苯那普利对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1和Smad7表达的影响

目的:探讨苯那普利对糖尿病大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad7表达的影响.方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病非治疗组(模型组)和糖尿病苯那普利治疗组3组.用链脲佐菌素诱导造模.于给药8周后处死大鼠,检测各组大鼠的平均动脉压、血糖、肾功能指标、24 h尿蛋白.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1及Smad7 mRNA表达水平.采用免疫组化检测TGF-β1及Smad7蛋白定位的表达.结果:与正常组相比,糖尿病大鼠平均动脉压、血糖、肾功能指标、24 h尿蛋白排出均增加;肾小球ECM明显增多、系膜区扩大(PAS染色);TGF-β1及Smad7 mRNA表达上调;TGF-β1及Smad7蛋白的表达明显增加.苯那普利治疗后上述指标明显减轻.结论:TGF-β/Smad通路在糖尿病肾病时是激活的,苯那普利治疗可延缓肾脏损害.     

依那普利对单侧尿路梗阻大鼠肾组织Smad 2/3活性的影响

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)依那普利对单侧尿路梗阻大鼠肾组织Smad2/3信号蛋白活性的影响.方法:采用单侧输尿管结扎(UUO)模型,治疗组从造模前24 h至造模后28 d以依那普利10 mg·kg-1·d-1灌胃,另设假手术组作正常对照.分别于造模后1,3,7,14,21和28 d取肾组织,应用免疫组化法检测肾组织TGF-β1、磷酸化Smad2/3和α-SMA表达.结果:正常大鼠肾组织具有基础的TGF-β1(4.32±1.72)%和磷酸化Smad 2/3(19.31±5.37)个/mm2的表达,α-SMA只表达于血管平滑肌,肾小管-间质无表达.UUO术后1 d,TGF-β1的表达无明显增加(5.15±2.08)%,第3 d明显增加(13.55±6.33)%,第7 d达高峰(26.78±8.77)%,此后表达减少;UUO术后3 d,磷酸化Smad2/3的表达明显增加(67.95±13.87)个/mm2,并持续增加到第7 d(150.61±27.34)个/mm2,此后表达减少;而UUO术后3 d,肾组织α-SMA表达亦明显升高(5.58±1.23)%,第7 d达到高峰(13.43±3.32)%,14 d表达开始下调.依那普利治疗可以明显抑制肾组织TGF-β1信号蛋白Smad2/3活性(降低39%～55%,P＜0.01),显著下调肾组织α-SMA的表达(降低44%～58%,P＜0.01),减轻肾间质纤维化.结论:依那普利可显著抑制梗阻肾肾组织α-SMA的表达,减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其抑制肾组织TGF-β1信号蛋白Smad2/3的活性有关.     

肾纤康对肾间质纤维化大鼠Smad信号通路的影响

目的：研究肾纤康对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2、Smad3、Smad7表达的影响,探讨肾纤康防治肾间质纤维化的作用机制。方法：将40只大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、肾纤康组、苯那普利组,采用左侧输尿管梗阻方法造模,用免疫组织化学方法作肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7检测,并观察肾脏病理学变化。结果：模型组和各治疗组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3面积比增加,Smad7面积比减少,与假手术组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。与模型组相比,药物治疗组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3面积比减少,Smad7面积比增加,差异有统计学意义（P〈0.05）。肾纤康组与苯那普利组肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7面积比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：肾纤康通过下调TGF-β1、Smad2、Smad3在肾间质的表达及增加Smad7的表达而抑制单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化,与肾纤康可调节TGF-β1/Smad信号转导通路有关,其作用与苯那普利差异无统计学意义。     

INF-γ对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3蛋白表达的影响

目的通过干扰素-γ(IFN-γ)治疗大鼠肝纤维化,观察大鼠肝脏组织病理学及TGF-β1,Smad3蛋白表达水平的变化,探讨INF-γ抗肝纤维化作用机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组和实验组3组。用3%硫代乙酰胺(TAA)100mg/kg复制大鼠肝纤维化模型,实验组同时肌肉注射INF-γ5U/d。在肝纤维化诱导第8周处死,用Masson染色观测肝组织纤维化程度,免疫组化法检测肝组织TGF-β1、Smad3蛋白表达水平。结果实验组肝纤维化程度、TGF-β1和Smad3表达比正常组增高(P<0.05),比模型组显著降低(P<0.05)。结论 IFN-γ可能通过抑制TGF-β1/Smad3蛋白的表达,从而起到抗肝纤维化的作用。     

升清降浊胶囊对慢性肾衰竭大鼠保护机制的实验研究

目的:探讨升清降浊胶囊对腺嘌呤所致慢性肾衰竭大鼠的肾功能改善作用,以及对钙、磷、FGF-23及TGF-β1/Smads/BMP-7信号通路的影响。方法:72只SD雄性大鼠随机抽取62只用腺嘌呤灌胃造模28 d,另10只设为正常对照组正常饲养;造模成功后采用随机分组方法分为5组:模型组,升清降浊胶囊低、中、高浓度组(剂量0.09、0.18、0.36 g/ml)、肾衰宁胶囊组(剂量0.225 g/ml),每组各10只。造模完成后第3天,每天8:00am给药治疗,观察实验第8周大鼠一般情况、肾脏病理形态学、血清中Scr、BUN、钙、磷的变化,采用酶联免疫吸附法检测FGF-23水平;应用免疫组织化学法检测各组大鼠TGF-β1、Smad2、Smad6、BMP-7蛋白表达。结果:(1)与正常组比较,模型组血清中BUN、Scr、磷、FGF-23水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05),血钙水平下降(P0.05);与模型组比较,各治疗组BUN、Scr、磷、FGF-23水平均有不同程度下降(P0.05或P0.01),以升清降浊胶囊高剂量组最为显著;血钙水平上升,高剂量组差异有统计学意义(P0.05)。(2)大鼠肾脏组织TGF-β1、Smad2、Smad6、BMP-7蛋白表达:与正常组比较,模型组TGF-β1、Smad2蛋白表达增高(P0.05);与模型组比较,各治疗组蛋白表达均有不同程度降低,以高剂量组最为显著(P0.05);Smad6、BMP-7蛋白表达与上述因子相反(P0.05)。结论:(1)升清降浊胶囊有效改善慢性肾衰竭大鼠的肾功能,降低血清中磷、FGF-23的水平,提高血钙含量,以高剂量组明显。(2)升清降浊胶囊对慢性肾衰竭大鼠有良好的保护作用,通过干预TGF-β1/Smads/BMP-7信号通路达到抑制肾间质纤维化作用。     

肾衰饮对肾纤维化大鼠TGF-β_1/Smad信号通路的作用研究

目的:探讨肾衰饮抗肾纤维化分子生物学机制。方法:采用腺嘌呤肾病模型,随机将60只SD大鼠分为空白组、模型组、肾衰饮组与尿毒清组,采用RT-PCR观察肾衰饮对CRF大鼠TGF-β1mRNA表达的影响;ELISA法检测Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达;免疫组化法检测α-SMA蛋白表达。结果:模型组与正常组比较TGF-β1mRNA表达增强,Smad2、Smad3水平升高,Smad7下降,治疗后肾衰饮组TGF-β1mRNA表达明显减少,Smad2、Smad3水平下降,Smad7升高,同时肾组织α-SMA表达下降,明显优于尿毒清(P0.05)。结论:肾衰饮抑制TGF-β1mRNA表达,提高Smad7水平,通过调节TGF-β1/Smad信号通路,以抑制肾纤维化的发生、发展。     

淫羊藿和女贞子配伍对绝经后骨质疏松症大鼠TGF-β1/Smads信号通路的实验研究

目的 研究淫羊藿和女贞子配伍对绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis,PMOP）大鼠转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β1/Smads信号通路的影响。方法 将48只SPF级8月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、淫羊藿组、女贞子组、淫羊藿和女贞子配伍组（配伍组）、雷洛昔芬组。对大鼠行双侧卵巢切除术造模,术后1周开始给予相应的药物治疗至术后13周结束。运用酶免法检测血清TGF-β1含量、蛋白免疫印迹法（western blot,WB）和免疫荧光法（immunofluorescence staining,IF）检测骨组织中TGF-β1、p-Smad2/3和Smad7蛋白表达,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）法检测骨组织中TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达。结果 与模型组比较,淫羊藿、女贞子配伍组能增加大鼠血清TGF-β1含量（P<0.05）,上调骨组织中TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA表达和TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达（P均< 0.01）,下调骨组织中Smad7的mRNA和蛋白表达（P均< 0.01）,且配伍组对上述指标的调节作用优于淫羊藿或女贞子单用。结论 淫羊藿和女贞子配伍可以调节PMOP大鼠TGF-β1/Smads信号通路中细胞因子的表达,从而调节骨代谢。     

普罗布考对糖尿病大鼠肾组织Smads蛋白表达的影响

目的：观察链脲佐菌素（STZ）造模的糖尿病大鼠以及普罗布考（之乐）干预的糖尿病大鼠肾脏组织中Smad2、Smad4、Smad7蛋白的表达,探讨普罗布考在糖尿病肾病中的作用机制。方法：36只6周龄雄性SD大鼠（清洁级）,将其随机分为3组（对照组、糖尿病模型组、糖尿病之乐治疗组）,12周末将其处死,检测各组大鼠血糖（GLU）、血尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、血三酰甘油（TG）,以免疫组化的方法观察各组大鼠肾脏Smad2、Smad4、Smad7蛋白的表达。结果：糖尿病模型组、糖尿病之乐治疗组GLU、BUN、Scr较正常组明显升高,糖尿病之乐治疗组TG较正常组下降;糖尿病模型组的Smad4、Smad7在肾脏组织的表达较正常组明显增高,糖尿病之乐治疗组Smad4、Smad7在肾脏组织的表达不明显,Smad2在各组间相比差异无统计学意义。STZ诱导的糖尿病大鼠出现了明显的糖尿病肾病的病理变化,糖尿病之乐治疗组也有明显的糖尿病肾病的病理变化,但较糖尿病模型组轻。结论：TGF-β1/Smads信号通路在糖尿病肾病时是激活的,普罗布考可以通过影响糖尿病大鼠肾组织中TGF-β1/Smads信号通路中的TGF-β1、Smad2、Smad4、Smad7蛋白的表达而起到抑制纤维化的作用,延缓糖尿病肾病的进展。     

丹酚酸B 对糖尿病小鼠创面愈合及局部碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子-β1 的影响

目的:探讨丹参主要成分丹酚酸B(Sal B)对糖尿病小鼠慢性伤口创面修复的影响及其分子机制。方法:将30只db/db糖尿病小鼠随机分为模型组、Sal B组(1 mg/mL)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)组(3.6μg/mL),每组10只;另取db/m小鼠8只为空白组。各组小鼠背部全厚皮切除术制备伤口模型,空白组和模型组外用含生理盐水的明胶海绵;bFGF组外用含bFGF的明胶海绵,Sal B组外用含Sal B的明胶海绵。外用药以一次性无菌敷料贴包扎,隔日换药1次,并拍摄创面照片计算愈合率,给药周期为14 d。实验结束后取创面皮肤,采用苏木素-伊红(HE)染色,观察病理学改变,采用实时定量PCR法和Western blotting检测创面局部生长因子bFGF、转化生长因子β1(TGF-β1)基因和蛋白的表达。结果:造模第3、7、14天,模型组创面愈合率分别为(0.26±0.11)%、(0.43±0.12)%、(0.66±0.12)%,低于空白组[(0.63±0.09)%、(0.81±0.97)%、(0.98±0.02)%],bFGF组创面愈合率[(0.37±0.12)%、(0.59±0.07)%、(0.79±0.04)%]与Sal B组创面愈合率[(0.40±0.05)%、(0.58±0.05)%、(0.75±0.06)%]高于模型组(均P0.05)。模型组bFGF mRNA、TGF-β1mRNA的表达水平分别为(0.19±0.05)、(0.32±0.08),低于空白组[(0.95±0.16)、(1.35±0.31)],差异有统计学意义(P0.05),bFGF组TGF-β1 mRNA的表达水平(1.31±0.33)高于模型组(P0.01),Sal B组bFGF、TGF-β1 mRNA的表达[(0.71±0.25)、(1.42±0.48)]均高于模型组(P0.05)。模型组bFGF、TGF-β1蛋白的表达[(0.38±0.13)、(0.26±0.12)]低于空白组[(0.58±0.05)、(0.55±0.16)](P0.05),bFGF组bFGF、TGF-β1蛋白表达[(0.64±0.12)、(0.56±0.16)]均高于模型组,Sal B组bFGF、TGF-β1蛋白表达[(0.63±0.10)、(0.68±0.07)]高于模型组(P0.05)。结论:Sal B可以促进糖尿病小鼠创面愈合,其机制可能是升高创面生长因子的水平,促进肉芽组织生成。     

核转录因子KLF6在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用

目的研究大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化形成过程中,肝脏核转录因子KLF6及相关基因表达变化及其作用。方法建立高脂饮食脂肪性肝纤维化模型,用RT-PCR与免疫组织化学法观察肝组织中KLF6、TGF-β1、α-SMA表达变化,放射免疫法检测血清肝纤维化指标HA、LN、CⅣ。结果模型组大鼠高脂喂养8周呈现单纯性脂肪变,肝脏KLF6、TGF-β1、α-SMA的mRNA表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。12周时随着脂肪变的加重,KLF6mRNA表达上调(0.62±0.10,P<0.01),于16周达高峰(1.01±0.07,P<0.01),24周略有回落(0.81±0.08,P<0.01);而TGF-β1和α-SMA的mRNA表达于16周时开始增高(0.62±0.19、0.77±0.12,P<0.01),24周达高峰(0.91±0.07、1.08±0.19,P<0.01)。相关分析发现,KLF6与TGF-β1、α-SMA表达以及肝纤维化分级评分之间呈显著正相关(r=0.848、0.859、0.706,P<0.01)。结论高脂饮食引起KLF6表达增强,最初可能是一种适应性反应,随着其表达进一步增强,可引起TGF-β1和α-SMA表达持续上调,从而促进脂肪性肝纤维化的发生、发展。     

小鼠肝组织中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1在肝纤维化发生及发展中的作用

目的 探讨小鼠肝组织中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)在肝纤维化发生及发展过程中的作用.方法 采用腹腔注射硫代乙酰胺制备小鼠肝纤维化模型,按时间将小鼠分为模型4、5、6周组(各10只),并分别设立正常对照组(各6只),采用Masson染色检测肝组织胶原沉积,免疫组织化学检测肝组织中IGFBPrP1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)、TGF-β1和Smad3蛋白表达和分布,同时以Western blot检测IGFBPrP1、α-SMA和Smad3蛋白表达.采用单因素方差分析、Pearson等级相关检验进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 免疫组织化学检测结果发现,模型组小鼠肝组织中IGFBPrP1由0.21±0.03上升到5.03±0.09,α-SMA由0.11±0.04上升到10.09±0.18,Collagen Ⅰ由0.22±0.01上升到11.01±±0.16,FN由0.31±0.09上升到19.81±1.62,TGF-β1由0.49±0.02上升到5.97±0.19,Smad3由0.22±0.03上升到2.03±0.07,这些检测因子在模型组的表达与正常对照组比较,随时间的增加而明显增强(F=783.141,998.200,886.715,935.242,931.241,697.118,P<0.05).在肝纤维化形成过程中,IGFBPrP1的表达与α-SMA、Collagen Ⅰ、FN、TGF-β1和Smad3的表达均呈正相关(r=0.906,0.927,0.988,0.947,0.977,P<0.05).Western blot检测结果发现,模型组小鼠肝组织的IGFBPrP1蛋白表达量由0.23±0.01上升到0.92±0.07,α-SMA蛋白表达量由0.36±0.02上升到1.39±0.03,FN蛋白表达量由0.03±0.00上升到0.12±0.02,Smad3蛋白表达量由0.09±0.01上升到0.56±0.04,模型组小鼠的蛋白表达量均较正常对照组明显升高(F=57.316,201.214,103.871,72.966,P<0.05).在肝纤维化形成过程中,IGFBPrP1的表达与α-SMA、FN和Smad3的表达均呈正相关(r=0.982,0.924,0.965,P<0.05).结论 IGFBPrP1随着肝纤维化程度的加重,其表达水平逐渐上调,IGFBPrP1的促肝纤维化作用可能与促进肝星状细胞激活、使细胞外基质的重要组成成分Collagen Ⅰ和FN的合成与分泌增加及影响TGF-β1/Smad3信号通路有关.     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠慢性胰腺炎的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠慢性胰腺炎(CP)的治疗作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为空白组(尾静脉注射无菌生理盐水),模型组(尾静脉注射二氯二丁基酯制作大鼠CP模型),治疗组(造模后尾静脉注射BMSCs),假治疗组(造模后尾静脉注射无菌生理盐水),每组10只。取大鼠胰腺组织进行病理学评分及纤维化程度评分,ELASA法检测胰腺组织中胰腺星状细胞(PSC)活化表达的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),I型胶原蛋白,瓜型胶原蛋白水平,白细胞介素10(IL-10)水平;qRT-PCR法检测胰腺组织中PSC凋亡基因BNIP3的表达,Western-blot法检测胰腺组织中TGF-β/Smad信号传导通路中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4的表达水平。将CP大鼠PSC培养体系分为对照组(单纯PSC培养组)和治疗组(PSC和BMSCs共培养组),每组5份标本,ELASA法检测α-SMA,I型胶原蛋白,Ⅲ型胶原蛋白,IL-10的表达水平;qRT-PCR法检测PSC凋亡基因BNIP3的表达,Western-blot法检测TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4的表达水平。结果(1)治疗组大鼠胰腺病理学评分及纤维化程度评分均低于模型组与假治疗组,且差别有统计学意义(P<0.05);治疗组α-SMA、I型胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白水平,TGF-βl、Smad2、Smad3、Smad4的表达水平均低于模型组与假治疗组,且差别有统计学意义(P<0.05),但PSC凋亡基因BNIP3以及IL-10的表达水平高于模型组与假治疗组,且差别有统计学意义(P<0.05);(2)治疗组α-SMA、I型胶原蛋白、Ⅰ型胶原蛋白水平,TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4的表达水平均低于对照组,且差别有统计学意义(P<0.05),但PSC凋亡基因BNIP3以及IL-10的表达水平高于对照组,且差别有统计学意义(P<0.05)。结论BMSCs可通过TGF-β/Smad信号传导通路抑制PSC增殖活化,减少胰腺纤维化的形成,进而控制慢性胰腺炎。     

TGF-β1、Smad4在慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型前列腺组织中的表达及意义

目的:研究慢性非细菌性前列腺炎(CNP)SD大鼠前列腺组织中转化生长因子(TGF-β1)和Smad4的表达,并初步探讨前列腺组织纤维化的发病机制及意义。方法:将60只6月龄SD大鼠随机分为对照组(假手术)、30dCNP模型组和45dCNP模型组,每组20只。CNP模型组采用去势+高剂量苯甲酸雌二醇肌注方法建立CNP大鼠模型。用免疫组化和免疫印迹方法检查TGF-β1、Smad4在前列腺组织中的表达变化。结果:两个CNP模型组TGF-β1表达显著高于对照组(P均<0.05),而且45dCNP模型组高于30dCNP模型组(P<0.05)。两个模型组Smad4表达显著低于对照组(P均<0.05),而且45dCNP模型组低于30dCNP模型组(P<0.05)。TGF-β1、Smad4在CNP大鼠模型前列腺组织中表达呈负相关。结论:TGF-β1、Smad4可能参与CNP发病过程,前列腺纤维化可能是导致临床难以治愈的重要因素。     

右归丸对骨性关节炎模型大鼠TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的分析右归丸对骨性关节炎大鼠TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法将64只成年SD大鼠利用随机数字表法分为4组,每组15只。正常组不做任何处理;模型组、右归丸组、抑制剂组采用经典的Hulth法建立膝骨性关节炎模型,造模6周后,右归丸组灌服20 g/(kg·d)的右归丸;抑制剂组腹腔注射100μg/(kg·d)的TGF-β1/Smads信号通路抑制剂SB431542,同时灌服20 g/(kg·d)的右归丸;模型组灌服等剂量的生理盐水,连续给药8周。末次给药24 h后取关节软骨组织,制作病理切片观察软骨病理改变,采用ELISA法检测软骨组织中肿瘤坏死因子α与白细胞介素1β水平,免疫组化染色观察软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白与基质金属蛋白酶13(MMP-13)阳性表达,采用RT-PCR法检测软骨组织中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达,采用Western blot检测软骨组织中TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与模型组比较,抑制剂组软骨组织Mankin评分降低(P0.05),软骨组织中肿瘤坏死因子α与白细胞介素1β水平降低(P0.05),Ⅱ型胶原蛋白阳性表达升高(P0.05),MMP-13阳性表达降低(P0.05),TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达升高(P0.05),TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达升高(P0.05)。与抑制剂组比较,右归丸组软骨组织Mankin评分降低(P0.05),软骨组织中肿瘤坏死因子α与白细胞介素1β水平降低(P0.05),Ⅱ型胶原蛋白阳性表达升高(P0.05),MMP-13阳性表达降低(P0.05),TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达升高(P0.05),TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达升高(P0.05)。结论右归丸对骨性关节炎大鼠软骨组织具有保护作用,其作用机制可能与TGF-β1/Smads信号通路有关。     

藏药韦色尼阿丸预防宫腔粘连形成的实验研究

目的探讨藏药韦色尼阿丸预防宫腔粘连的效果及对子宫内膜中转化生长因子-β(TGF-β)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法选择6~8周龄、体重180~200 g的雌性未孕SD大鼠,随机分为4组:正常对照组、模型对照组、模型组、研究组,其中正常对照组未进行任何处理,模型对照组切开子宫后未进行造模,模型组采用机械损伤及酒精灼烧法进行造模,而研究组在造模后用藏药韦色尼阿丸灌胃处理14 d。利用HE染色观察比较各组大鼠子宫内膜形态及子宫内膜腺体数量变化;利用Masson染色比较子宫内膜纤维化面积;通过免疫组织化学染色法观察藏药韦色尼阿丸对TGF-β和MMP-9表达水平的影响。结果(1)研究组相对于模型组内膜厚度增加、腺体数目增多(P<0.05),而与正常对照组比较子宫内膜厚度和腺体数目均无显著变化(P>0.05);(2)研究组子宫内膜纤维化面积较模型组显著减少(P<0.05),而相对于对照组无显著变化(P>0.05);(3)研究组大鼠子宫内膜中TGF-β表达水平较模型组显著降低(P<0.05),而与对照组无显著差异(P>0.05);(4)研究组大鼠子宫内膜中MMP-9表达水平较模型组显著升高(P<0.05),而与对照组无显著差异(P>0.05)。结论藏药韦色尼阿丸预防大鼠子宫形成粘连有一定疗效,其作用机制可能与抑制子宫内膜组织TGF-β的表达及上调MMP-9的表达相关。     

糖肾平对高糖+LPS刺激足细胞TGF-β1/Smad7信号转导通路影响的研究

目的:观察糖肾平胶囊对高糖环境下脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激足细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)/Smad7信号转导通路的影响,并探讨其作用机制.方法:以高糖、LPS刺激足细胞建立模型,分为正常组、高糖组、高糖+LPS组、厄贝沙坦组、糖肾平小、中、大剂量组和抑制剂组.采用Western-Blotting方法检测足细胞中TGF-β1、Smad7、核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)的表达.结果:与正常组比,高糖组和高糖+LPS组足细胞TGF-β1、NF-κB表达明显升高(P<0.01),Smad7表达明显降低(P<0.01);抑制剂组足细胞TGF-β1、NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显降低(P<0.01),Smad7蛋白表达明显升高(P<0.01),厄贝沙坦组TGF-β1蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组降低(P<0.05),NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.01),Smad7蛋白表达明显升高(P<0.01),糖肾平胶囊大、中、小剂量组足细胞中TGF-β1蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均降低(P<0.05),大剂量组足细胞NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显降低(P<0.01),中、小剂量组足细胞NF-κB蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均降低(P<0.05),糖肾平胶囊大、小剂量组Smad7蛋白表达比高糖组和高糖+LPS组均明显升高(P<0.01).结论:糖肾平能够降低足细胞TGF-β1、NF-κB蛋白的表达,增加Smad7蛋白表达,通过干预TGF-β1-smad7-NF-κB信号转导通路减少糖尿病肾病足细胞凋亡,可能是其防治糖尿病肾病的作用机制之一.     

丹酚酸A对慢性肾衰竭大鼠BMP-7/Smads/TGF-β_1信号通路的调控作用

目的:观察丹酚酸A对5/6肾切除(Platt法)大鼠肾组织骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)/Smads信号通路的调节作用。方法:将40只大鼠随机分为:假手术组、模型组、丹酚酸A组、科素亚组,采用Platt法复制慢性肾衰竭大鼠模型,术后8周分别观察大鼠肾组织BMP-7、Smad6、TGF-β_1蛋白及基因的表达,p-Smad2/3、p-Smad1/5/8的蛋白表达。结果:各治疗组大鼠肾组织BMP-7、Smad6、p-Smad1/5/8的表达较模型组升高(P0.01 or P0.05),TGF-β_1、p-Smad2/3的表达较模型组明显减弱(P0.01 or P0.05)。结论:丹酚酸A可能是通过诱导BMP-7、Smad6、p-Smad1/5/8蛋白表达,抑制p-Smad2/3蛋白表达,调节BMP-7/Smads/TGF-β_1信号通路,抑制了TGF-β_1信号向细胞核内转导的通路,从而抑制细胞外基质增生,起到延缓肾纤维化的作用。     

褪黑素对大鼠腹膜纤维化抑制作用的研究

目的探讨褪黑素对大鼠腹膜纤维化的抑制作用及机制。方法将45只雄性SD大鼠随机分为3组,每组15只。对照组每天给予生理盐水1.0 ml·100 g~(-1)·d~(-1)腹腔注射;模型组每天给予0.1%葡萄糖氯己定1.0 ml·100 g~(-1)·d~(-1)腹腔注射;褪黑素组在模型组基础上每天给予褪黑素5.0mg·kg~(-1)·d~(-1)溶于0.5 ml 0.9%生理盐水腹腔注射;以上操作均持续14 d。14 d后分别测量3组大鼠的腹膜超滤量,之后处死大鼠并留取大鼠腹膜组织。HE染色观察大鼠腹膜组织形态学变化,免疫组化检测腹膜组织转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)的表达,Western-blot检测腹膜组织p-Smad2/3及Smad7的蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠腹膜超滤量减少,腹膜厚度显著增加,且伴有间皮细胞排列紊乱、间皮下胶原纤维沉积、炎症细胞浸润等腹膜纤维化表现,且对TGF-β1及p-Smad2/3、Smad7蛋白的表达显著增加。与模型组比较,褪黑素组大鼠腹膜超滤量改善,腹膜纤维化表现减轻,腹膜组织变薄,对TGF-β1及p-Smad2/3、Smad7蛋白的表达显著减少。结论褪黑素可在一定程度上抑制大鼠腹膜纤维化进展,其抑制作用通过下调TGF-β/Smad通路的表达实现。     

黄连素通过上调Smad7减轻2型糖尿病大鼠肾脏损伤

目的:观察黄连素对2型糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用,并探讨可能机制。方法:将大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组以及黄连素治疗组,给药20周后检测血糖、24 h尿蛋白,观察肾脏病理改变,并检测炎症(IκBα)及纤维化(TGF-β1、TβRI、Smad7)信号通路。结果:与正常对照组比较,糖尿病大鼠肾重指数增加,24 h蛋白尿维持在高水平,肾脏病理显示肾小球系膜基质增生,肾小管扩张变性且排列紊乱,小管间质存在炎症浸润;黄连素治疗显著降低模型大鼠肾重指数及24 h蛋白尿,减少肾皮质TGF-β1、TβRI表达,上调Smad7和IκBα表达。结论:黄连素对2型糖尿病大鼠具有肾脏保护作用,机制可能是通过上调Smad7表达从而改善肾脏炎症及纤维化。     

上调Smad7表达对腹膜纤维化大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响

目的探讨上调TGF-β抑制性信号蛋白Smad7表达对大鼠腹膜纤维化模型腹膜间皮细胞转分化的影响。方法30只160～170 g SD雄性大鼠.随机分为4组：正常对照组（n=6）;腹膜纤维化模型组（n=12）：予腹腔注射4.25%腹膜透析液与脂多糖;空载体组（n=6）：模型成功后转染pTRE与pEFpurop-Tet-on质粒;Smad7治疗组（n=6）：模型成功后转染pTRE- m2 Smad7与pEFpurop-Tet-on质粒。第14、28天杀检大鼠,取脏层腹膜组织,用RT-PCR方法检测TGF-B1、α-SMA、E-钙黏蛋白（E-cadherin）基因的表达;用Western杂交或间接免疫荧光的方法检测TGF-β1、Smad7、磷酸化（p）-Smad2/3、α-SMA、E-cadherin的表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1、p-Smad2/3及α-SMA的表达显著上调（p〈0.01）;E-cadherin的表达显著下调（P〈0.01）。与模型组、空载体组比较,Smad7治疗组p-Smad2/3及α-SMA表达水平显著下调（P〈0.01）;E-cadherin的表达显著上调,但仍低于正常对照组（P〈0.05）。结论Smad7可通过抑制受体调控信号蛋白Smad2/3的活化,阻止高糖透析液及脂多糖介导的腹膜间皮细胞转分化,从而防止腹膜纤维化的发生和发展。