试管法与凝胶卡法对ABO血型不相合肾移植受者血型IgM抗体效价检测结果分析

目的探讨试管法、凝胶卡法两种方法对ABO血型不相合肾移植受者不同血型抗体效价检测的界值, 为ABO血型不相合肾移植术前抗体效价临界值的选择提供参考依据。方法收集2019年1月至2021年4月期间, 四川大学华西医院泌尿外科行ABO血型不相合214例肾移植受者的681例次血型抗体效价资料, A型135例次, B型168例次, O型378例次。对使用两种方法进行ABO血型IgM抗体效价测定的结果进行差异性、相关性以及一致性的统计分析。结果试管法检测结果比凝胶卡法低2个梯度(4倍稀释), 两种方法检测结果差异有统计学意义(P<0.000 1)。Spearman检验结果提示两种方法的检测结果呈显著相关(P<0.000 1), 组内相关性分析结果显示, 对于A型受者两种方法检测结果的一致性一般[组内相关系数(ICC)=0.640], 对于B型受者检测结果一致性较好(ICC=0.751), 而对于O型受者两种方法检测结果的一致性较差(ICC<0.4)。当试管法检测结果界值设定为:A型抗B效价为16、B型抗A效价为8、O型抗A与抗B效价均为8时, 与之对应的凝胶卡法界值为:A型抗B...     

有妊娠史无偿献血者不规则抗体检测及其临床意义

目的研究有妊娠史无偿献血者不规则抗体(IgG抗-D/M)的检测及其临床意义,为确保临床输血安全和保障血液质量提供参考依据。方法选取2015年1月至2019年1月本站500例曾有妊娠史的女性无偿献血者作为研究对象。对所选受检者均采用试管法鉴定ABO/RhD血型和筛查血浆中的不规则抗体,采用试管法在3种介质下鉴定不规则抗体类型,对存在特异性抗体的受检者采用试管法检测抗体效价。观察受检者不规则抗体(IgG抗-D/M)的筛查情况及其与妊娠次数的关系,从而分析有妊娠史无偿献血者检测不规则抗体(IgG抗-D/M)的临床意义。结果 500例有妊娠史无偿献血者筛查出有17例存在不规则抗体,阳性检出率为3.40%,其中有14例Rh血型系统和3例MNS血型系统。抗体特异性鉴定出有5例抗-D、3例抗-M、6例抗-E、2例抗-Ec、1例抗-C,相应的抗体效价区间在1∶8～1∶512之间,相应的抗体类型包括14例IgG类,3例IgG-IgM类。既往妊娠次数≥3次妇女的不规则抗体的阳性检出率明显高于既往妊娠次数为1～2次的妇女,差异有统计学意义(P0.05)。既往妊娠次数≥3次妇女IgG抗-D/M抗体效价水平明显高于既往妊娠次数为1～2次的妇女,差异有统计学意义(P0.05)。结论在献血前对曾有妊娠史的女性无偿献血者进行不规则抗体的筛查和鉴定,能够有效提高输血安全和血液质量,防止临床上溶血性输血反应的发生,具有极其重要的临床意义。     

标记人血清抗体IgG胶体金免疫法对不同标本幽门螺杆菌抗原的测定

目的 探讨胶体金免疫法检测患者不同体液中幽门螺杆菌(H.pylori,HP)抗原的可行性.方法 (1)筛选高效价人抗-H.pylori免疫血清,依次应用盐析和层析技术分离纯化获得抗-HP血清IgG;(2)采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗-HP抗体,制成金标抗体;(3)将纯化的特异性人抗-HP抗体同定于硝酸纤维素膜上,制成胶体金标免疫反应模板.分别取粪便、胃液、血清与反应模板结合,然后与金标记的人抗-HP抗体下37℃进行反应,阳性结果呈现肉眼可见的红斑.结果 分别以金免疫HP抗原检测、尿素酶实验、血清学抗体检测3种方法对60例患者进行检测对比.HP抗原金免疫检测以胃液准确性最高,为69.04%,粪便检测次之,为57.14%,血清检测准确性最低,为40.48%;检测胃液与传统的尿素酶实验的符合率为61.67%,与血清HP抗体检测的符合率为65%.结论 胶体金免疫法测定HP抗原诊断HP感染是可行的,本方法具有操作简便、快速的特点,尤其以胃液和粪便检测效果更好,但该项实验的敏感性和特异性有待进一步提高.     

流式细胞术在人ABO血型特异性抗体检测中的应用

目的 建立以流式细胞仪检测人ABO天然血型特异性抗体的技术,并检验其效果.方法 将52份健康志愿者的血清样本与标准化人源红细胞混合,加入异硫氰基荧光素标记的羊抗人IgM或IgG二抗,用流式细胞仪检测样本中抗红细胞抗原A和B的特异性IgM及IgG抗体.检测结果与酶标仪法进行对比.结果两种方法对于血型IgM抗体水平变化趋势检测的关联性较好,二者的Spearman等级相关系数为0.730(P＜0.05),但流式细胞术的特异性、灵敏性和重复性优于酶标仪法,A型和B型血清样本(各16例)中,流式细胞术结果转为阴性的IgM抗体滴度为1∶1024～1∶512,而酶标仪法则为1∶64～1∶32.用流式细胞术在O型血清中检测到IgG抗体.结论 流式细胞术可以进行ABO血型IgM和IgG抗体的检测,效果优于传统方法,并可半定量检测抗体水平.

Abstract：

Objective To establish and validate a standard method using flow cytometry (FCM)in human ABO blood group antibody (Ab) detection. Methods Sera samples from 52 blood donors were incubated with standardize red blood cells (RBCs), and anti-A/B antibody (IgM/IgG) was measured by indirect flow cytometry after adding secondary isotype-specific fluoresce labeled Ab. The results were compared with those by using ELISA reader. Results The changes of anti-A/B IgM measured by both methods correlated well and an overall correlation coefficiency of 0.730 for IgM was obtained by Spearman's rank testing (P＜0.05). FCM showed better specificity, sensitivity and reproducibility over ELISA reader. In blood group A samples (n = 16) or B samples (n = 16) ,the antirespectively. IgG blood group Ab could only be detected in blood group O sera. Conclusion Compared with traditional methods,FCM is a more objective method to offer accurate detection of natural ABO blood group Ab (IgM/IgG) and allowed semi-quantitative measurement of antibody levels.     

T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测结直肠癌循环肿瘤细胞hTERT

目的 T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术(Cellular FACTT)检测人循环肿瘤细胞中hTERT表达.方法 以亲和素作为连接分子,连接生物素化的检测抗体和生物素化的DNA,加入T7 RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并同时用酶联免疫方法检测hTERT及CEA作为比对.结果 64例结直肠癌患者血清hTERT阳性率是 45.3%(29/64),血清CEA阳性率是 57.8%(37/64);Cellular FACTT方法检测循环肿瘤细胞的hTERT检出率为81.3%(52/64).其检测的灵敏度与酶联免疫检测方法有显著差异P<0.01.结论 T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术较酶联免疫检测方法具有更高的敏感性,有可能作为一种新的检测方法用于临床的诊断.     

自身抗体引起的疑难配血分析

目的:分析自身抗体在血清学检测中的特性,以保证临床输血安全、及时、有效,以保障患者生命安全。方法:对送检患者的血清进行不规则抗体筛查,用盐水法、聚凝胺法、微柱凝胶卡式法进行交叉配血。结果:自身抗体和所有红细胞均出现凝集反应。结论:由于红细胞直抗阳性,在配合试验中主侧次侧均发生凝集现象时,主要考虑主侧配血,选择"最小不相容性"的同型洗涤红细胞进行输注。     

微柱凝胶法在不规则抗体筛检中的应用

目的探讨微柱凝胶法在不规则抗体筛查中的临床应用价值。方法选取笔者所在医院2007年2月～2010年2月申请输血的各科室住院患者3279例,采用微柱凝胶法对申请输血者进行不规则抗体筛查,并对筛查阳性标本进行抗体特异性鉴定。结果所有3279例申请输血者中共检出不规则抗体阳性11例,阳性率为0.34%。其中男3例（27.27%）、女8例（72.73%）,有输血或妊娠既往史9例、无输血或妊娠既往史2例。结论微柱凝胶法应用到抗体筛查时灵敏度高,结果准确,且省时省力,弥补了传统方法的不足,具有重要的临床应用价值和意义。     

人内皮高表达脂多糖相关因子1多克隆抗体的制备

目的 制备人内皮高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)多克隆抗体,检测EOLA1在人脐静脉内皮细胞(HUVEG)中的表达.方法 复性成功表达EOLA1的蛋白样品(样品1和2),二辛丁酸法检测2种蛋白样品浓度,应用肽质量指纹图谱(PMF)分析法对2种样品进行验证.采用与理论肽段符合率高的EOLA1蛋白样品免疫4只小鼠,同时取4只未免疫小鼠作对照.采集各小鼠血液分离血清,应用饱和硫酸铵盐析沉淀法纯化EOLA1多克隆抗体,ELISA法分析效价(数据以吸光度值表示).蛋白质印迹法检测EOLA1在HUVEC中的表达.结果 蛋白样品1和2的浓度分别为0.124 16、0.132 15 mg/mL.PMF分析显示,样品1的理论肽段符合率为32%,样品2的理论肽段符合率为24%.选用蛋白样品1免疫小鼠,经检测抗体效价在1∶10 000以上;应用制备的EOLA1多克隆抗体可以检测到EOLA1蛋白在HUVEC中表达.结论 应用EOLA1原核表达蛋白免疫小鼠可以制备EOLA1多克隆抗体,并可用于检测EOLA1蛋白表达.     

毕赤酵母及大肠埃希菌表达的重组乙型肝炎病毒e抗原在乙型肝炎病毒e抗体检测中的比较分析

目的 探讨毕赤酵母及大肠埃希菌表达的重组乙型肝炎病毒e抗原(recombinant hepatitis B e antigen, rHBeAg)在乙型肝炎病毒e抗体(hepatitis B e antibody, HBeAb)免疫检测中的应用.方法 用分子筛纯化两种rHBeAg,进行特异性和免疫反应性鉴定;分别用纯化后毕赤酵母表达的HBeAg(A)、大肠埃希菌表达的HBeAg(B)作为中和试剂,单克隆HBeAb为固相抗体,辣根过氧化物酶标记多克隆HBeAb为探测抗体,用固相-液相竞争抑制法酶联免疫吸附实验检测HBeAb标准品及乙型肝炎病毒PCR阳性和阴性的临床标本.结果 (1)检测中国药品生物制品检定所HBeAb国家参考品结果 :试剂A:阴性符合率(-/-)15/15,阳性符合率(+/+)10/10;灵敏度参考品最低检出量(稀释度)1#= 1∶ 128,2#=1∶ 128,3#=1∶ 256.试剂B:阴性符合率(-/-)15/15;阳性符合率(+/+)9/10;灵敏度参考品最低检出量(稀释度)1#=1∶ 32;2#=1∶ 64;3#=1∶ 64;大肠埃希菌抗原的灵敏度明显低于毕赤酵母抗原;(2)对乙型肝炎病毒PCR阳性及阴性的临床标本进行检测:试剂A和试剂B对PCR阳性组的HBeAb阳性检出率分别为50.4%和51.6%,差异无显著统计学意义(P＞0.05);PCR阴性组的HBeAb阴性检出率,试剂A和试剂B分别为 91.2%和 86.7%,差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 毕赤酵母表达的HBeAg用于HBeAb的检测灵敏度及特异性均优于大肠埃希菌表达产物.     

抗人IgG抗体与丝裂霉素联合应用治疗膀胱癌的实验研究

目的 探讨抗人IgG抗体和丝裂霉素(MMC)联合应用对人膀胱癌细胞株的抑制作用及机制.方法 抗人IgG抗体和MMC单独或联合作用于人膀胱癌T24细胞,噻唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测T24细胞的凋亡率,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和PARP的表达.采用T24细胞裸鼠移植瘤模型进行抗人IgG抗体和MMC的体内抗瘤实验.结果 单独应用抗人IgG抗体和MMC对T24细胞生长抑制率分别为(25.02±6.71)%和(32.31±6.46)%,而二者联用的抑制率达(73.66±5.81)%.PBS、25mg/L羊IgG、25mg/L羊抗人IgG抗体、2mg/L MMC、2mg/L MMCIk 25mg/L羊IgG和2mg/L MMC加25mg/L羊抗人IgG抗体处理T24细胞72 h后细胞凋亡率分别为1.7%、2.3%、20.7%、22.4%、28.3%和53.8%.羊抗人IgG抗体、MMC、MMC加羊IgG和MMC加羊抗人IgG抗体处理T24细胞72 h后出现17 000的Caspase-3和85 000的PARP剪切片断.体内实验显示羊IgG组、羊抗人IgG抗体组、MMC组、MMC加羊抗人IgG抗体组抑瘤率分别为2.31%、12.73%,36.81%和50.51%.HE切片观察见生理盐水组和羊IgG组移植瘤细胞基本无凋亡和坏死,羊抗人IgG抗体组肿瘤细胞凋亡和坏死增多,MMC组和MMC加羊抗人IgG抗体组则见大量肿瘤细胞凋亡和坏死.结论 抗人IgG抗体和MMC联合应用对膀胱癌具有体内外双重抗瘤作用,其抗瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

胸腰椎骨折椎弓根内固定断裂与植骨融合方式的相关性分析

[目的]探讨胸腰椎骨折椎弓根螺钉内固定系统内固定术后,椎弓根螺钉断裂与植骨融合方式之间的关系,以探讨胸腰椎骨折植骨融合的最佳方式。[方法]回顾性研究1995年5月~2005年12月本院脊柱外科收治的胸腰椎骨折病人197例,其中A组单纯内固定(不植骨)患者14例,B组“H”形椎板植骨21例,C组横突间植骨67例,D组椎间、椎内联合横突间植骨95例。[结果]术后随访6~32个月,内固定断裂12例,其中A组4例,B组3例,C组5例,D组0例,4组中D组内固定断裂率显著低于其他3组(P<0.05)。[结论]椎间、椎体内联合横突间植骨重建脊柱三柱的稳定性,符合人体生物力学原理,能有效降低内固定断裂的发生。     

Study of the correlations between the volumes of the hypophysis, the epiphysis and the subfornical organ to the somatic weight and the volume of the hypothalamus in rodents]

The correlations between volume of the hypophysis, of the epiphysis and of the subfornical organ to body weight and volume of the hypothalamus were studied on 193 rodents belonging to 41 species. Concerning the volume of the hypophyseal lobes the regression slopes of Rodentia occupy an intermediate position between those of Isectivora and Prosimians studied by BAUCHOT. The volume of the epiphysis increases more rapidly with the weight of the body than that of the hypophyseal lobes, the volume of the subfornical organ increases on the contrary more slowly.     

Characteristics of the receptors in the isolated capsule of the hip in the cat

Summary The properties of the afferent fibres from the capsule of the hip joint have been studied in the cat in situ, in relation to joint rotation, and in an isolated capsule preparation which was opened and stretched directly with an actuator.In situ two types of afferent fibres were found, those having a full range of sensitivity and others having only a limited range in response to the joint rotation. When studied in isolated tissue the afferent fibres of the capsule were uniform in threshold and sensitivities, and no full range receptors were found. We conclude that the full range receptors which enter the articular nerve of the hip are spindle afferents and not capsule receptors. On the basis of these and previous results in animals and man the role of joint receptors in kinaesthesia and position sense is discussed.

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Résumé Les auteurs ont étudié les propriétés des nerfs afférents à la capsule de la hanche, chez le chat en imprimant à l'articulation des mouvements de rotation et sur des préparations de capsule isolée et ouverte en l'étirant directement grâce à un dispositif mécanique.In situ, on a trouvé deux types de nerfs afférents, les uns ayant en réponse à la rotation articulaire une étendue complète de sensibilité et les autres seulement une sensibilité limitée. Sur la capsule isolée les nerfs afférents sont indentiques en ce qui concerne le seuil et la sensibilité et on ne trouve aucun récepteur complet. On en conclut que les récepteurs de toute l'étendue de la sensibilité qui pénètrent les nerfs articulaires de la hanche sont des fibres en fuseau d'origine musculaire et non des récepteurs capsulaires. Sur ces bases et sur les résultats précédemment obtenus chez l'animal et chez l'homme, les auteurs discutent le rôle des récepteurs articulaires dans la cénesthésie et le sens des positions.