沉默中介体复合物亚基19基因对人膀胱癌细胞UM-UC3迁移能力的影响

目的探讨中介体复合物亚基19(Med19)对人膀胱癌UM-UC3细胞迁移能力的影响及其机制。方法采用针对Med19的siRNA慢病毒载体转染人膀胱癌UM-UC3,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹方法(Western blot)检测Med19-siRNA转染组(siRNA)与空载组(NC)Medl9基因表达情况;采用Western blot检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达;采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化。结果 Medl9-siRNA慢病毒感染UM-UC3细胞后,转染组Medl9mRNA表达与空载组相比明显降低,差异有统计学意义(t=10.15,P0.01),且转染组Med19、MMP-2和MMP-9蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(t值分别为71.36,26.34,8.627,均P0.01),划痕实验和Transwell实验显示转染组细胞迁移能力明显减弱。结论沉默Med19基因可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达降低人膀胱癌细胞UM-UC3的迁移能力。     

脊索瘤与脆性组氨酸三联体基因的相关性研究

目的 探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因改变与脊索瘤发生的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学（SP）方法对18例脊索瘤和瘤旁正常组织FHIT基因RNA转录本和蛋白表达进行检测。结果 RT-PCR检测可见11例（61．1％）存在FHIT基因RNA转录本缺失．1例还同时含有正常和异常转录本。对其中2例进行测序，证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等2个片段；另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子。脊索瘤中FHIT蛋白表达阳性百分比为55．6％（10／18）．瘤周正常组织为100．0％（18／18），差异有统计学意义（P〈0．05），FHIT蛋白在脊索瘤中表达减低。结论 FHIT基因表达缺失是脊索瘤发生的重要事件之一，可能与脊索瘤的发生机制有关。     

RNA基因沉默关键蛋白Argonaute在人类肿瘤中的表达及其作用

真核生物中,小分子非编码核糖核酸(RNA)的作用主要为序列特异性的基因表达负调控,包括RNA干扰(RNAi)、翻译抑制和异染色质形成等,即RNA基因沉默[1].随着研究的深入,发现许多非编码小分子RNA的胞内蛋白质合作者,参与了小RNA的加工成熟和在细胞内行使功能,其中发挥重要核心作用的Argonaute(Ago)蛋白引起了众多科学家的高度重视.     

RNAi表达载体对膀胱癌细胞Livin基因表达的抑制作用

目的观察RNA干扰（RNAi）表达载体对膀胱癌BIU-87细胞Livin基因的抑制作用。方法构建针对Livin基因的RNAi质粒表达载体，脂质体法转染膀胱癌BIU-87细胞株，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测其对Livin mRNA及蛋白表达的影响。结果构建的表达质粒在膀胱癌BIU-87细胞株中均抑制了Livin mRNA及蛋白表达。与空白载体组细胞作对照，前者产生的小干扰RNA（siRNA）在对Livin mRNA的抑制率24、48h分别为（81．28±9．21）％、（55．88±6．27）％，蛋白抑制率24h为（64．75±7．55）％。结论RNAi表达载体可以有效地抑制膀胱癌细胞Livin基因的表达。     

BMP-7对IL-1β作用下软骨细胞合成和分解表型的影响

目的探讨在炎症因子白细胞介素（IL）-1β刺激下,骨形态发生蛋白（BMP）-7对小鼠关节软骨细胞合成表型及分解表型的作用,为 BMP-7用于骨关节炎（OA）治疗提供科学证据。方法将原代培养的小鼠关节软骨细胞分为6组,对照组包括未加处理的空白组、IL-1β（5 ng／ml）组,实验组包括3个浓度梯度（10、50、200 ng／ml）BMP-7分别与 IL-1β（5 ng／ml）共作用组、单独 BMP-7（200 ng／ml）组,作用时间为24 h。用逆转录-定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）、聚集蛋白聚糖（aggrecan）、Y 染色体性别决定结构域转录因子（Sox）9等合成基因及基质金属蛋白酶（MMP）-3、MMP-13、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS）-5等分解基因表达变化。再用酶联免疫吸附试验（ELISA）验证 MMP-3、MMP-13蛋白表达水平。结果在 IL-1β作用下,软骨细胞特异合成基因显著下调并表达分解表型。添加 BMP-7后,受抑制的合成基因得到一定程度恢复,MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5等蛋白酶表达量明显减少,其中200 ng／ml BMP-7的促合成、抑分解作用最佳。单独 BMP-7作用于软骨细胞会上调 aggrecan 表达,但不影响 Col Ⅱ和Sox9表达。结论BMP-7对 OA 的治疗作用与 BMP-7调控炎症环境中软骨细胞合成表型和分解表型的能力相关。     

应用液相芯片分析肝细胞癌及癌旁组织小分子RNA表达谱差异

目的运用液相芯片技术研究肝细胞癌（HCC）及毗邻癌旁组织中小分子RNA（miRNA）表达谱差异。方法常规抽提20例HCC及对照癌旁组织中总RNA，采用含有114种miRNA的液相芯片及配套的Luminex 100检测系统进行miRNA差异表达谱分析；选取部分筛选出的差异表达miRNA，以半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot分析其相对应的靶mRNA和目的蛋白表达状况。结果HCC的miRNA表达谱中差异表达miRNA共有28个，其中上调6个，下调22个，20例标本中共存性差异表达miRNA有9个（上调2个，下调7个，P〈0．01）；选取表达明显上调的miR-222作为进一步研究对象，半定量RT—PCR和Western blot分别证实其调节的靶目标-结缔组织生长因子（CTGF）在mRNA水平HCC和癌旁组织中差异无统计学意义。而蛋白质水平在HCC中表达明显下降。结论液相芯片筛选差异表达miRNA为HCC发病机制和诊断治疗的研究提供了新的思路；miR-18可能通过转录后基因沉默机制抑制CTGF mRNA翻译，从而促进HCC浸润转移。     

MicroRNA与肾脏

MicmRNAs（miRNAs）是一类真核生物高度保守的内源性非编码单链小分子RNA,长度约21～24个核苷酸。由具有发夹结构的约70～90个碱基大小的单链RNA前体（pre2miRNA）经过Dicer酶（an RNase Ⅲ enzyme,核糖核酸Ⅲ酶）加工后生成,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对,引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译,从而在转录后水平调控基因的表达,其基因表达具有时序性和组织特异性。转录后调节,     

miRNA与泌尿系恶性肿瘤的研究进展

微小核糖核酸（microRNA,miRNA）是一段高度保守非蛋白编码的单链小分子 RNA,在真核生物中广泛存在,可调控基因的表达。miRNA 通过与目的 mRNA 的3曚端非编码区（3＇-UTR）互补配对,致使 mRNA 降解或抑制其翻译,在转录后水平对基因表达进行调控。正常情况下,miRNA参与机体基本生命活动的调控,但当 miRNA 发生突变或表达水平明显改变时,机体也会随之发生异常。人们通过大量研究,对 miRNA 认识逐渐深入,发现它在肿瘤发生、肿瘤相关信号转导、肿瘤血管生成、肿瘤转移过程中均发挥重要作用。Catto 等[2]曾回顾总结了40余种 miRNA 在泌尿系肿瘤中的作用。本文主要就近年来相关研究的新进展综述如下。     

脑星形细胞瘤Livin基因表达与细胞增殖的关系

Livin是最近发现的凋亡抑制蛋白（IAP）家族的新成员，其基因位于染色体20q13．3，全长46kb，有α及β两种异构体，分别编码长度为298及280个氨基酸的蛋白质。近期研究表明Livin基因在某些恶性肿瘤中表达，但该基因与神经系统肿瘤的关系至今国内外尚未见报道。本研究采用实时逆转录-聚合酶链反应（real—timeRT，PCR）的方法检测脑星形细胞瘤中Livin α、β的表达，并结合免疫组织化学检测细胞增殖活性，现报告如下。     

长链非编码RNA在膀胱肿瘤中的研究进展

膀胱恶性肿瘤的发病率在泌尿系肿瘤中发病率最高,其发病与环境因素和生活习惯等密切相关,其发生、发展机制目前尚不完全明确,临床上对膀胱肿瘤复发的预防也尚无可靠方法.因此,进一步深入了解其发生、发展和复发的确切机制非常重要.长链非编码RNA(long noncodingRNA,LncRNA)是一类转录长度大于200nt、缺少或者没有开放阅读框的RNA,相比编码RNA来说,具有较高的组织器官特异性,种间不保守.LncRNA主要是通过影响相关信使RNA的转录从而干扰下游基因的表达、抑制RNA聚合酶Ⅱ,或者通过蛋白修饰影响相关基因的表达等机制发挥其生物学功能作用.本文就目前LncRNA在膀胱肿瘤中的研究进展进行综述.     

p53对胃癌细胞BGC823中Survivin基因表达的影响

目的 探讨p53基因对胃癌细胞株BGC823中Survivin基因表达的影响及其作用机制。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测胃癌细胞株BGC823中Survivin和p53基因表达情况；利用质粒pcDNA3．0-rpS3转染该细胞株。应用实时聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测细胞在培养后不同时间点Survivin mRNA和蛋白表达水平。结果 确认了胃癌细胞株BGC823中Survivin和突变型p53基因的表达。受野生型p53质粒转染的胃癌细胞在培养16和24h后，Survivin mRNA和蛋白质水平呈明显下降趋势。结论 野生型p53在转染胃癌细胞株BGC823后可显著抑制后者Survivin基因的转录和表达。     

磁控靶向RNA干扰抑制结直肠癌中Myc基因表达的研究

目的观察磁性纳米微粒介导的RNA干扰技术基因转染大肠癌Lovo细胞后对Myc基因的转录及表达的影响。方法用自行制备的葡聚糖磁性纳米微粒（DCIONP）为载体，载附含有Myc基因潜在特异性干扰序列的质粒DNA（pGenesil-1-X1、pGenesil-1-X2）、含对照引物的pGen—esil-1-HK，以及裸质粒pGenesil-1。并以单纯DCIONP、不加药组作为对照组，在外加磁场的作用下，转染体外培养的Lovo细胞。通过rt—PCR及Western blot方法分别检测转染24h后大肠癌细胞内Myc基因的mRNA转录水平及相关蛋白的表达。结果磁性转染pGenesil-1-X2的Lovo细胞，其Myc基因的mRNA转录水平明显降低，相关蛋白的表达亦显著降低。结论磁控靶向RNA干扰技术能够发挥干扰效应，抑制Myc基因mRNA的转录以及相关蛋白的表达。     

雷帕霉素靶蛋白反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

目的构建雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的反义RNA真核表达载体，观察其对血管平滑肌细胞（VSMC）功能的影响。方法提取人VSMC总RNA，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）扩增mTOR基因cDNA序列，经pGEM-T载体克隆后双酶切，将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1，转染VSMC，Westernblot法检测反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果经RT-PCR获得664bp产物，T载体克隆后，酶切确定该片段为mTOR基因cDNA，进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR，测序证明序列正确后转染VSMC，证实其能够显著抑制mTOR蛋白产物表达，转染72h的mTOR蛋白产物表达抑制率达82％，S期细胞由15％降低为7％，凋亡细胞增至9％。VSMC增殖过程在Gx／Go期→S期受阻。结论成功构建mTOR基因的反义RNA真核表达载体。     

长链非编码RNA及其与肿瘤相关研究进展

哺乳动物基因组中存在着大量非编码RNA是现代生物学研究的重大发现之一[1].应用基因芯片及全基因组和转录组测序技术研究证实编码蛋白质的RNA只占全部基因转录本的2％,剩余98％为非编码RNA[2]. 非编码RNA是指不编码蛋白质但在生物体生命活动中具有功能的RNA分子,按长度可将其分为短链非编码RNA和长链非编码RNA( long non-coding RNA,lncRNA)两大类.许多短链非编码RNA已被证实在肿瘤形成过程中发挥着重要作用[3],包括已被广泛研究并引起重视的microRNA和siRNA等.而后者指长度大于200个核苷酸的RNA,不参与或很少参与蛋白编码.目前研究已发现数十种lncRNA具有基因印记、计量补偿效应、RNA剪切等分子生物学作用,与肿瘤在内的多种疾病密切相关.本文将就lncRNA在肿瘤发生、发展中的作用做一综述.     

RNA干涉基本原理及其应用前景

RNA干涉（RNA interference，RNAi）的发现源于偶然。1995年康耐尔大学的Guo等试图用反义技术特异性阻断秀丽线虫中par—1基因的表达以研究其功能．但实验发现给线虫注射par—1的反义RNA时，如预期那样阻断了该基因的表达．但当在对照组注射正义RNA时以期待观察到该基因表达增强时．却发现该基因同样被抑制．该研究小组一直没能给出合理的解释。直到1998年，华盛顿卡耐基研究院的Fire和马萨诸塞州大学的Mello才解出谜底——他们将体外转录得到的单链RNA（正义RNA或反义RNA）纯化后注射给秀丽线虫．结果基因抑制效应很微弱，而将正义链和反义链混合的双链RNA纯化后给予线虫．却发现这种双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）比单独的正义RNA或反义RNA具有更高效的特异性基因沉默效应，且几个dsRNA分子就足以实现整个同源基因的完全沉默。还会在子代中也引起相应的基因沉默．至此他们将这种现象称作RNAi。     

基于生物信息学的胆囊癌差异表达谱中关键蛋白调控基因分析

背景与目的：胆囊癌（GBC）的机制发生目前仍不清楚，基因组与转录组层面的数据为研究GBC的分子生物学机制提供了基础数据资源。本研究运用生物信息学手段分析GBC组织和胆囊正常组织的差异表达基因以及GBC关键蛋白调控分子，从而探讨GBC发生的潜在分子生物学机制。 方法：基于GEO数据库中两个GBC转录组数据集筛选差异表达基因，并对这些基因进行GO三种类型功能注释。利用STRING数据库构建蛋白质互作网络，并进行模块挖掘寻找关键蛋白调控基因。评估关键蛋白调控基因的表达及预测效能。 结果：共筛选到140个可重复GBC差异表达基因（上调基因20个，下调基因120个），主要与前脑发育和神经发生的正调控通路密切相关，参与突触后膜和横小管组成。同时发现SFRP1这一关键调控蛋白基因在预测GBC的发生中具有一定作用。 结论：本研究获得的GBC转录谱表达的信息可为GBC分子机制的研究提供框架和脉络，关键蛋白调控基因SFRP1可能在GBC的发生与发展中发挥关键生物学作用。     

微小RNA及其在泌尿系统肿瘤中的研究进展

微小RNA(miRNA)是近年来在真核细胞内发现的一种对基因具有调控作用的、内源性的、非蛋白质编码的小分子RNA,主要通过与靶信使RNA(mRNA)的3'端非翻译区(3'-UTB)完全或部分互补结合,导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制,从而调控靶基因的表达.     

微RNA与间充质干细胞软骨分化调控机制研究进展

微RNA（microRNA，miRNA）是一类由内源基因编码、长度为22个核苷酸左右的单链RNA。相关研究表明，在细胞增殖、分化、凋亡以及疾病发生过程中微RNA发挥巨大作用，越来越多地引起人们的关注。MSC（mesenchymal stem cell，间充质干细胞）软骨分化过程中，微RNA在转录后水平调控软骨分化相关靶基因的表达，以此调控间充质干细胞软骨分化。     

胃癌基因表达谱和蛋白质表达谱的分析研究

目的从转录组水平和蛋白质组水平寻找胃癌组织与正常胃组织间的差异表达基因和蛋白。方法应用含有14592个已知基因及表达序列标签的cDNA表达谱芯片获取基因表达谱信息．50％以上样本中Cy3／Cy5荧光强度比大于或等于2和小于或等于0．5的基因分别为在胃癌中表达上调或下调的基因。采用双向凝胶电泳（2-DE）分离32例经手术切除的胃癌患者的胃癌组织和正常胃组织总蛋白．对差异表达蛋白质点利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）进行分析．获取肽质量指纹图谱（PMF）。同时搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果与正常组织相比．胃癌组织中差异表达基因共有387个,其中表达上调的有149个基因．上调超过3倍的有29个基因：表达下调的有238个基因．其中下调超过5倍的有21个基因。在蛋白质水平鉴定了15个差异表达蛋白．在肿瘤组织中高表达的有10个．其余5个在肿瘤组织中低表达。胃癌中过表达的基凶与蛋白产物主要与细胞骨架运动、细胞增殖及信号传导有关．表达下调的则主要与细胞免疫防御、毒理代谢有关。结论从转录组水平和蛋白质组水平对胃癌基因表达谱进行分析．不仅有助于从分子水平全方位理解胃癌的发病机制及生物学特性．同时也有助于进一步发现新的胃癌相关标志物和基因治疗的靶点。     

转化生长因子βⅡ受体、胰岛素生长因子Ⅱ受体、凋亡诱导蛋白BAX和转录因子E2F4基因移码突变与胃癌微卫星不稳定性的关系

目的探讨胃癌组织中与细胞增殖、凋亡和转录有关的基因移码突变与微卫星不稳定性（MSI）的关系。方法采用酚．氯仿一异戊醇法从胃癌及切缘正常石蜡组织中提取DNA。组织切片中肿瘤成分不足50％时采用显微切割方法。以聚合酶链反应一单链构象多态性（PCR-SSCP）、直接DNA测序法检测MSI及转化生长因子BII受体（TGFβRⅡ）、胰岛素生长因子Ⅱ受体（IGFⅡR）、凋亡诱导蛋白BAX和转录因子E2F4基因的移码突变。按照MSI的发生频率将胃癌患者分为3组：出现≥2个位点的MSI为高MSI,出现1个位点的MSI为低MSI,无MSI发生为微卫星稳定。结果61例胃癌患者中,12例（19．7％）为高MSI,11例（18．0％）为低MSI,38例（62．3％）为微卫星稳定。TGFβRⅡ、IGFⅡR、BAX和E2F4移码突变检出率分别为12例（19．7％）、3例（4．9％）、4例（6．6％）和10例（16．4％）。12例高MSI胃癌中,有10例TGFβRⅡ基因突变,3例IGFⅡR基因突变,4例BAX基因突变,10例E2F4基因突变;其移码突变率与高MSI发生密切相关。微卫星稳定组的肿瘤中未发现这些基因的突变。结论TGFβRⅡ、IGFⅡR、BAX和E2F4基因编码区重复序列是MSI发生的靶点,这些基因的移码突变在MSI胃癌的发生和发展中起了重要作用。