癃必消胶囊对体外培养的人前列腺增生间质细胞Fibronectin和Collagen Ⅳ基因表达的影响

目的研究中药癃必消胶囊对体外培养的人前列腺增生间质细胞Fibronectin和Collagen Ⅳ基因表达的影响。方法把含癃必消胶囊的药物血清加入到体外培养的人前列腺增生间质细胞中、采用实时定量RT-PCR等相关技术，检测Fibronectin和CollagenⅣ在体外培养的人前列腺增生间质细胞中的表达。结果癃必消胶囊能降低体外培养的前列腺增生间质细胞CollagenⅣ基因的表达，对Fibronectin基因的表达无明显规律。结论癃必消胶囊通过抑制前列腺间质细胞CollagenⅣ基因的表达达到治疗前列腺增生的目的。     

癃必消胶囊对体外培养的人前列腺增生间质细胞Fibronectin和Collagen IV基因表达的影响

目的 研究中药癃必消胶囊对体外培养的人前列腺增生间质细胞Fibronectin和Collagen IV基因表达的影响.方法 把含癃必消胶囊的药物血清加入到体外培养的人前列腺增生间质细胞中、采用实时定量RT-PCR等相关技术,检测Fibronectin和Collagen IV在体外培养的人前列腺增生间质细胞中的表达.结果 癃必消胶囊能降低体外培养的前列腺增生间质细胞Collagen IV基因的表达,对Fibronectin基因的表达无明显规律.结论 癃必消胶囊通过抑制前列腺间质细胞Collagen IV基因的表达达到治疗前列腺增生的目的.     

bFGF和TGF-β1对原代培养的前列腺间质细胞的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)在良性前列腺增生(BPH)中的作用。方法:培养了人BPH间质细胞,采用MTT法检测无血清培养的间质细胞的增殖,用免疫组化方法检测平滑肌细胞表型变化,观察不同浓度bFGF和TGF-β1对培养的人BPH间质细胞的影响。结果:bFGF促进间质细胞增殖(P<0.05、P<0.01),较高浓度时(10μg/L)降低平滑肌细胞表型表达;TGF-β1(>0.1μg/L)抑制间质细胞增殖并增加平滑肌细胞表型表达(P<0.05、P<0.01);5μg/L的bFGF与0.001μg/L和0.01μg/L TGF-β1作用间质细胞,促进细胞增殖(P<0.01),与0.1μg/L,1μg/L及10μg/L TGF-β1作用间质细胞,抑制细胞增殖,0.1μg/L时对细胞的抑制作用轻微(P>0.05),1μg/L及10μg/L时出现明显的抑制(P<0.01),同时TGF-β1在较高浓度时(>1μg/L),平滑肌细胞表型表达明显增加(P<0.01)。结论:bFGF以时间和浓度依赖的方式促进培养的增生前列腺间质细胞的增殖,并减少平滑肌细胞表型表达;TGF-β1抑制间质细胞的生长并诱导间质细胞向平滑肌细胞分化,两者共同在BPH的形成机制中发挥着重要作用。     

前癃通胶囊含药血浆对前列腺间质细胞Smad4基因表达的影响

目的:探讨中药前癃通胶囊含药血浆对体外培养前列腺间质细胞Smad4基因表达的影响,为中药复方治疗良性前列腺增生(BPH)提供实验依据。方法:收集2012年8~10月门诊BPH患者15例,按照随机数字表对入选患者进行实验分组,分为前癃通高、中、低剂量组,制备前癃通含药血浆。同时,体外培养前列腺间质细胞,当细胞接近长成单层后进行免疫荧光检测,进行间质细胞鉴定;加含药血浆后培养24 h,采用实时荧光定量PCR(q-PCR)技术检测间质细胞Smad4基因表达;Western印迹检测Smad4蛋白在间质细胞的表达。结果:经含药血浆处理后间质细胞Smad4基因mRNA的表达随药物剂量增加依次增强,与空白组、无血浆组比较,各组差异均有统计学意义(P0.01)。经含药血浆处理后间质细胞Smad4蛋白的表达随药物剂量增加依次增强,与空白组比较,低剂量组差异无统计学意义(P0.05),中剂量组差异有统计学意义(P0.01);与低剂量组比较,中剂量组差异有统计学意义(P0.05);与高剂量组比较,各组之间差异均有统计学意义(P均0.01)。结论:中药前癃通胶囊含药血浆体外培养前列腺间质细胞,可抑制其增殖,其机制与促进Smad4基因及蛋白表达有关。     

癃畅颗粒对睾酮诱导的大鼠前列腺增生组织bax表达影响的研究

目的:通过癃畅颗粒对大鼠前列腺增生组织中bax表达影响的研究,探讨癃畅颗粒治疗前列腺增生的作用机制。方法:采用大鼠去势后注射丙酸睾酮致前列腺增生法造模,灌胃给药后30d处死。摘取前列腺组织并测量湿重,采用免疫组化对癃畅颗粒和癃闭舒干预的大鼠前列腺增生组织进行bax检测。结果:前列腺湿重:空白组(0.61±0.03)g,模型组(0.95±0.04)g,癃闭舒组(0.73±0.02)g,癃畅颗粒低剂量组(0.80±0.05)g,癃畅颗粒中剂量组(0.78±0.07)g,癃畅颗粒高剂量组(0.68±0.03)g,与模型组比较差异有显著性(P<0.05)。前列腺指数:空白组0.143±0.006,模型组0.226±0.008,癃闭舒组0.172±0.004,癃畅颗粒低剂量组0.199±0.012,癃畅颗粒中剂量组0.181±0.010,癃畅颗粒高剂量组0.168±0.003,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。癃畅颗粒对BPH大鼠前列腺上皮细胞bax表达影响(平均光密度):空白组0.226±0.010,模型组0.184±0.005,癃闭舒组0.206±0.015,癃畅颗粒低剂量组0.199±0.001,癃畅颗粒中剂量组0.202±0.003,癃畅颗粒高剂量组0.211±0.003,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:癃畅颗粒能够有效缩小模型大鼠前列腺湿重,减轻病理变化。其作用机制可能为上调大鼠前列腺bax基因表达促进前列腺细胞凋亡。     

癃闭消(消癃通闭)胶囊对BPH大鼠模型内皮素-1表达的影响

目的 探讨癃闭消胶囊对BPH大鼠模型内皮素-1表达的影响,为中药癃闭消胶囊治疗BPH寻找新的治疗靶点.方法 应用免疫组化方法对空白组、模型组、癃闭消高、低剂量组大鼠前列腺组织中ET-1分别进行免疫组化染色,在光镜下观察染色部位及强度,采用NIS-Elements(Br)图像分析系统对结果进行半定量分析.结果 ET-1在模型组高表达,在癃闭消高、低剂量组表达明显降低(高剂量组P＜0.01;低剂量组P＜0.05).结论 癃闭消胶囊可显著降低ET-1在BPH组织中的表达水平,推测其可能为癃必消胶囊治疗前列腺增生的又一作用机制.     

“消癃通闭”对大鼠前列腺平滑肌α1肾上腺素受体的拮抗作用

采用大鼠离体前列腺平滑肌收缩功能实验方法,研究了中药复方”消癃通闭”对α_1-AR的拮抗作用。结果表明:“消癃通闭”使NE介导的大鼠前列腺平滑肌收缩效应曲线平行右移。“消癃通闭”70.0g/L时,使NE的PD_2值由对照时5.1±0.15减少到4.7±0.02,两组间有明显差异(P<0.01)。“消癃通闭”拮抗的PKB值为44.0±14.0gq“消癃通闭”170g/L时,使NE的PD_2值由对照时5.4±0.16,减少到4.6±0.22,两组间有显著性差异(P<0.01)。消癃通闭的拮抗PKB值为30.0±8.0g/L。两种浓度“消癃通闭”间拮抗的PKB值间无显著性差别。提示“消癃通闭”对α_1-AR有拮抗效应。     

中药消癃通闭对犬前列腺组织中T、E_2、DHT、AR和5α-还原酶的影响

取前列腺增生老龄犬,经口喂给消癃通闭药粉32天后,用RIA技术测定前列腺组织中睾酮(T)、雌二醇(E_2)、双氢睾酮(DHT),并与血清中浓度对照;用Scatchard Plots方法及双复管单点法测定雄激素受体(AR);用酶学法测定5α—还原酶Ⅰ、Ⅱ型。结果发现:正常犬微粒体中5α—还原酶Ⅰ型的活性为97.145±45.729,Ⅱ型的活性为15.745±15.093(单位均为DHT Pmol/mg Pro—tein·30min~(-1),下同)。予消癃通闭lg/kg·d~(-1)组犬的测定值分别为92.454±57.703和11.328±10.060;给予消癃通闭2g/kg·d~(-1)组犬的测定值分别为42.837±31.909和9.288±11.209。各组的前列腺组织中AR的测定值无明显差异。提示消癃通闭治疗前列腺增生的机理为抑制前列腺组织中5α—还原酶的活性。     

环氧化酶-2对大鼠前列腺增生的影响及作用机理研究

目的探讨环氧化酶2(COX2)对大鼠良性前列腺增生(BPH)的影响及作用机理。方法将成年SD大鼠随机分为正常(A组),BPH模型(B组)和BPH+选择性COX2抑制剂Celecoxib(C组),每组12只。5周后观察各组大鼠前列腺重量和组织学变化,ki67免疫染色及TUNEL染色测定前列腺上皮和间质细胞的增殖和凋亡指数,免疫组化染色及RTPCR法检测COX2及表皮生长因子(EGF),碱性成纤维生长因子(bFGF)和转化生长因子(TGFβ1)蛋白及mRNA表达情况。结果3组大鼠前列腺指数分别为1.70±0.09,1.88±0.17和1.74±0.16,B组显著大于A组和C组(P<0.05);光镜显示B组前列腺上皮细胞增生明显,C组上皮细胞明显萎缩;A组上皮和间质细胞增殖率分别为0.018±0.007和0.007±0.002,B组为0.025±0.006和0.010±0.004,C组为0.017±0.006和0.006±0.003,B组增殖率显著高于A组和C组(P<0.05);3组上皮细胞凋亡率分别为0.015±0.004、0.013±0.003和0.019±0.005,C组较A组和B组显著增高(P<0.05);B组较A组和C组COX2和EGF蛋白及mRNA表达显著增多,TGFβ1表达显著减少(P<0.05),3组间bFGF表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论COX2在大鼠BPH组织中表达上调。COX2可能通过调节生长因子表达,影响前列腺细胞增殖及凋亡,参与BPH的发生发展过程。     

中药"消癃通闭"对前列腺平滑肌中NOS神经的影响

目的　 探讨一氧化氮 (NOS)与前列腺增生 (BPH)发病的关系以及中药消癃通闭对前列腺平滑肌中NOS神经的影响。 方法　 去势雄性大鼠 ,皮下注射丙酸睾酮 5mg/ (kg·d) ,分别给予消癃通闭、保列治灌胃 ,2 1d后断髓处死 ,应用NADPH组化染色结合形态学定量分析方法 ,检测各组前列腺中NOS神经含量。 结果　NOS神经纤维主要分布在前列腺平滑肌细胞周围 ,消癃通闭高剂量组在治疗 3周后 ,前列腺组织中NOS神经的长度密度 (Lv)相对值为 (113.4 9± 2 3.30 )× 10 -3 ,与其它 3组相比均有显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论　 中药消癃通闭可增加模型BPH大鼠前列腺中NOS神经含量 ,为该药治疗前列腺增生改善临床症状提供了科学依据     

消癃通闭对前列腺平滑肌中NOS神经的影响

目的 探讨一氧化氮合酶(NOS)与良性前列腺增生(BPH)发病的关系以及中药消癃通闭对前列腺平滑肌中NOS神经的影响。方法 去势雄性大鼠,皮下注射丙酸睾酮5mg·kg~(-1)·d~(-1),分别给予消癃通闭、保列治灌胃,21天后断髓处死,应用NADPH组化染色结合形态学定量分析方法,检测各组前列腺中NOS神经含量。结果 NOS神经纤维主要分布在前列腺平滑肌细胞周围,泪癃通闭高剂量组在治疗3周后,前列腺组织中NOS神经的长度密度(L_v)为0.11349±0.023296,与其它三组相比均有显著性差异(p<0.001)。结论 中药消癃通闭可增加实验性BPH大鼠前列腺中NOS神经含量,为该药治疗前列腺增生,改善临床症状提供了科学依据。     

生长调控因子异常与前列腺增生的关系

目的 探讨多种生长调控因子在前列腺增生过程中的作用.方法 采用免疫组织化学Max vision二步法检测61例前列腺增生(BPH)和15例正常前列腺组织中TGF-β1、b-FGF、EGFR和TGF-α的表达.结果 TGF-β1主要定位于前列腺上皮细胞浆、间质细胞浆内,呈棕黄色颗粒,BPH及正常前列腺组织中上皮细胞阳性率分别为45.90%、13.33%;间质细胞阳性率分别为24.59%、6.67%,BPH中前腺上皮细胞和间质细胞总阳性率为52.46%,正常前列腺组织中上皮细胞和间质细胞总阳性率为20.00%,两组比较差异有统计学意义P<0.05.b-FGF定位于前列腺间质细胞浆内,部分上皮细胞浆阳性,呈棕黄色颗粒,上皮细胞阳性率为26.23%,间质细胞阳性率为75.41%,BPH中前腺上皮细胞和间质细胞总阳性率为75.41%,正常前列腺中上皮细胞阳性率为0%,间质细胞阳性率为13.33%,总阳性率为13.33%,P<0.05.EGFR主要定位于前列腺上皮细胞膜上,呈棕黄色颗粒,偶见于细胞浆内,阳性表达率为55.74%,TGF-α定位于前列腺间质细胞浆内,呈棕黄色颗粒,阳性表达率为88.52%,前列腺增生与正常前列腺两组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).在腺体增生为主和间质增生为主两组间,TGF-β1、b-FGF、EGFR和TGF-α表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论 TGF-β1、b-FGF、EGFR和TGF-α是促进BPH的重要因素,TGF-β1、b-FGF和TGF-α主要与前列腺间质增生有关,EGFR主要与前列腺上皮增生有关.     

前列腺癌组织中TGF-β1 mRNA表达及其临床意义

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在前列腺癌中的表达及意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对前列腺癌组织中TGF-β1mRNA表达进行研究。结果:TGF-β1mRNA的相对含量值:在正常前列腺组织为0.74±0.11;在前列腺癌T1~T2期为(0.69±0.10),T3~T4期为(0.44±0.08);Gleason评分≤5分者为(0.70±0.12),6~8分者为(0.54±0.11),≥9分者为(0.42±0.09)。T1~T2期与正常前列腺相比,差异无显著性(P>0.05),T3~T4期与正常前列腺组织相比,差异有极显著性(P<0.01),T3~T4期与T1~T2期前列腺癌相比,差异有显著性(P<0.05)。Gleason评分≤5分者与正常前列腺相比,差异无显著性(P>0.05),6~8分者与正常前列腺相比,差异有显著性(P<0.05),≥9分者与正常前列腺相比,差异有显著性(P<0.01),≥9分者与≤5分及6~8分者相比,差异均有显著性(P<0.01和P<0.05)。结论:TGF-β1的mRNA表达与临床分期、病理分级呈负相关。     

前列腺增生间质对上皮细胞组织激肽释放酶7表达的影响

目的:研究前列腺增生间质细胞对上皮细胞组织激肽释放酶7(KLK7)表达的影响。方法:分离良性前列腺增生(BPH)组织的间质细胞与上皮细胞,经细胞形态学及化学发光微粒子免疫分析(CM IA)方法证实后,构建上皮/间质细胞共培养模型;分别提取单独、共培养条件下上皮细胞的mRNA与蛋白;RT-PCR检测KLK7mRNA表达变化,W estern印迹检测KLK7基因编码蛋白(hK7)表达的改变。结果:细胞形态学、CM IA结果显示成功分离上皮与间质细胞,并构建前列腺间质/上皮细胞共培养模型;RT-PCR检测发现,KLK7基因mRNA的表达在有间质细胞共培养的上皮细胞中均高于单独培养的上皮细胞。KLK7/GAPDH的灰度比值分别为1.41±0.04、1.78±0.10,具有显著差异(P<0.01);W estern印迹与RT-PCR结果一致。结论:前列腺增生间质细胞抑制上皮细胞KLK7基因表达,KLK7可能是前列腺上皮细胞应对间质细胞调控的一种效应物质。     

温阳消癥方调控LncRNA MEG3对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子的影响

目的:探讨温阳消癥方对TGF-β₁诱导的人近端肾小管上皮细胞LncRNA MEG3的调控作用及对纤维化因子的影响。方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为对照组、TGF-β₁组、TGF-β₁+3.5 mg/ml温阳消癥组、TGF-β₁+14 mg/ml温阳消癥组，MTT法检测细胞增殖，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)表达，蛋白质印迹法检测α-SMA、FN、CTGF蛋白表达。结果:3.5、7、14 mg/ml温阳消癥不影响细胞增殖，35 mg/ml组细胞增殖明显降低(P<0.01);与对照组比较，TGF-β₁组中α-SMA、FN、CTGF mRNA、LncRNA MEG3及FN、CTGF蛋白表达显著升高(P<0.01),α-SMA蛋白表达升高(P<0.05);与TGF-β₁     

止消通脉宁干预TGF-β1诱导的HK-2细胞VEGF mRNA的表达

目的:通过观察止消通脉宁药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,进一步探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110ng/ml)、空白血清对照组(TGF-β110ng/ml+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110ng/ml+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110ng/ml+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110ng/ml+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24h后,荧光定量PCR检测VEGF mRNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,VEGF mRNA的表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁药物血清干预后,VEGFmRNA的表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制的可能与调节纤维化细胞因子VEGF的mRNA表达有关。     

内皮素受体A反义寡核苷酸对人前列腺间质细胞增殖的抑制作用

目的　探讨内皮素受体A反义寡核苷酸 (ETAR ASODN)对人前列腺间质细胞体外增殖活性的抑制作用。　方法　原代培养前列腺间质细胞 ,第 4～ 6代细胞经鉴定后加入不同浓度人工合成的ETAR ASODN片段 ,观察细胞增殖情况 ,放射配基结合实验检测内皮素受体A(ETAR)蛋白合成。　结果　加入 5、10、15 μmol/LETAR ASODN的前列腺间质细胞A540 值分别为 0 .30 4± 0 .0 82、0 .2 96± 0 .0 0 8和 0 .194± 0 .0 6 1,增殖活性均较对照组明显降低 (P <0 .0 1) ,且呈浓度依赖性 (P<0 .0 5 ) ;15 μmol/LETAR ASODN对ETAR蛋白合成有明显抑制作用。 　结论　ETAR ASODN能有效抑制前列腺间质细胞的ETAR蛋白表达及体外增殖活性。     

重组人核心蛋白多糖固相拮抗转化生长因子β1对瘢痕成纤维细胞的刺激作用

目的模拟人体内核心蛋白多糖和转化生长因子β1(TGF-β1)接触方式,观察核心蛋白多糖固相拮抗TGF-β1刺激瘢痕成纤维细胞的效果.方法制备成纤维细胞胶原网格(FPCL)体外三维培养模型,将其分为4组.对照组向FPCL中加入培养液;核心蛋白多糖组向FPCL中混入终浓度2 mg/L的重组人核心蛋白多糖,再加入培养液;TGF-β1组向FPCL中加入含5 μg/L TGF-β1的培养液;TGF-β1+核心蛋白多糖组向FPCL中混入终浓度2 mg/L的重组人核心蛋白多糖,然后加入含5μg/L TGF-β1的培养液.在培养12、24、48、72、96 h时观察各组FPCL的收缩情况,并用蛋白质印迹法与逆转录聚合酶链反应分别检测FPCL中瘢痕成纤维细胞Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白及mRNA表达水平.结果各培养时相点下,TGF-β1组FPCL收缩比对照组明显增强,核心蛋白多糖组FPCL收缩则比对照组明显减弱.TGF-β1组的PAI-1、α-SMA的蛋白及相应mRNA表达水平(3 482±211、4 320±272;0.89±0.15、0.56±0.11)显著高于对照组(1 764±147、1 699±146;0.29±0.06、0.21±0.06,P＜0.01);其余两组相应检测指标与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论重组人核心蛋白多糖混入胶原凝胶,可显著抑制TGF-β1对瘢痕成纤维细胞的刺激作用,表明在体外核心蛋白多糖具有拮抗TGF-β1的作用.提示皮肤组织损伤后,由于创面机械性缺少核心蛋白多糖,TGF-β1活性上调,可能是瘢痕增生的一个重要因素.     

培养的人前列腺间质细胞中结缔组织生长因子在纤连蛋白合成过程中的作用

本研究旨在阐明用转化生长因子β1（TGF-β1）对人前列腺间质细胞进行刺激后，细胞中结缔组织生长因子（CTGF）的表达与纤连蛋白（FN）合成之间的关系。作者对9例正常的前列腺，采用组织块移植模型，建立人前列腺间质细胞原代培养。     

消癃通闭对大鼠前列腺上皮细胞DNA合成的影响

为了进一步了解中药消癃通闭对前列腺上皮细胞增生的影响,用去势wistar大鼠,每天皮下注射丙酸睾酮5mg/kg,以维持其副性腺的发育。消癃通闭2g/kg灌胃20天时断头处死,取前列腺相同部位腹叶,匀浆,PI染色,采用流式细胞技术对大鼠前列腺上皮细胞DNA合成进行定量检测,结果显示:消癃通闭可抑制G2+M期DNA的合成(P<0.005),即该药可能抑制了前列腺上皮细胞的有丝分裂。