抽提模板的温度和杂交温育方式对丙型肝炎病毒RNA检测的影响

逆转录聚合酶链反应 微孔板反向杂交法检测丙型肝炎病毒核酸 (HCV RNA)影响因素较多。本实验室通过对室温和低温条件下抽提HCV RNA及不同杂交温育方式检测扩增产物的试验 ,探讨其对检测结果的影响。1　材料1 1　试剂　RT PCR微孔板反向杂交试剂盒由华美生物工程公司提供 ,批号 0 0 1 1 0 6。1 2　主要仪器　PE 2 4 0 0PCR扩增仪 ;LGR1 6 W高速微量冷冻离心机 ;LGR1 6 W高速离心机 ;LabsystemsDragon酶标仪、洗板机 ;电热恒温分子杂交箱。2　方法2 1　不同温度下抽提HCV RNA2 1 1　试剂盒提供的方法 (简称旧法 )　取…     

酶结合物效价下降引起抗-HCV检测失控原因分析

20 0 2年 6月 ,笔者检测抗 -HCV时 ,先后出现 3次失控现象 ,均为阳性对照和质控物 OD值低于要求 ,经过对仪器、人员、试剂、质控物的排查 ,发现是由于试剂盒保存不当引起酶结合物失效 ,为引起同行和试剂厂家重视 ,报告如下。材料与方法1　检测对象　绍兴市无偿献血者。2　试剂与仪器　抗 -HCV检测试剂为国内某厂家生产 ,经中国药品生物检定所批批检定 ,批号 2 0 0 2 0 0 2 2 0 ,HCV 2NCU质控物由卫生部临检中心提供 ,批号 0 2 0 2 ,以上各种试剂均在有效期内使用 ;TECANRSP-1 5 0全自动加样器(瑞士 TECAN公司 ) ,TECAN全自动洗…     

加样后室温停留时间对自动化检测抗-HCV的影响

目前 ,血站检验自动化仪器代替过去传统的手工操作 ,省工、安全。但仪器也有不足之处 ,当检测样品量大时 ,抗 - HCV加完样品后 ,进入仪器内的微板操作自动编排 ,需在室温仓内停留一段时间 ,然后才进入 37℃孵育仓正式开始记时 ,而实际上抗 - HCV在室温就已开始进行抗原抗体反应 ,尤其是在夏季 ,仪器做的抗 - HCV假阳性率比手工偏高。为了解决遇到的问题 ,我们通过 3个典型样品 ,探讨室温停留的时间对抗 - HCV测定结果的影响程度 ,现报告如下。1　材料和方法1 .1　材料　抗 - HCV EIA试剂盒 (北京万泰 ) ;RSP2 0 0全自动加样器 (瑞…     

ELISA检测抗-HIV灰带区样品的质量控制

尽管ELISA检测试剂使用前其试剂盒均要进行“批批”抽检(数量有限),然而在试剂盒使用的过程中检测结果失败、重复性不好、结果难以判定等现象仍时有发生。其中原因之一就是试剂盒中出现的各反应板之间和同一板各孔之间孔间差变异造成的质量均一性不好,进而导致检测结果不稳定。对试剂盒孔间变异的质量控制,笔者采用在一块板上每孔加同一份弱阳性质控血清和在另一块板上加同一份阴性高值血清进行分别检测的方法,获取各孔的OD值,以了解孔间变异,估算出检测样本测定值的可能变动范围,对于判定阈值附近样品的结果是十分有用的,以此减少假阳性或假阴性结果的出现。 1 材料与方法 1.1 材料①抗-HIV1/2型阴性高值血清(本室自制,经省防疫站艾滋病确认实验室确认为阴性）;②抗-HIV1/2型(2NCU/ml)质控血清(卫生部临检中心,批号200002）;③抗-HIV 1/2型ELISA诊断试剂盒(北京金豪公司);④CF-5000板式酶标仪(北京航天);⑤ BEM-Ⅱ型自动酶标洗板机(北京拓普)。 1.2 方法取两块反应板,分别按试剂盒说明书操作,在A板上加90孔弱阳性质控血清;在B板上加90孔阴性高值血清,进行检测。结果判定按说明书所给方法计算。     

ELISA检测HBsAg洗板方法的探讨

目的探讨酶联免疫试验(ELISA)检测HBsAg的最佳洗板次数和方式,试图找到一种实用、可靠的ELISA洗板方法。方法选择50例HBsAg阴性体检者完全分离后的血清为检测对象,分别进行3～7次洗板,得到阴性数和假阳性数,得出最佳洗板机洗板次数;收集同一批号试剂盒的阴阳性标准品及质控品,将质控品平行检测31孔,共2板分别用手工和洗板机2种方法各洗板7次。结果不同洗板次数的结果差异有统计学意义,且洗板7次假阳性率最低;2种洗板方式测定值结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论洗板7次能达到理想的洗板效果;对标本量少或无洗板机的基层医院可采用标准化手工洗板的方式。     

乙型肝炎病毒标志物抗—HBc（总）低滴度标本的研究

我们收集 2 0 0 1- 0 5～ 2 0 0 1- 11我院就诊患者乙肝血清标志物两种少见模式抗 - HBc(总 )低滴度标本的检测结果进行了统计分析 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1.1　试剂盒　乙肝血清标志物酶免试剂盒 (华美生物公司提供 )。1.2　仪器　酶标仪 SL T.Rainbow(奥地利 )洗板机 MultiWash (美国 )。1.3　样品　收集乙肝患者血清标志物检测 HBs Ag ,HBe Ag ,抗 - HBc(总 ) -的标本 6 3份 ,HBs Ag ,抗 - HBe ,抗 - HBc(总 ) -的标本 6份。1.4　方法　按试剂盒说明书对样品进行抗 - HBc(总 )检测。1.5　结果判定　选波长 4 5 0 nm,…     

计划无偿献血与自愿无偿献血人群血液安全性指标检测结果比较

为探讨献血模式改变对提高输血安全性的意义 ,笔者比较分析了 5 5 4 1 0例上海市区 2 0 0 2年 3～ 5月同期计划无偿献血 (初筛 )与自愿无偿献血人群的血液安全性检测指标 ,现将结果报告如下。材料与方法1　检测对象　 2 0 0 2年 3～ 5月上海市区的献血者5 5 4 1 0人 ,其中自愿无偿献血者 1 2 32 9人 ,计划无偿献血者 (初筛 ) 430 81人。2　试剂与仪器　 HBs Ag、抗 - HCV、抗 - HIV的检测均采用上海科华生物技术有限公司 ELISA试剂盒 ,HBs Ag试剂盒的批号为 2 0 0 1 1 1 2 5、2 0 0 1 1 2 0 7;抗 - HCV试剂盒的批号为 2 0 0 1 1 0 0…     

曲靖市有偿献血人群梅毒感染调查

为预防和控制梅毒传播 ,对我市 395 6例有偿献血者进行了梅毒感染状况调查 ,报告如下。1　对象和方法1.1　对象　 1996 - 0 1～ 2 0 0 1- 12在我站血源室建卡存档之有偿献血者 395 6例。1.2　试剂　 RPR、TRUST(血清反应素纸片试验 ) TP(梅毒螺旋体酶联免疫、双抗原夹心法 ) ,分别由上海科华公司、上海荣盛公司、厦门新创科技有限公司生产。1.3　方法　严格按照试剂盒说明书进行操作用奥地利生产12 8- G酶标仪 45 0 mm波长 ,测各孔 OD值 ,样品 OD值 S/ C.D.≥ 1者为梅毒抗体阳性 ,样品 OD值 S/ C.D.<1者为梅毒抗体阴性。2　结果经…     

血液抗-HCV初复检采用不同试剂的必要性

生部规定每袋血液必须经初、复检确认五项指标 ( ALT、HBs Ag、抗 - HCV、抗 - HIV、梅毒 )均为阴性后方可用于临床 ,而目前国产的试剂盒 ,不同厂家在抗原 (抗体 )包被和灵敏度方面都有所差异 ,特别是抗 - HCV试剂盒。故笔者对联合使用不同厂家试剂对抗 - HCV检测的必要性进行了探讨 ,现报告如下。材料与方法1　标本来源　均为本站采集的城郊两区的血样1 642份。2　方法2 .1　血清抗 - HCV初检采用上海实业科华技术有限公司提供的酶联免疫 ( EL ISA)试剂盒 ,批批检定合格 ,批号 980 5 30 0 1 ,复检采用厦门新创科技有限公司提供 …     

闽南地区HBsAg阴性献血者的抗-HBc阳性率

<正> 本文对711名HBsAg阴性(低于2ng/ml)的献血者进行抗-HBc测定。报告如下。材料和方法 1.被检样品:已确证HBsAg浓度低于2ng/ml,且其他肝功能试验正常的血样。 2.试剂:HBsAg和抗-HBc酶标试剂盒由厦门新创科技有限公司提供。HBsAg批号为910722,抗-HBc批号为910729。 3.方法:按试剂盒说明操作,阳性判断标准为被检血清HBsAg的OD值大于阴性对照血清OD值的2.1倍为阳性;抗-HBc按试剂盒所定抑制率>85％为阳性。     

光照对ELISA试验结果的影响

EL ISA法作为血站最常用的试验 ,具有灵敏、特异、重复性好的特点 ,但影响因素也很多 ,尤其是试验过程中底物的避光问题常被一些操作者忽视 ,有些商品试剂盒在说明书中指明加入底物溶液后应避光 ,但有些试剂说明书则未特别强调 ,且光照对 EL ISA的影响也少见报道。本文着重探讨了光照对 EL ISA试验结果的影响材料与方法1　试剂盒　上海科华抗 - HCV (批号 2 0 0 1110 5 )、HBs Ag(批号 2 0 0 112 0 7) ,厦门新创 HBs Ag(批号 2 0 0 110 2 5 0 1) ,美国雅培抗 - HCV (批号 M80 6 310 ) ,荷兰欧嘉隆抗 - HIV (批号A4 2 KA)。均…     

不同试剂检测献血者抗-HCV结果的分析

卫生部《血站管理办法》规定 ,献血者血液化验初复检用同一试剂厂家生产的试剂。但使用不同厂家的试剂 ,其检测结果也不尽相同。对此 ,笔者对济宁地区 2 0 0 1年无偿献血者用两种试剂对其血清抗 HCV检测 ,对不一致的阳性标本再做HCV RNA测定 ,结果分析如下。1　材料与方法1 1　标本来源　 2 0 0 1年济宁地区无偿献血者血液标本312 10份 ,按常规进行血清分离。1 2　材料　AT 2、FAME(瑞士哈美顿公司 ) ,LD 10B离心机 ,(北京医用离心机厂产 ) 2 4 0 0型水浴式PCR扩增仪 (美国PE公司生产 )。 2种抗 HCV试剂盒 (以下简称试剂A和试剂…     

溶血对抗—HCV，HBsAg等检测结果的影响

采血过程、运输及保存不当都易造成血液标本溶血 ,用溶血的标本进行抗 - HCV、HBs Ag、AL T、抗 - HIV的检测 ,其结果准确与否 ,笔者实验报告如下。1　材料和方法1.1　材料1.1.1　仪器与试剂　 1酶标仪 CF- 2 0 0 0 MK2 (英国 ) ;2洗板机 CSM10 0 (芬兰 ) ;372 2光栅分光光度计 (上海分析仪器厂 ) ;4AL T试剂 (郑州中亚生物工程有限公司 ,批号 2 0 0 30 7) ;5HBs Ag、抗 - HCV、抗 - HIV试剂 (上海科华生物技术有限公司 ,批号依次为 2 0 0 915、2 0 0 82 5、2 0 0 90 1)。1.1.2　溶血标本的配制　将抗 - HCV、抗 - HIV、HBs…     

丙型肝炎病毒总抗原检测用于病程监测的研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)总抗原检测方法在丙肝病程监测方面的临床意义。方法对来本院就诊的40位丙肝患者于治疗前、治疗1个月时、治疗3个月时、治疗6个月(停药)时,停药6个月后等不同时期进行采血,收集血清或血浆标本,用抗-HCV检测试剂盒(酶联免疫法)、HCV核酸(RNA)扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒、HCV总抗原检测试剂盒(酶联免疫法)进行检测。结果从患者确认感染丙肝到治疗结束抗-HCV检测均呈阳性,而HCV-RNA检测和HCV总抗原检测会随着病程的变化而变化。本次共检测了189例标本(40位患者不同时期标本总例数),其中HCV-RNA阳性51例,该51例阳性标本中,HCV总抗原检测阳性44例,阳性检出率为86.27%;138例HCV-RNA阴性标本,有3例HCV总抗原检测为阳性(2.2%)。2种方法比较,差异无统计学意义(χ2=1.6,P>0.05)。HCV总抗原检测其OD值会随着病程的变化而相应改变,可以较好地反应丙肝患者的病程状况。结论 HCV总抗原检测方法在丙肝病程监测方面具有很好的临床意义,适合在缺少荧光定量PCR检测能力的中小医院使用,可在一定程度上替代HCV-RNA检测,对抗-HCV阳性患者作进一步的验证检测或补充,更好地应用于丙肝患者的病程监测。     

抗-HCV检测设置灰区的探讨

不同抗HCV的检测试剂对丙型肝炎的检测结果有明显差异[1],设置抗HCV检测灰区的必要性越来越引起各血液检测的重视。本站2004年开始设置抗HCV的检测灰区,将抗HCV检测值位于阈值下30%的范围,落在灰区内的样本需重复检测。笔者对抗HCV检测值落于灰区内的24份样本的重复检结果进行分析,报告如下。1材料与方法1.1样本来源本站2004年1月1日～12月31日无偿献血样本32459份中抗HCV检测结果落在灰区内的样本24份。1.2试剂与仪器Murex丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(美国雅培公司,酶联免疫法)。RSP200型全自动样品处理系统(瑞士帝肯公司),贝灵Ⅲ…     

溶血对国产新型间接法试剂检测HCV抗体的影响

目的探讨样本溶血对改模后国产HCVELISA试剂检测结果的影响。方法分别将50例HCV阴性标本、弱阳性标本和强阳性标本人为造成不同程度的溶血,比较溶血前后不同试剂检测标本OD值的变化差异,分析溶血标本是否对间接法ELISA实验存在干扰,不同试剂间是否存在差异。结果对于HCV抗体阴性标本,两种试剂检测溶血标本的OD值与溶血前比较差异无统计学意义(P>0.05);对于HCV抗体弱阳性标本,两种试剂在5、10、15g/L溶血标本检测的OD值与溶血前比较,差异有统计学意义(P<0.05),在检测20g/L溶血标本的OD值与溶血前比较差异无统计学意义(P>0.05);两种试剂检测结果OD值均随溶血程度增加而呈现先降低后增加的曲线变化;对于HCV抗体强阳性标本,两种试剂在溶血后标本检测OD值与溶血前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论改模后间接法HCV抗体检测试剂抗溶血干扰能力增强,但溶血标本对改模后HCV酶免试验结果仍存在多种干扰,有可能导致检验结果出现偏差;国产HCV试剂之间存在差异,对于灰区结果和重度溶血标本需要重新取样,进行再捡。     

27916名无偿献血者抗-HCV抗体情况的调查分析

丙肝的传染源是病人和HCV无症状携带者。携带HCV的供血人员作为传染源意义更大。国外输血后肝炎中丙肝占 90 %以上 ,输血后肝炎的发病率为 2 - 2 0 %。我国输血后肝炎中丙肝占 6 0 -80 % ,而输血后丙肝的发病率为 2 - 3 4%。所以 ,对无偿献血者抗 -HCV抗体调查 ,是控制和预防HCV传播的重要手段之一。材料与方法1 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 2年 1 2月 ,参加无偿献血者 2 791 6人。2 抗 -HCV试剂盒 (英科新创科技有限公司、华美生物工程公司 )均在有效期内使用 ;全自动酶免分析系统 (瑞士费米 1 6 2 0型 ) ;按试剂盒说明书 ,做抗 -HC…     

ELISA法检测时洗板机洗板对检测结果的影响

ELISA法检测广泛应用于血站血液的HBsAg、抗-HIV、抗-HCV及梅毒抗体的检测。在该法的检测过程中,洗板机洗板是一项极重要的环节。洗板不当(次数不够或洗涤不干净或洗涤次数过多)会造成假阳性或者假阴性的出现。为此,就洗板机洗板对检测结果的影响我们做了一点分析,现报告如下。1对象与方法1.1对象选择40份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV及梅毒抗体均为阴性的非脂血、无溶血的健康献血者分离后的血清为检测对象。1.2检测及分析方法HBsAg、抗-HCV、抗-HIV及梅毒抗体均使用英科新创(厦门)科技有限公司诊断试剂盒按试剂说明要求进行检测。…     

国产ELISA试剂检测抗-HIV假阳性原因分析

酶联免疫吸附试验 (EL ISA)是检测人类免疫缺陷病毒抗体 (抗 - HIV)最常用的方法 ,国产 EL ISA试剂以其较高的敏感性和较好的特异性以及价格低廉为国内许多初筛实验室所采用。但在实际工作中我们有时会遇到假阳性的困扰 ,结合近几年国内试剂的发展 ,就其影响因素进行分析如下。1　材料和方法1.1　材料　抗 - HIV使用美国 BIO- RAD公司 CODA 型全自动酶免分析系统检测 ,国产第 2代试剂盒 A(批号 2 0 0 2 0 92 2 )、第 3代试剂盒 B和 C(批号 2 0 0 2 12 0 1和 2 0 0 30 4 16 ) ;类风湿因子(RF)采用胶乳凝集法 ,试剂由军事医学科…     

丙型肝炎病毒RNA国产聚合酶链反应诊断试剂技术现状及临床考核评价

利用聚合酶链反应 (PCR)检测血液中丙型肝炎病毒 (HCV) RNA是确诊 HCV感染的有效手段之一 ,是酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测抗 - HCV的 1种补充方法。欧盟、美国都已将 HCV RNA的检测纳入献血员筛查项目。继 Roche公司的AMPLICOR HCV试剂批准上市以后 ,国内基于基因扩增技术检测血液中 HCV RNA的体外诊断试剂盒已批准临床使用 ,我们介绍国内研制开发的此类试剂盒的技术现状、临床考核结果 ,以供使用者、临床医生及诊断试剂的研发者参考。一、国产试剂盒的技术现状1 .方法和原理(1 )丙型肝炎病毒 RNA PCR-杂交酶联检测方…