荧光定量检测肝癌、癌旁组织及外周血AFP mRNA

目的　探讨肝癌、癌旁组织及外周血AFPmRNA的表达意义。方法　应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)定量检测 30例原发性肝癌术前外周血、肝癌组织、癌旁组织AFPmRNA。结果　肝癌组织AFPmRNA的基因拷贝数与组织的分化程度、有无肝内浸润和 (或 )转移及血清AFP明显相关 ;而与外周血的AFPmRNA的表达相关无显著性 ;肝癌组织与癌旁组织AFPmRNA的表达量差异有显著性。结论　定量检测AFPmRNA表达情况可能判断肝癌组织的分化程度及早期诊断微小肝癌、肝癌的复发和转移 ,并指导治疗 ,判断预后。     

肝细胞性肝癌组织中LVD和MVD的表达及其与肝癌侵袭转移的关系

[摘要] 目的 研究肝细胞性肝癌组织中淋巴管密度（lymphatic vessel density,LVD）和微血管密度（microvessel density,MVD）在肝细胞性肝癌中的表达,及其与肝癌侵袭和转移的关系。方法 采用免疫组织化学Supervision法分别检测40例肝细胞性肝癌患者的癌组织、癌旁组织以及10例非肝癌患者的肝脏组织中LVD和MVD的表达情况,分析其与肝癌肝内转移、门脉癌栓和淋巴转移间的关系;分析癌旁组织LVD与癌组织MVD表达之间的关系。结果?在40例肝细胞性肝癌患者的癌组织、癌旁组织及10例非肝癌患者的肝脏组织中平均LVD值分别为（10.65±3.75）、 （8.98±2.52）、 （3.15±1.49）;癌组织与癌旁组织及正常组织的LVD值差异有均统计学意义（均 P ＜0.01）。癌组织、癌旁组织及正常肝脏组织平均MVD值分别为 （71.08±43.19）、 （23.20±4.70）、 （16.80±3.01）,癌组织与癌旁组织及正常组织的MVD值差异有统计学意义（均 P ＜0.01）。结论 肝细胞性肝癌组织中LVD及MVD高表达,与肝内转移、门静脉癌栓及淋巴转移有关。     

肝癌及癌旁肝组织中caveolin 1表达及其意义

摘要：目的探讨肝癌及癌旁肝组织中caveolin 1蛋白和mRNA的表达及其意义。方法利用免疫组化和原位杂交技术检测10例正常肝组织和50例肝癌及其癌旁肝组织中caveolin 1蛋白和mRNA的表达，并分析其与肝癌生物学行为的关系。结果肝细胞癌（HCC）中caveolin 1蛋白和mRNA表达的细胞主要为血管内皮细胞，其表达强度与HCC的分化程度无关。癌旁肝组织中caveolin 1蛋白和mRNA阳性信号多位于肝窦内皮细胞、肝星状细胞、血管内皮细胞和增生的胆管上皮细胞。caveolin 1蛋白和mRNA在肝硬化及不典型增生的癌旁组织的肝细胞中呈强表达。在胆管细胞性肝癌组织中，癌细胞和血管内皮细胞均呈强阳性。caveolin 1蛋白和mRNA在胆管细胞性肝癌中表达强度显著高于HCC；HBsAg和AFP阳性的肝癌患者的表达强度明显低于阴性患者。结论 HCC中caveolin 1蛋白和mRNA低表达或表达缺失可能是HCC较胆管细胞性肝癌恶性程度高、生长快和易发生转移的重要原因；检测caveolin 1表达有可能作为鉴别HCC和胆管细胞性肝癌的有用指标之一。     

p27kip1及相关分子skp2在人肝癌组织中的表达变化

目的探讨细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白27（p27^kip1）和细胞S相激酶相关蛋白2（skp2）表达与人肝癌发生的关系。方法用免疫组织化学SP法检测62例肝癌组织中p27^kip1、skp2蛋白的表达，并与22例癌旁正常肝组织作对比。结果p27^kip1蛋白阳性表达率在肝癌中为46．77％，而癌旁肝组织中为95．45％（P〈0．01）。skp2蛋白阳性表达率在肝癌中为32．26％，而癌旁正常肝组织中为13．64％（P〈0．05）。p27^kip1、skp2蛋白在肝癌中的表达呈负相关（P〈0．01）。结论p27^kip1、skp2蛋白检测有助于肝癌的临床诊断及判断预后。     

hTERT及c-myc在肝癌组织中的表达及其意义

为探讨端粒酶逆转录酶（hTERT）和c-myc在肝癌发生、发展中的作 用及两者表达的关系，笔者采用免疫组织化学方法检测40例肝癌组织及相应的癌旁组织、30例肝硬化组织和30例正常肝组织中hTERT和c-myc的表达，并进行对比研究。结果示： 肝癌组织中hTERT与c-myc阳性表达率明显高于正常肝组织、肝硬化组织、及癌旁组织（均P<0.05）;在伴淋巴结转移的肝癌组织中hTERT及c-myc阳性表达率高于无淋巴结转移者（P<0.05）;hTERT与c-myc表达一致率为85.00%（34/40），c-myc在hTERT阳性的肝癌组织中的表达率明显高于hTERT阴性组（P<0.01）。提示hTERT及c-myc的过度表达在肝癌的发生发展过程中起重要作用;两者在肝癌组织中的表达关系密切。 c-myc在转录水平上调控hTERT的表达，进而激活端粒酶，可能是肝癌发生发展的重要阶段。     

人肝细胞性肝癌性激素受体的表达

目的：研究人肝细胞性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中雄激素受体（AR）和雌激素受体（ER）的表达水平及分布规律。方法：应用单克隆抗体免疫组化法检测50例肝细胞性肝癌标本的肿瘤组织、癌旁组织和10例肝内胆管结石的肝组织中AR和ER的表达情况。结果：在肝癌组织、癌旁组织和肝内胆管结石的肝组织中，AR的阳性表达率分别为30％、8％和0％，除癌组织显著高于癌旁组织外（P＜0．01），其它各组无显著性差异（P＞0．05）；ER的阳性表达率分别为12％、10％和20％，在三组中均无显著性差异（P＞0．05），在所有阳性片中，AR和ER的标记指数（LI）均＜25。结论：AR和ER在肝细胞性肝癌组织中的表达率很低。     

生长激素受体在人肝癌组织中的表达

目的：研究人类肝癌细胞中是否存在生长激素受体（GHR）。方法：采用免疫组织化学方法，对50例肝细胞肝癌标本，49例癌旁肝组织，30例肝硬变组织及30例正常肝组织进行GHR的测定。结果：肝癌标本中42．0％存在GHR阳性表达，其中仅22．0％的标本存在中到强阳性表达。癌旁肝组织中GHR阳性染色占95．9％，肝硬变组织中占96．7％，正常肝组织占93．3％。结论：肝癌患者中存在GHR的低度表达，因此，在对行肝癌根治性手术后或肝癌细胞GHR表达阴性的患者术后可使用生长激素治疗。     

肝癌患者不同部位血甲胎蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的 检测肝癌患者不同部位（门静脉、肝静脉及外周静脉）血甲胎蛋白（AFP）mRNA的表达,了解肝细胞肝癌血行播散的规律。方法 采用巢式逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）检测技术,测定20例肝癌患者门静脉、肝静脉及外周血AFPmRNA的表达。结果 全组病例门静脉、肝静脉血AFPmRNA阳性率（65％）高于其外周血AFPmRNA阳性率（40％－45％）,但差异无显著性（P＞0．05）。肿瘤≤5cm患者的肝静脉血AFPmRNA阳性率（70％）明显高于外周血（20％,P＜0．05）,门静脉血AFPmRNA阳性率（60％）也高于外周血（30％）,但差异无显著性（P＞0．05）。肿瘤＞5cm患者的门静脉、肝静脉血AFPmRNA阳性率接近于外周血AFPmRNA的阳性率。结论 肿瘤＞5cm的中晚期肝癌患者,其外周血中AFPmRNA的表达能较好地反映脱落癌细胞的血行播散情况;肿瘤≤5cm的患者虽然其外周血AFPmRNA阳性检出率较低,但肝静脉血的AFPmRNA明显高于外周血,提示肝内已有肿瘤播散,此时直接检测肝内门静脉或肝静脉血的AFPmRNA表达能更准确地反映癌细胞血行播散情况。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体mRNA在肝癌中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体的4种受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在肝细胞癌肝组织中的表达状况。方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测40例人肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织、23例正常人肝组织中DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA表达率及表达水平。结果 （1）40例肝癌组织、癌旁组织、23例正常肝组织DR4、DR5的mRNA的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）40例癌旁组织、23例正常肝组织DcR1、DcR2表达水平明显高于40例肝癌组织（P〈0．05）；（3）DR4和DR5mRNA在肝细胞癌组织中表达水平与患者的年龄，肿瘤大小，有无包膜，分级程度，AFP水平，HBsAg，有无肝硬化有关系。结论 肝癌组织中存在TRAIL受体的表达，与其在正常肝组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）；DR4、DR5表达水平与肝癌的病理状况有关系。     

原发性肝癌癌旁组织生长激素受体的基因研究

目的探讨原发性肝癌癌旁组织生长激素受体（GHR）的基因表达情况或变化。方法采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应（RT—PCR）对45例原发性肝癌（HCC）的癌旁组织进行了生长激素受体（GHR）的检测，以8例正常肝组织作为对照，并随机选择12例RT—PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定。结果在蛋白表达水平，应用放射性配体法于正常肝组织与45例HCC癌旁组织中检测到单一的GH特异性结合位点（即GHR）。对照组肝组织GHR的RT值为40．2932±3。5667．fmol／mg；protein，Kd为0．6167±0．1007nmol／L。HCC癌旁组织GHR的RT为33．6283±3．6218fmol／mg。protein，Kd值为0．6319±0．1978nmol／L，与正常肝组织相比，HCC癌旁GHR的RT降低（P〈0．05）．而Kd无显著性改变（P〉0．05）。半定量的RT—PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织与HCC癌旁组织的表达率均为100％。GHRmRNA在正常肝组织与原发性肝癌癌旁组织的表达两者之间差异无显著性（P〉0．05）。结论全部肝癌癌旁组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR，在其受体功能未明的情况下，目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重，以免造成肿瘤的增殖与复发。     

TACE联合PEI治疗原发性肝癌血液循环性肝癌细胞的变化及意义

目的：探讨联合经肝动脉化疗栓塞术(TACE)及B超引导下肿瘤局部无水酒精注射术(PEI),治疗原发性肝癌周围静脉血液循环性肝癌细胞的变化及其意义.方法:应用巢式RT-PCR检测12例原发性肝癌患者血液循环性肝癌细胞,并经TACE及PEI联合治疗,观察其血液循环性肝癌细胞的变化.结果:血液循环性肝癌细胞表达阳性的5例原发性肝癌患者(41.67%),经TACE及PEI联合治疗后,其血液循环性肝癌细胞均转为阴性(100%,P<0.01).结论:联合TACE及PEI治疗原发性肝癌可有效地杀灭血液中播散的循环性肝癌细胞,可预防肝癌的复发和转移.     

巢式RT-PCR检测荷人肝癌裸鼠周围静脉血液中AFPmRNA

目的应用巢式RT－PCR检测荷人肝癌裸鼠周围静脉血液中AFPmRNA并探讨其意义。方法抽取20只荷人肝癌裸鼠周围静脉血液各1ml,应用巢式RT－PCR检测其周围静脉血液中AFPmRNA。结果20只荷瘤裸鼠中有6只血液中被检测到AFPmRNA（30.0％）,其中有4只发现了肺脏、肝脏或肾脏转移（66.67％）。结论AFPmRNA可以作为肝癌血液转移的敏感性指标,也可作为肝癌远处转移的预测性指标之一。     

MAGE-1基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1基因表达进行检测,随机对6例RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1基因,所有患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAAg、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标。结果:31例HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率64.5％(20/31)明显高于癌旁组织2％(1/31),P<0.01。HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、乙肝标志物、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P>0.05。结论:MAGE-1基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与HCC患者AFP、AFU、AFPmRNA肿瘤转移、复发均无关。     

肝癌组织、外周血细胞磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 mRNA表达的意义

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)mRNA表达对肝细胞肝癌(HCC)及其血液微转移的诊断价值。方法参照甲胎蛋白(AFP)mRNA,半定量与巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测41例HCC、41例癌旁组织、52例非瘤肝组织(41例远离癌灶组织与11例正常肝组织)及67例外周血的GPC3表达。结果半定量PCR显示组织与外周血细胞全部存在GPC3 mRNA表达,HCC、癌旁、非瘤肝组织的表达量分别为78.9±35.5、30.6±21.6、23.8±15.5;而AFP mRNA的表达量依次为61.2±32.6、31.5±23.6、21.2±15.9。各基因在HCC与其他组织中的表达量差异具有统计学意义(P<0.01),以各基因在非瘤肝的相对表达量上限(x-+1.96s)为界,HCC中GPC3 mRNA和AFP mRNA的高表达分别占80.5%与63.4%;至少一个基因高表达HCC达总数的92.7%,与AFPmRNA单独检测差异有统计学意义(P<0.01)。临床病理特征分析发现AFP mRNA与HCC分级及血清AFP浓度有关,GPC3 mRNA表达与HCC分级及侵袭性有关。67例外周血GPC3 mRNA的表达量为15.9±9.0,各类组织中GPC3 mRNA表达均强于相应的外周血表达(P<0.01)。外周血GPC3mRNA表达量在HCC组、非HCC组分别为16.1±8.3、15.6±10.2,组间差异无统计学意义;在HCC转移组、HCC无转移组的表达量各为16.0±9.0、16.3±7.7,组间差异无统计学意义。巢式PCR显示,AFP mRNA表达比率在HCC组与非HCC组各为56.1%、23.1%,组间差异有统计学意义(P=0.011);HCC转移组与无明显转移组各为80.9%、30.0%,组间差异有统计学意义(P=0.002)。结论GPC3 mRNA是潜在的HCC组织诊断指标,与AFP mRNA有明显的互补作用,两者联合检测可提高HCC的阳性检出率;外周血存在GPC3 mRNA的广泛表达,但其与HCC的转移复发无关,不能用于HCC微转移的检测。     

肝癌细胞血行播散与术后复发或转移的关系

目的探讨血液甲胎球蛋白信使核糖核酸（ａｌｐｈａｆｅｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｍｅｓｅｎｇｅｒＲＮＡ,ＡＦＰｍＲＮＡ）阳性肝癌患者与术后复发或转移的联系。方法应用巢式逆转录多聚酶链反应（ｎｅｓｔｅｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ）检测术后２４小时,４８小时及１周肝癌患者周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ,并随访１～２年。结果术前及术后１周内血液ＡＦＰｍＲＮＡ持续阳性的肝癌患者１２例中,术后１年内出现复发或转移性癌灶６例,术后２年内复发或转移９例;而随访的血液ＡＦＰｍＲＮＡ阴性的肝癌患者１９例中仅有５例在术后１年内复发,在２年内复发８例,无肝外远处器官转移（１年时,二者差异无显著意义,Ｐ＞００５;２年时,二者差异有显著意义,Ｐ＜００５）。结论术后血液ＡＦＰｍＲＮＡ持续阳性的肝癌患者更容易复发或产生远处转移。     

原发性肝癌组织VEGF与外周血AFP mRNA检测的临床意义

目的：探讨肝癌组织中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达与外周血液中甲胎蛋白（AFP） mRNA表达在原发性肝细胞癌转移中的意义。方法 ： 用巢式逆转录PCR法检测20例肝癌患者术前外周血液中的AFP mRNA，对其手术切除标本采用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达，结合临床病理资料进行配对分析。结果：（1）20例原发性肝细胞癌中10例VEGF为阳性表达，其表达情况与临床病理参数无明显相关;（2）20例肝癌中13例AFP≥200μg/L ,15例外周血液中AFP mRNA阳性；（3） VEGF阳性的10例病例中有9例在外周血中可检测到AFP mRNA。结论：（1）肝癌组织VEGF和外周血中AFP mRNA检测都可作为判断原发性肝癌有无血行转移倾向的指标，前者较为简单，而后者较为客观准确。(2) 对肝癌高危人群的普查和肝癌术后随访，应用外周血中AFP mRNA的检测方法较血清AFP水平更加敏感。     

黑色素瘤抗原-3基因在肝细胞癌中的研究

目的 检测黑色素瘤抗原－３（ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｔｉｎｅｇ－３,ＭＡＧＥ－３）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,探计用ＭＡＧＥ－３基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗在理论上的可行性。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法对４５例ＨＣＣ患者癌组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－３ ｍＲＮＡ表达情况进行研究,对３例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物中目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定     

B超发现的未能扪及的睾丸肿块

探讨对于临床上体检不能扪及而由Ｂ超检查发现的睾丸肿块的诊治方法。对方法对有关病例的超声检查表现及其病理结果进行回顾性分析。结果近１０年来６００多例因子各种原因行阴囊超声检查的患者中,共发现１４例１６处体检未能扪及的睾丸肿块。患者平均年龄４２．４岁,肿块直径平均１２．１ｍｍ,除１例外其余肿块均表现为低回声团块。     

原发性肝癌组织生长激素受体mRNA的表达

目的探讨原发性肝癌组织与正常肝组织的生长激素受体(GHR)mRNA的表达情况。方法通过半定量的逆转录鄄多聚酶链式反应(RT鄄PCR)方法检测GHRmRNA在32例原发性肝癌组织与6例正常肝组织中的表达。结果癌组织GHRmRNA的表达率为90.6%(29/32),正常肝组织GHRmRNA的表达率为100%;半定量RT鄄PCR结果表明:GHRmRNA在正常肝组织、原发性肝癌组织的表达二者之间无显著性差异(P>0.05)。结论正常肝组织、原发性肝癌组织的GHR在蛋白表达水平上差异的原因与二者在mRNA水平上的表达量无明显相关性。