NF-κB在醛固酮所致大鼠肾损伤中的作用及相关机制

目的 探讨NF-κB在醛固酮-1%NaCl诱导的单侧肾切除肾损伤模型中的作用及可能机制。 方法 32只雄性SD大鼠单侧肾脏切除后随机分为4组：对照组（n=8）;1%NaCl组（1%NaCl饲料喂养,n=8）;醛固酮组（1%NaCl饲料喂养+0.75 μg/h醛固酮泵入,n=8）;吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）组（1%NaCl饲料喂养+0.75 μg/h醛固酮泵入+PDTC 100 mg/kg灌胃,n=8）。共治疗4周。观察各组大鼠收缩压、蛋白尿、肾功能、肾组织形态学改变。.Western印迹和实时定量PCR法观察肾皮质胞间黏附分子1（ICAM-1）及结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达及mRNA表达;EMSA法检测肾皮质NF-κB活性;免疫组化法观察NF-κB的表达情况。 结果 醛固酮组大鼠表现明显的高血压、蛋白尿、肾小球硬化,ICAM-1及CTGF蛋白和mRNA表达水平较1%NaCl组显著升高（均P < 0.05）,NF-κB活性明显增强,NF-κB在肾组织表达也明显增加。PDTC干预后在抑制NF-κB活性和表达的同时,ICAM-1及CTGF表达明显减少（均P < 0.05）,同时大鼠血压和肾小球硬化也得到了明显缓解。 结论 NF-κB抑制剂PDTC可通过减少ICAM-1及CTGF的表达缓解单侧肾切除-1%NaCl-醛固酮所致肾损伤。     

内毒素休克大鼠核因子κB活化规律及其在生物蝶呤诱生中的作用

目的观察内毒素休克大鼠血浆及主要脏器核因子(NF)κB活化规律及其对生物蝶呤(BH4)和一氧化氮(NO)表达水平的影响,探讨内毒素休克时NF-κB信号通路对BH4诱生NO的分子调控机制及其与多器官功能损害的关系。方法将47只大鼠按表格随机法分为正常组(8只)、内毒素／脂多糖(LPS)组(24只,每观察时相点8只,均同时注射LPS制成休克模型)和拮抗组[15只,每观察时相点5只,均同时注射LPS并以吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)拮抗]。休克及拮抗组于注射LPS后2、6、12 h观察,并与正常组同法处死,无菌留取大鼠血标本及肝、肺、肾组织,测定组织中NF-κB活性和三磷酸鸟苷环水解酶Ⅰ(GTP-CHⅠ)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平、血浆和组织中的BH4含量及NO水平、肝脏和肾脏功能指标、肺组织髓过氧化物酶活性。结果与正常组(例如肺组织中NF-κB活性为26±6)比较,LPS组大鼠组织中NF-κB迅速活化(P<0．01),并于注射后2 h达峰值(肺组织中为291±44);LPS组各组织中GTP-CHⅠ和iNOS mRNA表达、BH4和NO水平也较正常组明显升高(P<0．05或0．01),至伤后12 h仍持续较高水平。此外,该组相应器官功能均受到不同程度的损害。应用PDTC的拮抗组大鼠各组织中NF-κB活性均较LPS组有所降低,GTP-CHⅠ、iNOS mRNA表达及BH4、NO水平显著受抑,肝、肺、肾功能明显改善。结论内毒素休克时机体内NF-κB通路高度活化,并对BH4／NO系统具有明显调节效应;可通过下调BH4介导的iNOS的过度活化抑制NF-κB信号途径,从而减轻组织炎性反应,对机体脏器功能起到保护作用。     

枯否细胞NF-κB 激活对胆源性内毒素血症大鼠肝部分切除后肝细胞再生的影响

目的探讨胆源性内毒素血症(BE)大鼠肝部分切除(PH)后枯否细胞(KCs)核因子-κB(NF-κB))激活对肝细胞再生的影响.方法将Wistar大鼠分为4组(每组72只)N-PH组(正常大鼠70%PH组);BE-PH组(BE大鼠70%PH组);BE-PH 白细胞介素(IL)-10治疗组;BE-PH治疗对照组.检测70%PH后0、1、6、24、48、72h KCs NF-κB 激活、KCs肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA、IL-1βmRNA和IL-6 mRNA表达以及肝细胞溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)标记.结果 BE-PH组KCs NF-κB活性高于N-PH组(P<0.001),KCs TNFαmRNA、IL-1βmRNA及IL-6 mRNA表达亦明显高于N-PH组,而肝细胞BrdU高峰标记指数(38.82±9.79)低于N-PH组(64.37±13.69)(P<0.01);BE-PHIL-10组KCs NF-κB 活性低于BE-PH组(P<0.01),KCs TNFα、IL-1β及IL-6 mRNA表达减少,而肝细胞BrdU高峰标记指数高于BE-PH组(P<0.05).结论 BE-PH后KCs NF-κB 高水平激活导致KCs TNFαmRNA、IL-1βmRNA及IL-6 mRNA表达增高,从而抑制肝细胞再生,适当调控KCs NF-κB 活性能促进BE-PH后肝细胞再生.     

急性胰腺炎大鼠肝脏NF-κB 对 TNF-α表达的调控及其在肝损伤中的作用

目的 观察急性胰腺炎发生时肝组织中核因子-κB(NF-κB)对TNF-αmRNA表达的调节及其在肝损伤中的作用。方法 Wistar大鼠72只，随机均分为急性胰腺炎组(AP组)、急性胰腺炎吡咯基二硫氨基甲酸酯(PDTC)处理组(APP组)以及对照组(SO组)。分别在术后3h、6h、12h及24h检测肝组织NF-κB活性、TNF-αmRNA的表达以及血浆ALT水平。结果 AP组及APP组的NF-κB活性、TNF-αmRNA表达及血浆ALT水平分别在术后3～6h及3～24h显著高于SO组。在应用了NF—κB抑制剂的APP组，NF-κB活性、TNF-αmRNA表达以及血浆ALT水平均显著低于AP组。结论 急性胰腺炎发生时，肝脏中活化的NF-κB促进了TNF-αmRNA的表达，并参与了肝损伤的发生。     

NF-κB 活化与细胞凋亡在大鼠重症急性胰腺炎肺损伤中的关系

目的：探讨大鼠重症急性胰腺炎（SAP）肺损伤中NF-κB活化与细胞凋亡的关系。 方法：选择Wistar大鼠共72只,随机分为假手术组、SAP模型组（模型组）、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）预处理+SAP模型组（PDTC组）,各组分别在造模后2、6、8、12 h取6只大鼠,收集肺组织光镜下观察病理变化,利用免疫组织化学法检测NF-κB的表达,检测细胞凋亡。 结果：除假手术组外,其余两组大鼠造模后均出现明显的肺损伤,且随时间推移逐渐加重,但PDTC组在各时间点肺损伤程度低于模型组;假手术组大鼠肺组织有极少量的NF-κB表达与凋亡细胞,而其余两组造模后肺组织均有明显的NF-κB表达与细胞凋亡,且均在造模后6 h达高峰,但PDTC组NF-κB表达量及凋亡细胞数均明显少于模型组,差异均有统计学意义（均P<0.05）;相关性分析显示,SAP大鼠肺组织NF-κB活性与细胞凋亡率呈明显正相关（3 h时,r=0.93,P=0.02;6 h时,r=0.95,P=0.021;8 h时,r=0.82,P=0.038;12 h时,r=0.98,P=0.02）。 结论：大鼠SAP肺损伤中的细胞凋亡增加可能与NF-κB活性升高有关。     

核因子-κB介导脂多糖诱导急性肺损伤大鼠高迁移率族蛋白B1的表达

目的探讨核因子(NF)-κB在脂多糖诱导大鼠急性肺损伤过程中对肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响。方法采用腹腔注射脂多糖(LPS)致大鼠脓毒症急性肺损伤模型。取健康SPF级雄性SD大鼠72只,体重180~220g,采用随机数字表法,分为对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(L组,n=30)、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)溶剂对照组(P组,n=6),PDTC治疗组(LP组,n=30)。各组分别给予腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)(C和P组)或LPS(L和LP组);P组和LP组在PBS或LPS注射前15min,给予腹腔注射PDTC 100mg/kg。C组和P组腹腔注射PBS后的16h,L组和LP组注射LPS后的16h后各取6只大鼠检测其肺湿/干重比(W/D);C组和P组腹腔注射PBS后的16h,L组和LP组注射LPS后的4h(T1)、8h(T2)、16h(T3)、24h(T4)和48h(T5)时各取6只大鼠经处理后采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中髓过氧化物酶(MPO)和白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot法检测肺组织HMGB1的表达水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织的病理变化。结果与C组比较,L组肺组织W/D、BALF中MPO和IL-6水平明显升高(P0.01),病理切片显示严重肺组织损伤,T2~T4时肺组织中HMGB1的表达水平明显升高(P0.05);使用PDTC治疗后,与L组比较,肺组织W/D、BALF中MPO和IL-6水平明显降低(P0.01),病理示肺损伤程度明显减轻;T2~T4时肺组织HMGB1表达水平明显降低(P0.05)。结论在脂多糖诱导急性肺损伤中,被激活的NF-κB通过介导晚期炎症因子HMGB1的表达来参与急性肺损伤的发生与发展过程。     

休克期切痂对烫伤大鼠肝、肺组织高迁移率族蛋白B1表达及促炎/抗炎平衡的影响

目的 观察休克期切痂对烫伤大鼠组织早期和晚期炎症介质变化规律及相应器官功能的影响,探讨休克期切痂改善预后的分子机制。方法 Wistai大鼠30％Ⅲ度烫伤后随机分为24h切痂组和72h切痂组。分别检测肝、肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白介素-10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果烫伤后2d,肝、肺组织HMGB1、TNF-α mRNA表达增强,而IL-10mRNA伤后8d增强;24h切痂大鼠伤后4d肝、肺组织HMGB1和TNF-α mRNA表达下调,伤后8d其IL-10 mRNA表达恢复正常;72h切痂大鼠伤后8d肝、肺IL-10mRNA仍维持较高水平。伤后2．8d肝组织内TNF-α蛋白水平呈双峰改变,4d时减少;24h和72h切痂组肝TNF-α维持在正常范围;伤后2、4d肝TNF-α／IL-10比例升高,24h切痂可降低TNF-α／IL-10。此外,24h切痂组4、8d血浆天冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶含量及肺组织髓过氧化物酶活性显著降低。结论休克期切痂可阻断严重烫伤大鼠肝、肺组织早期和晚期炎症介质过度表达,维持促炎／抗炎介质平衡,改善多脏器功能。     

抑制核因子-κB活性对肝肺综合征大鼠肺血管内巨噬细胞iNOS表达的影响

目的 研究抑制核因子-κB(NF-κB)活性对肝肺综合征(HPS)大鼠肺血管内巨噬细胞(PIM)内诱导型一氧化氮合酶(iNOs)表达的影响.方法 Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:对照组,吡咯醛二硫氨基甲酸(PDTC)对照组,CCl4组,CC4+PDTC组.对照组不做任何处理.CC4组,肌注CC4(3 ml/kg·4 d),共16次.CC4+PDTC组,注射CC4第4次后,腹腔注射PDTC(20 mg/kg·48 h).PDTC对照组,仅按CC4+PDTC组方法注射PDTC.取动脉血作血气分析,静脉血测内毒素和肝功能.取肠系膜淋巴结作细菌培养.应用免疫组化方法观察PIM的黏附、聚集情况,以及iNOS和NF-κB的蛋白表达和定位.以非放射性凝胶电泳阻滞实验(EMSA)检测NF-κB活性,SYBR Gteen Ⅰ实时定量PCR方法检测肺组织中iNOS的mRNA表达.结果 CCl4组发展成HPS模型,表现为PaO2、PaCO2降低和肺泡一动脉血氧分压差(A-aDO2)升高,肝功能异常,内毒素血症,所有数值都与对照组和PDTC对照组有显著性差异(P<0.05).CCl4组肠系膜淋巴结培养阳性率为62.5%(5/8),与CCl4+PDTC组的66.7%(6/9)无统计学差异(P=1.000).CCl4组中超过10个巨噬细胞的血管为60.8%(292/480),CCl4+PDTC组中超过10个巨噬细胞的血管仅为19.6%(106/540),两组间存在非常显著性差异(P<0.01).对照组和PDTC对照组中肺血管内无巨噬细胞聚集.肺组织切片免疫组化染色检测NF-κB和iNOS蛋白均在CCl4组的PIM中表达.CCl4组的NF-κB活性明显高于对照组和PDTC对照组(P<0.05).CCl4+PDTC组的NF-κB活性明显低于CCl4组(P<0.05),而与对照组和PDTC对照组之间无显著性差异(P>0.05).CCl4组的iNOS的mRNA表达明显高于对照组和PDTC对照组(P<0.05).CCl4+PDTC组的iNOS的mRNA表达明显低于CCl4组(P<0.05),而与对照组和PDTC对照组之间无显著性差异(P>0.05).结论 NF-κB诱导PIM内iNOS高表达在HPS中发挥重要作用,PDTC可能通过抑制PIM中NF-κB的活性,降低PIM活性以及其中iNOS表达,从而改善HPS.通信作者:王宇,电子信箱:wangyu0319@126.com     

HMGB1和NF-κB在肝内胆管结石相关胆管癌中的表达及意义

目的：探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）和NF-κB在肝内胆管结石相关肝内胆管癌组织中的表达及其临床意义。 方法：用免疫组化法检测40例肝内胆管结石相关肝内胆管癌组织（肿瘤组）和40例单纯肝内胆管结石慢性炎症胆管组织（炎症组）及30例正常胆管组织（正常组）中HMGB1与NF-κB的表达,比较各组两种蛋白表达的差异,并分析两种蛋白的表达与肝内胆管结石相关胆管癌患者临床病理特征和预后的关系。 结果：HMGB1与NF-κB在各组织中的表达强度差异均有统计学意义,两者均表现为肿瘤组>炎症组>正常组（均P<0.05）;HMGB1及NF-κB在胆管癌组织中的表达呈正相关（χ2=13.713,r=0.586,P<0.05）。HMGB1的表达与肝内胆管结石相关胆管癌患者肿瘤的分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关（均P<0.05）,而NF-κB的表达与各因素均无明显关系（均P>0.05）。肝内胆管结石相关肝内胆管癌患者中,HMGB1阳性者其生存率低于HMGB1阴性者（P<0.05）,而NF-κB表达与患者生存率无关（P>0.05）。 结论：HMGB1/NF-κB通路可能参与了肝内胆管结石相关肝内胆管癌的发生与发展,其中HMGB1的表达与肿瘤的恶性程度和患者的预后密切相关。     

核转录因子-κB抑制剂对体外循环肺损伤的保护作用

目的探讨核转录因子κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)对体外循环(CPB)肺损伤的保护作用。方法将12只犬随机分为实验组和对照组,每组6只。常规建立CPB动物模型,实验组:于术前10min给予PDTC(20mg/kg)静脉推注;对照组:给予同等剂量的生理盐水。于CPB前30min、CPB后30min、停机后30min取两组肺组织,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测NF-κB mRNA水平。于CPB前、CPB后取肺组织行病理学检查。结果CPB后30min和停机后30min,两组肺组织NF-κB RNA表达均增强,但实验组明显弱于对照组(P<0.01)。CPB后实验组肺组织仅见毛细血管轻度淤血,中性粒细胞和淋巴细胞轻度聚集,无肺水肿、肺不张等损伤;而对照组肺组织可见毛细血管、小静脉严重淤血,肺泡壁增厚,部分肺泡萎陷甚至结构消失,肺泡腔和间质弥漫性中性粒细胞浸润。结论CPB可引起NF-κB量和活性的增加,使用NF-κB特异性抑制剂——PDTC能显著减轻CPB术后肺炎性反应,并具有良好的肺保护作用。     

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