周期性张应力对成纤维细胞增殖能力的影响

目的探讨周期性张应力对体外培养的小鼠胚胎成纤维细胞增殖特性的影响。方法将体外培养的L929细胞分为加力组与对照组,加载周期性张应力的细胞为加力组,不加力的为对照组。应用细胞应力加载系统对L929细胞加载8%形变率、0.1 Hz的周期性张应力,分别在加力1 h、2 h、4 h和8 h后应用流式细胞仪分析细胞周期;四甲基偶氮唑盐比色法分析细胞的增殖活性。结果加力组加力1 h(q=5.532,P<0.01)与2 h(q=6.569,P<0.01),S期细胞比率(S-phase fraction,SPF)较对照组出现了下降,并伴有细胞数量的增加(P>0.05);加力组在加力4 h后,SPF较对照组下降(P>0.05),细胞数量增加(P>0.05);加力组在加力8 h后,SPF较对照组开始出现增高(q=4.287,P<0.05),细胞数量显著增加(q=5.202,P<0.01)。结论 8%形变率、0.1 Hz的周期性张应力引起细胞增殖活性的变化,表现为随应力加载时间的延长,细胞的增殖活性出现先被抑制、后被促进的改变。     

加载牵张应力对人牙周膜成纤维细胞生长和增殖的影响

目的：探讨不同力值和不同频率的牵张应力对HPDLF增殖的影响。方法：通过细胞牵张应力加载系统,施加频率为0.1Hz,大小为6%、12%、18%形变率的牵张应力;大小为12%形变率的频率为0.1Hz、0.2Hz及持续性的牵张应力,利用四唑盐（MTT）比色试验观察牵张应力对HPDLF增殖的影响。结果：频率为0.1Hz时,6%、12%的牵张应力对HPDLF有促增殖作用,12%的牵张力作用最强,18%的牵张应力对HPDLF的增殖有抑制作用;大小为12%时,0.2Hz的牵张应力对HPDLF的促增殖作用最强,持续性牵张应力促增殖作用最小。结论：不同力值和频率的牵张应力对HPDLF的促增殖作用影响不同,12%形变率、频率为0.2Hz的牵张应力有最佳的促增殖效果。     

Effects of cyclic tension stress on proliferation of fibroblasts

目的 探讨周期性张应力对体外培养的小鼠胚胎成纤维细胞增殖特性的影响.方法 将体外培养的L929细胞分为加力组与对照组,加载周期性张应力的细胞为加力组,不加力的为对照组.应用细胞应力加载系统对L929细胞加载8％形变率、0.1 Hz的周期性张应力,分别在加力1h、2h、4h和8h后应用流式细胞仪分析细胞周期；四甲基偶氮唑盐比色法分析细胞的增殖活性.结果 加力组加力1 h(q =5.532,P＜0.01)与2 h(q=6.569,P＜0.01),S期细胞比率(S-phase fraction,SPF)较对照组出现了下降,并伴有细胞数量的增加(P＞0.05)；加力组在加力4h后,SPF较对照组下降(P＞0.05),细胞数量增加(P＞0.05)；加力组在加力8h后,SPF较对照组开始出现增高(q =4.287,P＜0.05),细胞数量显著增加(q=5.202,P＜0.01).结论 8％形变率、0.1 Hz的周期性张应力引起细胞增殖活性的变化,表现为随应力加载时间的延长,细胞的增殖活性出现先被抑制、后被促进的改变.     

牵张应力对人牙周膜细胞MMP-2表达的影响及相关信号通路的研究

目的：探讨NF-κB通路对牵张应力介导的人牙周膜细胞（HPDLCs）中MMP-2表达的影响.方法：按胶原酶消化法培养HPDLCs,分为5组：非加力对照组（A组）;12％形变率,3h组（B组）;12％形变率,6h组（C组）;12％形变率,12h组（D组）;12％形变率＋PDTC干预,12h组（E组）,通过细胞牵张应力加载系统施加机械牵张应力,结束后收集细胞提取蛋白,用蛋白印迹法检测MMP-2蛋白表达的变化.结果：B、C、D组MMP-2表达大于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着作用时间的延长蛋白表达增加;NF-κB通路抑制剂PDTC可抑制机械牵张应力作用下牙周膜细胞MMP-2表达的增加.结论：持续机械牵张应力可诱导人牙周膜细胞MMP-2表达的增加,从而影响牙周组织细胞外基质代谢,机械牵张应力可通过NF-κB通路影响MMP-2蛋白的表达.     

TNF-α对HSG细胞作用的体外研究

目的体外研究TNF-α对导管起源的HSG（human salivary bland,HSG）细胞的增殖抑制作用,为TNF-α治疗涎腺肿瘤奠定理论和实验基础。方法通过形态学研究、生长曲线的测定、细胞分裂指数测定、嗜银蛋白染色分析、流式细胞仪、克隆形成率等观察TNF-α对HSG细胞的作用。结果光镜下培养的正常HSG细胞为多边形,细胞可连接成片。加入TNF-α后,部分细胞发生形变,脱落到培养液中。1ngl/L、10ngl/L和50ng/L TNF-α对HSG细胞增殖抑制率分别为5%、72%和81%;细胞分裂指数测定、嗜银蛋白染色分析、克隆形成率等结果表明细胞生长受到抑制;流式细胞仪结果表明HSG细胞主要被抑制在G1期。结论 TNF-α在体外能抑制HSG细胞的增殖。     

富血小板血浆对兔骨髓基质细胞生物学特性的影响

目的:探讨自体富血小板血浆(PRP)对体外培养的兔骨髓基质细胞(rBMSCs)生物学特性的影响。方法:体外培养的rBMSCs分为实验组和对照组,实验组中加入含1%PRP的DMEM条件培养基,对照组为不含PRP的DMEM培养基,在不同时间点收集两组细胞,分别进行形态学观察、细胞周期分布和增殖指数测定、碱性磷酸酶(ALP)染色和活性测定、骨钙素(OCN)含量测定以及骨桥蛋白(OPN)mRNA相对表达量的分析。结果:实验组细胞具有成骨细胞的形态学特征;PRP作用7d后S期细胞比例较对照组明显增加,细胞增殖指数由22.89±1.24增至33.15±1.02,具有统计学意义(P<0.01);实验组ALP染色呈阳性,且ALP活性、OCN含量均较对照组明显提高,差异具有统计学意义;OPN mRNA相对表达量是对照组的3.48倍。结论:PRP可促进rBMSCs的增殖并可提高rBMSCs的体外成骨潜能,使其向成骨细胞转化。     

牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖及相关因子表达的影响

目的:观察牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖、炎性因子及Hedgehog通路基因的表达影响,探讨牵张力对软骨细胞的调控。方法:体外培养软骨细胞并鉴定。用Flexcell 4000TM加力板对细胞施加0.5 Hz,0%、3%和15%的牵张应变,作用4 h后检测细胞增殖情况,对比PCNA、Caspase-3、COL II、IL-1β、TNF-α及Hedgehog通路基因Ihh、Ptc和Smo的表达变化。结果:与对照组相比,3%组细胞增殖速度增加,PCNA、COLII、Ihh、Ptc和Smo的mRNA表达增加,15%组Caspase-3、IL-1β和TNF-α表达增加,而PCNA、Smo表达降低。与3%组相比,15%组细胞增殖速度降低,PCNA、COL II、Ihh和Smo表达降低,而Caspase-3、IL-1β表达增高。结论:不同强度牵张力对大鼠髁突软骨细胞增殖活性及炎性因子表达作用不同。Hedgehog通路对牵张力敏感,可能参与了力学刺激对软骨细胞的调控。     

张应力对面颌肌细胞烟碱样乙酰胆碱受体表达影响的体外研究

目的 :研究张应力和烟碱样乙酰胆碱受体 (nAChR)失敏对体外培养颌面部骨骼肌细胞nAChR表达变化的影响。方法 :采用出生后 2～ 3天BALB/C小鼠颌面部骨骼肌组织进行体外细胞原代培养 ,建立面颌肌细胞体外力学刺激 细胞培养模型 ;放射受体分析法 ,评价张应力作用后细胞表面nAChR数量的变化 :半定量RT PCR技术检测nAChR ,亚基基因转录水平变化。结果 :1.张应力刺激有使骨骼肌细胞表面nAChR数量减少的趋势 ,但加力与未加力组间及各加力时间段间并未发现有明显统计学差异。 2 .张应力有使nAChRα1。亚基的基因转录水平降低的趋势 ,但未发现有明显统计学差异。 3.失敏作用能明显提高nAChRαl亚基的基因转录水平。 4 .张应力刺激后 ,加入乙酰胆碱使受体失敏后发现 ,与未加力的失敏组比较 ,加力的最初阶段 ,nAChRαl亚基的基因转录水平降低 ,随加力时间的延长 ,基因转录水平明显增强 ,变化量逐渐增加。结论 :功能矫形治疗中 ,骨骼肌细胞nAChR的变化受神经影响很大 ,张应力的刺激可以增加肌细胞对神经刺激的敏感度 ,牵张应力与神经刺激间有协同作用。     

周期性张应力对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨周期性张应力对人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)增殖的影响及其机制。方法采用多通道细胞牵张应力加载系统,以hPDLF为对象构建细胞体外培养-力学刺激模型。加力组分别给予1、2、4、6、12和24h的力学刺激,刺激幅度10％、频率为0.1 Hz。以静态组为对照组。应用细胞计数试剂-8(CCK-8)检测hPDLF增...     

静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达

目的:研究人牙周膜成纤维细胞在不同大小机械张应力作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。方法:运用酶解组织块法体外培养人牙周膜成纤维细胞,将细胞按加力时间的不同(2 h、4 h、6 h)分为3组,每组再按形变率不同将其分为8%、12%和16%3个亚组,并取加力时间0h、形变率0%作为对照组。用western blot技术检测细胞在不同时间点和不同形变率作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。结果:Western blot结果显示,人牙周膜成纤维细胞在机械力加载后β-catenin 和Wnt3a蛋白表达显著减少(P<0.05)。在加力时间相同的组内(2 h、4 h、6 h),β-catenin 和Wnt3a蛋白表达随着形变率的增大而逐渐减少(P<0.05)。结论:β-catenin和 Wnt3a参与了静态张应力作用下牙周膜成纤维细胞的代谢,机械力对牙周膜成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号通路有抑制作用。     

周期性牵张力对人牙周膜细胞MMP-1 mRNA表达的影响

目的:观察周期性牵张应力对人牙周膜细胞(HPDLF)的MMP-1 mRNA表达的影响.方法:对培养在弹性膜培养板上的HPDLF施加0.2 Hz、12%形变率的周期性牵张力,利用原位杂交和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术观察HPDLF的MMP-1 mRNA的表达.结果:体外培养的HPDLF正常情况下表达MMP-1 mRNA,加载周期性牵张力12 h、24 h、48 h后,随着作用时间的延长,HPDLF的MMP-1 mRNA有持续增强的趋势.结论:周期性牵张力作用下,HPDLF的MMP-1 mRNA的表达增强,加速ECM的代谢活动.     

张应力对成骨样细胞MG-63增殖状态的影响

目的：研究体外培养的成骨样细胞在受到不同应变强度的张应力作用后其增殖状态的改变。方法：采用四点弯曲细胞力学加载仪对成骨样细胞MG-63分别以不同强度的张应力进行力学刺激，并对其受力后的增殖状态进行了研究。结果：在1000μstrain的张应力作用后成骨样细胞增殖指数有升高但与未受力时无显著差别；在2000～4000μstrain范围内的张应力作用后其增殖指数较未受力时显著升高，其中，2000μstrain张应力作用后增殖指数最高；4000μstrain以上则随着应变值的增加，细胞的增殖指数不断升高并显著高于受力位于4000μstrain以下时。结论：在生理受力范围内，2000μstrain的张应力对成骨样细胞的促增殖作用最强；而超过生理受力范围的张应力作用于成骨样细胞后，随着力值的增大，细胞增殖活性逐渐增强并高于细胞受生理范围内张应力作用时。     

机械牵张应力对成骨细胞增殖和分化影响的初步研究

目的:研究不同力值及加力时间的机械牵张应力对成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法:采用Flexcell牵张应力加载系统,对成骨样细胞Saos-2进行不同力值、不同时间的刺激,MTT法检测细胞受力后的增殖变化;ALP试剂盒检测细胞受力后ALP活性的变化;半定量RT-PCR检测骨钙蛋白(OC)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA的表达;用茜素红染色观察矿化结节形成。结果:当应变值为12%时,力学刺激对成骨样细胞Saos-2增殖以及ALP活性的促进作用最强(P<0.01)。应变值为12%的力学刺激呈时间依赖性明显上调了成骨样细胞Saos-2的增殖、ALP活性以及骨桥蛋白和骨钙蛋白mRNA的表达(P<0.01);牵张应力刺激组较对照组更加容易形成矿化结节。结论:大小适宜的牵张应力可以促进成骨细胞的增殖以及分化指标如ALP活性、骨桥蛋白和骨钙蛋白mRNA的转录水平、矿化结节的形成等,说明机械牵张应力对于成骨细胞的增殖和分化发挥着重要的调控作用。     

循环张应力对牙周膜细胞基质金属蛋白酶-8和13表达的影响

目的 以同一频率下不同力值、不同时间的循环张应力对人牙周膜细胞(HPDLC)中的基质金属蛋白酶(MMP)一8、13表达的影响,探讨生物力介导下牙周组织细胞外基质代谢调节的分子机制和牙周组织改建的分子生物学基础.方法 对培养在弹性硅胶膜6孔板上的HPDLC施加0.1Hz,硅胶膜形变率分别为6%、12%和18%的周期性循环...     

不同浓度肿瘤坏死因子对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子(TNF-α)对人牙周膜细胞增殖活性和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:取第4代体外培养人牙周膜细胞(hPDLCs),分别与0、1、5、10、20 ng/mL不同浓度TNF-α共同培养7 d,采用MTT法测定培养后0～7 d各时间点HPDLCs的增殖活力;用实时PCR检测不同浓度TNF-α刺激72 h后细胞周期蛋白(CyclinD1)mRNA的表达;检测ALP活性。结果:与对照组相比,1、5 ng/mL的TNF-α均可促进HPDLCs的增殖和Cyclin mRNA和ALP的表达(P<0.05);10、20 ng/mL浓度可抑制PDLCs的增殖和Cyclin D1 mRNA、ALP的表达(P<0.05)。结论:不同浓度的TNF-α刺激牙周膜细胞后可以影响细胞的增殖和分化。     

压力对髁突软骨细胞增殖及TGF-β_lmRNA表达影响的体外研究

目的 :观察体外单层培养的髁突软骨细胞加载机械压力后增殖活性和转化生长因子βlmRNA(TGF βlmRNA)表达在不同时点的变化 ;对压力刺激导致的TGF βlmRNA表达与软骨细胞增殖之间的关系进行初步探讨。材料和方法 :选用新生SD大鼠的髁突软骨作为原代培养的组织来源 ,建立髁突软骨细胞有限细胞系 ;应用自行设计的静压力加载装置对培养细胞加载强度为 12 0 g/cm2的持续压力 1h。分别于加力后 0、6、12、18、2 4h收集样本 ,用流式细胞仪分析各样本中细胞的DNA含量和细胞周期并计算增殖指数 ;用原位杂交技术检测压力作用后细胞TGF βlmRNA的表达 ,以彩色病理图象分析仪检测各样本表达的阳性率。对照组细胞除不加力外 ,其它培养条件和检测方法与实验组相同。结果 :加力后 0h体外培养的髁突软骨细胞增殖活性和S期细胞百分比在加力结束时都较对照组增大 (P <0 .0 5 ) ,但在加力后 12h恢复 ,12～ 2 4h内实验组细胞增殖指数和S期细胞比例与对照组保持相同的变化趋势和相似的水平 ;实验组TGF βlmRNA表达在停止加力后 0h也较对照组明显增强 (P <0 .0 5 ) ,但 6h左右即恢复到与对照组相似的水平 ,之后 6～ 2 4h内的变化与对照组比较无明显差别。结论 :(1)本研究所设计的压力加载装置以气体为介质对细胞施加稳定、     

周期性张应变对人牙周膜细胞迁移的影响

目的 探讨周期性张应变对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)迁移的影响及其相关机制,为进一步了解机械力对hPDLC功能的影响提供资料.方法 应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的hPDLC施加周期性张应变,牵张幅度分别为10%和20%,加载时间为6 h和24 h,频率均为0.1 Hz,以未加载的静态细胞作为对照组,应用划痕法观察hPDLC的迁移,蛋白质印迹法检测hPDLC的基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的表达变化;用细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的特异性抑制剂PD98059预处理hPDLC后,在0.1 Hz、10%幅度条件下,加载6 h,检测细胞p-ERK1/2和MMP-9表达的变化.用细胞迁移划痕法观察加载10%和20%幅度张应变,观察24 h后PD98059和MMP家族的抑制剂强力霉素(doxycycline,DOX)对hPDLC迁移的影响.结果 细胞迁移划痕实验结果显示,牵张幅度和加载时间均可显著促进细胞迁移.与静态组相比,施加牵张幅度分别为10%和20%的张应变6 h后,hPDLC迁移变化不明显,但加载24 h后,10%和20%幅度的张应变均显著促进了hPDLC迁移(P<0.05),细胞迁移率分别为(45 ±8)%和(66±14)%,且20%比10%幅度牵张对细胞迁移的促进作用更显著(P<0.05).蛋白印迹法结果显示,周期性张应变促进了hPDLC的MMP-9表达.牵张幅度对细胞MMP-9的表达有显著影响(P<0.05),但加载时间对细胞MMP-9的表达无显著影响.ERK1/2的抑制剂PD98059不仅可以明显抑制张应变诱导的p-ERK1/2活化,而且可通过ERK信号通路明显抑制张应变诱导的细胞MMP-9表达.细胞迁移划痕实验还证实,加载幅度分别10%和20%的张应变24 h后,抑制剂PD98059和DOX均能有效抑制周期性张应变诱导的hPDLC迁移.结论 周期性张应变可通过激活hPDLC的ERK信号通路,促进细胞的MMP-9表达,从而诱导体外培养的hPDLC迁移.     

静张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖和胶元纤维合成的影响

目的 :观察静张应力对HPDLF增殖活性的胶元纤维合成总量的影响 ,从细胞代谢和功能活动两方面 ,了解HPKLF的应力 生物学效应 ,探索HPDLF在正畸矫治过程中的作用机制和意义。方法 :将体外培养的HPDLF在膜式静张应力 体外细胞培养研究体系中进行多段的相同静张应力加载 ,以H3 TdR和3 H Proline参入法分别检测其S期细胞增殖活性和胶元纤维合成总量。结果 :与对照组比较 ,静张应力对HPDLF具有明显的促增殖作用 ,有使其增殖高峰提高的趋向 ;但其胶元纤维合成总量却明显低于对照组。结论 :静张应力作用对HPDLF具有明显的促增殖效果 ;但却较为显著地降低了HPDLF的胶元纤维合成总量。     

不同加载时间周期性张应力对大鼠颅底软骨细胞的影响

目的: 构建颅底软骨细胞体外培养力学刺激模型,研究周期性张应力对颅底软骨细胞主要细胞外基质（Ⅱ型胶原）和Sox9表达的影响。方法: 采用FX-5000T应力加载系统对体外培养的第2代大鼠颅底软骨细胞分别施加3、6、12、24 h的周期性张应力,加力值均为10%形变率,频率均为1 Hz。加力后即刻收集细胞,提取总RNA,实时荧光定量 PCR技术检测颅底软骨细胞Ⅱ型胶原（type-Ⅱcollagen,Col-Ⅱ）和Sox9 mRNA的表达。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 与对照组（加力0 h）相比,加力3 h组Col-Ⅱ和Sox9表达下降,且后者有显著差异（P<0.05）;加力6 h组Col-Ⅱ和Sox9表达显著下降（Col-Ⅱ,P<0.01;Sox9,P<0.05）;加力12 h组Col-Ⅱ和Sox9表达较6 h组有所上升,与对照组相比差异无统计学意义;加力24 h组中,两者表达与对照组相比显著升高（P<0.05）。结论: 周期性张应力可影响颅底软骨细胞增殖及细胞外基质合成,加力短时间基质合成抑制,增加加力时间则明显促进基质合成,且成软骨分化标志物Sox9 mRNA表达水平差异先于Col-Ⅱ出现。     

周期性张应力对牙周膜细胞内基质金属蛋白酶-8和13表达的影响

目的：观察周期性张应力作用下牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,HPDLC）中基质金属蛋白酶（MMPs）的表达变化。方法：通过建立体外应力加载系统,对培养在弹性膜六孔板的HPDLC施加0.1Hz,硅胶膜形变率分别为6%、12%、18%的周期性张应力,分别在加载2、6、12h后利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot技术检测HPDLC的MMP-8,MMP-13的表达变化。结果：HPDLC在加载周期性牵张力后,细胞生长方向顺应力方向而发生改变,MMP-8和MMP-13的表达明显增加。结论：周期性循环张力可诱导HPDLC中MMP-8、MMP-13表达增强,为MMP-8、MMP-13可能参与正畸力下牙周组织的改建提供了依据。