调节性T细胞的新标记CD4+CD25+CD127low/-在类风湿性关节炎中的应用

目的 选择用膜表面标志CD4+CD25+CD127low/-作为检测调节性T(Treg)细胞的指标,探讨其在类风湿性关节炎(RA)中的可能临床应用价值.方法 用流式细胞术检测正常人及RA患者外周血CD4+CD25high、CD4+ CD25+ FoxP3+ 和CD4+CD25+CD127low/- T细胞占CD4+T细胞的比例,分析CD4+CD25+CD127low/-与CD4+ CD25+ FoxP3+ 2群细胞比例之间的相关性.结果 正常人及RA患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞比例与CD4+ CD25+ FoxP3+T细胞比例之间呈显著正相关(r=0.694、0.768,P均＜0.01).RA患者外周血CD4+CD25high、CD4+ CD25+ FoxP3+及CD4+CD25+CD127low/-T细胞比例均显著低于正常人(P均＜0.01).结论 膜表面标志CD4+CD25+CD127low/-可以用来鉴定Treg细胞,RA患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞的明显减少可能是RA的发病机制之一.     

调节性T细胞的新标记CD4~+CD25~+CD127~(low/-)在类风湿性关节炎中的应用

目的选择用膜表面标志CD4+CD25+CD127low/-作为检测调节性T(Treg)细胞的指标,探讨其在类风湿性关节炎(RA)中的可能临床应用价值。方法用流式细胞术检测正常人及RA患者外周血CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127low/-T细胞占CD4+T细胞的比例,分析CD4+CD25+CD127low/-与CD4+CD25+FoxP3+2群细胞比例之间的相关性。结果正常人及RA患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞比例与CD4+CD25+FoxP3+T细胞比例之间呈显著正相关(r=0.694、0.768,P均<0.01)。RA患者外周血CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+及CD4+CD25+CD127low/-T细胞比例均显著低于正常人(P均<0.01)。结论膜表面标志CD4+CD25+CD127low/-可以用来鉴定Treg细胞,RA患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞的明显减少可能是RA的发病机制之一。     

胸腺基质淋巴细胞生成素诱导重症肌无力患者胸腺CD4~+CD25~-T细胞向CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞分化

目的:探索胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对重症肌无力(MG)合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞诱导生成CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的研究。方法:以磁珠分选的方法得到胸腺CD4+CD25-T细胞及树突状细胞(DC)细胞,通过不同浓度(0.1、1、10、20 ng/m L)的TSLP活化DC后诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,以流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比率;RT-PCR检测Foxp3 m RNA表达;Western blot法检测上调的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的Foxp3蛋白表达;ELSIA法检测培养上清IL-10的含量。结果:10 ng/m L TSLP组、20 ng/m L TSLP组经诱导后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比例均明显升高,Foxp3的表达水平也相应增加,IL-10水平升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:TSLP可以诱导MG合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,并促进Foxp3的表达。     

慢性牙周炎患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞表达

目的探讨外周血单个核细胞CD4~+CD25~+调节性T细胞(Tregulatory, Treg)在慢性牙周炎患者中的表达。方法慢性牙周炎患者40例,其中轻中度组22例和重度组18例;同期31例牙周健康者为对照组。采用流式细胞术检测3组CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg、CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg表达;采用ELISA法测定3组血浆转化生长因子-β(transforming grow factor-β, TGF-β)水平;Pearson法分析CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg与CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg,CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg、CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg与牙周袋探诊深度的相关性。结果轻中度组、重度组CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg[(2.88±1.50)%、(2.52±1.03)%]、CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg表达[(4.42±1.49)%、(3.85±1.02)%]、血浆TGF-β水平[(1 054.18±370.35)、(1 003.78±398.76)ng/L]低于对照组[(3.57±1.11)%、(6.27±1.67)%、(1 296.60±303.17)ng/L](P0.05),轻中度组与重度组比较差异无统计学意义(P0.05);Pearson线性相关分析结果显示,CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg与CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg表达呈正相关(r=0.776,P0.001),CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg、CD4~+CD25~+CD127~(low/-)Treg均与牙周袋探诊深度呈负相关(r=-0.333,P=0.005;r=-0.551,P0.001)。结论慢性牙周炎CD4~+CD25~+Treg介导的免疫应答减弱,可能促进疾病的发生、发展。     

子宫内膜异位症患者外周血中CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的表达及意义

目的：探讨子宫内膜异位症患者外周血 CD4+CD25+FoxP3+调节性 T 细胞（CD4+CD25+FoxP3+ Treg）的表达及意义。方法选择2012年10月至2013年9月云南省第一人民医院收治的65例子宫内膜异位症患者、30例子宫肌瘤患者及20例健康体检者,应用流式细胞仪检测3组的外周血 CD4+CD25+FoxP3+ Treg 百分率,并进行比较。结果子宫内膜异位症组患者外周血中的 CD4+CD25+FoxP3+ Treg 占 CD4+ T 淋巴细胞的比例显著高于子宫肌瘤组患者及健康体检者,组间差异有统计学意义（P<0.001）;而子宫肌瘤患者与健康体检者外周血中的 CD4+CD25+FoxP3+ Treg 占 CD4+ T 淋巴细胞的比例差异无统计学意义（P>0.05）。结论 CD4+CD25+FoxP3+ Treg 在子宫内膜异位症患者外周血中的表达显著增加,明显高于非子宫内膜异位症患者,提示机体免疫异常与子宫内膜异位症的发生存在密切关系。     

小鼠调节性T细胞的CD4+ CD25+ CD127low/-标记分析

新的特异性细胞表面标记的发现是提高调节性T细胞(Treg)测量和分选技术的重要环节,Foxp3是公认的天然Treg的标记,却不能作为分选细胞的标记,CD127是新发现低表达于Treg细胞表面的标记。本实验测定CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25+Foxp3+标记的小鼠外周血及脾脏Treg细胞的数量,并测定CD4+CD25+CD127low/-细胞内Foxp3转录因子的表达水平,分析CD4+CD25+CD127low/-标记在小鼠Treg细胞测定及分选的价值。收集BALB/c小鼠外周血及制备脾细胞悬液,分别三重荧光染色CD4、CD25、CD127及CD4、CD25、Foxp3后应用流式细胞仪检测,得出CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+这两种标记的小鼠外周血和脾脏Treg细胞的比例;再在CD4、CD25、Foxp3基础上加CD127染色(四重荧光染色),检测CD4+CD25+CD127low/-细胞Foxp3转录因子的表达情况。结果显示:①BALB/c小鼠外周血CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+TCD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为39.02%、5.35%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为7.13%、3.97%;②BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+T、CD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为23.49%、3.86%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为12.8%、8.23%;③BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞比例高于CD4+CD25+Foxp3+细胞,以脾脏更为明显(P<0.01);④小鼠外周血及脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞高表达Foxp3转录因子,CD4+CD25+Foxp3+细胞低表达CD127。结论:BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-较CD4+CD25+Foxp3+能定量更多的Treg细胞;CD127low/-作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,在细胞分选时受其他细胞的干扰最小,是定量和纯化小鼠Treg细胞的更好标记选择。     

FoxP3、CD4~+CD25~+调节性T细胞、TLR2和TLR9在儿童传染性单核细胞增多症中的变化

本研究旨在探讨TLR2(Toll-like receptors,TLRs)、TLR9和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及其转录因子FoxP3在儿童传染性单核细胞增多症(infectious mononucleosis,IM)发病中的作用。2010年4月至2011年1月我院儿科诊治的初次发病的急性期IM患儿35例(IM急性期组),IM恢复期组35例以及健康对照儿童35例(对照组)纳入研究。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞TLR2、TLR9、FoxP3mRNA的表达,运用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群CD4+CD25+的表达。结果显示:IM急性期组TLR2mRNA(4.03±0.56)、TLR9 mRNA(8.88±1.56)相对表达水平显著高于对照组TLR2 mRNA(2.22±0.57)、TLR9mRNA(3.63±1.30)及恢复期组TLR2 mRNA(2.76±0.83)、TLR9 mRNA(5.34±1.60)相对表达水平(P<0.01)。IM急性期组FoxP3 mRNA(2.82±0.90)、CD4+CD25+(2.38±1.32%)表达水平显著低于对照组FoxP3mRNA(4.65±1.23)、CD4+CD25+(7.85±1.97%)及恢复期组FoxP3 mRNA(4.11±1.37)、CD4+CD25+(6.81±1.84%)(P<0.01),IM恢复期组FoxP3 mRNA、CD4+CD25+表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IM急性期存在CD4+CD25+Treg数量降低及其特异性转录因子FoxP3表达下调,而TLR2和TLR9在IM急性期表达上调。     

致敏小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞磁珠分选及体外扩增

本研究探讨致敏小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞的分选及体外扩增。流式细胞术检测致敏小鼠及正常小鼠体内CD4+ CD25+ Treg细胞水平,免疫磁珠分选方法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载抗CD3/CD28单克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激CD4+ CD25+ Treg细胞进行体外扩增培养,用0.4%台盼蓝染色并计数检测细胞的活性,流式细胞术检测分选后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3基因的表达。结果表明:致敏小鼠体内CD4+ CD25+ Treg水平较正常小鼠升高(P<0.05)。分选出CD4+ CD25+ Treg细胞纯度平均达到87%,细胞活性大于97%,高表达Foxp3基因。体外扩增2周后细胞数扩增倍数能够达到42倍,CD4+ CD25+ Treg细胞所占比例为85.32%,Foxp3表达由(76.92±1.72)%稍下降至(75.33±2.11)%(P>0.05)。结论:免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4+ CD25+ Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力;体外成功扩增了CD4+ CD25+ Treg细胞,扩增后的CD4+ CD25+ Treg细胞表面标记及Foxp3基因表达无明显改变。     

肝移植患者外周血CD39^＋和CD73^＋调节性T细胞的表型特点分析

目的了解肝移植术后患者和健康人群外周血中CD39和CD73在调节性T细胞中的表达特点。方法自2008年6月至2012年12月对76例良性终末期肝病的患者行原位肝移植术,常规术后随访。所有患者肝移植出院后一年内复查外周血CD4＋CD25＋CD39＋T细胞占CD4＋CD25＋T细胞百分比,同时检测CD4＋CD25＋CD39＋T细胞中FoxP3的百分比,CD4＋CD25＋CD73＋T细胞占CD4＋CD25＋T细胞百分比,CD4＋CD25＋CD73＋T细胞中FoxP3的百分比,以及CD4＋CD25＋CD127-T细胞中FoxP3的百分比。检测时患者肝功能良好,无合并感染及新发恶性肿瘤。另选取年龄、性别无统计学差异的60名健康人为健康对照组。结果肝移植术后患者与健康对照组相比,外周血中CD4＋CD25＋CD39＋占CD4＋CD25＋T细胞的百分比明显降低（P=0.001）。肝移植组与健康对照组外周血绝大多数的CD4＋CD25＋CD39＋T细胞的FoxP3阳性,且两组间FoxP3阳性率无统计学差异[（79.67±7.98）%vs.（82.40±7.01）%,P〉0.05]。两组外周血中CD73＋占CD4＋CD25＋T细胞的百分比无统计学差异[（14.97±4.91）%vs.（13.82±4.47）%,P〉0.05],大约20%的CD4＋CD25＋CD73＋T细胞FoxP3阳性,且两组间FoxP3阳性率无统计学差异[（18.78±5.53）%vs.（19.19±5.89）%,P〉0.05]。两组大约70%的CD4＋CD25＋CD127-T细胞FoxP3阳性,且两组间FoxP3阳性率无统计学差异[（67.43±6.41）%vs.（69.37±5.15）%,P〉0.05]。结论在肝移植患者和健康人群中,CD39＋Treg可能是主要发挥免疫调节作用的细胞群,可以作为鉴定Treg细胞的表面标志之一。与健康对照组相比较,外周血CD4＋CD25＋CD39＋Treg细胞在成人肝移植患者中明显降低。     

半乳凝素-10在CD4^＋CD25^＋CD127^low／-调节性T细胞中的表达与意义

目的探讨半乳凝素-10(galectin-10)在CD4 CD25 CD127low/-调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)中的表达及其与Foxp3的相关性。方法通过流式细胞术分选健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中Treg细胞与CD4 CD25-CD127 T细胞,经微量抽提RNA后,用RT-PCR检测galectin-10和Foxp3的mRNA表达水平。结果galectin-10和Foxp3的mRNA显著表达于Treg细胞,几乎不表达于CD4 CD25-CD127 T细胞。健康人外周血和胃癌患者癌旁淋巴结中的结果一致。结论ga-lectin-10基因高表达于Treg细胞中,可以作为Treg细胞一项新的标志物。     

Coexpression of CD25 and CD27 identifies FoxP3+ regulatory T cells in inflamed synovia

A better understanding of the role of CD4+CD25+ regulatory T cells in disease pathogenesis should follow from the discovery of reliable markers capable of discriminating regulatory from activated T cells. We report that the CD4+CD25+ population in synovial fluid of juvenile idiopathic arthritis (JIA) patients comprises both regulatory and effector T cells that can be distinguished by expression of CD27. CD4+CD25+CD27+ cells expressed high amounts of FoxP3 (43% of them being FoxP3+), did not produce interleukin (IL)-2, interferon-gamma, or tumor necrosis factor, and suppressed T cell proliferation in vitro, being, on a per cell basis, fourfold more potent than the corresponding peripheral blood population. In contrast, CD4+CD25+CD27- cells expressed low amounts of FoxP3, produced effector cytokines and did not suppress T cell proliferation. After in vitro activation and expansion, regulatory but not conventional T cells maintained high expression of CD27. IL-7 and IL-15 were found to be present in synovial fluid of JIA patients and, when added in vitro, abrogated the suppressive activity of regulatory T cells. Together, these results demonstrate that, when used in conjunction with CD25, CD27 is a useful marker to distinguish regulatory from effector T cells in inflamed tissues and suggest that at these sites IL-7 and IL-15 may interfere with regulatory T cell function.     

Single cell analysis shows decreasing FoxP3 and TGFbeta1 coexpressing CD4+CD25+ regulatory T cells during autoimmune diabetes

Natural CD4(+)CD25(+) regulatory T (CD4(+)CD25(+) T reg) cells play a key role in the immunoregulation of autoimmunity. However, little is known about the interactions between CD4(+)CD25(+) T reg cells and autoreactive T cells. This is due, in part, to the difficulty of using cell surface markers to identify CD4(+)CD25(+) T reg cells accurately. Using a novel real-time PCR assay, mRNA copy number of FoxP3, TGFbeta1, and interleukin (IL)-10 was measured in single cells to characterize and quantify CD4(+)CD25(+) T reg cells in the nonobese diabetic (NOD) mouse, a murine model for type 1 diabetes (T1D). The suppressor function of CD4(+)CD25(+)CD62L(hi) T cells, mediated by TGFbeta, declined in an age-dependent manner. This loss of function coincided with a temporal decrease in the percentage of FoxP3 and TGFbeta1 coexpressing T cells within pancreatic lymph node and islet infiltrating CD4(+)CD25(+)CD62L(hi) T cells, and was detected in female NOD mice but not in NOD male mice, or NOR or C57BL/6 female mice. These results demonstrate that the majority of FoxP3-positive CD4(+)CD25(+) T reg cells in NOD mice express TGFbeta1 but not IL-10, and that a defect in the maintenance and/or expansion of this pool of immunoregulatory effectors is associated with the progression of T1D.     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在ITP患者发病机制中的作用

目的研究慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量及Foxp3基因的表达水平,探讨它们在CITP发病机制中的作用。方法分别收集40例CITP患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T淋巴细胞。利用PE标记的抗-CD4单抗,FITC标记的抗-CD25单抗,作双色流式细胞术,分析CITP患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞百分率,采用RT-PCR法检测T细胞Foxp3 mRNA表达水平。结果CITP患者外周血CD4^＋T、CD4^＋CD25^＋T细胞百分率及T细胞Foxp3 mRNA水平均低于对照组（P〈0.01）,且CD4^＋CD25^＋T细胞百分率与Foxp3 mRNA水平呈正相关。结论CITP患者细胞免疫功能失调,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的数量与功能发生改变,T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与CITP的发病机制有关。     

人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA与T细胞CDA^＋CD25^＋Treg表达相关性探讨

目的探讨人外周血单个核细胞中FOXP3mRNA的表达与CD4^＋CD25^＋Treg表达的相关性。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录成mRNA,以β-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4^＋CD25^＋Treg的比例。结果哮喘患儿组CD4^＋CD25^＋Treg细胞百分率明显低于同龄对照组,P〈0.01;FOXP3mRNA的表达也显著降低,P〈0.05;FOXP3和β-actin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物。结论应用SYBRGreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3mRNA表达水平简便、经济、可行,哮喘患儿CD4^＋CD25^＋Treg明显降低可能参与哮喘发病,FOXP3表达降低可能是导致CD4^＋CD25^＋Treg发育障碍的重要因素。     

骨髓间充质干细胞上调再生障碍性贫血患者CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的临床研究

目的:初步探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义;探讨临床使用异体骨髓间充质干细胞(MSC)治疗对CD4+CD25+Foxp3+Treg表达的影响。方法:(1)流式细胞仪检测13例重型再生障碍性贫血(SAA),17例慢性再生障碍性贫血(CAA)及10例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达;(2)检测7例AA患者MSC治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达。结果:(1)AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达明显低于健康对照者(P<0.01);(2)SAA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达较CAA者低(P<0.05);(3)MSC治疗后AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达升高(P<0.05)。结论:(1)AA患者存在外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达减低,其表达异常可能参与AA的发病;(2)CD4+CD25+Foxp3+Treg表达在SAA患者更低,提示其表达水平可能可以作为判断AA病情轻重的指标;(3)MSC治疗可上调AA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达,为MSC纠正AA患者的免疫异常提供了临床依据。     

转录因子T-bet、GATA-3、FoxP3及CD4~+CD25~+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

本研究旨在探讨转录因子T-bet、GATA-3和CD4+CD25+调节性T细胞及其转录因子FoxP3在儿童过敏性紫癜(HSP)发病机制中的作用。2009年2月-2010年2月在本院收治的46例急性期HSP患儿(HSP组)及30例健康对照儿童(对照组)纳入研究。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞T-bet、GATA-3及FoxP3 mRNA的表达。运用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群CD4+CD25+的表达。结果表明,HSP组患儿GATA-3 mRNA相对表达水平(964.30±655.18)显著高于对照组儿童GATA-3 mRNA相对表达水平(78.09±57.20,P<0.01)。HSP组患儿T-bet mRNA(53.98±35.79)、FoxP3 mRNA(32.17±23.04)和CD4+CD25+(5.34±2.51)相对表达水平低于对照组儿童T-bet mRNA(181.56±96.90)、FoxP3 mRNA(147.91±99.15)和CD4+CD25+(7.85±1.97)相对表达水平(P<0.01)。结论:HSP患儿急性期存在Th1特异性转录因子T-betmRNA表达下调,Th2特异性转录因子GATA-3 mRNA表达上调。HSP患儿急性期存在CD4+CD25+调节性T细胞及其特异性转录因子FoxP3 mRNA表达下调,调节性T细胞的减少及由此引发的免疫抑制效应不足可能是HSP急性期免疫失衡的重要原因之一。本研究为从调节性T细胞及其调控的分子机制角度进一步阐明儿童HSP的发病机制提供了实验依据。     

过敏性紫癜患儿外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的表达

目的:探讨过敏性紫癜(schonlein-henoch purpura,HSP)患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达及其意义。方法:采用免疫荧光抗体标记法及流式细胞仪对20例HSP患儿和20例健康儿童、20例呼吸道感染患儿、20例幼年特发性关节炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞比率进行检测。结果:HSP患儿外周血CD4+CD25+T细胞的百分率显著低于健康儿童和呼吸道感染患儿(P<0.05),而与幼年特发性关节炎患儿相当。结论:外周血CD4+CD25+调节性T细胞参与了HSP的发病。     

不同树突状细胞对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞体外扩增的影响

目的利用不同种类树突状细胞(dendritic cells,DC)体外扩增获得表型和功能稳定的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)。方法免疫磁珠法(MACS)分离Balb/c小鼠CD4+CD25+调节性T细胞,利用与调节性T细胞同基因或异基因成熟DC、未成熟DC和调节性DC刺激其扩增,流式细胞术测定其纯度和表型。以CD4+CD25-T细胞作为反应细胞,验证扩增前后Treg细胞的免疫抑制功能。结果MACS分离的CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(95.38±1.82)%,同基因和异基因DC都能有效刺激Treg细胞体外扩增,其中同基因成熟DC扩增效果最为明显。而且同基因成熟DC扩增后CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(94.16±1.88)%,而且高表达Foxp3分子。当CD4+CD25+调节性T细胞与效应T细胞比例为1∶1时,能够有效的抑制效应T细胞的增殖,而且,同基因成熟DC扩增的CD4+CD25+调节性T细胞的抑制效果比新分离的Treg效果更好。结论同基因成熟DC能够体外扩增表型和功能稳定的Treg细胞。