青皮对主要致龋细菌生长的影响及网络药理学分析其防龋机制

目的研究青皮提取物对6种主要致龋菌生长的影响,基于网络药理学方法探讨青皮潜在的防龋机制。方法采用液体稀释法测定6种主要致龋菌最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)。基于TCMSP数据库获取青皮化学成分及其对应靶点,通过Gene Cards、OMIM数据库获取龋病靶点,将药物与疾病靶点映射得到青皮化学成分的预测靶点。构建成分-靶点调控网络及蛋白-蛋白相互作用网络,利用DAVID数据库分析预测靶点的GO富集分析,利用Kobas数据库分析预测靶点的KEGG富集分析。结果青皮提取物对变形链球菌、血链球菌、远缘链球菌、黏性放线菌、内氏放线菌和嗜酸乳杆菌MIC分别为1.0、0.5、1.0、2.0、2.0、2.0 g/L,MBC分别为2.0、1.0、2.0、4.0、4.0、4.0 g/L。网络药理学方法得到青皮化学成分12个,靶点28个,关键化学成分包括新橙皮苷、柚皮素、川陈皮素等,关键靶点包括TNF、CAT、MMP9等。KEGG富集分析得到AGE-RAGE、NF-κB等信号通路。结论青皮提取物对6种主要致龋细菌生长具有显著抑制作用,网络药理学揭示了其化学成分防治龋病的药理基础及作用机制,能为后续从青皮中开发防龋药物提供实验和理论依据。     

基于网络药理学和分子对接技术探讨人参对牙周炎的潜在治疗机制

目的 采用网络药理学和分子对接技术探讨人参治疗牙周炎的潜在作用机制。方法 通过多种数据库获得人参、牙周炎的潜在靶点,利用VENNY获得人参-牙周炎交集靶点,在STRING平台形成蛋白质互作网络关系图,采用Cytoscape软件形成核心靶点图并构建人参-活性成分-靶点网络图,将核心靶点进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,通过分子对接技术分析人参活性成分治疗牙周炎的核心靶点。结果 分析获得22个人参活性成分、591个人参活性成分潜在作用靶点、2 249个牙周炎基因靶点和145个人参-牙周炎交集靶点。人参对血管内皮生长因子A、表皮生长因子受体等核心靶点以及低氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B (PI3K-Akt)信号通路分子具有较强的结合活性。结论 人参及其活性成分可通过调节HIF-1、PI3K-Akt等多条信号通路发挥治疗牙周炎的作用。     

网络药理学探索雷公藤治疗复发性阿弗他溃疡的药理特性和治疗机制

目的 基于网络药理学方法研究雷公藤的主要活性成分及其治疗复发性阿弗他溃疡(RAU)的药理特性及作用机制。方法 基于中药系统药理学分析平台等获取雷公藤化学成分及靶点,Gene Cards等数据库获取疾病靶点,将药物与疾病靶点韦恩分析,得到雷公藤治疗RAU的潜在靶点。采用Cytoscape 3.7.2构建成分-靶点调控网络,STRING构建蛋白-蛋白相互作用网络,Network Analyzer计算网络拓扑属性,DAVID数据库进行GO、KEGG富集分析。结果 获得成分51个,疾病靶点2562个,交集靶点150个。雷公藤治疗RAU的核心活性成分有雷公藤甲素、山奈酚、川陈皮素等,关键靶点包括丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A (VEGFA)等。GO富集分析得到对药物的反应、酶结合、膜筏等80个GO条目。KEGG富集分析得到TNF信号通路、Toll样受体通路、T细胞受体信号通路等117条通路。结论 网络药理学初步揭示了雷公藤活性成分治疗RAU的药理基础及作用机制,为后续从雷公藤中开发低毒副作用的治疗RAU的药物提供理论依据。     

黄芩对5种常见牙周细菌抑制作用的体外研究

目的：观察黄芩对5种常见牙周细菌的作用。方法：采用试管两倍稀释法测定黄芩甲醇提取物在体外厌氧环境对牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、伴放线放线杆菌、具核梭杆菌、血链球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果：黄芩对各实验菌株均有抑制作用，对牙周常见可疑致病菌牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、伴放线放线杆菌、具核梭杆菌的MIC值为5g／L、MBC值为20g／L，对牙周有益菌血链球菌的MIC值为40g/L、MBC值为40g/L，结论：浓度为5g/L的黄芩在不破坏牙周局部生态平衡的情况下可有效抑制牙周可疑致病菌的生长。     

柠檬精油对牙周致病菌抑制作用及其安全性初步研究

目的:探讨柠檬精油对牙周致病菌的体外抗菌活性及对细胞增殖的影响。方法:采用微量液体稀释法测定柠檬精油对Pg、Fn、Aa、Pi的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)及最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);以较低浓度的MIC为标准稀释LEO作为实验组,采用MTT法测定柠檬精油对HUVECs的毒性作用,明确抑菌浓度下LEO的安全性。结果:柠檬精油对牙周主要致病菌均有抑菌作用,Pg、Fn、Aa、Pi的MIC分别是9.0 g/L、4.5 g/L、4.5 g/L、9.0 g/L,Aa、Fn的 MBC是9.0 g/L,Pg、Pi的MBC未测得。1/2MIC、1/20MIC浓度的LEO能够抑制人脐静脉内皮细胞的生长,而低于1/200MIC浓度的LEO则对人脐静脉内皮细胞的生长没有影响,其中1/200MIC浓度的LEO作用明显优于0.02%的CHX。结论:体外环境中,柠檬精油对牙周致病菌Pg、Fn、Aa、Pi具有抗菌活性,低浓度应用对机体相对安全。     

复方五倍子用作髓室底穿孔内屏障材料的体外抑菌实验

目的：通过体外抑菌实验检测复方五倍子、白芨对牙周、牙髓感染常见菌牙龈卟啉单胞菌（F印、具核梭杆菌（n）的最小抑菌浓度（MIC）及持续抑菌效果,评价其抑菌作用。方法：采用液体二倍稀释法配制不同浓度的复方五倍子培养基和白芨培养基,将尸g和n接种其上,厌氧培养48h观察细菌生长,测定最小抑菌浓度（MIC）;通过采集复方五倍子和白芨不同时间点的药物浸出液,配制成培养基,接种细菌,厌氧培养48h,菌落计数,计算药物的杀菌率。结果：复方五倍子对两种细菌均有抑制作用且具有相同的MIC,而相同浓度白芨组无抑菌作用;在观察时间内,各实验组均有不同程度的持续抑菌作用,其中,复方五倍子组持续抑菌效果最佳,48h时达到最大,120h后仍有一定的杀菌作用;白芨组抑菌效果明显低于复方五倍子组。提示相同浓度的复方五倍子抑菌作用优于白芨,其中起主要抑菌作用的成分为五倍子。     

基于网络药理学和分子对接技术探究姜黄素治疗牙周炎的作用机制

目的 联合使用网络药理学和分子对接技术探究姜黄素作用于牙周炎的治疗靶点。方法 采用多种数据库预测姜黄素、牙周炎的作用靶点，利用String绘制姜黄素-牙周炎蛋白质相互作用（PPI）网络，筛选出的关键靶基因进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析；通过分子对接技术分析姜黄素治疗牙周炎的关键靶点。结果 从数据库中获得672个牙周炎相关疾病靶点，107个姜黄素作用靶点，筛选获得20个关键靶点，对这20个靶点进行GO和KEGG通路富集分析发现，姜黄素可能通过调节低氧诱导因子（HIF）-1、甲状旁腺激素（PTH）等信号通路发挥治疗作用；分子对接分析结果表明，姜黄素和多个靶点均具有良好的结合潜能。结论 本研究获得姜黄素治疗牙周炎的潜在靶点及分子机制，对促进药物的研发及临床应用提供理论基础。     

实时荧光定量PCR检测牙周炎患者龈下菌斑的分布

目的 应用实时荧光定量PCR技术探索侵袭性牙周炎（aggressive periodontitis,AgP）、慢性牙周炎（chronic periodontitis,CP）患者龈下菌斑中伴放线聚集杆菌(A. actinomycetemcomitans,Aa)、牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis,Pg）的分布规律。方法 采集32例AgP、33例CP、32例牙周健康者的龈下菌斑,构建含有2种待测细菌基因片段的重组质粒,建立定量标准,采用TaqManMGB探针实时荧光定量PCR方法检测样本中细菌数量。结果 本实验构建的引物及TaqManMGB探针特异性及敏感性较好。AgP组龈下菌斑Aa的检出率高于CP组（P＜0.01）,但2种细菌数量在组间无显著差异,两组内Pg的检出率及数量都明显高于Aa（P＜0.001）,另外AgP组Aa的数量、CP组Pg数量与牙周探诊深度密切相关（P＜0.01及P＜0.001）。结论 龈下菌斑Aa的检出率可能与牙周炎类型存在一定关联,Aa可能并不是中国人群样本AgP患者龈下菌斑的优势菌,实时荧光定量PCR对牙周病学研究有广泛应用前景。     

地塞米松诱导同系新西兰仔兔先天性腭裂的转录组异质性

目的 研究地塞米松诱导同系新西兰仔兔先天腭裂的转录组异质性，进一步探究先天性腭裂发生的分子机制。方法 妊娠第14天到第17天给20只新西兰孕兔肌肉注射地塞米松（每天1.0 mg），观察每只孕兔所有子代腭部表型。选取生产了8只胚胎、腭裂胚胎与非腭裂胚胎为4∶4的孕兔，分为腭裂组（CP）与非腭裂组（NCP），收集其腭部组织进行转录组测序分析。结果 CP组与NCP组相比，共有225个差异基因（Q<0.05），其中120个基因上调，105个基因下调。差异性表达基因的GO和KEGG富集分析表明，异三聚体G蛋白复合物、细胞外基质、转录因子复合物、基底膜的GO分类呈显著富集；GABA能突触、吗啡成瘾、逆行内源性大麻素信号、谷氨酸突触、含血清素的神经突触、肌动蛋白细胞骨架的调节、Apelin信号通路等在KEGG通路中显著富集。实时荧光定量分析法验证表明，与NCP组相比，CP组ARHGEF6 (P<0.05)、ABI2 (P<0.001)基因表达水平下降，APC基因表达水平上升（P<0.001）。结论 参与腭突中肌动蛋白细胞骨架调节的基因ARHGEF6、APC、ABI2的表达水平...     

������RISE-AP12®������߲���������������������о�

目的研究抗菌肽RISE—AP12对体外培养的牙龈91、啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）的抗菌活性。方法本研究于2012年10月至2013年1月在中国医科大学附属口腔医院中心实验室进行。以P．g W83为实验菌株,采用麦氏比浊法配制P.g W83混悬液（10^6 CFU／mL）备用,微量液体稀释法测定抗菌肽RISE—AP12对P．g W83的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentration,MBC）。结果抗菌肽RISE—AP12对10^6 CFU／mL P．g W83的MIC为0．01 mg／mL,MBC为0．02mg／mL。结论抗菌肽RISE—AP12对浮游状态下的P譬有抑菌（MIC为0,01 mg／mL）和杀菌（MBC为0．02 mg／mL）作用。     

Inhibitory effect of garlic extract on oral bacteria

Garlic (Allium sativum) has long been known to have antibacterial, antifungal and antiviral properties but there are few data on its effects against oral bacterial species particularly putative periodontal pathogens or their enzymes. Filter sterilised, aqueous extract of garlic was tested for ability to inhibit the growth of a range of oral species and to inhibit the trypsin-like and total protease activity Porphyromonas gingivalis. The garlic extract (57.1% (w/v), containing 220 microg/ml allicin) inhibited the growth and killed most of the organisms tested. In general, the minimal inhibitory and minimum bactericidal concentrations for the Gram-negative strains (garlic MIC range 35.7-1.1 mg/ml; allicin mean MIC 4.1 microg/ml; mean MBC 7.9 microg/ml) were lower than those for the Gram-positive strains tested (garlic MIC range 142.7-35.7 mg/ml; allicin mean MIC 27.5 microg/ml; mean MBC 91.9 microg/ml). Also, of the organisms tested, the putative periodontal pathogens had among the lowest MICs (17.8-1.1 mg/ml garlic) and MBCs (35.7-1.1 mg/ml garlic). Time-kill curves for Streptococcus mutans and P. ginigvalis, showed that killing of the latter started almost immediately, whereas there was a delay before S. mutans was killed. The garlic extract also inhibited the trypsin-like and total protease activity of P. gingivalis by 92.7% and 94.88%, respectively. These data indicate that garlic extract inhibits the growth of oral pathogens and certain proteases and so may have therapeutic value, particularly for periodontitis.     

中草药抗致龋菌的实验研究

目的：筛选出具有抗致龋的中草药,并检测其最小抑菌,杀菌浓度,方法：对各种实验用中草药分别采用水、醇两种方法提取有效成分,从黄连中提纯盐酸小檗碱,通过纸片扩散法筛选出具有抗致龋菌的中草药,用液体稀释方法检测最小抑菌及最小杀菌浓度。结果：对变形链球菌Ingbritt株的最小杀菌浓度,厚朴、黄连、五倍子、大黄醇提取物,黄连水提取物和小檗碱分别是0．488、1．950、7．800、31．250、7．800及0．626g/L;对茸毛链球菌6715株的最小杀菌浓度,厚朴,黄连、大黄醇提取物,黄连水提物和小檗碱分别是0．488、3．900、31．250、1．950及0．625g/L;对粘性放线菌ATCC19246株的最小杀菌浓度,黄连、大黄醇提物、黄连水提取物和小檗碱分别是3．900、131．250、3．900及1．250g/L。结论：厚朴、黄连、大黄醇提取物、盐酸小檗碱、黄连及大黄水提取物对致龋菌有较强的抑菌或杀菌作用,厚朴醇提取物的杀菌效果最强。     

前扣带回皮质层中牙移动疼痛相关蛋白质组学研究

目的研究正畸牙移动中前扣带回皮质层（ACC）的蛋白质组学表达,筛选牙移动疼痛相关的目标蛋白,探讨ACC在疼痛传导和形成中的作用。 方法30只雄性SD大鼠建立实验性牙移动模型后,根据行为学观测结果分组。实验组进行加力,对照组仅进行乙醚麻醉,24 h后进行行为学观测并取ACC组织,根据行为学观测结果选取4标样本进行蛋白质组学研究。ACC组织在提取蛋白并胰酶消化后,经串联质谱标记（TMT）试剂标记,进行液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析,进行基因本体（GO）注释,GO功能聚类分析,基因和基因组学京都百科全书（KEGG）代谢通路注释及功能聚类分析。 结果本实验共鉴定并定量3374种蛋白,其中表达上调蛋白12种、表达下调蛋白109种。GO注释和功能聚类分析中从生物过程、细胞组成、分子功能三个方面阐述了大鼠在实验性牙移动应力下发生的一系列应激反应及代谢调节。KEGG注释及功能聚类分析表明与炎症相关通路花生四烯酸通路及JAK-STAT信号通路表达下调,且差异具有统计学意义。花生四烯酸通路的前列腺素E合成酶（PGES）、谷胱甘肽过氧化物酶1（GPX1）、环氧化物水解酶2（EPHX2）,JAK-STAT信号通路的信号转导和转录因子1（STAT1）、STAT2显著下调,可能与炎症性疼痛的发生、发展密切相关。 结论TMT技术是组织蛋白质组学研究的有效方法。ACC在牙移动疼痛形成和调节中发挥重要作用,其中花生四烯酸通路、JAK-STAT信号通路可能是牙移动疼痛的关键信号通路。本实验为进一步探讨牙移动疼痛关键蛋白提供了重要的实验依据。     

In vitro antimicrobial susceptibility of periodontopathic Actinobacillus actinomycetemcomitans to roxithromycin and erythromycin

The in vitro minimal inhibitory concentrations (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) of roxithromycin and erythromycin against Actinobacillus actinomycetemcomitans were evaluated. Sixty-seven different A. actinomycetemcomitans isolated from periodontal pockets of 101 subjects with different forms of early-onset and adult periodontitis and three reference strains of A. actinomycetemcomitans (ATCC 29522, ATCC 29523, and NCTC 9710) were included in this study. Erythromycin showed poor in vitro activity against A. actinomycetemcomitans ; roxithromycin, on the contrary, exhibited good in vitro activity. Moreover, roxithromycin showed the best in vitro antimicrobial activity against 17 serotype a and 12 serotype c subpopulations of A. actinomycetemcomitans ; against 38 serotype b subpopulation of A. actinomycetemcomitans , roxithromycin was consistently active. Roxithromycin exhibited MBC values usually equal to, or onefold higher than MIC values. All the MBC values of erythromycin were three-to four-fold higher than the respective MIC result. Since roxithromycin is characterized by high concentrations in serum and good penetration and diffusion into gingival tissue, it could be expected to pass into the gingival crevicular fluid at levels sufficiently high to inhibit A. actinomycetemcomitans in vivo. These data indicate that roxithromycin might be a potential candidate for therapeutic trials in patients with A. actinomycetemcomitans -associated periodontitis.     

熊果酸的提取及其对牙周病原菌的作用

目的 从女贞叶有效位皂甙中提取有效成分熊果酸，鉴定其化学结构；检测其对牙周卟啉菌、中间型普氏菌和福塞氏类杆菌的作用。方法 按照中药硅胶柱层析的方法；利用微量胶体稀释法测定晶体Ⅰ对3种牙周病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度；同时测定晶体Ⅰ对中间型普氏菌和福赛氏类杆菌的杀菌曲线。结果 晶体Ⅰ经过波谱分析鉴定其结果为熊果酸，熊果酸对3种牙周病原菌的最小抑菌浓度为0.740 μg/L，最小杀菌浓度为0.295 μg/L，杀菌曲线显示0.800 μg/L的熊果酸可在3h内杀灭中间型普氏菌，6h内杀灭福赛氏类杆菌。结论 熊果酸对牙周病原菌具有良好的抑制和杀灭作用。Ⅰ     

Antimicrobial properties of hydrogen peroxide and sodium bicarbonate individually and in combination against selected oral, gram-negative, facultative bacteria

The topical application of hydrogen peroxide (H2O2) and sodium bicarbonate (NaHCO3), individually and in combination, has been used empirically in the treatment of periodontal diseases. In this study, we examined both minimum inhibitory concentrations (MIC) and minimum bactericidal concentrations (MBC) of these disinfectants individually and in combination against selected facultative, Gram-negative oral bacteria in a microtiter dilution assay. The bacteria studied included Actinobacillus actinomycetemcomitans, Haemophilus aphrophilus, Eikenella corrodens, and Capnocytophaga gingivalis. These bacteria exhibited MBC (one hr) values ranging from 75 mumol/L to greater than 10 mmol/L and MIC from less than 5 to 500 mumol/L for H2O2. The tested bacteria exhibited MIC values for NaHCO3 of from 23 to 182 mmol/L, and the MBC (one hr) exceeded 728 mmol/L for most of the strains examined. At sublethal (sub-MIC) concentrations, sodium bicarbonate antagonized the ability of H2O2 to inhibit bacterial growth in MIC assays, but sublethal concentrations of H2O2 had no effect on the MIC values of NaHCO3. Lethal concentrations of H2O2 and NaHCO3 exhibited synergistic antimicrobial activity in combination in one-hour bactericidal assays. Since the bactericidal properties of these antimicrobial agents are synergistic, we conclude that it may be rational to use them in combination to treat certain forms of periodontal disease. Also, lower and perhaps safer concentrations of H2O2 can be used in combination with NaHCO3 when oxidative antimicrobial chemotherapy is indicated.     

Interactions of sanguinarine and zinc on oral streptococci and Actinomyces species

Sanguinaria extract, which contains benzophenanthridine alkaloids, has been used as a folk medicine for many years. Minimum inhibitory and minimum bactericidal concentrations (MIC and MBC values) for sanguinarine were determined for common and etiologically important plaque bacteria. Because the efficacy of sanguinarine is believed to be enhanced by zinc, isobolograms were assessed to determine their mode(s) of interaction. Hydrogen ion concentration influenced the inhibitory activity of both sanguinarine and zinc. For sanguinarine, at the optimum pH (6.5), MIC values were 4 or 8 micrograms/ml for Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus, Streptococcus sanguis, Actinomyces viscosus and Actinomyces naeslundii. MIC values were 0.125-0.50 mmol Zn/ml. MBC values ranged from 1 to 8 mmol Zn/ml at pH 5.5. Isobologram data revealed that sanguinarine and zinc interacted synergistically. Viadent oral rinse, which contained 300 micrograms sanguinaria extract/ml and 0.2% zinc chloride (14.9 mmol Zn/l), was inhibitory to all strains tested. MIC values were 1 or 2% (ml Viadent oral rinse/100 ml aqueous solution) for all strains except A. viscosus for which the MIC value was 12% (vol/vol).