田基黄对舌癌细胞株TSCCa裸鼠移植瘤抑制作用的研究

本研究的目的是探讨田基黄在裸小鼠体内的抑瘤作用。将体外培养的人舌鳞癌细胞株TSCCa接种于12只裸鼠皮下,建立移植瘤模型,观察田基黄和平阳霉素对TSCCa细胞移植瘤的抑瘤效果。结果田基黄和平阳霉素对TSCCa细胞移植瘤的抑制率分别为78.3％和81.7％,两者无显著性差异,提示田基黄对口腔鳞癌有较好的治疗作用。     

平阳霉素磁控缓释微球体内外抗肿瘤作用的实验研究

观察了自制的平阳霉素磁性明胶微球对人舌癌Ｔｃａ８１１３细胞株的体外杀伤作用及对人舌癌裸鼠移植瘤的治疗效果，结果表明，平阳霉素磁性明胶微球才游离平阳霉素均具有杀伤肿瘤细胞的作用，二者之间无显著性差异（Ｐ〉０．０５），体内实验中，平阳霉素磁明胶微球对人舌癌移植有明显的抑制作用，抑瘤率为８５．３３％，明显高于游离平阳霉素（３５．９％），而对正常组织中的毒副作用明显减轻。     

重组人肿瘤坏死因子-α联合肿瘤坏死因子受体1基因转染杀伤舌癌细胞的实验研究

目的 :观察重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)对建系细胞 (T T)作用效应与机制。方法 :反转录PCR方法克隆人TNFR1基因 ,并将其稳定转染入舌癌细胞中 ,建系并鉴定 ;通过MTT法检测、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳及电镜观察检测rhTNF α对T T细胞的作用效果与机制。结果 :成功构建含TNFR1基因的真核表达质粒 pcDNA3 TNFR1,并建立表达TNFR1蛋白活性的舌癌细胞系T T ;较之亲本Tca 8113细胞及转染空载体的T pc细胞 ,rhTNF α对T T细胞具有更强的细胞毒作用 ,且通过介导细胞凋亡的方式发挥其作用。结论 :重组人肿瘤坏死因子 α联合肿瘤坏死因子受体 1基因转染可有效地杀伤舌癌细胞 ,为舌癌基因治疗提供理论依据。     

VEGF-C在人舌鳞癌细胞株TCa8113的表达及过表达细胞株的建立

目的 研究VEGF—C在人舌癌发生发展中的作用，检测VEGF—CmRNA和蛋白在人舌鳞癌细胞株TCa8113中的表达，建立高表达VEGF-C的细胞株TCa8113／VEGF—C。方法 运用RT—PCR和免疫组化法分别检测VEGF—CmRNA和蛋白在人舌癌细胞株中的表达，通过脂质体转基因的方法筛选建立过表达VEGF-C的细胞株。结果 TCa8113中检测到VEGF—C的表达，筛选建立的细胞株高表达VEGF—C。结论 TCa8113能转录VEGF—CmRNA，并在胞浆中翻译表达VEGF—C蛋白，但是表达较弱；筛选建立的高表达VEGF-C的TCa8113细胞株为今后的研究提供了材料。     

人fadd基因cDNA的克隆和诱导舌癌细胞凋亡的研究

目的：观察人fadd基因对舌癌（Tca-8113）细胞的凋亡诱导作用。方法：用反转录PCR获取人fadd基因，将基因克隆入真核表达载体pcDNA和pIRES2和pIRES2-EGFP中，脂质体法转染舌癌细胞，通过细胞计数、荧光显微镜及电镜观察、流式细胞仪等检测技术被转染细胞的生长及其凋亡状况。结果：成功获取了人fadd基因。与对照组相比，在转染1-3d内，fadd基因的表达导致舌癌细胞存活数目减少，大量细胞发生凋亡。结论：人fadd基因可以诱导转染的舌癌细胞发生凋亡。     

田基黄对舌癌细胞株TSCCa裸鼠移植瘤抑制作用的研究

本研究的目的是探讨田基黄在裸小鼠体内的抑瘤作用。半本外培养的人舌鳞癌细胞株ＴＳＣＣａ接种于１２呆裸鼠皮下，建立移植瘤模型，观察田基黄和平阳霉素对ＴＳＣＣａ细胞移植瘤的抑瘤效果。结果田基黄和平阳霉素对ＴＳＣＣａ细胞移植瘤的抑制率分别淡７８．３％和８１．７％，两者无显著性差异，提示田基黄对口腔鳞癌有较好的治疗作用。     

热休克蛋白在人舌癌细胞株和癌前病变细胞株的差异表达

目的 检测热休克蛋白(HSPs)27、70、90α在舌癌细胞株及癌前细胞株的表达情况.方法 体外培养人舌癌细胞株SCC-15,SCC-6和癌前细胞株DOK.采用RT-PCR测定人舌癌细胞株SCC-15、SCC-6及癌前细胞株DOK中HSP27、HSP70、HSP90α的mRNA表达情况,并作对比分析.采用Western...     

舌癌移植瘤活体成像的特点及应用

目的:建立稳定表达荧光素酶的舌癌细胞株并应用生物发光成像技术监测活体裸鼠舌癌侵袭发展过程。方法:应用脂质体将携带荧光素酶基因的质粒转染到人舌癌Tca83细胞株中,G418筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株,扩增后接种于裸鼠,建立裸鼠舌体及皮下移植瘤模型。活体成像监测肿瘤的生长情况,HE染色病理分析移植瘤细胞的组织学特征。结果:获得了稳定的舌癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株能够稳定表达荧光素酶;移植后获得稳定的动物模型,应用小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的侵袭过程。结论:本研究成功的构建了稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株和稳定的舌癌移植瘤动物模型,用于活体成像检测;为舌癌区域淋巴结转移机制的研究提供了新的研究方法。     

Semaphorin 3A及其受体在舌鳞癌中的表达及作用

目的：检测Semaphorin（Sema）3A及其受体Neuropilin1（NRP1）在舌癌组织和舌鳞状细胞癌SCC9细胞株中的表达情况,同时观察外源性Sema 3A蛋白对舌鳞状细胞癌SCC9细胞株的影响。方法：通过细胞免疫化学、RT-PCR和Western blot-ting方法检测Sema 3A、NRP1在舌癌组织和SCC9细胞株中的表达情况;通过MTT实验检测外源性Sema 3A蛋白对SCC9细胞株增殖的影响;通过Transwell检测外源性Sema 3A蛋白对SCC9细胞株迁移、侵袭的影响。结果：Sema 3A在舌癌组织和SCC9细胞株中阴性表达,NRP1在舌癌组织和SCC9细胞株中阳性表达;100 ng/ml外源性Sema 3A蛋白明显抑制SCC9细胞株的增殖（P〈0.05）,对其迁移、侵袭能力影响未见统计学差异（P〉0.05）。结论：舌癌组织和舌鳞状细胞癌SCC9细胞株中Sema 3A的阴性表达、NRP1的阳性表达可能与舌癌的发生发展有关。     

HSP70多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对Tca8113细胞的免疫杀伤作用

目的:研究HSP70多肽(HSP70 peptide complexes,HSP70-PC)对人脾细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性及功能的影响.方法:人舌癌Tca8113细胞在43℃条件下加热30min,恢复12h后,用亲和层析方法提纯HSP70多肽,并用Western印迹鉴定;将提纯的HSP70多肽体外刺激人脾淋巴细胞扩增、活化,然后用MTT法测定其对舌癌Tca8113细胞的杀伤作用,并用电镜和相差显微镜观察其培养上清舌癌Tca8113细胞的形态学变化.采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验.结果:1g湿重的肿瘤细胞可提取纯化HSP70蛋白85μg,通过SDS-PAGE和Western印迹证实为HSP70抗原肽复合物;提取舌癌Tca8113细胞的HSP70-PC与体外免疫扩增的人脾淋巴细胞形成致敏CTL,当致敏CTL与Tca8113细胞效靶比为100:1和50:1时,致敏CTL的杀伤率分别为(77.4±2.9)%和(78.9±1.9)%,2组间无显著差异(P>0.05).HSP70诱导的CTL对Tca8113的杀伤率与非抗原刺激的淋巴细胞组比较,有显著性差异(P<0.01),受攻击的舌癌Tca8113细胞出现凋亡的形态学变化.结论:Tca8113细胞来源的HSP70多肽具有较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力,能刺激人脾淋巴细胞产生特异性杀伤肿瘤细胞的效应,并能介导肿瘤细胞凋亡.     

Effects of exogenous nitric oxide on oral squamous cell carcinoma: an in vitro study.

PURPOSE: Nitric oxide (NO) is a newly found unstable free radical gas, serving as an important mediator, messenger, and signal transduction molecule and involved in a variety of pathophysiologic processes. Recently, NO has been reported to have cytotoxic effects on several tumor cells as an effector molecule of activated macrophage. The objective of this study was to investigate the effects of exogenous NO on oral squamous cell carcinoma cell line and to try to clarify the possible mechanisms by which it kills tumor cells. METHODS: TSCCa cell line, established from a patient with oral squamous cell carcinoma of the tongue, was exposed to various concentrations of exogenous NO that were released from an NO donor, sodium nitroprusside (SNP), for 48 hours. Nitrite/nitrate levels in the culture supernatant were determined with a commercial available NO kit. Both morphologic and ultrastructural changes were evaluated by reverse phase contrast microscopy or transmission electron microscopy. The DNA was harvested from SNP-treated or untreated TSCCa cells and assessed by agarose gel electrophoresis. RESULTS: SNP released NO into medium in a dose-dependent manner. NO had a concentration-dependent cytotoxicity against TSCCa cells. NO induced tumor cell death through apoptosis, which was characterized by incompleteness of nuclear membrane, disappearance of nucleole and nuclear condensation, chromatin margination, or chromatin homogenization. Agarose gel electrophoresis showed a typical internucleosomal DNA cleavage pattern (DNA ladder), a reliable indicator of apoptosis. CONCLUSIONS: Our results suggested that NO had a tumoricidal potential against oral cancer cells. NO might exert its cytotoxicity as an effector molecule of activated microphage through at least apoptosis.     

血清饥饿和低氧对口腔鳞癌细胞系血管内皮生长因子表达的影响

目的：探讨血清饥饿和低氧对体外培养的口腔鳞癌细胞系血管内皮生长因子（VEGF）表达的调节。方法：采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测血清饥饿和缺氧条件下口腔鳞癌TSCCa细胞系和颈淋巴转移癌GNM细胞系中VEGF mRNA表达情况，同时用酶联免疫吸附实验（ELISA）的方法定量测定了2细胞系中VEGF的活性变化。结果：RT—PCR结果显示GNM细胞VEGFmRNA表达水平均较TSCCa细胞高（P〈0．05），血清饥饿和低氧处理时在TSCCa细胞和GNM细胞中VEGF mRNA均有明显的增加，以TSCCa细胞系中VEGF mRNA增加的尤为明显。低氧处理4h时，VEGF的活性便显著增加，8h时达到最高。GNM细胞中VEGF增加至2倍，而TSCCa细胞中VEGF增加至6倍。血清饥饿组在TSCCa细胞中VEGF的活性增加至4倍，明显高于GNM细胞中的2倍。结论：血清饥饿和低氧能显著上调口腔鳞癌细胞VEGF的表达和活性，可能在口腔鳞癌血管形成中起重要作用。     

In vitro effects of nitric oxide synthase inhibitor L-NAME on oral squamous cell carcinoma: a preliminary study

It has been reported that increased nitric oxide synthase (NOS) expression and nitric oxide (NO) production may play an important role in cancer biology. The aim of this study was to determine the roles of NO in tumour cellular proliferation and DNA or RNA synthesis, and to investigate the therapeutic potential of NOS inhibitors in oral cancer. After exposure to different concentrations of the NOS inhibitor N(G)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME), the growth of TSCCa cells, established from a patient with squamous cell carcinoma of the tongue, was evaluated using MTT and crystal violet assay. DNA or RNA synthesis, inducible/endothelial NOS (iNOS/eNOS) mRNA expression and NO production were then examined to determine the possible mechanisms of inhibitory effects of L-NAME on TSCCa cells. L-NAME had an inhibitory effect on TSCCa cell growth in both a concentration- and time-dependent manner. Acridine orange staining revealed that DNA and/or RNA synthesis of TSCCa cells was reduced after treatment with L-NAME. An in situ hybridisation (ISH) study showed clearly that L-NAME down-regulated eNOS and iNOS mRNA expression and this was followed by a decrease in NO production. It is postulated that the NOS/NO pathway may be implicated in cellular proliferation and DNA or RNA synthesis of cancer cells, apart from promoting tumour angiogenesis. Further studies have provided with new insight into the mechanisms by which NOS/NO takes part in oral carcinogenesis, and possible therapeutic interventions based on the NOS/NO pathway for tumour progression control.     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与口腔鳞癌颈淋巴结转移的关系

目的:探讨基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1,2(TIMP-1,2)在口腔鳞癌中的表达形式以及其活性与颈淋巴结转移的关系。方法:应用原位杂交法(in situ hybridization,ISH)检测30例口腔鳞癌组织,口腔鳞癌转移细胞系GNM和人舌鳞癌细胞系TSCCa MMP-2,9和TIMP-1,2的表达;应用胶质酶谱法(zomography)分析上述标本MMP-2,9的活性以及应用体外侵袭实验检测两细胞系侵袭力的差异。结果:MMP-2,9和TIMP-1,2 mRNA 在肿瘤细胞和间质细胞均有表达;有转移鳞癌组织MMP-2,9,以及TIMP-1,2阳性率均高于无转移患者(P<0105), GNMMMP-2,9阳性率高于TSCCa;MMP-2,9活性在转移组明显高于未转移组(P<0105);GNM条件培养上清液中 MMP-2,9活性以及体外侵袭力均高于TSCCa。结论:MMP-2,9在口腔鳞癌转移中有重要作用,TIMP-1,2表达上升可能是肿瘤细胞与间质相互作用的结果。     

口腔鳞状细胞癌中内皮型一氧化氮合酶基因表达的体外研究

目的 观察内皮型一氧化氮合酶在口腔鳞癌细胞系中的表达，探讨内皮型一氧化氮合酶在口腔鳞癌发生中的作用。方法 采用免疫组织化学和原位杂交方法，检测内皮型一氧化氮合酶在人舌鳞癌TSCCa细胞系和人口腔鳞癌颈淋巴结转移癌GNM细胞系中的表达。结果 两个细胞系在翻译和转录水平上均可表达内皮型一氧化氮合酶，内皮型一氧化氮合酶的表达主要位于细胞浆。结论 口腔鳞癌细胞可以通过自分泌形式产生内皮型一氧化氮合酶，进一步证实了一氧化氮可能促进肿瘤发生的观点。     

表皮生长因子对口腔鳞癌细胞系MMP-2和MMP-9活性的影响

目的:探讨表皮生长因子((Epidermal growth factor,EGF)和口腔鳞癌侵袭转移的关系.方法:采用蛋白酶谱分析法测量不同浓度EGF作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性,同时用Boyden Chamber观察EGF诱导口腔鳞癌细胞系TSCCa和GNM细胞转移作用.结果:不同浓度的EGF(0 ng/ml,10 ng/ml,20 ng/ml,40 ng/ml,80 ng/ml)作用于两种细胞系后,随着外源性EGF浓度的增加,GNM和TSCCa细胞中MMP-2和MMP-9的活性均有增加,与对照组相比差异有显著性(p＜0.05);以TSCCa细胞中MMP-2和MMP-9的活性增加较为明显,MMP-2和MMP-9的活性与EGF有剂量依赖关系;用不同浓度10 ng/ml,20 ng/ml,40 ng/ml,80 ng/ml的EGF培养TSCCa和GNM细胞2 h,GNM和TSCCa细胞穿过滤膜数均有增加,在相同的浓度内,TSCCa细胞较GNM细胞增加较为明显,两者相比差异有显著性(p＜0.05).结论:EGF可促进口腔鳞癌细胞侵袭转移.     

血管内皮生长因子对口腔鳞癌细胞系基质金属蛋白酶-2和-9活性的影响

目的　探讨血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和口腔鳞癌侵袭转移的关系。方法　采用蛋白酶谱分析法测量不同浓度VEGF作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后基质金属蛋白酶 2 (matrixmetal loproteinase 2 ,MMP 2 )和MMP 9的活性 ,同时用BoydenChamber观察VEGF诱导口腔鳞癌TSCCa细胞转移的作用。结果　不同浓度的VEGF (1、5、10ng/ml)作用于GNM细胞 2h后 ,MMP 2和MMP 9的活性与对照组相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;而不同浓度的VEGF作用于TSCCa细胞 2h后 ,MMP 2和MMP 9的活性与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5或 0 0 1) ,MMP 2和MMP 9的活性与VEGF有剂量依赖关系 ,用VEGF 1、5、10ng/ml培养口腔鳞癌TSCCa细胞系 2h ,BoydenChamber小室下室浸润的口腔鳞癌细胞数分别为 (6 6 7± 1 78)× 10 4/ml、(17 17± 2 38)× 10 4/ml、(2 2 33± 2 5 4 )× 10 4/ml ,分别高于对照组 (2 4 8±1 0 2 )× 10 4/ml (P <0 0 5或 0 0 1)。结论　VEGF可促进口腔鳞癌细胞侵袭转移。     

外源性表皮生长因子对口腔鳞癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活剂及其抑制剂活性的影响

目的：探讨表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）和口腔鳞癌侵袭转移的关系。方法：采用发色底物反应法测量不同浓度EGF作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后u—PA和PAI-1的活性,同时用Boyden Chamber观察EGF诱导口腔鳞癌TSCCa和GNM细胞转移作用。结果：不同浓度的EGF（0ng／ml,10ng／ml,20ng／ml,40ng／ml,80ng／ml）作用于两种细胞系后,随着外源性EGF浓度的增加,GNM和TSCCa细胞中u—PA和PAI-1的活性均有增加,与对照组相比差异有显著性（p〈0．05）;而以TSCCa细胞中u—PA和PAI-1的活性增加较为明显,u—PA和PAI-1活性与外源性EGF有剂量依赖关系,用不同浓度10ng／ml,20ng／ml,40ng／ml,80ng／ml的EGF培养TSCCa和GNM细胞2h,GNM和TSCCa细胞穿过滤膜数均有增加,在相同的浓度内,TSCCa细胞较GNM细胞增加较为明显,两者相比差异有显著性（p〈0．05）。结论：EGF可促进口腔鳞癌细胞侵袭转移。     

基质降解酶u-PA 、PAI-1与人口腔鳞状细胞癌细胞侵袭转移的相关性研究

目的 探讨体外培养细胞系TSCCa和GNM细胞的u-PA及PAI-1活性和表达与口腔鳞状细胞癌侵袭转移的关系。方法 采用酶联免疫反应法和免疫组化法测定了两细胞系中u-PA及PAI-1的活性和表达，同时对GNM细胞在BALB／CA裸鼠皮下种植瘤组织的u-PA及PAI-l抗原表达进行了测定。结果 两细胞系均能产生u-PA及PAI-l，但u-PA在两细胞系中的表达不同，在GNM细胞u-PA为高表达，在TSCCa细胞中u-PA为低表达，PAI-1在两细胞系中均为高表达；种植瘤组织中u-PA呈阳性～强阳性表达，PAI-1为阴性表达。结论 u-PA可能是两细胞系高低不同的转移能力的重要机制之一。