重组人酸性成纤维细胞生长因子关节腔注射预防骨关节炎软骨退行性变

目的:验证重组人酸性成纤维细胞生长因子关节腔内注射对兔实验性早中期骨关节炎软骨退行性变的防治作用。方法:实验于2005-10/2006-04在暨南大学附属第一医院中心实验室完成。选用健康新西兰大白兔30只,切断膝关节前、后交叉韧带建立兔骨关节炎模型后,按随机数字表法分为3组,空白组、透明质酸钠组和重组人酸性成纤维细胞生长因子组。重组人酸性成纤维细胞生长因子组术后第8周起于手术侧膝关节腔内注射人酸性成纤维细胞生长因子8000IU/(只·周),透明质酸钠组关节腔内注射透明质酸钠1mL/(只·周)。空白组不进行干预。术后第16周空气栓塞法处死动物,大体观察及手术显微镜下观察软骨表面分级;取股骨髁负重面软骨标本进行苏木精-伊红、沙黄染色及骨关节炎组织病理学评分(正常为0～1,重度为10分以上)、分级。结果:30只动物全部进入结果分析。①重组人酸性成纤维细胞生长因子组和透明质酸钠组标本股骨髁负重软骨有轻度粗糙,关节软骨可见浅表溃疡形成。空白组标本股骨髁负重面软骨有轻～中度溃疡形成。②3组动物关节软骨表面分级差异有显著性意义(χ2=22.97,P=0.000)。③3组动物骨关节炎软骨的组织病理学分级差异有显著性意义(χ2=16.84,P=0.005),透明质酸钠组和重组人酸性成纤维细胞生长因子组的骨关节炎组织病理学评分均显著低于空白组(P<0.05)。结论:关节腔注射重组人酸性成纤维细胞生长因子可以较好的延缓兔膝骨关节炎软骨退行性变和预防骨关节炎的发展。     

四环素对兔膝骨关节炎负重模型软骨基质金属蛋白酶1表达的影响

目的:观察四环素对兔膝骨关节炎负重模型软骨基质金属蛋白酶1表达的影响,探讨其对骨关节炎防治的有效性及其机制。方法:实验于2005-03/05在武汉科技大学医学院药理实验室进行。①分组处理:18只日本大耳白随机分为假手术组,模型组和给药组各6只。模型组和给药组将兔右侧膝关节前交叉韧带切断造成关节不稳定后,以石膏将左后腿固定于腹部,右后腿负重锻炼造成负重损伤,给药组每日给予四环素(35～40mg/kg)灌胃,其他2组给予等量生理盐水。②观察指标:4周后通过大体形态观察了解股骨内髁关节面的病理改变;苏木精-伊红染色观察软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色结果观察蛋白多糖和胶原等基质含量;并检测软骨基质金属蛋白酶1水平。结果:18只兔进入结果分析。①大体观察结果:模型组出现软骨的退变,给药组较模型组关节退变为轻(P<0.05)。②关节软骨细胞形态和基质变化:模型组出现软骨表层缺损,表中层细胞明显减少,甲苯胺蓝染色明显减退;给药组仅见表层软骨细胞减少甲苯胺蓝染色较模型组深。③软骨基质金属蛋白酶1水平:假手术组呈阴性表达,给药组阳性表达率低于模型组[(63±6)%,(82±4)%,P<0.01]。结论:四环素可减轻兔膝骨关节炎负重模型的关节退行变性,减少软骨破坏和软骨基质丢失,其作用可能与四环素控制软骨基质金属蛋白酶1表达增高有关。     

透明质酸钠对兔创伤性骨关节炎软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的干预(英文)

背景:各种关节损伤、关节手术后导致的创伤性骨关节炎较为常见,关节腔注射透明质酸钠已被视为一种治疗骨关节炎的有效手段。目的:以前交叉韧带切断的方法建立兔创伤性骨关节炎模型,观察关节腔注射透明质酸钠对其关节软骨中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达水平的影响。设计:随机对照动物实验。单位:武汉大学人民医院骨科。材料:实验于2003-04/12在武汉大学人民医院骨科实验室完成。选取清洁级5～6月龄大耳白兔16只,随机数字表法分为透明质酸钠注射组、生理盐水对照组,8只/组。透明质酸钠(上海建华精细生物制品有限公司提供,国药准字2000第366095号)。方法:①两组均建立创伤性骨关节炎模型。每只兔以氯胺酮1.0mg/kg体质量麻醉,单侧膝关节行前交叉韧带切断造模。②术后第5周,透明质酸钠注射组患膝关节腔注射质量浓度为10g/L的透明质酸钠0.3mL,1次/周,连续5周。生理盐水对照组注射等量生理盐水。③术后10周处死,观察两组股骨内髁关节软骨的大体形态学(0分:关节面光滑,色泽正常;1分:关节面粗糙,有小的裂隙,色泽灰暗;2分:关节面糜烂,软骨缺损达软骨表层或中层;3分:关节面溃疡形成,缺损达软骨深层;4分:软骨剥脱,软骨下骨质暴露)和组织学病理变化,采用反转录聚合酶链反应方法检测软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达情况。主要观察指标:①两组股骨髁关节面标本大体观察结果。②两组股骨内髁软骨光镜组织学观察结果。③两组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达。结果:实验选取清洁级大耳白兔16只,全部进入结果分析。①两组股骨髁关节面标本大体观察结果:解剖显微镜下观察股骨髁关节面病理变化,透明质酸钠注射组软骨退变程度较生理盐水对照组明显减轻。②两组股骨内髁软骨光镜组织学观察结果:透明质酸钠注射组见软骨膜变性脱落,表层软骨细胞变性、坏死、排列紊乱,形成糜烂;生理盐水对照组见软骨细胞变性、坏死,排列紊乱,溃疡病变达软骨深层,并见新生的毛细血管和成纤维细胞增生,溃疡底部见纤维组织增生。③两组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达:透明质酸钠注射组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA表达量均值为1.09±0.18,生理盐水对照组的表达量均值为1.26±0.23,两组基本相似(P>0.05)。结论:关节腔注射透明质酸钠对早期骨关节炎软骨具有修复和保护作用,能有效减轻早期创伤性骨关节炎关节软骨的退变,对诱导型一氧化氮合酶的表达没有下调作用。     

膝骨性关节炎模型的分期特征

目的:通过切断兔的膝前交叉韧带,观察评价其关节炎和滑膜炎不同时期的临床及病理特点,界定膝骨关节炎模型的分期。方法:实验于2004-08/2005-05在解放军南京军区南京总医院动物中心完成,取成年新西兰大白兔30只,将其右膝关节作为实验侧,作膝前交叉韧带切断,左膝关节为对照侧,只作关节囊切开。术后笼中饲养,任其自由活动。分别于造模2,4,6,8及12周时各处死6只。观察滑膜、关节液、软骨的病理特点。采用改良的Mankin骨关节炎的评分法(1～5分定为早期,6～9分为中期,10～14分为晚期)。结果∶28只兔进入结果分析。①实验侧2,4,6周可见早期骨关节炎的改变,表现为滑膜充血增生,关节渗出增多,软骨表层不平整,甲苯胺蓝染色正常或轻染,Mankin评分为2.17～3.8分。②实验侧8周可见骨关节炎中期改变,表现为滑膜增生明显,滑液少,软骨裂隙形成达表层,软骨细胞排列紊,甲苯胺蓝染色不均,Mankin评分为7.83。③实验侧12周可见骨关节炎晚期改变,表现为滑膜部分呈结节样增生,滑液少而混浊,骨赘形成,软骨下骨暴露,软骨细胞减少,甲苯胺蓝大部分失染,Mankin评分为12.2。④对照侧大部分为正常关节软骨(Mankin评分0～1分)。结论∶①兔前交叉韧带断裂后2～6周为骨性关节炎的早期改变,8周为中期,12周为晚期。②此模型能较为全面地反应骨性关节炎软骨退变从早期的代偿性增生到失代偿后软骨细胞和基质减少,软骨变软到剥脱缺失为特点的晚期改变的全过程。     

透明质酸钠对兔创伤性骨关节炎软骨诱导一氧化氮合酶mRNA表达的干预

背景各种关节损伤、关节手术后导致的创伤性骨关节炎较为常见,关节腔注射透明质酸钠已被视为一种治疗骨关节炎的有效手段.目的以前交叉韧带切断的方法建立兔创伤性骨关节炎模型,观察关节腔注射透明质酸钠对其关节软骨中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达水平的影响.设计随机对照动物实验.单位武汉大学人民医院骨科.材料实验于2003-04/12在武汉大学人民医院骨科实验室完成.选取清洁级5～6月龄大耳白兔16只,随机数字表法分为透明质酸钠注射组、生理盐水对照组,8只/组.透明质酸钠(上海建华精细生物制品有限公司提供,国药准字2000第366095号).方法①两组均建立创伤性骨关节炎模型.每只兔以氯胺酮1.0 mg/kg体质量麻醉,单侧膝关节行前交叉韧带切断造模.②术后第5周,透明质酸钠注射组患膝关节腔注射质量浓度为10 g/L的透明质酸钠0.3 mL,1次/周,连续5周.生理盐水对照组注射等量生理盐水.③术后10周处死,观察两组股骨内髁关节软骨的大体形态学(0分关节面光滑,色泽正常;1分关节面粗糙,有小的裂隙,色泽灰暗;2分关节面糜烂,软骨缺损达软骨表层或中层;3分关节面溃疡形成,缺损达软骨深层;4分软骨剥脱,软骨下骨质暴露)和组织学病理变化,采用反转录聚合酶链反应方法检测软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达情况.主要观察指标①两组股骨髁关节面标本大体观察结果.②两组股骨内髁软骨光镜组织学观察结果.③两组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达.结果实验选取清洁级大耳白兔16只,全部进入结果分析.①两组股骨髁关节面标本大体观察结果解剖显微镜下观察股骨髁关节面病理变化,透明质酸钠注射组软骨退变程度较生理盐水对照组明显减轻.②两组股骨内髁软骨光镜组织学观察结果透明质酸钠注射组见软骨膜变性脱落,表层软骨细胞变性、坏死、排列紊乱,形成糜烂;生理盐水对照组见软骨细胞变性、坏死,排列紊乱,溃疡病变达软骨深层,并见新生的毛细血管和成纤维细胞增生,溃疡底部见纤维组织增生.③两组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达透明质酸钠注射组软骨诱导型一氧化氮合酶mRNA表达量均值为1.09±0.18,生理盐水对照组的表达量均值为1.26±0.23,两组基本相似(P＞0.05).结论关节腔注射透明质酸钠对早期骨关节炎软骨具有修复和保护作用,能有效减轻早期创伤性骨关节炎关节软骨的退变,对诱导型一氧化氮合酶的表达没有下调作用.     

膝骨性关节炎模型的分期特征

目的：通过切断兔的膝前交叉韧带，观察评价其关节炎和滑膜炎不同时期的临床及病理特点，界定膝骨关节炎模型的分期。 方法：实验于2004-08／2005-05在解放军南京军区南京总医院动物中心完成，取成年新西兰大白兔30只，将其右膝关节作为实验侧，作膝前交叉韧带切断，左膝关节为对照侧，只作关节囊切开。术后笼中饲养，任其自由活动。分别于造模2，4，6，8及12周时各处死6只。观察滑膜、关节液、软骨的病理特点。采用改良的Mankin骨关节炎的评分法（10分定为早期，6-9分为中期，10～14分为晚期）。 结果：28只兔进入结果分析。①实验侧2，4，6周可见早期骨关节炎的改变，表现为滑膜充血增生，关节渗出增多，软骨表层不平整．甲苯胺蓝染色正常或轻染，Mankin评分为2．17-3．8分。②实验侧8周可见骨关节炎中期改变，表现为滑膜增生明显，滑液少，软骨裂隙形成达表层，软骨细胞排列紊，甲苯胺蓝染色不均，Mankin评分为7．83。③实验侧12周可见骨关节炎晚期改变，表现为滑膜部分呈结节样增生．滑液少而混浊，骨赘形成，软骨下骨暴露，软骨细胞减少。甲苯胺蓝大部分失染，Mankin评分为12．2。④对照侧大部分为正常关节软骨（Mankin评分0～1分）。 结论：①兔前交叉韧带断裂后2-6周为骨性关节炎的早期改变，8周为中期，12周为晚期。②此模型能较为全面地反应骨性关节炎软骨退变从早期的代偿性增生到失代偿后软骨细胞和基质减少，软骨变软到剥脱缺失为特点的晚期改变的全过程。     

艾灸疗法影响兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的效应

目的:观察艾灸疗法对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法:于2004-03/2005-04在华中科技大学同济医学院和武汉体育学院完成本课题。选取6～8月龄健康新西兰兔36只,按照组间均衡一致的原则,随机抽签法分为3组:正常对照组,骨关节炎模型组,艾灸治疗组,每组12只。骨关节炎模型组,艾灸治疗组动物于左侧或右侧兔膝关节腔内注入16g/L木瓜蛋白酶制备骨性关节炎模型,0.5mL/次,隔3天再注射1次,共注射3次。艾灸治疗组动物于术后6周开始进行艾灸治疗。剪除造模侧膝关节约3cm×3cm区域毛后用点燃的艾条,距后三里(相当于人足三里)、阴阳陵泉、血海四穴高2cm处各悬灸10min,2天1次,共治疗4周。正常对照组,骨关节炎模型组不予治疗。术后10周处死所有动物,切开膝关节腔,先大体观察关节软骨、滑膜的病变。然后切取胫骨平台和股骨内髁的软骨约0.5cm×0.5cm×0.5cm组织块,行苏木精-伊红、Masson三色和甲苯胺蓝染色,通过光镜观察有关的组织形态学变化。采用硝酸还原法测定关节滑液一氧化氮含量。采用原位未端原位标记法和流式细胞仪检测软骨细胞的凋亡率。结果:在模型制备及饲养过程中,所有动物均无死亡,全部纳入结果分析。①大体观察结果:正常组兔膝关节软骨为淡蓝白色,表面光滑而有光泽;造模组关节软骨无光泽,为淡黄白色,软骨表面凸凹不平,出现裂隙;艾灸组关节软骨为淡白色,软骨表面粗糙。②组织形态学结果:正常组苏木精-伊红染色可见关节软骨的细胞致密而均匀,基本无破坏;Masson三色染色正常,软骨胶原蓝绿色;甲苯胺蓝染色均匀无失染。骨关节炎模型组关节软骨破坏严重,软骨表层变薄,粗糙,出现裂隙,部分软骨剥落,形成缺损区,软骨细胞数目明显减少,排列紊乱,四层结构不易分辨;Masson三色染色蓝绿色丢失严重,仅表层软骨尚可保留一些;胺蓝染色仅残存的软骨细胞及簇集的细胞核蓝染,细胞的胞浆呈紫红色。艾灸组苏木精-伊红染色可见关节软骨破坏程度较造模组明显减轻,关节软骨表面有表浅裂隙,软骨细胞排列轻度紊乱,四层结构可以分辨。Masson三色染色全层未钙化软骨保持蓝绿色着染;甲苯胺蓝染色蓝紫色着染均匀。③骨关节炎模型组关节液一氧化氮含量较正常对照组明显升高、艾灸治疗组较正常对照组明显升高,比模型组降低,差异均有显著性意义(P<0.05)。④骨关节炎模型组、艾灸治疗组关节软骨细胞凋亡阳性表达较正常对照组明显升高;艾灸治疗组比骨关节炎模型组明显降低,差异均有显著性(P<0.05)。⑤骨关节炎模型组软骨细胞凋亡率比正常组明显升高,艾灸治疗组比正常对照组明显升高,比模型组明显降低,差异均有显著性(P<0.05)。结论:艾灸疗法能减少关节液一氧化氮的含量,抑制软骨细胞的凋亡,治疗膝骨性关节炎具有有效性和可行性。     

同种异体脱钙骨与骨髓间充质干细胞关节腔内共培养:与同腔软骨性状的对比简

背景：临床发现膝关节内游离体能长期存在于关节腔内并能保持一定的软骨组织学特性和生理学特性,因此大胆提出假设：关节腔环境可能是软骨细胞生长、发育的较佳环境并提出“腔内培养,腔内移植”的理念。目的：观察兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨基质体外培养或关节腔内培养组织工程软骨与同腔软骨的性状差异。 方法：实验分3组进行,体外培养组将经成软骨诱导的乳兔骨髓间充质干细胞与成年兔脱钙骨基质体外复合培养;腔内培养组将经成软骨诱导的乳兔骨髓间充质干细胞与成年兔脱钙骨基质以筋膜包裹,复合培养于成年新西兰兔膝关节腔内,以同腔内正常软骨为对照。 结果与结论：培养12周后：①体外培养组苏木精-伊红染色见软骨细胞少量增生,胞核蓝染;甲苯胺蓝染色见软骨细胞排列无序,少量周围基质包绕;Masson染色阳性区域小,细胞排列无序;Ⅱ型胶原免疫组织化学见软骨细胞胞浆及胞外基质少量黄色颗粒。②腔内培养组苏木精-伊红染色见软骨细胞增生,胞核蓝染;甲苯胺蓝染色见软骨细胞成串排列,软骨陷窝形成,周围基质包绕;Masson染色阳性,软骨细胞多,基质蓝染,按一定应力方向排列;Ⅱ型胶原免疫组织化学见细胞外基质中出现较多棕黄色颗粒,Ⅱ型胶原染色阳性。说明骨髓间充质干细胞与同种异体脱钙骨基质复合物可在体外及膝关节腔内培养出组织工程软骨,关节腔内培养的软骨比体外培养的软骨更接近正常软骨。     

透明质酸钠预防兔膝关节固定后关节软骨退行性改变的作用

目的:多项研究成果已证明透明质酸钠在软骨修复及重建过程中具有重要作用。观察关节内注射透明质酸钠对兔膝关节固定后关节软骨退行性改变中的预防作用,并评估其效率。方法:实验于2004-10/2005-05在泰山医学院基础研究所完成。①实验分组:雄性新西兰大白兔24只,体质量2.5～3.0kg,随机分为生理盐水对照组和透明质酸治疗组,每组12只。②实验方法:透明质酸治疗组给予左膝关节内注射0.3mL透明质酸,1次/周,共行5次;生理盐水对照组给予左膝关节注射同等剂量生理盐水,1次/周,共行5次。各组均于初次注射后将左下肢给予石膏管型固定,膝部预留窗口以备下次注射。于末次注射1周后麻醉处死动物,采集左膝关节股骨髁关节软骨制成石蜡切片。同时采集右膝同部位软骨作为正常对照。③实验评估:普通光学显微镜下观察苏木精-伊红染色切片的形态变化;对甲苯胺蓝染色切片利用Image-ProPlus6.0图像分析系统进行平均染色灰度质分析;激光共聚焦显微镜分析免疫荧光标记的Ⅱ型胶原荧光强度。结果:纳入兔24只,均进入结果分析。透明质酸治疗组苏木精-伊红染色显示软骨层无变薄现象,软骨细胞同源细胞簇排列整齐,细胞大小均匀,细胞核染色均匀,潮线较为完整,无血管翳增生;生理盐水对照组苏木精-伊红染色显示软骨层变薄,细胞排列紊乱无规律,细胞大小不等,核染色浓淡不一,潮线不完整,血管翳有侵入软骨基底部的迹象。透明质酸治疗组软骨甲苯胺蓝染色灰度值及Ⅱ型胶原荧光强度均明显高于生理盐水对照组软骨(P<0.01),与正常软骨亦有显著差异(P<0.01)。结论:透明质酸能够有效地预防兔膝关节固定后的软骨退行性改变,但这种预防作用所产生的效果与正常软骨尚有差距。     

丹参对兔骨性关节炎关节软骨白介素-1β、白介素-6和胰岛素样生长因子-Ⅰ表达的影响

目的:探讨丹参对兔骨性关节炎(OA)模型关节软骨退变的保护作用及其机制。方法:将24只大白兔随机分成2组,即对照组和实验组,每组12只。所有兔通过手术建立右膝关节OA动物模型,对照组的所有兔的右膝关节腔内注射生理盐水0.5ml/kg,实验组所有兔的右膝关节腔内注射丹参注射液0.5ml/kg,手术完毕后当天就注射1次,以后每4天注射1次。在动物OA模型建立后的第10周,将兔处死,收集右侧股骨内侧髁标本,用光学显微镜和透射式电子显微镜观察关节软骨形态学结构改变,用免疫组化技术检测关节软骨组织中IL-1β、IL-6和IGF-Ⅰ蛋白的表达。结果:实验组兔的关节软骨破坏程度明显轻于对照组(P0.05)。IL-1β、IL-6和IGF-Ⅰ蛋白阳性免疫反应物主要定位于细胞浆,为粗细较为一致的淡红色颗粒。实验组IL-1β蛋白阳性染色强度明显低于对照组(P0.05)。实验组IL-6和IGF-Ⅰ蛋白阳性染色强度明显高于对照组(P0.05)。结论:丹参能调节OA关节软骨组织中IL-1β、IL-6和IGF-Ⅰ蛋白的异常表达,对关节软骨具有保护作用。     

Virus-mediated gene transfer for cutaneous gene therapy

Cutaneous gene therapy offers unique opportunities and limitations in the use of viral vectors for corrective gene transfer. Skin presents a formidable barrier to microbial invasion and is nourished by small blood vessels, thus ruling out the possibility of directed virus delivery through cannulated blood vessels. However, skin is physically accessible and its resident keratinocyte stem cell population is susceptible to direct in vivo transduction with retroviral vectors. Furthermore, keratinocyte stem cells transduced in culture have been shown to persist and to express the encoded transgene when grafted to immunocompromised mice. Cutaneous gene therapy trials are likely to involve virus-mediated transduction as a principal means of gene transfer.     

金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因及5类抗生素耐药相关基因检测

目的了解本地区临床分离的金黄色葡萄球菌（SA）的耐药特点,探讨SA中耐消毒剂基因（qacA）、β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯-林可霉素-链阳菌素B类（MLSB）、四环素类、糖肽类药物耐药基因的存在情况。方法采用聚合酶链反应（PCR）法对20株SA进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、MLSB类基因、四环素类基因、糖肽类基因、耐消毒剂基因检测。结果 PCR结果显示20株SA中13种耐药相关基因检出率分别为mecA75%、TEM90%、aac（6＇）/aph（2″）70%、ant（4＇,4″）15%、ant（6）-Ⅰ25%、ermA100%、ermC55%、msrA20%、msrB55%、tetM65%、qacA60%,vanA、vanB基因均为阴性。结论多数SA菌株具有耐多药特征,存在耐β-内酰胺类、氨基糖苷类、MLSB类、四环素类等多种抗生素耐药基因,且对胺类、胍类消毒剂耐受。     

klotho gene

The klotho gene, originally identified by insertional mutagenesis in mice, suppresses multiple aging phenotypes(e.g. arteriosclerosis, pulmonary emphysema, osteoporosis, infertility, short lifespan). We have shown that mice deficient for the klotho gene show endothelial dysfunction as manifested by an attenuated response of aortic relaxation in response to acetylcholine stimulation. Nitric oxide production was also significantly reduced in klotho deficient mice. A decrease in klotho gene expression in animals under sustained circulatory and metabolic stress(e.g. atherosclerosis). The klotho gene delivery improves endothelial dysfunction through a pathway involving nitric oxide, and is involved in modulating vascular function(e.g. hypertension, vascular remodeling). Our findings establish the basis for the therapeutic potential of klotho gene delivery in atherosclerotic disease.