控释神经生长因子的阵列微管促进神经再生

[目的]制备可控释神经生长因子(nerve growth factor, NGF)的阵列微管神经修复支架,并评价其促神经再生效能。[方法]采用梯度冷凝技术制备复合NGF的阵列微管神经修复支架,检测其机械特性和NGF释放规律。将新生SD大鼠的背根神经节(dorsal root ganglions, DRG)随机分为4组:无序支架组、复合NGF的无序支架组、阵列微管支架组和复合NGF的阵列微管支架组。将DRG植入各组支架中体外培养72 h,观察轴突生长情况。[结果]在机械强度方面,各组在横向压缩过程中的峰值载荷差异无统计学意义(P0.05)。纵向牵拉测试中,神经支架组与自体神经组的应力-应变曲线类似。在NGF释放规律方面,阵列微管组和无序组的释放曲线类似,且不同时间点NGF浓度差异无统计意义(P0.05)。在轴突生长方面,复合NGF的阵列微管支架组轴突长度为(1 025.41±175.33)μm,显著高于阵列微管支架组(857.58±233.14)μm、复合NGF无序支架组(341.73±52.27)μm、无序支架组(225.36±61.62)μm。[结论]复合NGF的阵列微管神经修复支架同时具有营养活性及引导结构,且具有良好的机械性能,在体外环境下可以引导大鼠DRG轴突定向延伸,在周围神经再生领域具有重要前景。     

微载体复合间充质干细胞构建3D细胞球对体外周围神经再生的影响

[目的]探索微载体复合间充质干细胞构建三维(three-dimension, 3D)细胞球对周围神经再生的体外实验研究。[方法]选取48 h SD乳鼠,腹股沟处取脂肪组织,经消化、过滤、离心、分离培养得到脂肪间充质干细胞,然后将脂肪间充质干细胞与微载体构建3D细胞球,将构建好的3D细胞球与背根神经节共培养,根据添加不同培养方式的细胞球而分成3组,具体分组如下:单纯背根神经节培养组,2D细胞与背根神经节共培养组,3D细胞球与背根神经节共培养组。[结果]单纯背根神经节培养组轴突生长长度(341.66±9.01)μm, 2D细胞与背根神经节共培养组轴突生长长度(395.33±24.9)μm, 3D细胞球与背根神经节共培养组轴突生长长度(487.00±5.00)μm。3D细胞球组对背根神经节轴突生长的促进作用较2D共培养组更明显,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]基于微载体的3D细胞球对背根神经节轴突生长作用更明显,为以后神经组织工程治疗神经缺损提供良好的种子细胞,从而提高神经再生的能力。     

聚碳酸亚丙酯电纺纤维的取向性对大鼠背根神经节生长的影响

目的聚碳酸亚丙酯[poly(propylene carbonate),PPC]是一种具有良好生物降解性和生物相容性的新型生物材料。探讨PPC电纺丝在周围神经组织工程应用的可行性,比较取向性和无序性PPC纤维对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)生长的影响。方法采用电纺丝技术制备取向性和无序性PPC纤维,扫描电镜观察其表面结构特点。3只新生1～2日龄SD大鼠,雌雄不限,体重4～6 g。取SD大鼠DRG,分别接种至含取向性和无序性PPC纤维的12孔板中,作为实验组及对照组,每组6孔。倒置显微镜下观察DRG生长情况,并于培养7 d行免疫荧光染色和扫描电镜观察,定量比较神经轴突生长长度和雪旺细胞迁移距离。结果电纺丝技术成功制备取向性和无序性PPC纤维,每根纤维直径为800～1 200 nm,形成具有亚微米尺度的结构。取向性PPC纤维约90%纤维丝在其长轴方向,而无序性PPC纤维丝呈各个角度分布。倒置显微镜观察,DRG均在两组PPC纤维生长良好。免疫荧光染色和扫描电镜观察示:实验组轴突和雪旺细胞沿纤维丝方向生长,具有一致的方向性;对照组轴突生长末端呈多方向生长。实验组轴突生长长度为(2 684.7±994.8)μm,对照组为(504.7±52.8)μm,组间比较差异有统计学意义(t=—5.360,P=0.000)。实验组雪旺细胞迁移距离为(2 770.6±978.4)μm,对照组为(610.2±56.3)μm,组间比较差异有统计学意义(t=—5.400,P=0.000)。实验组及对照组内雪旺细胞迁移距离均大于轴突生长长度。结论 PPC纤维与DRG有良好亲和性,亚微米尺度PPC纤维的取向结构决定了DRG轴突和雪旺细胞生长方向,可作为周围神经损伤的修复材料。     

食管癌对神经生长及导向作用的研究

目的建立肿瘤与神经共培养模型,探讨食管癌对神经生长和导向的作用。方法采用原代分离培养的方法,取大鼠的背根神经节,将背根节与转染绿色荧光蛋白的食管癌EC109细胞共培养,观察肿瘤细胞对神经生长的影响,并计算神经轴突的数目与面积。采用实时定量PCR检测食管癌细胞系EC109和EC9706中神经生长因子（NGF）和脑源性神经生长因子（BDNF）的表达情况。结果食管癌细胞与背根节细胞混合普通培养,背根节细胞发出轴突靶向肿瘤细胞生长。食管癌细胞与背根节组织共培养后,近肿瘤细胞侧背根节长出的轴突较长、较浓密,远肿瘤侧则较短、较稀疏。共培养第7天,近肿瘤侧神经突的数目与面积分别为87个和346μm^2,远肿瘤侧分别为23个和141μm^2,差异均有统计学意义（P〈0．05）。PCR检测发现,NGF和BDNF均表达于食管癌细胞。结论食管癌细胞对神经纤维有促生长和导向作用,该作用的发挥可能与NGF和BDNF等神经营养因子的分泌有关。     

L2脊神经交通支在椎间盘源性腰痛传导通路中的作用

目的:探讨L2脊神经交通支在椎间盘源性腰痛传导通路中的作用。方法:取成年SD大鼠24只,随机分为4组:椎间盘前侧L2脊神经交通支未切断组(椎间盘前侧对照组)、椎间盘前侧L2脊神经交通支切断组、椎间盘后侧L2脊神经交通支未切断组(椎间盘后侧对照组)和椎间盘后侧L2脊神经交通支切断组,每组6只。分别于L5-6椎间盘前侧和后侧注入荧光金(FG),7d后取双侧L2、L5脊神经节(DRG)制片,并行P物质(SP)免疫细胞化学染色,观察L2、L5 DRG内FG标记细胞及FG和SP双标细胞的形态大小和数量变化。结果:各组大鼠双侧L2 DRG中均发现FG和SP双标细胞。其横截面积为210～1140μm~2,平均(652±320)μm~2。FG注入椎间盘前侧,L2脊神经交通支切断组L2 DRG内FG和SP双标细胞数量低于对照组,两组间差异具有显著性(P＜0．05);L5 DRG内未发现FG标记细胞与双标记细胞。FG注入椎间盘后侧,L2脊神经交通支切断组的L2 DRG内FG和SP双标记细胞数量低于对照组,两组间差异具有显著性(P＜0．05),两组L5 DRG双标记细胞数差异无显著性(P＞0．05)。结论:L2脊神经交通支在大鼠L5-6椎间盘的痛觉传导通路中起一定作用。如果人类腰椎间盘有与大鼠相类似的神经支配模式,那么选择性破坏腰脊神经交通支尤其是L2交通支可能在椎间盘源性腰痛的治疗中起到一定的作用。     

自组装IKVAV多肽纳米支架及其对背根神经节神经元细胞的作用

目的:应用自组装IKVAV多肽纳米支架与鼠背根神经节神经元细胞(DRGc)联合培养,观察其对DRGc的作用。方法:将多肽溶于0.1MNaOH溶液中,调整pH值为8.5,多肽浓度为0.01mg/μl,与等体积DMEM/F12混合触发多肽自组装为凝胶支架,透射电镜检测。采用原代分离培养方法获得DRGc单细胞悬液后分为实验组与对照组,实验组中DRGc接种于凝胶支架表面,对照组接种于多聚赖氨酸表面,倒置相差显微镜观察神经元生长情况,采用细胞计数结合免疫细胞化学染色方法,观察DRGc的存活和轴突生长情况,并行统计学分析。结果:透射电镜下显示自组装凝胶支架为编织状纳米纤维。实验组和对照组中DRGc培养1d时平均轴突长度分别为43.8±10.4μm、33.4±5.75μm;培养14d时实验组和对照组中神经元数目分别为36.50±1.78个/视野、19.70±3.71个/视野,神经元所占比例分别为(43.60±4.83)%、(26.97±4.90)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05)。结论:自组装IKVAV多肽纳米支架能降低神经元的死亡率,并诱导轴突的发生和生长,具有支架及生物活性双重作用,可作为神经组织工程支架材料。     

腰椎间盘内神经侵润生长

椎间盘源性下腰痛的产生可能与神经向椎间盘深层侵入生长有关,本质上也是一种牵涉性痛.腰椎间盘内感觉纤维主要由背根神经节内的小型肽能神经元发出,由交感神经和窦椎神经双重性、多节段支配,且以交感神经为主.蛋白聚糖、髓核和周围靶细胞组成的生物性屏障可能是影响轴突生长的主要因素,椎间盘细胞减弱了聚集蛋白聚糖对轴突生长的抑制作用,髓核组织和软骨素酶ABC促进轴突再生,体外培养条件下IL-1β、TNF等炎性因子也可抑制轴突生长.     

氨哮素对失神经支配红白肌感觉神经营养活性的影响

目的　观察以氨哮素为代表的外界因素对失神经支配红、白肌肉内感觉神经生长因子 (nerve growthfactor,NGF)含量及感觉神经再生的影响。　方法　选用 Wister大白鼠 6 4只 ,体重 2 0 0～ 2 5 0 g,雌雄不拘。平均分成8组 ,每组 8只 (双侧 ,共 16例标本 )。其中 4组为实验组 ,另 4组为对照组 ,分别于神经损伤后 1、3、7和 14 d取材。剪断大白鼠双侧坐骨神经制成腓肠肌 (gastrocnemius,GAS)和比目鱼肌 (soleus,SOL)失神经支配模型。实验组术后每日按2 0 0 μg/ kg剂量给大鼠服用氨哮素 ;对照组术后每日给生理盐水。在各时间点用免疫组织化学方法检测实验组和对照组动物 GAS和 SOL 内 NGF含量 ,另用鸡胚背根神经节培养方法测定各组肌肉提取液感觉神经营养活性。　结果　与对照组相比 ,实验组 SOL 内 NGF含量在术后第 1、3和 7天时增高比较明显 (P<0 .0 1) ;GAS中只有术后第 1天 NGF含量增高明显 (P<0 .0 5 ) ,第 3、7和 14天时实验组 NGF含量与对照组相近 (P>0 .0 5 )。实验组内比较 ,GAS组术后第 1天NGF含量最高 (P<0 .0 1) ,以后 NGF含量逐渐下降 ;SOL 组 NGF含量各时间段相近 (P>0 .0 5 )。实验组两种肌肉间比较 ,在伤后第 7天时 ,SOL内 NGF的含量高于 GAS(P<0 .0 5 )。在对鸡胚背根神经节的神经营养活性     

周围神经端端或端侧吻合后降钙素基因相关肽和P物质免疫组织化学的对比研究

目的　探讨周围神经端端或端侧吻合后神经递质降钙素基因相关肽 (CGRP)和 P物质 (SP)水平的变化。　方法　选取雌性 Wistar大鼠 2 0只 ,随机分为 5组 ,每组 4只 ;实验组为 4组 ,正常对照组为 1组。实验组 :切断双侧腓总神经。将左侧腓总神经远侧断端吻合至胫神经侧方 ,右侧行腓总神经端端吻合 ,术后 1、2、4和 2 7周于各时间点分别在神经吻合口、腰段脊髓和背根神经节处取材 ,每次 4只进行 CGRP和 SP的免疫组织化学染色。对照组 :不行神经切断及吻合术 ,1周后检测同上。　结果　实验组术后 1周在腰段脊髓后角和背根神经节中 CGRP和 SP的表达均显著减少 ,术后 4、2 7周 ,CGRP和 SP在腰段脊髓后角的表达逐渐恢复至接近正常水平 ,但在背根神经节中的表达却无显著变化。端端、端侧吻合的两侧 CGRP和 SP变化的趋势一致 ,但在腰段脊髓后角的 4个时间点的样本中 ,端端吻合的表达显著高于端侧吻合。对坐骨神经进行乙酰胆碱酯酶 (Ach E)、SP、CGRP和 PGP9.5染色显示神经纤维均可通过端端与端侧神经吻合口。　结论　再生的神经纤维可以通过端侧吻合口 ,端侧吻合中感觉神经的恢复与端端吻合相似 ,但恢复的程度稍差于端端吻合。     

FK1706促进人神经母细胞瘤细胞生长的作用及其机制

目的通过体外培养神经细胞(SH-SY5Y)观察FK1706对神经细胞再生的作用并探讨其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,根据不同处理分别分为FK1706组、神经生长因子组(NGF)、FK1706+NGF组、FK1706+NGF+格尔德霉素(Geldanamycin)组和空白对照组。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同组细胞增殖活性,测量细胞轴突长度。分子生物学检测不同细胞中磷酸化促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(p-Raf)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、p-Raf/Raf及p-ERK/ERK表达水平。通过免疫共沉淀(IP)检测不同细胞中热休克蛋白90(HSP90)与Raf结合的复合体表达水平。使用方差分析比较各组间数据。结果CCK-8检测显示FK1706+NGF组细胞增殖活性最强(1.12±0.08),高于FK1706组和NGF组(0.61±0.07、0.89±0.04),差异有统计学意义(t=6.824,P<0.05),加入格尔德霉素可以抑制其增殖活性(0.31±0.02);FK1706+NGF组细胞轴突最长,轴突长度为(277.40±18.64)μm,高于FK1706组和NGF组[(71.24±6.12)、(144.61±11.20)μm],差异有统计学意义(t=14.577,P<0.05),FK1706+NGF+格尔德霉素组轴突长度[(97.06±11.29)μm]低于FK1706+NGF组;NGF组p-Raf、p-ERK表达水平分别为(0.58±0.02)和(1.24±0.03),高于对照组(0.25±0.03、0.76±0.02)和FK1706组(0.23±0.02、0.78±0.03,t₁=23.335,t₂=9.163,P<0.05),差异有统计学意义,加入FK1706可以增强NGF组p-Raf和p-ERK的表达水平(t₁=21.213,t₂=2.191,P<0.05),差异有统计学意义,加入格尔德霉素可以抑制FK1706和NGF的协同作用,与细胞轴突长度和增殖活性检测结果一致。IP检测显示FK1706+NGF组HSP90/Raf复合体相对表达水平最高(1.56±0.04),显著高于其他组(t=16.398,P<0.05),差异有统计学意义,FK1706+NGF+格尔德霉素组HSP90/Raf的表达水平(0.93±0.05)低于FK1706组和FK1706+NGF组。结论FK1706可以促进HSP90和Raf结合,提高大鼠肉瘤/促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶/促分裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(Ras/Raf/MAPK/ERK)信号通路中Raf和ERK磷酸化水平,促进神经细胞增殖和轴突生长。     

外源性神经生长因子对内源性神经生长因子的影响

目的：探讨外源性神经生长因子对内源性神经生长因子的影响，方法：采用大鼠坐骨神经硅管内再生室模型，靶器官内注射神经生长因子（实验组）或生理盐水（对照组）２周，注射后１天，１周天及２周，采用新生大鼠背根神经节细胞培养，测定硅管内液神经营养活性，用化学发光免疫检测法（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＣＬＩＡ）测定神经生长因子含量，结果：实验组与对照组细胞存活数及神经生长因子含量     

Effects of nerve growth factor on acetylcholinesterase activity of the proximal stump of the transected sciatic nerve

28 rats were studied. They were divided into four groups of 7 rats of each: one-day control animals (Group A), sevenday control animals (Group B), one-day nerve growth factor (NGF)-treated animals (Group C) and seven-day NGF-treated animals (Group D). In all animals, the right sciatic nerve was explored and completely transected using microscissors under a microscope. In NGF-treated animals, NGF (0.1 mg/kg NGF) was injected subcutaneously. In control animals, there was a statistically significant decrease in AChE activity in the proximal stump of the transected sciatic nerve at 7-day measurements (p < 0.05). In the NGF-treated groups, mean AChE activity in the proximal stump of the transected sciatic nerve was decreased at the 7-day measurement. AChE activity difference between control and NGF-treated groups, measured on the 7th day, are statistically significant (p < 0.01). These results demonstrate the effect of NGF on the cholinergic system.     

神经生长因子在周围神经侧枝发芽中的表达

目的：研究周围神经端侧吻合后侧支发芽过程中神经生长因子（NGF）的表达,探讨端侧吻合后神经侧支发芽再生的机制.方法：SD大鼠共32只,建立胫腓神经端侧吻合模型,随机分为1周、2周、4周和8周组,切取吻合近端和远端神经纵切片标本,进行神经生长因子的免疫组织化学反应,并结合计算机图像分析进行反应强度的半定量分析.结果：端侧吻合后近端神经NGF表达未见显著增强,而在远端的表达则显著增强.结论：端侧吻合远侧端NGF在神经侧支发芽中起着十分重要的作用.     

人工组织神经移植物辅加神经生长因子修复大鼠坐骨神经缺损

目的 探索壳聚糖与聚乙醇酸联合制成的人工组织神经移植物辅加神经生长因子（NGF）修复大鼠外周神经缺损的可能性。方法 壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维制备成人工组织神经移植物并辅加NGF，修复大鼠的坐骨神经10mm缺失。术后24周，进行足迹试验，电生理学测试，形态学观察。用自体神经，硅胶管以及壳聚糖套管与聚乙醇酸纤维等分别作为对照组，结果 术后24周内，实验动物均未出现明显炎症及排斥反应。实验组的各检测指标均优于除自体神经组外的各对照。结论 壳聚糖和聚乙醇酸与外周神经组织有良好的生物相容性；辅加NGF的人工组织神经移植物对修复缺损的神经具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。     

神经生长因子治疗周围神经损伤的前瞻性研究

目的观察神经生长因子(NGF)对周围神经损伤的近期治疗效果。方法2004年4月～2005年10月将48例周围神经损伤患者随机分为治疗组(NGF组,25例)和对照组(维生素B_(12)组,23例),4周后比较两组患者疼痛、麻木症状的改善情况,以及神经电生理变化。结果与对照组相比,治疗组患者的疼痛、麻木症状显著减轻,差异有显著性意义(P＜0．05)；感觉和运动电位的恢复率明显增高,差异有极显著性意义(P＜0．01)；恢复神经的感觉和运动电位的潜伏期均明显缩短,差异有显著性意义(P＜0．05)；波幅均显著增高,差异有显著性意义(P＜0．05),不良反应少。结论NGF早期可安全、有效地治疗周围神经损伤。     

复合神经生长因子的纳米纤维导管促神经再生的初步研究

目的 探讨应用同轴静电纺丝技术制备复合神经生长因子的神经导管的可行性,检测神经生长因子的活性及对神经再生的作用.方法 应用同轴静电纺丝技术制备以可降解生物材料乳酸己内酯共聚物[P(LLA-CL)]为壳层材料、神经牛长冈子(NGF)和牛血清蛋白(BSA)为芯层材料的纳米纤维,纺织成神经导管复合体.模拟体内环境进行体外降解缓释8周,在不同时间点,应用PCI2细胞培养法检测缓释液中NGF的生物活性.构建大鼠坐骨神经10 mm缺损模型.分别采用自体神经移植(A组)、P(LLA-CL)/BSA/NGF导管(B组)、P(LLA-CL)/BSA导管加一次性注射NGF(C组)、P(LLA-CL)/BSA导管(D组)桥接神经断端,术后12周进行再生神经形态学等观察.结果 P(LLA-CL)/BSA/NGF导管在体外8周尚末完全降解.能够持续释放NGF,并保持牛物活性.解剖观察可见再牛神经均通过神经导管,B组再生神经的卣径最均匀一致,达到正常神经的直径.透射电镜图片显示,A组和B组神经纤维数日多、大小均匀、成熟良好,C组和D组纤维结缔组织多、神经纤维细小、髓鞘薄.结论 P(LLA-CL)/BSA/NGF导管具有良好的组织相容性和生物活性,能够诱导并促进神经再生,提高神经再牛的质量,其移植效果接近于自体神经移植.     

P75 nerve growth factor receptor is expressed in regenerating human nerve grafts

BACKGROUND: The purpose of this study was to elucidate the expression of p75 nerve growth factor receptor (p75NGFR) in human cross-facial nerve grafts and to compare the immunohistological findings with patient data and the functional outcome in facial reanimation. MATERIALS AND METHODS: The study comprised 37 sural nerve graft specimens. All of the patients had long-lasting complete facial paralysis and were operated on by the standard two-stage procedure involving cross-facial nerve grafts and microneurovascular muscle transfer. Nerve biopsies were taken 4 to 20 months (mean, 8 months) after the cross-facial nerve grafting. Immunohistochemistry for p75NGFR as well as for Schwann cells (S-100; Dako, Glostrup, Denmark) and for Neurofilament-200 (NF-200; Boehringer, Mannheim, Germany) was performed. RESULTS: In graft biopsies, the mean number of NF-200-positive axons amounted to 38% (range, 6-81%) of that in control samples. Further, regenerated axons were thinner than in control samples. Morphologically, the grafted nerves were characterized by fibrosis and invasion of inflammatory cells. A longer time between cross-facial nerve grafting and biopsy sampling correlated with a higher number of viable axons (NF-200) (P = 0.002). In all cases, expression of p75NGF receptor was clearly higher at the distal end of the grafted nerve. Expression of p75NGFR was lower in older than in younger patients (P = 0.003). A high expression of p75NGFR was often seen with better function of the transplanted muscle. CONCLUSION: Increased expression of p75NGFR in human nerve grafts was noted, especially in younger patients. We suggest that p75NGFR expression might be a contributing factor in a successful axonal regeneration and eventual recovery of muscle function.     

外消旋聚乳酸/神经生长因子复合膜包绕神经缝接部位促进神经再生

目的探讨外消旋聚乳酸／神经生长因子（PDLLA／NGF）复合膜包绕神经缝接部位是否具有促进神经再生作用。方法雌性Wistar大白鼠16只，随机分为2组：A组（神经端端缝接）8只；B组（神经端端缝接并缝接部位包绕PDLLA／NGF复合膜）8只。显露每只动物的右侧坐骨神经，利刀横断。A组以外膜缝合法端端缝接；B组以外膜缝合法端端缝接后，在缝接部位包绕1层PDLLA刷GF（含量250U）复合膜。6个月后，观察比较两组神经再生情况。结果B组的小腿三头肌湿重恢复率、运动神经传导速度、再生的有髓神经纤维直径、轴突直径、髓鞘厚度均优于A组。结论PDLLA／NGF复合膜包绕神经缝接部位具有促进神经再生作用。