神经嵴细胞的特性和培养

在胚胎的发育中，神经嵴细胞是一组特殊的细胞群，可以分化为神经元、神经胶质细胞及多种非神经细胞，是机体内最具多能性的结构之一。在口腔颌面部的发育中，大部分组织如牙乳头、牙囊、牙周膜、骨组织、肌肉中所包含的细胞几乎无一例外地均来源于神经嵴细胞。因此，神经嵴细胞，尤其是     

细胞外基质与造牙本质细胞分化

内釉上诱导牙乳头细胞分化为造牙本质细胞，基底膜起介导作用；在无内釉上皮或基底膜存在的条件下，牙本质基质仍可诱导造牙本质细胞的分化。近年研究表明某些胞外基质成分在造牙本质细胞分化过程中起关键性作用。     

血清对神经嵴细胞向神经胶质细胞分化诱导的体外研究

目的：探讨神经嵴细胞在含血清培养基中向神经细胞的自发分化过程，方法：取妊娠第8．5天的BALB／c胎鼠的神经嵴细胞，分别在无血清和含血清培养基中培养，免疫组化和透射电镜鉴定和观察神经嵴细胞的分化情况.结果：在无血清的培养基中，NSE染色结果阳性，透射电镜下未见神经内分泌颗粒，神经嵴细胞保持其原有的特性，在有血清的培养基中，神经嵴细胞自发分化，胶质纤维酸性蛋白（GFAP），神经特性烯醇化酶（NSE）和S－100染色阳性，透射电镜下可见大量的神经内分泌颗粒。结论：血清可使神经嵴细胞自发的向神经胶质细胞分化。     

细胞凝聚区的形态在C57BL／6N系小鼠下颌骨发育中的作用意义

观察胚胎早期间充质细胞增殖、分化的改变，明确下颌骨在胚胎早期由细胞凝聚到定向分化成成骨细胞而发育形成的过程。方法：用免疫组化及ＴＵＮＥＬ染色等方法，检测了胚龄１３－１９ｄ及出生１ｄ的小鼠下颌骨下未分化间充质细胞增殖、细胞程序性死亡及表型转化的生物学改变。     

小鼠重组OSF-2对人牙周膜细胞附着和伸展的影响

目的：观察小鼠重组牙周膜细胞特异性因子2（OSF-2）对牙周膜细胞附着和伸展的作用。方法：采用固相结合分析实验及四唑盐比色等细胞生物学技术，观察牙周膜细胞在OSF-2基质上的附着能力和伸展率。结果：牙周膜细胞在OSF-2基质上附着和伸展良好，当浓度在20ug／ml以上时，作用尤其显著（P〈0．01），与在FN基质的生长结果相似。结论：小鼠重组OSF-2可有效促进牙周膜细胞的附着和伸展。     

人成牙本质细胞的分离和鉴定

目的:分离并鉴定完整的成熟人成牙本质细胞。方法:收集人健康恒牙,采用胶原酶和蛋白酶联合消化法分离出成牙本质细胞,并对分离出的细胞进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定。结果:实验分离出的细胞为柱状或立方状,有较长的细胞突起,具有典型的成牙本质细胞形态,免疫组化染色显示细胞表达Ⅰ型胶原、DMP1和DSP蛋白。结论:本研究分离得到了完整的成熟人成牙本质细胞,为后期研究成牙本质细胞的分化、功能及特点奠定基础。     

细胞毒性T细胞与肿瘤免疫治疗

宿主对肿瘤的免疫应答是细胞免疫和体液免疫对肿瘤作用的综合结果，其中细胞免疫是抗肿瘤免疫的重要组成部分。本文通过介绍T细胞活化机制和杀死靶细胞的机制，进而综述目前常用的抗肿瘤免疫途径。     

人牙髓细胞的体外培养

对牙髓细胞的体外培养是研究牙髓的有效工具。随着细胞培养技术的发展，牙髓细胞培养的成功率不断提高。干细胞生物学的研究使得人们认识到，在成体组织中也存在干细胞。目前不仅已分离出牙髓干细胞，而且对其干细胞特征作了进一步的研究，这将给牙髓病治疗和牙齿组织工程带来重大的变化。     

人牙周膜细胞克隆与牙骨质瘤细胞克隆体外钙化的比较

目的：研究瘤性成牙骨质细胞和牙周膜细胞克隆体外不同的生物学特性。方法：对瘤性成牙骨质（CTM）细胞和牙周膜（PDL）细胞进行克隆化培养，分别观察细胞的钙化形态并检测培养液中骨钙素（OC）的含量。结果：其钙化的形式有两种，一种为弥散型钙化，一种为结节状钙化。PDL组结节状钙化为细胞钙化总数的16％，而CTM组结节样钙化为钙化总数的62％（P＜0.01)。两种钙化形式的克隆细胞16d时的OC含量有明显的不同。结论：结节状钙化形式可能是成牙骨质细胞钙化的特有形式之一，这对今后牙周细胞的移植和牙周组织工程的研究有一定的指导意义。     

肿瘤exosome诱导特异性T杀伤细胞的研究

目的检测癌细胞来源的exosome在体外刺激细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤癌细胞的能力.方法分离纯化舌鳞癌Tca8113细胞,培养上清液中的exosome,制备癌细胞的冻融抗原(FTA),并把两者负载到从血液分离和培养的树突状细胞(DC)上,测定其诱导的CTL对Tca8113的杀伤活性,以SPCA-1人肺腺癌细胞系和95-D人巨细胞癌为对照组.结果体外FTA和exosome冲击致敏的DC能显著刺激T淋巴细胞增殖,其诱导的CTL对细胞系Tca8113具有显著的杀伤作用,在效靶比为20:1时12 h平均分别为45.19%+4.57%和43.60%+5.66%(P＜0.01);exosome冲击致敏的DC诱导的CTL对SPCA-1人肺腺癌也有明显的杀伤作用(P＜0.05),但FTA冲击致敏的DC诱导的CTL却无此功能.结论肿瘤细胞培养上清液中分离出的exosome,负载到DC上后,可以活化T细胞,使之成为抗原特异性的CTL,具有特异性的杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔癌的免疫治疗开拓了新的途径.exosome特异的CTL也可杀死其他肿瘤细胞,说明肿瘤来源的exosome是一种可引起肿瘤消退的共同抗原.     

口腔鳞状细胞癌中郎格罕氏细胞的免疫组织化学研究

目的 本实验拟通过对郎格罕氏细胞在口腔鳞状细胞癌中的分布情况进行研究,从免疫上研究口腔鳞状细胞癌的发病机制,以期在免疫学上为口腔鳞状细胞癌的防治提供理论基础。方法 本研究采用S-100蛋白特异性标记郎格罕氏细胞,以免疫组织化学PAP方法对25例口腔鳞状细胞癌的上皮及间质内郎格罕氏细胞分布特点进行观察,计算郎格罕氏细胞出现频率。结果 口腔鳞状细胞癌病组织中郎格罕氏细胞数目为正常口腔粘膜组织的19.5倍。在细胞分布上,正常口腔粘膜组织中郎格罕氏细胞紧贴基底细胞层,而病变组织中的郎格罕氏细胞则散布于癌巢间的淋巴细胞中。所有组织标本中均有淋巴细胞浸润带出现。结论 本研究结果表明：1.癌上皮内郎格罕氏细胞与淋巴细胞相伴浸润,关系密切;2.间质内郎格罕氏细胞与淋巴细胞相伴浸润,关系密切;3.郎格罕氏细胞可能为抗原递呈细胞,在鳞状细胞癌免疫反应启动和调节中可能起着关键作用。     

RhoE在舌鳞状细胞癌中的表达及其对细胞迁移和侵袭的影响

初步探讨RhoE在舌鳞状细胞癌（TSCC）中的表达水平,及其对TSCC细胞迁移和侵袭的影响及相关机制。     

树状细胞疫苗抑制肿瘤的实验观察

目的观察经肿瘤抗原致敏的树状细胞（DC）疫苗对荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）、重组人肿瘤坏死因子α（rhTNF-α）协同诱导人外周血单核细胞成为DC。Tea8113舌癌细胞可溶性抗原体外致敏DC，将同源人T淋巴细胞与之共同培养诱导出抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs），共同接种至荷瘤裸鼠体内行免疫治疗。结果人外周血单核细胞在细胞因子协同诱导下可获得功能正常的DC，用致敏DC＋CTLs免疫治疗的荷瘤裸鼠与其他实验组相比，明显抑制肿瘤生长，肿瘤倍增时间显著提高（P〈0．05）。结论从人外周血来源的单核细胞在多种细胞因子作用下可诱导为功能正常的DC、冻融抗原体外致敏的DC，经其激活的肿瘤特异性CTLs对荷舌鳞癌裸鼠有明显的免疫治疗作用，可望成为口腔颌面部舌癌免疫治疗的新途径。     

人牙髓细胞在体外传代培养过程中的生物学行为变化

目的 探讨人牙髓细胞在体外传代过程中的生物学行为变化,为其在口腔材料生物相容性及牙髓损伤修复等研究中的应用提供依据.方法 选取第4、8、10和15代人牙髓细胞,从细胞形态及增殖能力、碱性磷酸酶活性、老化相关β-半乳糖苷酶的表达及p53基因的表达对牙髓细胞进行评价.结果 人牙髓细胞培养至第15代时,胞质增大、胞体扁平,增殖缓慢,第7天时A值仅为0.124±0.017,显著低于第4、8代(A值分别为0.391±0.030、0.317±0.049)(F=126.465,P =0.000);第15代细胞的碱性磷酸酶活性[(21.96±4.03) U/g蛋白]显著低于第4、8、10代细胞[分别为(85.67 ±4.64)、(84.22 ±2.99)、(29.64±3.53) U/g蛋白](P=0.000),并出现了大量β-半乳糖苷酶染色阳性细胞,p53基因表达显著上升,其相对表达量为(2.3±0.1),与第4代(设为1.0)比较差异有统计学意义(t=18.622,P=0.000).结论 人牙髓细胞在传代培养过程中细胞体积增大、代谢酶指标下降、细胞老化相关酶及p53基因表达升高.     

Periostin抗体的制备和Periostin组织表达特异性的研究

目的:制备抗Periostin抗体,并了解Periostin的组织表达特性。方法:以重组、纯化的小鼠Periostin为抗原,混入Freund完全佐剂充分乳化后,免疫新西兰大白兔;用双向免疫扩散试验检测抗体效价,将获得的多克隆抗血清初步纯化后,用Western blot和免疫组化检测小鼠Periostin的组织表达特异性。结果:Western blot显示Periostin在小鼠颅盖骨及牙周组织总蛋白中有特异性表达,而在肝、肾和脑组织总蛋白中没有表达。免疫组化检测,下颌骨表面骨膜和牙周膜组织中的Periostin染色呈强阳性,而在牙骨质、牙本质、牙槽骨和牙髓组织中则为阴性,并且它不是粘附于细胞表面,而是分布在由成骨细胞和牙周膜细胞分泌于其周围的细胞外基质中,牙槽骨中的骨细胞也不产生Periostin。结论:Periostin这种在有骨形成能力组织中的高表达,而在成熟骨组织中无表达的特点提示了其可能与矿化组织的早期形成有关。     

细胞呈序性死亡在颌面部细胞凝聚区形成中的作用

观察和分析细胞程序性死亡在细胞凝聚区形成中的作用意义。方法：建立和制备Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ系小鼠胚胎期１３、１４、１５、１６ｄ和生后１０ｄ等多时间点的颌面部发育模型，采用原位末端转移酶标记法标记颌面部组织的ＰＣＤ细胞。     

滑膜细胞体外培养和纯化分离

滑膜组织是位于关节腔内面的内村结构，各种关节内痰痛均会累及滑膜。体外细胞培养可以有效地模拟体内细胞的生长环境，并能确切地了解单一和多元因素对滑膜细胞的影响，其方法已成为一种基础研究手段。滑膜A型细胞位于滑膜衬里层，具有较强的吞噬作用，通过胞饮作用清除关节腔内的磨损碎屑扣无用的代谢产物从而发挥防御作用。     

十二烷基硫酸钠对人牙周膜细胞活性影响的实验研究

目的:观察不同浓度十二烷基硫酸钠(sod ium dodecyl su lfate,SDS)对人牙周膜细胞(perio-dontal ligam ent cell,PDLC)活性的影响,探讨牙膏中存在的去垢成分SDS是否对人体健康存在着潜在危害。方法:采用细胞培养技术及四唑盐(MTT)比色方法,检测加入SDS后与对照组比较细胞活性的变化。结果:PDLC在加入100μg/mL SDS后,细胞活性与正常组比较已明显降低,在SDS浓度≥200μg/mL时PDLC已全部死亡。SDS浓度≤25μg/mL对PDLC生长无明显影响。结论:SDS在低浓度时即对PDLC有明显的细胞毒作用。