AITD甲状腺自身抗体的Western blot研究

目的：研究自身免疫性甲状腺疾病（Autoimmune thyroid disease,AITD)甲状腺自身抗体的异质性。方法：以正常、Graves病（Graves disease,GD)及慢性淋巴细胞性甲状腺炎（Hashimoto thyroiditis,HT)甲状腺组织作为抗原，运用Western blot技术检测AITD的甲状腺自身抗体，并以正常阴性血清及标准阳性血清（TGAb 、TPOAb＋、TRAb ）作为对照。结果：AITD血清可与多种甲状腺抗原反应，每个患者出现的阳性条带带型均不一样。AITD血清在HT及GD甲状腺组织抗原泳道出现的阳性条带数明显多于正常甲状腺组织抗原泳道（P＜0．01）。且有的条带不出现于正常甲状腺组织抗原泳道。结论：AITD时存在新的甲状腺自身抗体且抗体存在异质性。     

抗CD28抗体协同刺激增强抗CD3抗体体外激活T淋巴细胞并降低TGF-β的表达

为了探讨体外激活T淋巴细胞的方法及活化后T淋巴细胞的免疫学特征,利用抗CD3、抗CD28抗体在体外刺激健康人外周血单个核细胞PBMNC,检测淋巴细胞转化,CD8^＋CD25^＋细胞比例和肿瘤生长因子β（TGF-β）表达等相关免疫学指标.结果表明,在抗CD28抗体的协同作用下,抗CD3抗体的刺激活性明显提高,CD8^＋CD25^＋细胞比例明显增加,TGF-β的表达下调.结论：抗CD28抗体协同刺激可以提供第二信号,使T淋巴细胞充分活化,TGF-β表达水平明显下降.     

妊娠合并Graves病T淋巴细胞亚群及甲状腺抗体检测的临床研究

目的 观察妊娠合并Graves病患者T淋巴细胞亚群及甲状腺抗体变化，探讨其免疫紊乱特征。方法 采用流式细胞仪测定32例初诊Graves病人、31例妊娠合并初诊Graves病人及28例正常对照者的T淋巴细胞亚群CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋，并用放射免疫法测定三组的TSAb、TGAb和TMAb。结果 妊娠合并初诊Graves病组的CD3＋为（62．72±6，13）％，CD4＋为（34．24±4．16）％，CD8＋为（33．26±3．71）％，CD4＋／CD8＋为（1、22±0．34）％。妊娠合并初诊Graves病组的TSAb20％，TGAb38％，TMAb32％.初诊Graves病组及妊娠合并初诊Graves病组与正常对照组比较，CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋下降，差异均有统计学意义（t分别=2．02、2．40、3，59、1，82、1．91、1．96，P均〈0．05）；CD8＋升高，差异均无统计学意义（t分别=1．35、1．45，P均〉0．05）；TSAb、TGAb、TMAb升高，差异均有统计学意义（χ^2分别=9．57、8．35、8．25、9，21、7．79、8．01，P均〈0．05）。妊娠合并初诊Graves病组与初诊Graves病组比较，CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋较高，差异均有统计学意义（t分别=1．83、2．02、2．95，P均〈0．05）；CD8＋较低，差异无统计学意义（t=0．73，P〉0．05）；TSAb、TGAb、TMAb较低，差异均有统计学意义（χ^2分别=6．59、5．24、4．87，P均〈0.05）。结论 妊娠合并Graves病人的T淋巴细胞亚群紊乱不如非妊娠状态明显，甲状腺抗体阳性率也较低．与妊娠期机体处于一种免疫抑制状态有关。     

CD28分子在系统性红斑狼疮患者Tc/Ts淋巴细胞上异常表达的研究

目的：研究CD28^＋、CD8^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^-淋巴细胞在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血淋巴细胞中的表达情况.方法：应用CD3CD4CD8三标抗体和CD8CD28双标抗体对SLE患者淋巴细胞进行标记,用流式细胞仪测定CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD28^＋、CD8^＋CD28^＋和CD8^＋CD28^-淋巴细胞的表达.结果：SLE患者外周血CD3^＋淋巴细胞明显高于健康对照组（P＜0.05）.CD4/CD8T淋巴细胞比例明显倒置（P＜0.01）,CD3^＋CD8^＋淋巴细胞比健康对照组显著增加（P＜0.01）,其中以CD8^＋CD28^-的T淋巴细胞增加为主（P＜0.01）,而CD8^＋CD28^＋淋巴细胞增加不明显（P＞0.05）,SLE患者外周血CD28^＋T淋巴细胞比健康对照组明显降低（P＜0.05）.结论：SLE患者存在明显的T细胞功能失调.CD28^＋、CD8^＋CD28^＋（Tc）、CD8^＋CD28^-（Ts）T淋巴细胞在SLE的发病机制和组织损伤中起重要作用.     

流式细胞术检测淋巴细胞亚群抗体用量的探讨

目的探讨应用流式细胞术（FCM）检测人淋巴细胞数绝对值在正常范围（0.8～4）×10^9／L时，荧光抗体的最佳用量。方法：取30例标本，淋巴细胞数量在（O.8～4）×10^9／L不等，用流式细胞术检测CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋及NK细胞，根据荧光抗体用量分为4组，分别为20、10、5、2．5μL，统计分析4组间差异。结果所测白细胞分化抗原（CD）3＋、CD4＋、CD8＋、CD9＋及自然杀伤细胞（NK），结果4组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论对于淋巴细胞数绝对值在正常范围（O.8～4）×10^9／L的全血标本，减少荧光抗体量至2、5μL对CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋及NK细胞检测结果无影响，比常用量可减少8倍，对于临床实验室节约试剂成本、减少浪费等有一定参考价值。     

抗CD3单克隆抗体对人CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞凋亡和自噬的影响

目的观察抗CD3单克隆抗体对分离培养的人外周血CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞自噬、凋亡及其分泌的代表性因子转化生长因子β（TGF-β）的影响。方法采用密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离32例健康者外周血T淋巴细胞,磁性细胞分离器（MACS）分离得到CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞,分别利用电镜及流式细胞仪观察、检测各组（抗CD3单克隆抗体1mg/L组、IgG1同型抗体对照组）干预72h后细胞的凋亡率、自噬率,用ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子TGF-β的水平。结果抗CD3单克隆抗体组CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞自噬率、凋亡率及TGF-β水平均增加（均P〈0.01）,凋亡率和自噬率之间无相关性（P〉0.05）。结论抗CD3单克隆抗体可促进CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞凋亡和自噬及TGF-β分泌,且自噬与凋亡间相互独立。     

流式细胞术在免疫相关性全血细胞减少症诊断中的临床意义

本研究探讨流式细胞术检测在诊断免疫相关性全血细胞减少症（immunorelated pancytopenia,IRP）的临床意义。50例全血细胞减少症患者入院后进行了血清铁蛋白（SF）,叶酸（FA）及维生素B12浓度,免疫学检查,血小板抗体,乙肝六项,甲肝及丙肝抗体、溶血相关检查、骨髓涂片及染色体核型分析等常规检查。50例患者分为A组（未明确诊断组）和B组（明确诊断组）,另设正常对照组（30名正常人）。A组：22例拟诊为IRP。B组：28例恶性血液病患者,其中再生障碍性贫血7例、阵发性睡眠性血红蛋白尿2例、骨髓增生异常综合征10例、巨幼细胞性贫血9例。对照A组和B组均采用流式细胞术测定骨髓造血干／祖细胞、有核红细胞、髓细胞结合的自身抗体,同时检测外周血总B淋巴细胞、CD5^＋B淋巴细胞的比率。对正常对照组仅进行外周血总B淋巴细胞、CD5^＋B淋巴细胞的比率检测。结果表明：A组22例拟诊免疫相关性全血细胞减少症患者中20例骨髓自身抗体检测结果阳性,阳性率为90．90％。抗体结合类型以IgG型最多见,其次为IgM型,IgA型较少;B组中2例骨髓自身抗体检测结果阳性,阳性率为7．14％。前者抗体检出率显著高于后者（P〈0．01）。A组外周血总B淋巴细胞、CD5^＋B淋巴细胞比例显著高于B组及正常对照组（P〈0．01）,后两组相比无显著差异（P〉0．05）。结论：利用流式细胞术进行骨髓造血细胞自身抗体及外周血总B淋巴细胞、CD5^＋B淋巴细胞的检测能为免疫相关性全血细胞减少症的诊断提供可靠的依据,为全血细胞减少症的鉴别诊断提供了更多的检测手段,而且还有利于制定更有效的治疗策略。     

Graves病患者^131I治疗前后甲状腺抗体变化的临床意义

目的探讨Graves病患者在^131I治疗前后血清促甲状腺激素受体抗体（TRAb）、甲状腺球蛋白抗体（TGAb）和甲状腺微粒体抗体（TMAb）水平动态变化的临床意义。方法115例Graves病患者,均给予口服^131I治疗,治疗前常规检测血清TRAb、TGAb、TMAb及游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）水平,服^131I后3、6、12个月各复查一次,按^131I治疗前TRAb、TGAb、TMAb的水平分组：A组69例,TRAb、TGAb、TMAb均为阳性;B组46例,TRAb阳性,TGAb、TMAb均为阴性;TRAb采用放射受体分析法检测,TGAb、TMAb、FT3、FT4、TSH均采用放射免疫分析法检测。结果服^131I治疗后12个月,A、B组治愈率分别为87．0％（60／69）、76．1％（35／46）,差异有统计学意义（χ^=13．92,P〈0．01）;甲状腺功能减退发生率分别为24．6％（17／69）和6．5％（3／46）,差异有统计学意义（χ^2=12．15,P〈0．01）。结论^131I治疗Graves病可以降低患者甲状腺自身抗体水平,促使其自身免疫状态得以改善和恢复。     

协同刺激分子CD28/CTLA-4:B7在胃癌患者中的表达及临床意义

目的研究胃癌患者外周血共刺激分子CD28和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4，CD152）及B7分子的表达水平，以探讨胃癌患者共刺激通路是否异常以及在胃癌发病机制中的作用。方法用流式细胞仪检测56例胃癌患者外周血淋巴细胞表面的CD28、CD152、CD3、CD4、CD8及B7分子的表达，并与健康对照组及胃良性肿瘤组作比较。结果胃癌患者外周血中CD3^＋、CD4^＋、CD3^＋CD28^＋、B7-1（CD80）、B7～2（CD86）的表达水平及CD4^＋／CD8^＋低于健康对照组及良性肿瘤组，CD3^＋、CD152^＋和CD8^＋水平显著增高。结论胃癌患者外周血淋巴细胞低表达CD28和B7分子，高表达CTLA-4分子，导致了胃癌患者B7：CD28／CTLA-4共刺激通路异常，影响了T细胞彻底清除肿瘤细胞，从而使肿瘤逃避机体的免疫监视、免疫抑制，发生转移。     

自身抗体在自身免疫性甲状腺患者血清中的检测及应用

自身免疫甲状腺病（AITD）主要包括Graves病（GD）和桥本甲状腺炎（HT）等，是以抗甲状腺自身抗体包括甲状腺刺激抗体（TSAb）、甲状腺微粒体抗体（TMA）、甲状腺球蛋白抗体（TGA）和致敏淋巴细胞为特点的器官特异性自身免疫病，但近来发现这类疾病尤其是GD有易于与其他非器官特异性疾病并发的倾向，我们对此两类AITD患者血清非甲状腺特异性抗体做了检测。     

恶性肿瘤患者化疗前后外周血免疫学指标的检测及其临床意义

目的观察恶性肿瘤患者化疗前后外周血免疫学指标的变化，并探讨其临床意义。方法应用流式细胞仪检测103例恶性肿瘤患者静脉化疗前、后外周血T淋巴细胞亚群（CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋）、B淋巴细胞（CD19^＋）及NK细胞（CD3^-／CD16＋56^＋）的表达率。结果所有患者化疗后CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋表达高于化疗前（P〈005），其中化疗有效组（30例），差异有显著性意义（P〈0．01），化疗无效组（40例），差异无统计学意义（P〉0.05）；化疗前后CD19^＋的变化无统计学差异（P〉0．05）；化疗后NK细胞降低明显，有统计学差异（P〈0．05）。结论有效的化疗能够改善恶性肿瘤患者的T淋巴细胞免疫功能。     

慢性乙肝患者外周血CD4+细胞HLA-DR、CD8+细胞CD28表达的检测及其意义

目的 检测乙肝患者外周血CD4^＋淋巴细胞表面HLA-DR和CD8^＋淋巴细胞表面CD28的表达情况,评价乙肝患者的细胞免疫状态。方法 荧光抗体CD4-PECY5、HLA-DR-FITC和CD8-PE、CD28-FITC标记淋巴细胞,流式细胞仪分别测定患者CD4^＋淋巴细胞表面HLA-DR和CD8^＋淋巴细胞表面CD28表达的百分率,并与HBV-DNA结果比较。结果 ①与正常对照组比较,乙肝患者组外周血CD4^＋淋巴细胞表面HLA-DR的表达显著升高（P〈0.001）,CD8^＋淋巴细胞表面CD28的表达显著降低（P〈0.01）;②乙肝患者DNA阳性（〉4000拷贝/ml）与阴性（〈4000拷贝/ml）组CD4^＋淋巴细胞表面HLA-DR和CD8^＋淋巴细胞表面CD28的表达比较均无显著性差异（P〉0.1）。结论 乙肝患者外周血CD4^＋细胞的免疫活化增强,CD8^＋细胞与抗原递呈细胞结合的作用减弱;淋巴细胞的活化情况与病毒复制情况及含量多少无关。     

甲状腺功能亢进症患者药物治疗前后外周血树突细胞亚群的变化

甲状腺功能亢进症（简称甲亢）是抑制性T淋巴细胞功能缺陷的一种自身免疫性疾病。树突细胞（dendritic cell，DC）是专职的抗原提呈细胞，DC根据细胞表型常分为2个亚群：DC1表面标志为Lin-人白细胞抗原（HLA）DR^＋CD11c^＋CD123^-，主要发挥抗原提呈的功能，促进细胞免疫的发生；DC2表面标志为Lin—HLA DR^＋CD11c^-CD123^＋，主要产生Ⅰ型干扰素（IFN-α），促进体液免疫的发生。     

血清TGAb、TPOAb检测在甲状腺疾病中的诊断意义

甲状腺球蛋白抗体（TGAb）是主要的特异性甲状腺自身抗体,是甲状腺上皮细胞分泌的糖蛋白。甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）是自身免疫性甲状腺疾病（antoimmune thyroid disease,AITD）的一种重要自身抗体,是慢性淋巴细胞性甲状腺炎的特异性诊断指标。     

罗红霉素对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者细胞免疫功能的影响

目的：观察慢性阻塞性疾病（COPD）急性加重期患者外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞及CD4^＋／CD8^＋变化，探讨COPD急性加重期患者的细胞免疫功能及罗红霉素对其的影响。方法：15位健康体检者（对照组，A组）、27例COPD急性加重期患者常规治疗组（B组）和27例COPD急性加重期患者常规加罗红霉素治疗组（C组）于发病初及治疗8W后检测肺功能，测定外周血中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞占总淋巴细胞的百分率。结果与正常体检者及C组治疗后比较，COPD急性加重期患者外周血CD8叶。T淋巴细胞升高，CD4^＋／CD8^＋比值降低，且CD8^＋T淋巴细胞与CD4^＋／CD8^＋比值与FVC％pred、FEV1％pred and FEV1／FVC呈显著相关性。结论：COPD急性加重期患者存在细胞免疫功能异常，CD8^＋T淋巴细胞免疫反应增强是COPD急性加重期患者气流受限的可能发病机制之一，罗红霉素通过调节COPD患者急性加重期细胞免疫反应而减轻气流受限，改善肺功能。     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者细胞免疫紊乱的研究

目的：研究慢性特发性血小板减少性紫癜患者T淋巴细胞亚群和其所分泌的细胞因子的改变。方法：用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法检测28例患者和20例健康对照者外周血的CD3^＋，CD4^＋，CD8^＋T淋巴细胞亚群，其中27例（15例患者，12例对照者），用流式细胞仪测定CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞亚群；同时用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测患者治疗前后血清细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-10（IL-10）水平，观察治疗对其影响。结果：与对照组相比，患者CD8^＋，CD4^＋CD25^＋增高（P〈0.01），CD3^＋与CD4^＋降低（P〈0．01）；血清细胞因子IFN-γ水平和IL-10水平治疗前较对照组明显增高（P〈0．01）和降低（P〈0．01），经类固醇激素等治疗后趋向正常。结论：T淋巴细胞亚群和细胞因子的紊乱参与了特发性血小板减少性紫癜的发病过程。     

流式细胞术检测肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群的改变。方法采用先进的流式细胞术分别测定了29例结核菌阴性及49例结核菌阳性的初治活动性肺结核患者血清T淋巴细胞亚群计数。结果初治活动性肺结核患者血清中CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋降低，而CD3^＋、CD8^＋升高，与正常对照组比较，CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋差异有显著性（P〈0．05）；老年结核患者的CD3^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋均较青年结核病患者低，其中CD4^＋／CD8^＋差异有显著性；病变范围广泛者的CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋较病变范围小者低，CD3^＋差异有显著性；痰菌阳性者与阴性者比较，CD4^＋／CD8^＋下降，CD8^＋升高，但差异无显著性。结论初治活动性肺结核患者的T细胞亚群变化存在其自身特点。对肺结核患者T淋巴细胞亚群的检测有助于判断病情、了解抗结核治疗效果及预后。     

特发性血小板减少性紫癜患者脾脏CD5+和CD5-B细胞共同参与血小板自身抗体的产生

目的：研究慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者脾脏CD5^ B细胞水平的变化及CD5^ 和CD5^-B细胞与血小板膜糖蛋白（GP）特异性自身抗体产生的关系，以识别致病B细胞亚群。方法：应用双色流式细胞仪检测8例慢性ITP患者脾脏CD5^ B细胞水平。选择4例血浆抗GPⅡb/Ⅲa和抗GP Ⅰb/Ⅸ抗体双阳性ITP切脾患者，应用Ficoll密度梯度离心及花环形成分离法分离脾脏B淋巴细胞，继而采用镝产珠分选法分选、纯化CD5^ B细胞和CD5^-B细胞，并分别进行体外培养，应用改良MAIPA法检测血浆和细胞培养上清液的血小板特异性抗体。结果：ITP患者脾脏CD5^ B细胞水平圈晨自身免疫性疾病患者略有增高，二者之间差异无统计学意义。CD5^ B细胞水平与患者血小板计数无相关性。4例血浆抗GPⅡb/Ⅲa抗体和抗GPⅠb/Ⅸ抗体双阳性。另外1例CD5^ B细胞培养液抗GPⅡb/Ⅲa抗体阴性，抗GPⅠb/Ⅸ抗体阳性;CD5^-B细胞培养液抗GPⅡb/Ⅲa抗体和抗GPⅠb/Ⅸ抗体双阳性。结论：脾脏CD5^ 和CD5^-B细胞 均可产生血小板GP特异性自身抗体，抗体产生种类和滴度无明显差异。提示二者共同参与了ITP的发病过程。     

CD28／CD152：CD80／CD86分子在强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞上的表达

目的探讨共刺激分子CD28／CD152：CD80／CD86在强直性脊柱炎（AS）患者外周血淋巴细胞上的表达及与免疫功能的关系。方法流式细胞仪检测AS患者及健康体检者T细胞表面标志CD3、CD4、CD8、CD19的表达及CD28／CD152和CD80／CD86在外周血T、B淋巴细胞上的表达水平；采用速率散射比浊法、酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM及C-反应蛋白（CRP）和白细胞介素-6（IL-6）水平。结果CD3^＋CD4^＋T细胞及CD4^＋／CD8^＋比值明显高于健康对照组（P〈0．05），而CD3^＋CD8^＋T细胞则明显低于健康对照组（P〈0．05）；CD4^＋和CD8^_T细胞上CD28和CD19^＋B细胞上CD80、CD86的表达均较健康对照组增高（P〈0．05），而CD152在CD4^＋T淋巴细胞上的表达也比健康对照组显著增加，但在CD8%＋T淋巴细胞上的表达却显著降低（P〈0.05）；血清IgG、IgA及CRP、IL-6水平均较健康对照组显著增高（P〈0．05）。结论AS患者外周血淋巴细胞CD28／CD152：CD80／CD86分子的异常表达与其免疫功能紊乱有密切关系。     

胃癌患者肿瘤组织和外周血中细胞毒性T细胞的相关性分析

目的研究胃癌患者肿瘤浸润淋巴细胞CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞数量与外周血CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞数量的相关性。方法采用流式细胞术对60例胃癌患者的肿瘤浸润淋巴细胞及外周血淋巴细胞的CD8^＋CD28^＋细胞及CD8^＋CD28^-细胞进行检测，采用直线相关分析两者的相关性。结果胃癌患者外周血淋巴细胞CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞分别为（26．13±8．17）％和（8．15±4．00）％；肿瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞分别为（36．98±15．30）％、（6．02±4．37）％。两者之间具有正相关性（r分别为0．602、0．387，P〈0．01）。结论胃癌患者外周血CD8^＋CD28^-、CD8^＋CD28^＋细胞的检测对了解患者的免疫状况具有一定的价值。