／HtrA2载体转染至人肺腺癌细胞株A549,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测其对Omi／HtrA2转录和表达的下调作用,流式细胞术检测Omi／HtrA2下调后A549细胞凋亡的变化。结果Omi／HtrA2在非小细胞肺癌中的表达明显高于正常肺组织(P<0．05)。shRNA-Omi／HtrA2载体能显著抑制A549细胞Omi／HtrA2基因的表达(88％)。转基因组细胞经顺铂处理后凋亡率为(13．00±0．98)％,显著低于对照组的凋亡率(24．00±1．08)％(P<0．05)。结论Omi／HtrA2的高表达参与肺癌的发展,Omi／HtrA2短发夹siRNA可抑制A549细胞的凋亡。     

组织因子途径抑制物2在肿瘤发生转移和侵袭中的作用

细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)降解是肿瘤发生浸润转移过程中的关键一步,肿瘤细胞分泌的多种丝氨酸蛋白酶包括基质金属蛋白酶(matrixmetallopoteinases,MMPs)参与细胞外ECM降解。组织因子途径抑制物2(tissuefactorpathwayinhibitor-2,TFPI-2)是一种具有32000丝氨酸蛋白酶抑制物,可抑制包括纤溶酶、胰蛋白酶、MMPs在内的多种蛋白酶。越来越多的研究表明,TFPI-2通过降解MMPs等抑制肿瘤转移、降低肿瘤的侵袭转移能力。TFPI-2在抑制肿瘤细胞迁徙及浸润转移过程中发挥重要作用,可作为一种潜在的基因治疗靶点。