甲状腺乳头状癌microRNAs表达谱与临床相关性研究

目的 寻找甲状腺乳头状癌(PTC)中特异性表达的microRNAs,以提高PTC的早期诊断水平和判断PTC的侵袭性.方法 选取51例甲状腺手术组织标本,利用miRNA芯片技术寻找甲状腺良恶性结节之间有表达差异的microRNAs,并通过qRT-PCR验证差异性表达的microRNAs,分析其与PTC临床病理特征的相关性. 结果 (1)qRT-PCR结果显示miR-30a-3p(U=60,P=0.003),miR-146b-5p(U=40,P=0.001)及miR-199b-5p(U=69,P=0.007)在良恶性结节中存在差异性表达.(2)miR-199b-5p在包膜外浸润及颈侧区淋巴结转移的PTC患者中明显升高(P =0.010),侵袭性越强其表达越明显. 结论 miR-199b-5p,miR-30a-3p及miR-146b-5p能鉴别甲状腺结节的良恶性,miR-199b-5p与PTC的侵袭性正相关.     

微小RNA-146b-5p通过Robo1对胆囊癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miRNA, miR)-146b-5p通过Robo1对胆囊癌细胞增殖和凋亡的影响。方法选取郑州大学第一附属医院2017年1月到2021年12月手术切除的59例胆囊癌及其癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析肿瘤组织和癌旁组织miR-146b-5p表达水平;采用免疫组织化学分析两种组织Robo1蛋白表达水平。采用转染试剂转染miRNA对照和miR-146b-5p抑制剂至人胆囊癌细胞系GBC-SD, 分别命名为miRNA对照组和miR-146b-5p KD组, 采用噻唑蓝(MTT)和克隆形成实验分析两组细胞活力和增殖能力;采用划痕实验、Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化能力;采用生物信息学和荧光素酶报告基因分析miR-146b-5p的靶基因;采用Western blot分析靶基因表达水平。计量数据比较采用t检验。结果胆囊癌组织miR-146b-5p表达水平(1.01±0.16)明显低于癌旁组织(1.94±0.30), 差异有统计学意义(t=20.860, P<0.05)。mi...     

microRNA-186-5p及其靶基因CLDN18与甲状腺乳头状癌复发风险的关系

背景与目的：microRNA（miRNA）在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用,而且不同的miRNA表达状态与肿瘤的不同生物学特征紧密关联。本研究通过分析不同复发风险甲状腺乳头状癌（PTC）患者差异表达的miRNA,筛选与PTC复发风险相关的miRNA,并分析其作用机制。 方法：用基因芯片技术分析低危复发风险与中高危复发风险PTC患者血清外泌体中差异表达的miRNA,然后用qRT-PCR方法PTC患者肿瘤组织中验证;用Transwell实验筛选出与PTC细胞侵袭能力有关的差异表达miRNA。通过OncomiR在线数据库对筛选的细胞侵袭力相关miRNA的靶基因进行预测,随后采用过表达与敲低策略,分析PTC细胞相关蛋白表达（Western blot）与PTC细胞侵袭能力（Transwell）的变化,明确细胞侵袭力相关miRNA与预测靶基因的关系。最后,通过GEPIA在线网站对TCGA数据库中PTC临床样本的分析进一步确证。 结果：基因芯片分析结果显示,与低危复发风险PTC患者比较,中高危复发风险PTC患者血清外泌体中4个miRNA（miR-186-5p、miR-532-3p、miR-199b-3p、miR-3158-5p）表达上调,1个miRNA（miR-3605-5p）表达下调（均P<0.05）;组织标本qRT-PCR验证结果显示,中高危复发风险PTC患者癌组织中miR-186-5p和miR-3158-5p表达上调（均P<0.05）;Transwell实验结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞侵袭能力明显增强,敲低则明显减弱（均P<0.05）,但改变miR-3158-5p的表达水平对PTC细胞的侵袭能力无明显影响（均P>0.05）。OncomiR在线数据库预测PRDX6、S100PBP、CLDN18、MAP2可能是miR-186-5p的靶基因;Western blot结果显示,过表达miR-186-5p后PTC细胞中CLDN18的蛋白表达明显降低,敲低则相反,但改变miR-3158-5p的表达水平对其他3个基因的蛋白表达无明显影响;Transwell实验结果显示,过表达CLDN18表达后PTC细胞的侵袭能力明显减弱,敲低则明显增强,而过表达或敲低miR-186-5p对PTC细胞的作用被同时过表达或敲低CLDN18所逆转（均P<0.05）。TCGA数据库分析结果显示,PTC组织中CLDN18表达较正常甲状腺组织明显降低。 结论：miR-186-5p表达的增高可能与PTC的复发风险密切相关,机制可能与其通过调节下游CLDN18基因的表达而影响PTC细胞的侵袭能力有关。     

miR-26b-5p通过下调 MKNK2/eIF4E信号通路抑制胰腺癌细胞的增殖及侵袭

目的:筛选胰腺癌( PC)侵袭相关微小 RNA(miRNA,miR),验证其生物学功能和调控的信号通路,为胰腺癌的诊治提供新的分子标志物和靶点。方法:通过基因表达综合数据库( GEO)的 miRNA表达谱数据集 GSE71533和 GSE85589,分析 miR-26b-5p的差异表达;利用癌症基因组图谱数据库( TCGA),分析 miR-26b-5p对 PC患者总生存率的影响。采用 TargetScan数据库识别 miR-26b-5p的靶基因集。通过细胞功能实验,验证 miR-26b-5p对 PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。利用基因本体(GO)和 KEGG通路富集分析,揭示 miR-26b-5p靶基因的功能,并通过蛋白印迹(Western blotting)实验验证 miR-26b-5p靶向的信号通路。结果:在 GSE71533和 GSE85589数据集,相对于正常组织和对照组血浆,miR-26b-5p在 PC组织和 PC患者血浆明显低表达(9.65±0.10 vs 10.18±0.07,P < 0.001;0.67±0.18 vs 0.79±0.24, P=0.017)。TCGA-胰腺癌生存分析结果显示, miR-26b-5p高表达组的总体生存率明显优于低表达组( P=0.023)。KEGG分析显示,预测的 251个 miR-26b-5p的靶基因与 MAPK信号通路有关。 CCK-8实验、 Transwell迁移、侵袭实验和划痕实验结果显示: miR-26b-5p抑制 PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭。 KEGG通路富集分析结果提示 miR-26b-5p的靶基因参与丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)信号通路。 Western blotting实验证实 miR-26b-5p下调 MKNK2/eIF4E信号通路。结论: miR-26b-5p下调 MKNK2/eIF4E信号通路,抑制 PANC-1细胞增殖、侵袭,有可能作为胰腺癌诊断和治疗的新靶点。     

高糖环境下肝细胞外泌体对胰腺癌细胞迁移与侵袭能力的影响

背景与目的：在肿瘤微环境的影响和调控下,一些非肿瘤细胞通过外泌体在肿瘤的转移中起着关键作用。研究表明在胰腺癌中,高糖微环境可以促进其侵袭和转移。肝脏既是糖代谢的重要器官,也是胰腺癌转移的高发器官,胰腺癌肝转移的机制尚不清楚。因此,本研究探讨在高糖微环境下肝细胞分泌的外泌体对胰腺癌细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法：将永生化肝细胞MIHA分别在高糖与正常糖培养基中培养后,从上清液中提取外泌体,并通过透射电镜、粒径分析和Western blot对两种培养基来源的外泌体进行鉴定;用荧光染料PKH67标记两种培养基来源的外泌体后,分别与荧光染料DAPI标记的胰腺癌细胞PANC-1共培养,通过实时激光扫描共聚焦显微镜观察PANC-1细胞对外泌体的吞噬情况。将PANC-1细胞分别与高糖培养基来源的外泌体（高糖组）及正常糖培养基来源的外泌体（正常糖组）共培养,以未加外泌体培养的PANC-1细胞为阴性对照组,随后分别用划痕试验、Transwell实验检测各组PANC-1细胞的迁移与侵袭能力,用Western blot检测各组PANC-1细胞中上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin和N-c...     

长链非编码RNA GAS5靶向微小RNA-106b-5p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的观察长链非编码RNA(lncRNA) GAS5靶向微小RNA(miR)-106b-5p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集112例胃癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析组织中lncRNA GAS5和miR-106b-5p的表达水平。HGC-27细胞随机分为lncRNA对照组、lncRNA GAS5组、miRNA对照组和miR-106b-5p KD组, 分别采用慢病毒建立lncRNA GAS5过表达和miR-106b-5p敲减细胞系。细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验、Transwell实验检测各组的细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因分析lncRNA GAS5和miR-106b-5p关系。组间比较采用t检验。结果癌旁组织中lncRNA GAS5表达量(1.003±0.107)显著高于胃癌组织(0.387±0.060), 差异有统计学意义(t=8.649, P<0.05)。lncRNA GAS5组细胞lncRNA GAS5表达水平(3.073±0.373)明显高于lncRNA对照组(1.007±0.097), 差异有统计学意义...     

术后引流液外泌体hsa-miR-609在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用及其机制探讨

目的观察甲状腺乳头状癌(PTC)术后引流液中外泌体microRNA(miRNA)表达变化,探讨其在PTC发生发展中的作用。方法收集3例PTC患者术后第一天切口引流液,以结节性甲状腺肿术后引流液为对照,采用超速离心法提取引流液中的外泌体,通过透射电镜、粒径分析及标记蛋白检测验证外泌体的特征,提取外泌体中的RNA进行miRNA芯片检测并进行聚类分析。结果通过囊泡形态、粒径大小及特异性蛋白标记证实术后引流液中存在外泌体,miRNA芯片数据聚类分析结果显示PTC和结节性甲状腺肿患者术后引流液外泌体miRNA谱具有显著差异,其中以hsa-miR-609的表达差异最为显著。生物信息学结果提示预测的hsa-miR-609的靶基因和PTC肿瘤发生紧密相关。结论术后引流液来源的外泌体中的miRNA表达异常在PTC发生发展中发挥重要调控作用。     

BMSCs来源外泌体调节表皮HaCaT细胞及对烧伤创面愈合的促进作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的外泌体对表皮细胞(HaCaT细胞)增殖、侵袭与迁移的影响,以及对小鼠烧伤创面愈合的作用。方法:分离培养小鼠的BMSCs,超速离心法收集BMSCs来源的外泌体,采用BMSCs来源的外泌体培养HaCaT细胞,CCK-8法检测BMSCs来源的外泌体对HaCaT细胞增殖的影响,细胞划痕实验和Transwell实验检测BMSCs来源的外泌体对HaCaT细胞迁移与侵袭的影响。选取25只C57BL/6小鼠构建烧伤模型,22只成功建模,将存活小鼠分为对照组和外泌体组,每组11只,外泌体组烫伤周围注射BMSCs来源的外泌体,对照组小鼠同时注射等体积PBS溶液。采用ImageJ软件分析小鼠创面愈合率,通过HE染色观察创面组织学变化,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测创面组织中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)的水平,免疫组织化学染色检测创面组织Ⅰ型胶原(ColⅠ)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)表达。结果:成功分离培养出小鼠BMSCs,并得到BMSCs来源的外泌体。与对照组比较,实验组HaCaT细胞增殖活性明显升高;细胞的划痕愈合率较对照组显著升高,细胞侵袭数目较对照组也显著增加,差异均具有统计学意义(P0.05)。与对照组小鼠比较,经BMSCs来源的外泌体处理的小鼠,第3、7、14、21、28天的创面愈合率显著升高,创面组织结构得到明显改善,且组织中促炎因子TNF-α、IL-1β的含量均显著降低,而抗炎因子IL-10的含量显著升高,Ⅲ型胶原表达明显,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:BMSCs外泌体可促进HaCaT细胞的增殖、侵袭与迁移能力,并减轻小鼠烧伤创面组织的炎症程度,促进创面愈合。     

术后引流液外泌体hsa?miR?609在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用及其机制探讨

［摘要］ 目的 观察甲状腺乳头状癌（PTC）术后引流液中外泌体microRNA（miRNA）表达变化,探讨其在PTC发生发展中的作用。方法 收集3例PTC患者术后第一天切口引流液,以结节性甲状腺肿术后引流液为对照,采用超速离心法提取引流液中的外泌体,通过透射电镜、粒径分析及标记蛋白检测验证外泌体的特征,提取外泌体中的RNA进行miRNA芯片检测并进行聚类分析。结果 通过囊泡形态、粒径大小及特异性蛋白标记证实术后引流液中存在外泌体,miRNA芯片数据聚类分析结果显示PTC和结节性甲状腺肿患者术后引流液外泌体miRNA谱具有显著差异,其中以hsa?miR?609的表达差异最为显著。生物信息学结果提示预测的hsa?miR?609的靶基因和PTC肿瘤发生紧密相关。结论 术后引流液来源的外泌体中的miRNA表达异常在PTC发生发展中发挥重要调控作用。     

人甲状腺乳头状癌原代细胞的体外长期培养

目的探索人甲状腺乳头状癌原代细胞的体外长期培养方法及其监测鉴定手段。方法常规分离甲状腺乳头状癌细胞,并用含10%胎牛血清、L-谷氨酰胺和20 ng/ml人重组表皮生长因子(EGF)的高糖型DMEM培养液培养,分别在不同时间观察甲状腺乳头状癌细胞生长情况,测定培养液中的甲状腺球蛋白(Tg)和甲状腺过氧化物酶(TPO)水平,用免疫细胞化学方法检测Tg的表达。结果培养约8 d甲状腺乳头状癌细胞长满约80%的培养瓶底,符合传代标准;在培养45 d内生长良好,经5~6传代后细胞逐渐老化。细胞培养液中Tg含量随培养时间延长呈抛物线形变化,培养约14 d Tg达到峰值(985.2μg/L);TPO在细胞培养液中始终未检测到。免疫荧光染色结果显示,体外培养甲状腺乳头状癌原代细胞的Tg表达阳性。结论应用本研究建立的培养条件可以使人甲状腺乳头状癌原代细胞传5~6代,细胞存活约45 d。建立了简便、系统的监测及鉴定甲状腺乳头状癌细胞生物活性手段,提示在14 d左右该细胞用于基因研究较为合适,为研究甲状腺乳头状癌发生、发展机理及其特征提供了一种合适替代工具。     

他莫西芬对甲状腺乳头状癌的抑制作用

目的:探讨他莫西芬对人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:不同浓度的他莫西芬作用于人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞24 h后,采用CCK8法观察不用浓度他莫西芬对BCPAP细胞增殖的影响;将实验分为阴性对照组、10μmol/L他莫西芬组和20μmol/L他莫西芬组,划痕修复实验检验他莫西芬对其迁移能力的影响,Transwell小室实验检验他莫西芬对其侵袭能力的影响。Western blot检测各组bcl-2和C-myc的蛋白表达水平。结果:CCK8实验、划痕修复实验和Transwell小室实验结果显示他莫西芬能明显抑制BCPAP细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且呈现浓度依赖性(P0.05);Western blot结果显示,他莫西芬下调凋亡相关蛋白bcl-2与C-myc表达水平。结论:他莫西芬抑制甲状腺乳头状癌BCPAP细胞的增殖、迁移和侵袭,增殖抑制作用可能与下调凋亡相关蛋白bcl-2和C-myc表达水平有关     

环状RNA在甲状腺乳头状癌中的研究进展

目的总结目前环状RNA(circRNAs)在甲状腺乳头状癌中的作用和未来研究的重点。方法复习circRNAs的生物学功能及其在甲状腺乳头状癌中作用及研究现状的文献,并做综述。结果 circRNAs在甲状腺乳头状癌组织中存在异常表达,并且其可以作为miRNA海绵或与RNA结合蛋白相互作用,从而调控与细胞增殖、凋亡、侵袭和转移相关的蛋白,影响甲状腺乳头状癌细胞的生物学特性。结论 circRNAs有望成为甲状腺乳头状癌早期诊断的生物标志物和治疗的分子靶点,这为甲状腺乳头状癌的防治提供了一种科学有效的方法。     

外泌体在甲状腺疾病中的研究进展

目的总结外泌体在甲状腺疾病领域的研究进展。方法检索国内外文献,收集外泌体与甲状腺生理、病理及疾病相关的文献报道并作综述。结果外泌体是由细胞分泌的,可以存在于各种体液中的微小囊泡,其可介导甲状腺的正常生理发育,对Graves’病的疾病进展发挥着重要作用;外泌体可作为甲状腺癌的诊断和鉴别诊断标志物,并影响甲状腺癌的生长、侵袭和转移;外泌体作为抗甲状腺癌药物载体具有良好的靶向性。结论外泌体在甲状腺多种疾病的发生发展中发挥着重要作用;外泌体作为甲状腺癌的早期诊断、预后评估标志物以及靶向药物载体,具有良好的应用前景。     

阿霉素耐药细胞外泌体通过传递耐药性影响骨肉瘤细胞增殖和迁移的实验研究

目的探讨骨肉瘤阿霉素耐药细胞外泌体与MDR1、miRNAs的相关性及作用机制。方法选取骨肉瘤MG63和U2OS细胞株构建阿霉素耐药株, 通过MTT法检测耐药和敏感株的50%抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50), 于15～120 min中间隔15 min观察一次荧光染色检测荧光强度的变化, RT-PCR和Western Blot检测MDR1的mRNA和P-gp蛋白表达水平等验证骨肉瘤细胞耐药性;通过粒径分析及Western Bolt检测鉴定外泌体。观察PKH26标记的阿霉素耐药细胞外泌体的胞吞作用, 并采用MTT法和细胞划痕实验检测阿霉素耐药细胞外泌体与骨肉瘤细胞共培养后细胞的增殖水平、迁移能力及耐药性的变化。通过骨肉瘤源性外泌体测序及生物信息分析、RT-PCR验证miRNAs在骨肉瘤敏感和耐药细胞中的mRNA差异表达水平。观察MG63和U2OS中正常骨肉瘤细胞组与耐药细胞组、耐药细胞+正常外泌体组、耐药细胞+耐药外泌体组成瘤裸鼠肿瘤生长情况, 血清外泌体鉴定及其miR-21-5p的mRNA表达水平, RT-PCR、Weste...     

LncRNA MEG3调控microRNA-181b-5p/TIMP3对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响

目的 探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)调控微小RNA-181b-5p(microRNA-1816-5P,简称miR-181b-5p)/组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。方法 收集2019年12月—2021年12月本院所收治的20例前列腺癌患者前列腺癌组织及其对应癌旁组织；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织MEG3、miR-181b-5p表达；将前列腺癌细胞(PC3细胞)随机分为对照组(未处理)、pcDNA3.1-NC组(转染pcDNA3.1-NC)、pcDNA3.1-MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG)、pcDNA3.1-MEG3+miR-NC组(pcDNA3.1-MEG3与miR-NC共转染)、pcDNA3.1-MEG3+miR-181b-5p mimic组(pcDNA3.1-MEG3与miR-181b-5p mimic共转染);qRT-PCR检测细胞MEG3、miR-181b-5p表达；MTT实验、Transwell实验、划痕实验分别检测PC3细胞活力、侵袭及迁移能力；Western blot检测PC3...     

miR-139-5p对人肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-139-5p在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖、侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 采用生物信息学方法,从GEO数据库中下载GSE36915数据集,进行差异miRNA分析,结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,筛选与预后显著相关的miRNA。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139-5p在肝癌及其癌旁组织中的表达。利用CCK-8实验、Transwell实验观察miR-139-5p对人肝癌细胞SK-Hep-1和SMMC-7721的表型变化。采用高通量测序检测过表达miR-139-5p的SK-Hep-1细胞中基因表达的变化,确定miR-139-5p调控的潜在的信号通路和靶基因,并采用免疫印迹实验和报告基因实验进行验证。结果 通过对GSE36915数据集进行分析,共鉴定到50个显著差异表达的miRNA。结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,发现在差异最显著的20个miRNA中,miR-15b-3p、miR-1180-3p、miR-139-5p、miR-139-3p与预后显著相关,最终确定miR-139-5p为进一步研究对象。mi...     

miR-221在甲状腺乳头状癌中的表达及其生物学功能

背景与目的:microRNA(miRNA)异常表达与恶性肿瘤的发生发展密切相关,部分miRNA表达与甲状腺乳头状癌(PTC)侵袭性临床病理特征具有明确的相关性。本研究探讨miR-221在PTC中的表达情况及其对PTC细胞生物学行为的影响。方法:通过qPCR技术检测51对PTC癌组织及癌旁组织手术标本中miR-221的表达情况,并通过实时荧光定量RT-PCR检测甲状腺乳头状癌K1细胞miR-221的表达,将PTC K1细胞分别转染miRNA随机序列(阴性对照组)和miR-221抑制物(miR-221抑制物组)后,以无处理的K1细胞为空白对照,分别用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期、细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞侵袭力。结果:miR-221在PTC癌组织中的相对表达量均明显高于癌旁组织的相对表达量(P0.05)。与空白对照组比较,miR-221抑制物组K1细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率明显增加,G_0/G_1期细胞比例明显升高,而G_2/M期细胞的比例明显降低,细胞侵袭能力明显降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。阴性对照组与空白对照组间以上指标差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:miR-221在PTC中的表达升高,且可能通过调节细胞周期与凋亡而影响PTC细胞的增殖与侵袭能力。miR-221有作为PTC早期诊断与治疗的生物标志物的潜在价值。     

人胎儿皮肤皮脂腺细胞和外泌汗腺细胞的分离培养及鉴定

目的建立人胎儿皮肤皮脂腺、外泌汗腺细胞的体外分离培养与鉴定方法。方法通过分离人胎儿皮肤皮脂腺腺体和外泌汗腺腺管,以DMEM/F12(1∶1)为基础培养基,分别添加不同浓度的胎牛血清、表皮生长因子、L-谷氨酰胺、氢化可的松、霍乱毒素、青霉素、链霉素、重组人表皮生长因子、三碘甲状腺氨酸、胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠作为皮脂腺细胞培养基及外泌汗腺细胞培养基,置入37℃、体积分数5%CO2孵箱中进行原代及传代培养。倒置相差显微镜下观察人胎儿皮肤皮脂腺、外泌汗腺细胞的形态及变化,并进行细胞克隆形成率测定。采用油红染色和细胞角蛋白(CK)4.62、上皮膜抗原(EMA)免疫组织化学染色对传代培养的皮脂腺、外泌汗腺细胞进行鉴定。结果分离的人胎儿皮脂腺腺体和外泌汗腺腺管可以在体外贴壁生长繁殖;其皮脂腺细胞的克隆形成率为2.7%,明显低于人胎儿角质形成细胞(8.0%,P<0.01).人外泌汗腺细胞的克隆形成率为7.3%,与人胎儿角质形成细胞(7.7%)比较差异无统计学意义(P>0·05).油红染色显示,皮脂腺细胞含有少量脂质小滴,CK4.62、EMA免疫组织化学染色均为阳性;外泌汗腺细胞CK7、CK19免疫组织化学染色均为阳性。结论用酶消化法和显微分离法可体外分离人胎儿皮肤皮脂腺、外泌汗腺细胞,两者均具备上皮细胞的标志和生物学特点,但皮脂腺细胞增殖速度较为缓慢。     

外泌体靶向运载整合素αv/β3的小干扰RNA对未分化甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨通过外泌体靶向运载整合素αv/β3小干扰(si)RNA(si-αv/β3)对未分化甲状腺癌(ATC)细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用蛋白质印迹法(Western blot)检测整合素αv/β3在ATC细胞系(8505C、Hth7)及人正常甲状腺细胞(上海生命科学院细胞所)中的表达;将含内化精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽(iRGD)的质粒转染人源胚胎肾细胞HEK-293T后采用超高速离心法得到靶向外泌体, 采用PKH26染色验证其靶向性;进一步通过转染获得靶向运载si-αv/β3的外泌体iRGD-exos-si-av/β3(载siRNA组), 将其同8505C细胞共孵育后, 采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot检测载siRNA组与空载外泌体组8505C细胞内整合素αv/β3的mRNA和蛋白表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、划痕实验和Transwell检测8505C细胞的增殖、迁移及侵袭能力。两样本间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果整合素αv/β3在8505C及Hth7细胞中的表达量显著高于人正常甲状腺细胞(αv:1....     

外泌体与囊胚发育及种植关系研究新进展

近年来不孕症患者数量逐渐增多,辅助生殖技术(ART)通过体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的方式帮助人们完成受孕的愿望。外泌体是一种双磷脂膜囊泡,包裹着DNA、微小RNA(miRNA)、蛋白质、脂质等内容物,可由胚胎在体外的发育过程中分泌而来。外泌体对胚胎的发育、种植以及子宫内膜容受性有显著影响,在种植窗内胚胎与子宫内膜可以通过分泌外泌体的形式进行相互复杂交流,而外泌体内容物中miRNA种类及含量可能影响胚胎种植率以及临床妊娠结局。因此胚胎来源外泌体中miRNA的检测有望成为ART中鉴定胚胎质量的新策略。本文就外泌体与囊胚发育以及种植相关机制的研究进行综述。