PD-L1下调对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 研究PD-L1基因对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响,初步探讨PD-L1在口腔鳞癌进展过程中发挥的作用.方法 采用脂质体2000(lipofectamine 2000)转染小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)的方法,对口腔鳞癌细胞系细胞中PD-L1基因进行敲减,real-time PCR检测敲减效果.利用MTT法比较PD-L1敲减组与对照细胞增殖能力的差异.克隆形成实验评价PD-L1对肿瘤细胞克隆形成能力的影响.划痕实验研究PD-L1对细胞迁移能力的影响.Transwell实验验证PD-L1对细胞侵袭能力的影响.提取口腔鳞癌病人组织标本RNA并通过real-time PCR的方法比较PD-L1的表达差异.结果 转染siRNA后,细胞PD-L1表达明显下降,PD-L1敲减细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力都较对照组细胞减弱.在临床标本的检测中,证实了PD-L1在口腔鳞癌组织中高表达.结论 PD-L1能对口腔鳞癌细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力都具有明显影响,可能在口腔鳞癌的进展过程中发挥一定作用.     

POLQ表达降低对SACC-83细胞DNA损伤敏感性的影响

目的 ：探讨DNA损伤环境中抑制POLQ对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）细胞SACC-83增殖及克隆形成能力、细胞周期及DNA损伤修复通路的影响。方法：应用shRNA(short hairpin RNA)瞬时转染方法构建POLQ敲减的SACC-83细胞模型，利用qRT-PCR及Western免疫印迹实验检测POLQ干扰效率。应用不同浓度DNA损伤剂依托泊苷（etoposide,ETP/VP-16-213）诱导SACC-83细胞发生DNA损伤，利用Western免疫印迹实验检测γH2AX的表达水平，评价DNA双链断裂水平。在不同浓度依托泊苷诱导形成的DNA损伤环境中，通过CCK-8细胞增殖实验检测抑制POLQ对SACC-83细胞增殖能力的影响。采用平板克隆实验观察抑制POLQ对SACC-83细胞克隆形成能力的影响，应用流式细胞仪分析抑制POLQ对SACC-83细胞周期的影响，应用Western免疫印迹实验检测抑制POLQ对SACC-83细胞γH2AX、RAD51及PARP1表达水平的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据...     

敲减TULP3对头颈鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨敲减TULP3对头颈鳞状细胞癌(HNSCC)细胞生物学行为的影响。方法 应用TCGA数据比较头颈鳞癌组织与癌旁组织中TULP3表达水平;体外培养人HNSCC细胞系HN4、HN6、CAL27、HSC3、SCC4及正常口腔上皮角质细胞HOK并应用Western Blot比较TULP3蛋白表达水平,免疫组化分析TULP3在HNSCC组织中表达情况。构建RNA干扰寡核苷酸si-TULP3及si-NC转染HN4、HN6,应用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell侵袭实验检测敲减TULP3对HNSCC细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。实时定量逆转录PCR及Western Blot检测细胞周期及上皮间质转化(EMT)相关指标变化。构建HN6-shTULP3及HN6-shNC细胞株接种于裸鼠皮下,分析裸鼠移植瘤体积差异。结果 TCGA数据显示头颈鳞癌组织TULP3表达量显著高于癌旁组织 (P＜0.000 1) ;HN4、HN6、CAL27、HSC3细胞中TULP3蛋白表达量均高于HOK细胞,TULP3在HNSCC组织中呈阳性表达。HN4、HN6细胞转染si-TULP3后,增殖、侵袭、迁移能力明显弱于si-NC组。敲减TULP3后,HN4、HN6细胞CDK4、Cyclin D1、Cyclin D3、N-cadherin、ZEB2、Slug蛋白表达水平下降,其中CDK4、Slug基因水平也下降 (P＜0.001) ;此外,β-catenin蛋白表达水平上升。敲减TULP3后裸鼠皮下移植瘤体积明显小于对照组(P＜0.01)。结论 敲减TULP3可以抑制HNSCC细胞系的增殖、侵袭及迁移能力,可能通过调控细胞周期及抑制EMT进程发挥作用。     

莱菔硫烷对RhoC敲低的口腔鳞癌细胞的调控作用

目的 观察莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对RhoC稳定敲低的口腔鳞癌细胞系CAL27 RhoC/shRNA的影响。方法 选取口腔鳞癌细胞系CAL27 RhoC/shRNA进行培养，用不同浓度的SFN处理对数期CAL27RhoC/shRNA细胞，通过RT-PCR和western blot检测SFN对细胞中Nrf2 RNA和蛋白水平的影响。分别通过MTT实验、克隆形成实验和侵袭实验检测SFN对口腔鳞癌细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响；PHOD染色检测SFN对口腔鳞癌细胞F-actin聚合能力的影响。结果 应用SFN能有效抑制口腔鳞癌细胞CAL27 RhoC/shRNA的增殖能力、克隆形成能力、侵袭能力和F-actin蛋白聚合能力。结论 SFN可减弱RhoC敲低的口腔鳞癌细胞的恶性能力。     

水飞蓟宾对人舌癌细胞Tca的抑制作用

目的:研究水飞蓟宾在体外对舌癌细胞的作用,并进一步探讨其可能的作用机制.方法:MTT实验测定水飞蓟宾对舌癌细胞系(Tca)的半数抑制浓度(IC50);平板克隆形成实验检测加药前后细胞的克隆形成能力;流式细胞仪检测加药前后细胞周期的变化.结果:水飞蓟宾对舌癌细胞系有较强的抑制作用, 作用48 h时,IC50约为100 μmol/L;水飞蓟宾作用后,舌癌细胞的平板克隆形成能力降低;流式细胞仪检测结果显示细胞出现G1期阻滞.结论:水飞蓟宾在体外对舌癌细胞具有明显的抑制作用, 其作用机制可能是细胞出现G1期阻滞.     

环状RNA-BIRC6促进血管新生的作用研究

目的 分析人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经人羊膜间充质干细胞上清(hAMSC-CM)诱导后差异表达的circBIRC6在血管新生中的作用。方法 运用实时定量PCR检测HUVEC中circBIRC6的表达水平;设计针对circBIRC6的siRNA和过表达质粒,通过转染构建敲减和过表达circBIRC6的HUVEC细胞模型;通过Transwell小室迁移实验、成管实验、创愈划痕实验检测HUVEC的血管新生能力。结果 hAMSC-CM诱导HUVEC中circBIRC6的表达上升;实时定量PCR验证了HUVEC敲减和过表达circBIRC6细胞模型的可靠性;在Transwell小室迁移实验、成管实验、创愈划痕实验中,敲减circBIRC6降低了HUVEC的小室细胞迁移率、总成管长度和划痕迁移率,而过表达circBIRC6则反之。结论 本研究初步阐明circBIRC6促进HUVEC血管新生的作用,并揭示hAMSC-CM可能通过上调HUVEC中circBIRC6的表达进而促进血管新生。     

敲减ALPL基因对人牙髓干细胞凋亡的影响

目的:观察敲减ALPL基因对人牙髓干细胞(h DPSCs)凋亡的影响。方法:取第3代h DPSCs,将其随机分为实验组和对照组后,通过慢病毒转染法敲减实验组h DPSCs的ALPL基因,并采用Western-Blot及ALP染色法检测两组细胞中ALP蛋白的表达水平。用Western-Blot和流式细胞术分别检测各组h DPSCs的凋亡状态及凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8的表达水平。结果:Western-Blot及ALP染色结果显示,人ALPL敲减病毒颗粒能在h DPSCs中有效敲减ALPL基因;敲减ALPL基因后,可使h DPSCs的凋亡水平及其凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-8的表达水平明显上升(P<0.05)。结论:敲减ALPL基因可促进h DPSCs的凋亡。     

TIP30蛋白在ACC-M细胞中的表达鉴定及作用

目的 :筛选含有TIP3 0的涎腺腺样囊性癌高转移细胞 ,检测TIP3 0蛋白在涎腺腺样囊性癌高转移细胞中的表达 ,检测携带外源性TIP3 0细胞的细胞周期分布变化。方法 :应用脂质体转染方法将TIP3 0导入ACC M细胞中 ,G418筛选阳性克隆 ,用免疫印记杂交法 (Westernblot)检测转染细胞中TIP3 0蛋白的表达 ;流式细胞仪测定细胞周期分布。结果 :筛选 14d后 ,含有TIP3 0的ACC M克隆形成 ,TIP3 0蛋白在ACC M中表达稳定 ;携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低。结论 :ACC M细胞能稳定表达外源基因TIP3 0 ,携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期细胞比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低 ,从而影响ACC M细胞的生长 ,是TIP3 0抑制涎腺腺样囊性癌细胞生长的可能机制之一。     

SOX18通过上调KLF4促进血管瘤内皮细胞增殖并抑制其凋亡的实验研究

目的:构建表达SOX18的真核表达载体,并合成靶向于SOX18的siRNA,探索SOX18调控血管瘤内皮细胞(hemangioma-derived endothelial cell, HemECs)增殖的机制。方法:检测SOX18及相关基因在临床样本中的表达。构建SOX18的真核表达载体,通过转染该真核表达载体以及靶向于SOX18的siRNA,实现过表达和敲减SOX18。以细胞计数的方法检测SOX18对血管内皮细胞增殖的影响;流式细胞术检测超表达和敲减SOX18后对细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测过表达和敲减SOX18后对相关基因的调控作用。结果:SOX18在血管瘤组织总的表达显著高于正常组织。成功构建了过表达SOX18的真核表达载体pCMV-HA-SOX18,并验证其能够在HemECs细胞内过表达。此外,结合siRNA敲减实验,证实SOX18能够促进HemECs增殖并抑制其凋亡。qRT-PCR检测和Western Blot检测证明SOX18能够上调KLF4和VEGF-C的表达。结论:SOX18能够通过促进KLF4和VEGF-C的表达促进HemECs增殖。     

三羟基异黄酮对ACC2及ACCM细胞株侵袭能力的影响

目的:观察4,5,7-三羟基异黄酮(Genistein)对腺样囊性癌细胞株(ACC2)及腺样囊性癌肺转移株(ACCM)的侵袭能力,和对两细胞株金属基质蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法:采用细胞划痕实验及Transwell小室侵袭实验,检测Genistein对ACC2和ACCM细胞侵袭能力的影响;采用明胶酶谱法及流式细胞术分别检测Genistein对两种细胞株MMP-2蛋白胞外分泌及胞内表达的影响。结果:Genistein能显著抑制ACC2及ACCM两种细胞株的侵袭能力(P<0.01),但两细胞株之间不存在差异(P>0.05)。同时,Genistein可使两细胞株细胞外分泌MMP-2蛋白的水平下调,及胞内MMP-2蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:Genistein可对ACC2及ACCM的侵袭产生明显的抑制作用,该作用可能与诱导胞内外侵袭相关蛋白MMP-2的表达降低有关。