血管内皮细胞生长因子促进激素性股骨头坏死修复

[目的]探讨应用血管内皮细胞生长因子治疗激素性股骨头坏死的方法。[方法]新西兰兔30只，22只兔耳缘静脉注射马血清，臀肌注射醋酸泼尼松龙，制造激素性股骨头坏死动物模型。动物随机分为3组：A组：VEGF治疗组，B组：对照组，C组：正常对照组。治疗组骨穿刺针行经皮注射血管内皮细胞生长因子脂质体至股骨头。于治疗后5周，采用影像学方法观察股骨头结构变化，病理组织学观察股骨头骨组织、骨髓造血组织及血管的变化。[结果]VEGF治疗组，X线及CT检查显示：模型股骨头结构变清晰，骨质破坏明显修复；HE染色结果：VEGF治疗组可见软骨细胞修复性增生，骨髓腔造血组织出现增生，栓塞的血管旁边出现新生的血管。[结论]VEGF治疗股骨头坏死能促进新血管生成及骨修复。     

TNFα和VEGF在激素性股骨头坏死中的变化

[目的]通过应用马血清、激素作用新西兰兔，诱导激素性股骨头坏死动物模型。分析TNFα、VEGF在激素性股骨头坏死中的作用。[方法]将20只健康新西兰兔随机分成2组，每组10只。A组为模型组。每只用马血清10ml／kg。经兔耳缘静脉注射。间隔2周，按5ml／kg剂量连续2d注射马血清各1次。间隔2周后，注射醋酸泼尼松龙。按7．5mg／kg腹腔注射3次。B组：正常对照组。动物注射激素5周后，采血，应用ELISA法测血清中TNF-α浓度。处死模型组，标本进行常规组织病理学检查，免疫组化分析股骨头VEGF的表达。[结果]模型组兔血清TNF-α浓度明显高于正常组（P〈0．01）。组织病理学检查显示：部分血管栓塞。骨髓腔内造血组织明显减少。免疫组化结果显示：骨细胞及骨髓组织VEGF表达明显减少。[结论]血清中TNF-α浓度升高及股骨头骨髓组织VEGF表达减少可能是激素性股骨头坏死发生的重要因素。     

中药对股骨头缺血坏死修复过程中血管内皮生长因子基因表达的影响

目的：探讨具有活血补肾作用的中药丹仙康骨胶囊对股骨头缺血坏死修复过程中血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法：采用手术方法制作兔股骨头缺血坏死模型，应用逆转录一聚合酶链反应(RT-PC=R)、免疫组化、微血管灌注及组织形态学方法观察中药丹仙康骨胶囊治疗兔股骨头坏死过程中血管内皮生长因子基因(VEGFmRNA)表达、血管生成及骨组织修复情况。结果：股骨头坏死模型组4周时可见有坏死骨周围VEGFmRNA表达呈阳性，但随着时间的推移而减少，至8、12周时VEGFFmRNA表达均为阴性，再生血管密度低，只见少量间充质细胞增生及新骨形成；丹仙康骨胶囊治疗组至8、12周时VEGFmRNA表达呈强阳性，并可见明显血管增生，血管密度显著增高，大量新骨形成。结论：活血补肾的丹仙康骨胶囊能促进股骨头缺血坏死修复过程中VEGFmRNA的表达、血管的再生和新骨的形成。     

活血化瘀中药对激素性股骨头缺血坏死模鼠TGF-β1表达的实验研究

目的：观察活血化瘀中药对激素性股骨头缺血性坏死大鼠转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响,进一步探讨其防治激素性股骨头坏死的作用机制。方法：采用清洁级SD大鼠40只,随机分为空白组4只和模型组36只．模型组每周2次腹腔注射醋酸泼尼松龙24．5mg／kg,经6周诱导出早期激素性股骨头缺血坏死的模型,空白组每周2次腹腔注射同等剂量的生理盐水。6周后处死空白组4只和模型组4只,进行光、电镜观察,确定造模成功。随后将其余32只模型组大鼠再随机分为治疗组16只和对照组16只,分别灌服桃红四物汤和生理盐水,于灌胃后第6、8周检测血清中TGF-β1的含量;检测股骨头局部TGF-β1mRNA的转录及股骨头局部TGF-β1的表达。结果：①图像分析仪分析：治疗组股骨头局部TGF—β1较对照组表达明显增强,两组有明显差异（P〈0．01）。②血清TGF-β1含量检测：治疗组血清中TGF-β1的表达增强,与对照组相比有明显差异（P〈0．01）。③股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录：治疗组在第6周时表达即增强,在第8周时表达又降低,而对照组在第6周时表达减少,在第8周时未检测到TGF-β1 mRNA的表达,两组有明显差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：活血化瘀中药可促进激素性股骨头缺血坏死模鼠股骨头局部TGF-β1 mRNA的转录水平以及股骨头局部TGF-β1的表达,促进坏死股骨头的修复。     

血管内皮生长因子基因转染促进股骨头坏死修复

目的　探索治疗股骨头及其它骨缺血性坏死新方法。方法　将血管内皮生长因子真核表达质粒pCD hVEGF1652 0 0 μg与胶原混合植入坏死的兔股骨头内 ,术后 2、4周用免疫组化SABC方法检测血管内皮生长因子 (VEGF)表达情况 ,组织形态学分析术后 2、4周修复区血管生成情况及术后 6、8周股骨头新骨形成情况。结果　术后 2周免疫组化证实基因转染组股骨头内有VEGF表达 ,组织形态学检测发现术后 2、4周转染基因的股骨头内血管生长快于对照组 ,术后 4、8周转染基因股骨头新骨形成多于对照组 ,差异均有显著性(P <0 0 1)。结论　利用VEGF基因转染刺激坏死骨组织内血管再生 ,可促进坏死骨修复 ,为临床治疗骨缺血性坏死提供了新的研究方向     

介入治疗激素性股骨头坏死血管内皮细胞生长因子表达的实验研究

目的：观察股动脉药物灌注治疗实验性激素股骨头坏死过程中血管内皮细胞生长因子的表达，探讨介入治疗对骨坏死再血管化和再骨化的机理，方法：新西兰兔48只，利用Shwartman反应和大剂量甲基强的松龙造成兔股骨头坏死模型后，随机分为动脉组、静脉组和对照组。在治疗后的1、2、3和4周，观察股骨头VEGF阳性成骨细胞率，阳性软骨细胞率和阳性血管率，结果：动脉比静脉治疗能更快，更有率提高VEGF阳性成骨细胞率，阳性软骨细胞率和阳性血管率，结论：股动脉介入股骨坏死比静脉治疗更快速有效，其机理在于疏通已经阻塞的血管，促进VEGF等细胞因子的分泌从而加速股骨头的再血管化和再骨化。     

应用血管内皮生长因子基因治疗股骨头缺血性坏死的实验研究

目的：通过建立犬股骨头缺血坏死模型，探讨应用脱蛋白骨复合转染血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）基因骨髓基质细胞植入治疗股骨头缺血坏死的可行性。方法：实验选取36只成年犬，随机分为3组，每组12只。A组为脱蛋白异体骨复合转染VEGF基因的自体骨髓基质细胞；B组为脱蛋白异体骨复合未转染基因的自体骨髓基质细胞；C组单纯植入脱蛋白骨材料。采用液氮冷冻法制作狗股骨头缺血坏死模型，将细胞骨材料复合物植入缺血坏死股骨头内。应用微循环灌注方法了解股骨头内的血运情况，组织形态学观察坏死股骨头的修复情况，免疫组化方法检测VEGF的表达，骨密度仪测定股骨头的骨密度。结果：A组4周后股骨头内有VEGF表达，12周后股骨头内有大量的树枝状血管生成，大量新骨形成，骨密度增高；B、C组均无VEGF基因表达，B组有部分新骨及血管生成，C组仅见少量类骨质形成，血管再生不明显。结论：利用脱蛋白骨复合转染VEGF基因的骨髓基质细胞可促进新骨形成与血管再生，有利于促进坏死骨的修复。     

复方丹参缓释系统植入治疗股骨头缺血性坏死的实验研究

[目的]探讨磷酸钙骨水泥(calcium phosphate cement,CPC)复方丹参缓释系统局部植入治疗股骨头缺血性坏死的机理。[方法]健康新西兰大白兔30只,制作股骨头坏死模型后,分为CPC组、CPC/丹参缓释系统组及对照组。于治疗后1、2、3和4周取标本,行HE染色和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)免疫组化染色,记录空骨陷窝率、VEGF阳性血管率、VEGF阳性成骨细胞率、VEGF阳性软骨细胞率。[结果]CPC/丹参缓释组空骨陷窝率较对照组及单纯CPC组明显降低,VEGF阳性血管率、VEGF阳性成骨细胞率、VEGF阳性软骨细胞率较其他2组明显增加(P<0.01,P<0.05)。[结论]CPC丹参缓释系统通过中药的局部缓释,可促进VEGF等细胞因子的分泌刺激血管内皮的增殖、分化,促进血管的生长和修复,从而改善、重建股骨头局部微循环,促进骨坏死修复。     

液氮冷冻犬股骨头坏死过程中细胞因子和组织学的动态变化

目的研究早期犬股骨头缺血坏死（ONFH）发生、发展过程中组织学改变和细胞因子VEGF的动态表达变化,探讨其在股骨头坏死修复中的意义。方法健康比格犬16只,8～12个月龄,体重8～10kg,取其中4只作为正常对照组（A组,共8髋）,其余通过液氮冷冻法制成双侧股骨头坏死模型,作为实验组（B组）。分别于术后4、8、12、18周行CT检查后处死,取股骨头标本行HE染色观察骨小梁形态改变,免疫组化及RT-PCR检测VEGF的表达情况。结果 CT扫描发现术后B组股骨头骨密度首先升高,然后逐渐降低,至第18周出现囊性变和钙化灶。HE染色观察实验组术后4、8周可见关节软骨、骨小梁的结构和形态首先出现部分改善,新骨形成,参与修复,之后坏死紊乱吸收。免疫组化示：B组在术后第4周VEGF蛋白呈阳性表达,至第8周表达最高,这两个时期表达强度均高于A组,此后逐渐降低至第18周仅见微弱阳性表达,与A组无明显差异。RT-PCR检测VEGF mRNA的表达情况进一步显示C组在术后第4、8周VEGF mRNA表达率均高于其他各组。通过SPSS13.0分析,有统计学差异（P〈0.05）。结论在ONFH发生早期,出现VEGF的高表达,有助于促进坏死股骨头内血管的新生和软骨下骨的增殖,此后骨小梁开始修复重建,这可能有利于坏死股骨头的修复;坏死中后期VEGF表达微弱,骨小梁进一步吸收萎缩、排列紊乱,部分坏死股骨头塌陷,这可能最终导致坏死过程的不可逆性。     

酸性成纤维细胞生长因子对股骨头坏死修复作用的实验研究

目的探讨酸性成纤维细胞生长因子（acidic fibroblast growth factor，aFGF）对股骨头坏死的修复作用。方法将48只成年健康新西兰大白兔用液氮冷冻法造成左侧股骨头坏死头模型，然后将其随机分为实验组和对照组、实验组术后第6、9、14d局部注射aFGF，对照组注射生理盐水。术后2、4、8周分别处死各8只动物，观察有关指标。结果所有动物股骨头坏死模型建立成功，X线检查结合计算机相对骨密度分析、组织学观察及骨密度（BMD）测定：术后第2周，两组无显著差异，4、8周时，实验组均表现出较明显的纤维组织增生和成骨细胞增生作用，新骨形成多于对照组。结论aFGF对液氮冷冻成年兔股骨头坏死模型的修复有促进作用。     

液氮冷冻建立兔股骨头缺血性坏死模型

目的：为股骨头缺血性坏死的治疗研究建立动物模型。方法：用液氮将股骨头冷冻坏死,术后定期折X线片,并取股骨头行组织切片了解股骨头坏死情况。结果：术后3d切片见股骨头完全坏死,术后半月见股骨头自股骨颈开始修复,术后1月X线片见股骨头密度增高。结论：液氮冷冻建立的兔股骨头缺血性坏死可作为研究其治疗的动物模型。     

富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死BMP-2/Smads通路的影响

目的研究富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死BMP-2/Smads通路的影响。方法随机将40只新西兰兔随机分为模型组、富血小板血浆(3%)组、骨髓间充质干细胞(1×106/m L)组、富血小板血浆(3%)+骨髓间充质干细胞(1×106/m L)组。建立兔股骨头坏死模型,术后4w分别向各组股骨头内髓芯减压后注射富血小板血浆、骨髓间充质干细胞。另设空白组10只新西兰兔。空白组与模型组不注射任何物质作为对照。造模后第14周,取材。通过HE染色观察兔股骨头骨髓腔内的病理学及骨陷窝空缺率变化情况。酶联免疫(ELISA)法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测股骨头中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白水平的变化。结果与模型组相比,各治疗组骨髓腔内骨小梁变粗,脂肪细胞减少,骨细胞增多,骨陷窝空缺率降低(P0.05);各治疗组兔血清VEGF的含量增加,股骨头中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白水平提高。结论富血小板血浆与骨髓间充质干细胞可调节BMP-2/Smads信号通路,促进股骨头骨细胞增殖,减少骨陷窝空缺率。     

Upregulation of VEGF in Subchondral Bone of Necrotic Femoral Heads in Rabbits with Use of Extracorporeal Shock Waves

Extracorporeal shock wave treatment appears to be effective in patients with avascular necrosis of the femoral head. However, the pathway of biological events whereby this is accomplished has not been fully elucidated. The purpose of this study was to investigate the effect of extracorporeal shock waves on vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in necrotic femoral heads of rabbits. VEGF expression was assessed by immunohistochemistry, quantitative real-time PCR, and Western blot analysis. The degree of angiogenesis was also assessed, as determined by the microvessel density (MVD), the assessment of which was based on CD31-expressing vessels. Bilateral avascular necrosis of femoral heads was induced with methylprednisolone and lipopolysaccharide in 30 New Zealand rabbits. The left limb (the study side) received shock wave therapy to the femoral head. The right limb (the control side) received no shock wave therapy. Biopsies of the femoral heads were performed at 1, 2, 4, 8, and 12 weeks. Western blot analysis and real-time PCR showed that shock wave therapy significantly increased VEGF protein and mRNA expression, respectively, in the subchondral bone of the treated necrotic femoral heads. Compared with the contralateral control without shock wave treatment, the VEGF mRNA expression levels increased to a peak at 2 weeks after the shock wave treatment and remained high for 8 weeks, then declined at 12 weeks, whereas the VEGF protein expression levels increased to a peak at 4 weeks after the shock wave treatment and remained high for 12 weeks. The immunostaining of VEGF was weak in the control group, and the immunoreactivity level in the shock-wave-treated group increased at 4 weeks and persisted for 12 weeks. The most intensive VEGF immunoreactivity was observed in the proliferative zone above the necrotic zone. At 4, 8, and 12 weeks after the shock wave treatment, MVD in subchondral bone from treated femoral heads was significantly higher than that in subchondral bone from untreated femoral heads. These data clearly show that extracorporeal shock waves can significantly upregulate the expression of VEGF. The upregulation of VEGF may play a role in inducing the ingrowth of neovascularization and in improving the blood supply to the femoral head.     

活血化瘀中药联合血管内皮生长因子基因转移促进股骨头坏死处新生血管形成的实验研究

目的:观察活血化瘀中药联合血管内皮生长因子(VEGF)基因转移对促进股骨头缺血坏死处新生血管形成情况。方法:日本大耳兔40只,随机分为对照组、模型组、中药组、基因组和综合组。治疗8周后采用免疫组织化学方法观察股骨头滑膜VEGF阳性细胞率及数字减影血管造影股骨头血管数目改变情况。结果:模型组VEGF阳性细胞表达率减低,与对照组、基因组、综合组比较,差异有显著性意义(P<0.01),与中药组比较,有统计学差异(P<0.05),综合组VEGF阳性细胞表达率较高,与中药组及基因组比较,有统计学差异(P<0.05)。血管数目:在A区,各组与模型组比较,均无统计学差异;在B区,各组较模型组血管数目均有增加,对照组、基因组、综合组与模型组比较,有统计学差异(P<0.05)。综合组与基因组比较有统计学差异(P<0.05),中药组虽然血管数目较模型组多,但是无统计学意义。结论:活血化瘀中药及VEGF基因转移均可促进股骨头缺血坏死处局部新生血管形成和侧支循环的建立,尤以活血化瘀中药联合基因疗法效果为好,为临床应用活血化瘀中药联合基因疗法治疗股骨头缺血性坏死提供实验依据。     

股骨头缺血性坏死造模的实验研究

目的：制作激素性股骨头缺血性坏死的动物模型。方法：将30只成年三黄鸡随机分实验组、对照组2组,实验组注射马血清后大量使用地塞米松,2组分别进行股骨头内PO2、pH值测定和组织学检查。结果：实验组第6周出现股骨头缺血性坏死,复制成功率33．3％,第12周成功率83．3％,总成功率60．0％。结论：鸡注射马血清后大量使用激素可成功地复制出激素性股骨头缺血性坏死的动物模型。     

一氧化氮对激素性股骨头缺血坏死治疗的生化研究

目的　分析一氧化氮 (NO)在前凝血状况下诱导实验性激素性股骨头缺血坏死过程中的作用。方法　 36只成年新西兰兔随机分为三组 ,A组 (正常对照组 ) 12只 ;B组 (疾病模型组 ) 12只 ,间隔三周于兔耳缘静脉注射马血清 ,共 2次 ,每次10ml/kg。于第二次注射后 2周 ,腹腔连续 3d注射甲基强的松龙 ,共 3次 ,每天 1次 ,每次 4 0mg/kg,建立激素性股骨头缺血坏死模型 ;C组 (治疗组 ) 12只 ,模型诱导方式同B组 ,模型复制成功后 ,将硝酸甘油作为一氧化氮外源供体 ,采用介入疗法 ,通过微泵导管直接注入双侧股骨头供血动脉内 ,持续泵注药液治疗 2周。三组动物均于实验完成后行心内穿刺抽取全血标本 ,测定血小板α颗粒膜蛋白 (GMP - 14 0 ) ,氧化型低密度脂蛋白 (OX -LDL) ,NO的血浆含量 ,而后处死 ,切取双侧股骨头行HE染色 ,光镜下观察病理改变 ,统计空骨陷窝率和软骨下区血管数 ,进行组间t检验。结果　A、C组血浆OX -LDL和GMP - 14 0水平明显低于B组 ,而血浆NO水平明显高于B组。C组空骨陷窝率及软骨下区血管数虽未完全达到A组正常水平 ,但较B组有明显改变。结论　NO生成减少导致的OX -LDL合成增多是引发激素性股骨头缺血坏死过程中系统血管内凝血的重要环节 ,以一氧化氮供体作为药物 ,采用介入疗法治疗激素性股骨头缺     

股骨头坏死修复过程中的动物实验研究

目的：通过动物模型，了解股骨头坏死后的修复过程。方法：采用新西兰白兔32只，3只为正常对照，余29只用液氮冷冻法造成左侧股骨头坏死，右侧作为自身对照。术后24h、48h、1w各处死3只，2、4、8、12w各处死5只，观察有关指标。结果：（1）X线表现：2w组两侧股骨头密度无差异，4w后手术侧股骨头骨密度增高。（2）骨密度测定：8w后手术侧股骨头骨密度显高于对照侧（P＜0．01）。（3）组织学观察：24h组两侧镜下结构均无明显异常，48h后手术侧股骨头出现骨髓组织坏死，1w后骨陷窝大部分空虚，原始间充质细胞和毛细血管从活骨一侧增生，向死骨部侵入，替代坏死的骨髓组织，4w以后逐渐出现间充质细胞在死骨表面分化成成骨细胞，形成新骨，8w以后修复反应遍及整个股骨头， 骨小梁增宽。（4）四环素荧光标记；死骨无荧光标记，4w以后修复区出现强的荧光标记。（5）骨组织形态记量：4w后手术侧股骨头的TBV和MTT均较对侧显增高（P＜0．01）。结论：通过以上结果可以认为这一模型是成功的，而且能在较短的时间内观察到坏死修复的过程，用兔作坏死模型，比较经济，利于大批观察。