Livin和Caspase-3在胃癌组织中的表达及其与预后的关系

目的:探讨Livin和半胱天冬蛋白酶-3 (Caspase-3)蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义.方法:(1)用免疫组化PV-9000二步法检测76例胃癌组织和30例癌旁正常组织中Livin和Caspase-3蛋白表达情况.(2)用原位末端标记(TUNEL)法检测胃癌组织中细胞凋亡情况.结果:(1)Livin和Caspase-3分别在胃癌组织和癌旁正常组织中的阳性表达率具有统计学意义(P＜0.05).(2)Livin阳性表达率与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移相关(P＜0.05);Caspase-3的阳性表达率与组织分化程度、淋巴结转移相关(P＜0.05).(3)Livin阳性组平均凋亡指数(AI)低于阴性组(P＜0.05);Caspase-3阳性组AI高于阴性组(P＜0.05).(4)有随访结果的56例中,5年总生存率为46.8％.单因素和多因素分析显示,Livin和淋巴结转移是影响胃癌患者预后的独立风险因素(P＜0.05).结论:(1) Livin和Caspase-3在胃癌组织中的异常表达,导致细胞凋亡不足,可能是胃癌形成的机制之一.(2)Livin和淋巴结转移是影响胃癌患者预后的独立风险因素.     

海带多糖对人鼻咽癌HONE1细胞裸鼠移植瘤的抑制及凋亡相关基因的调控

目的:观察海带多糖(laminaria japonica polysaccharides,LJP)对人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)HONE1细胞移植瘤生长抑制及凋亡相关基因调控效应,探讨其抗癌机制.方法:以人NPC细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型及LJP行体内抑瘤实验,并以RT-PCR检测移植瘤Bax,Bcl-2,Caspase-3,8,9 mRNA表达.结果:LJP中、高剂量组抑瘤率分别为33.7％和47.0％,具有明显抑瘤作用;RTPCR检测结果显示,Bax mRNA表达随着LJP浓度的增加而增高(P＜ 0.05);Bcl-2mRNA表达随着LJP浓度增加而降低(P＜0.05).Caspase-3mRNA表达随着LJP浓度增加而增高(P＜ 0.05);LJP组Caspase-8,9mRNA表达无差异,且Caspase-9mRNA表达均低于顺铂(cisplatin,DDP)组.结论:LJP具有抑制NPCHONE1细胞生长的作用,其机制是促进癌细胞凋亡而实现的.     

大蒜素对小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响

目的探讨大蒜素对肺癌A549细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响,为大蒜素治疗肺癌补充理论依据。方法实验分为对照组(正常培养A549细胞)、低剂量组(A549细胞+10μmol/L大蒜素)、中剂量组(A549细胞+30μmol/L大蒜素)和高剂量组(A549细胞+50μmol/L大蒜素)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞增殖情况;采用荧光TUNEL法检测各组细胞凋亡;采用Transwell检测各组细胞迁移能力,采用Western blot技术检测各组细胞Caspase-3、p53和CHOP表达。结果不通浓度大蒜素可有效降低肺癌细胞的增殖、迁移能力,且与剂量呈负相关(P0.05);增加肺癌细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、p53和CHOP的表达,且表达水平与剂量呈正相关(P0.05)。结论大蒜素通过提高肺癌A549细胞Caspase-3、p53和CHOP等凋亡因子的表达诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖和迁移能力,从而发挥其抗肿瘤的作用。     

青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:研究青蒿琥酯诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡作用及其可能机制.方法:应用流式细胞术(FCM)、透射电镜(TEM)等方法检测不同浓度下青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响,并应用Western Blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平.结果:经青蒿琥酯处理后,人胃癌SGC-7901细胞凋亡率升高,并具有时间浓度依赖性(P＜0.05),癌细胞被阻滞于G0/G1期;电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;Western Blot法检测到凋亡相关基因Bcl-2表达减弱,Bax表达增强(P＜0.05).结论:青蒿琥酯能有效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调凋亡相关基因Bcl-2、上调Bax表达有关.     

凋亡调控因子Survivin和Caspase-3蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨宫颈鳞状细胞癌中凋亡凋控因子Survivin和Caspase-3蛋白的表达及其意义.方法采用免疫组织化学技术检测40例宫颈鳞状细胞癌及10例正常宫颈组织中Survivin和Caspase-3的表达水平.结果Survivin蛋白在宫颈鳞状细胞癌 中表达水平高于正常宫颈组织(P＜0.05).Caspase-3表达水平低于正常宫颈组织(P＜0.05).Survivin和Caspase-3蛋白的表达水平在不同分化程度的宫颈癌之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论宫颈鳞状细胞癌的发生、发展与Survivin和Caspase-3蛋白的异常表达有关,可能是细胞异常增殖和凋亡失衡的结果.     

藤蟾方抑制人胃癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的探讨中药复方藤蟾方在体外对人胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及凋亡诱导作用.方法用MTT法及流式细胞仪分析法分析藤蟾方对人胃癌细胞SGC-7901细胞的抑制作用及诱导凋亡情况.结果 (1)藤蟾方在3.5μg/ml时显示对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用,并随浓度升高而增强,具有显著性差异(P＜0 01);(2)通过散点图可看出,随浓度的增加右下象限和右上象限出现高染现象,呈剂量依赖性.其中与空白组比较,低、中、高三剂量的凋亡率均有显著性差异(P＜0.01),中、高剂量的坏死率亦有差异(P＜0.01或P＜0.05).结论提示藤蟾方在体外能抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长,诱导细胞凋亡,这可能为藤蟾方抑制其生长的机理之一.     

大蒜素对LM-8细胞Bcl-2及Bax表达的影响

背景:有研究证实,大蒜素对LM-8细胞增殖及凋亡有影响.目的:观察大蒜素干预C3H小鼠骨肉瘤细胞株LM-8细胞Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达,以及LM-8细胞的形态学变化与Bcl-2及Bax变化的关系.设计:随机分组,非盲法,细胞水平体外实验.单位:实验于2006-09/2007-05在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:实验所用C3H小鼠LM-8骨肉瘤细胞株购自解放军第四军医大学实验动物中心.大蒜素为武汉汇海公司产品,是从大蒜球茎中分离出的硫化物.Cell Counting Kit-8试剂购于上海同仁化学研究所,Bcl-2和Bax抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司.方法:以含体积分数为0.1新生牛血清的1640完全培养基,培养LM-8细胞,制作细胞爬片.SP免疫细胞组织化学技术检测细胞爬片中Bcl-2和Bax蛋白表达;倒置显微镜下观察5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素作用前后LM-8细胞形态变化;将LM-8细胞调整至7.5×107L-1接种于96孔板,用1.0,5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素处理细胞,设立不加任何处理因素的对照组及不含细胞和药物的培养基空白组,孵育24,48,72 h后取出培养板,加入CCK-8测定吸光度值,计算LM-8细胞生长抑制率:以5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度大蒜素干预LM-8细胞24,48,72 h,消化离心收集细胞,以流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化.主要观察指标:LM-8细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达;LM-8细胞形态及增殖、凋亡情况.结果:①Bcl-2和Bax蛋白表达:大蒜素可以降低Bcl-2表达,增强Bax表达,经15.0mg/L大蒜素作用72h,Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率及Bcl-2/Bax表达与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).②LM-8细胞的形态:经不同质量浓度大蒜素干预后均出现明显凋亡表现.③LM-8细胞的增殖:大蒜素能明显抑制LM-8细胞的增殖,当大蒜素浓度从1.0 mg/L增加到15.0 mg/L,LM-8细胞72 h时生长抑制率由(23.87±3.26)%增至(58.32±5.38)%,在72 h其药物半数抑制率浓度是11.09 mg/L.④LM-8细胞的凋亡:5.0,10.0和15.0 mg/L质量浓度的大蒜素作用72 h后可诱导LM-8细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:①大蒜素可抑制LM-8细胞增殖,该效应与大蒜素的浓度和时间有关.②大蒜素可诱导LM-8细胞凋亡,作用呈浓度依赖性.③大蒜素抑制LM-8细胞增殖和诱导LM-8细胞凋亡的机制可能与下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达有关.     

Bcl-2、Caspase-3、Apo2.7在胃癌变过程中的表达及与细胞凋亡的相关性研究

目的 研究在胃癌变过程中细胞凋亡率及相关调控基因B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和凋亡细胞相关抗体(Apo2.7)的表达情况和临床意义.方法 应用流式细胞术和免疫组化染色检测对比分析364例组织标本的细胞凋亡率及细胞凋亡调控基因Bcl-2、Caspase-3、Apo2.7在胃癌及胃癌前组织中的表达情况.结果 在正常胃黏膜(NOR)、慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠上皮化生(IM)、黏膜上皮异型增生(GIN)、胃癌中,细胞凋亡率以及Caspase-3、Apo2.7的表达率在胃黏膜癌变进展中呈下降趋势,Bcl-2表达率呈上升趋势;胃癌组与IM、CAG、CSG、NOR组Bcl-2、Caspase-3、Apo2.7免疫组化阳性率差异均有统计学意义(P<0.05),NOR组与CAG、IM、GIN、胃癌组Bcl-2、Caspase-3、Apo2.7免疫组化阳性率差异均有统计学意义(P<0.05),免疫组化染色阳性率与流式细胞术所示进展趋势一致.结论 Bcl-2的过度表达和Caspase-3、Apo2.7的表达下调,使细胞凋亡受抑,从而促进胃癌的发生和发展;应用流式细胞术和免疫组化染色检测胃黏膜组织的细胞凋亡率以及Bcl-2、Caspase-3和Apo2.7的表达可对胃部病变进行早期诊断和进程分期.     

腺苷对人胃癌MGC-803细胞增殖与凋亡的影响

目的观察腺苷(adenosine)对人胃癌MGC-803细胞的增殖、凋亡的影响。方法 CCK-8法检测不同浓度腺苷(0.01~10 mmol/L)对胃癌MGC-803细胞增殖的影响。流式细胞仪检测腺苷(0.25、0.5、1 mmol/L)对细胞凋亡的影响。Western blot检测腺苷处理后细胞内凋亡相关蛋白和内质网应激相关蛋白的表达量。结果腺苷能抑制胃癌MGC-803细胞的活力,并且呈现浓度和时间依赖性(P0.05)。腺苷(0.25、0.5、1 mmol/L)处理24 h后,细胞的总凋亡率显著升高(P0.01)。腺苷可以引起凋亡相关蛋白Caspase-3活化片段的蛋白表达量上调(P0.01)。腺苷能诱导内质网应激(ERS)相关蛋白Caspase-4活化片段、p-JNK、CHOP、GRP78的表达量上调(P0.05)。结论腺苷可以抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,并且促进凋亡,而内质网应激可能参与了腺苷引起的凋亡。     

水飞蓟素对人骨肉瘤Saos-2细胞的作用及机制研究

目的研究水飞蓟素(silymarin,SM)对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及凋亡的影响,并进一步探讨基因P21、Caspase-3、Bax及Bcl-2在其中有无调控作用。方法取对数生长期人骨肉瘤Saos-2细胞进行实验,实验分对照组及不同药物浓度梯度组,倒置相差显微镜观察细胞形态变化。CCK-8法测定细胞增殖。Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。RT-PCR检测增殖抑制基因P21及凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2m RNA表达水平。Western Blot检测P21、Caspase-3蛋白表达水平。结果对照组细胞生长良好,不同药物浓度组细胞变小、变圆,呈凋亡样改变,浓度越高,上述细胞形态改变越明显。CCK-8检测结果显示,不同药物浓度组细胞增殖受抑制,呈时间及剂量依赖性。Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,与对照组相比,不同药物浓度组细胞凋亡数量增多,呈剂量依赖性。RTPCR检测结果分析显示,与对照组相比,不同药物浓度组增殖抑制基因P21及促凋亡基因Caspase-3、Baxm RNA表达量均明显增加(P<0.05),而抗凋亡基因Bcl-2m RNA表达量明显下降(P<0.05)。Western Blot检测结果分析显示,与对照组相比,不同药物浓度组P21、Caspase-3蛋白表达量均明显增加(P<0.05)。结论水飞蓟素能够抑制人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及诱导其凋亡。水飞蓟素可通过上调基因P21、Caspase-3、Bax表达及下调基因Bcl-2表达对人骨肉瘤Saos-2细胞产生抑制作用。     

苯乙酸对胶质瘤C6细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:观察诱导分化剂苯乙酸(phenylacetate,PA)对Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响,探讨PA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制.方法:体外培养胶质瘤C6细胞,实验组给予PA浓度5.0 mmol/L诱导72 h,对照组不用PA,用原位杂交检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达,图像分析比较表达水平的差异.结果:两组比较,Bcl-2无明显变化(P＞0.05),实验组的Bax和Caspase-3表达增强(P＜0.01).结论:PA能增强Bax和Caspase-3的表达,其诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制可能与此有关.     

红光照射对大鼠缺氧缺血性脑损伤急性期凋亡因子表达的影响

目的 观察红光照射对大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)急性期凋亡因子Caspase-8及Caspase-3表达的影响.方法 采用随机数字表法将45只SD大鼠分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤组(简称模型组)及红光照射组.采用经典Rice法将模型组及红光照射组大鼠制成HIBD模型,假手术组仅分离左颈总动脉后缝合.红光照射组于HIBD损伤后立即对其额顶部进行红光照射,连续照射3d.于制模后第3天时取各组大鼠损伤侧海马组织,采用实时PCR技术检测Caspase-8及Caspase-3 mRNA表达,采用Western blot 技术检测Caspase-8及Caspase-3蛋白表达;采用免疫荧光法观察各组大鼠Caspase-8及Caspase-3定位并进行半定量分析.结果 制模后第3天时发现模型组和红光照射组Caspase-8、Caspase-3基因及蛋白表达均较假手术组明显增强(P＜0.05);红光照射组Caspase-8基因表达(1.55 ±0.12)及蛋白表达(0.70 ±0.18)、Caspase-3基因表达[(1.48±0.16)×10-4]及蛋白表达(0.74 ±0.13)均较模型组显著降低(P＜0.05).结论 红光照射可通过抑制细胞凋亡因子Caspase-8、Caspase-3表达,减轻HIBD急性期神经细胞凋亡,从而发挥HIBD治疗作用.     

恩度联合TP方案对食管癌细胞抑制作用的实验研究

目的:探讨重组人血管内皮抑素(恩度)联合紫杉醇+顺铂(TP)对食管癌细胞的抑制是否具有协同作用.方法:复苏Eca-109食管癌细胞株,传代培养,建立Eca-109食管癌细胞裸鼠移植瘤模型.3d测量1次肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;测量瘤体的终末体积、重量,计算肿瘤抑瘤率;应用流式细胞仪测定肿瘤细胞凋亡率;应用免疫组化测定促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达.结果:恩度联合TP组能明显抑制食管癌移植瘤的生长,肿瘤体积、重量小于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05);恩度联合TP组食管癌细胞凋亡率高于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05);恩度联合TP组抗凋亡蛋白Bcl-2表达低于其他组,差异有统计学意义(P＜ 0.05);恩度联合TP组Bax表达量高于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:恩度联合TP方案能明显抑制食管癌细胞及移植瘤的生长,优于单独应用TP组.     

大蒜素和顺铂联合作用对人视网膜母细胞瘤细胞凋亡影响的研究

目的:探讨大蒜素和顺铂联合应用对人视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用,及其对人视网膜母细胞瘤细胞凋亡的影响.方法:人视网膜母细胞瘤细胞株,经复苏,孵育,传代分为4个实验组,分别用大蒜素、顺铂、大蒜素和顺铂联合处理人视网膜母细胞瘤细胞,在不同时间(24、48、72 h)观察细胞的形态.并应用免疫细胞化学SP法检测不同处理条件下和各时间点bcl-2和PDCD5的表达情况.结果:人视网膜母细胞瘤细胞在大蒜素、顺铂以及大蒜素和顺铂联合作用下,细胞生长增殖受到抑制,与对照组的人视网膜母细胞瘤细胞相比形态学变化明显.大蒜素、顺铂及两者联合作用均可以下调人视网膜母细胞瘤细胞中bcl-2的表达,上调人视网膜母细胞瘤细胞中PDCD5的表达,大蒜素15μg/mL和顺铂3μg/mL联合用药可增强对人视网膜母细胞瘤细胞的生长抑制,与大蒜素15μg/mL、顺铂3μg/mL单独处理人视网膜母细胞瘤细胞比较,下调bcl-2表达和上调PDCD5表达的作用差异有统计学意义(P<0.05).结论:大蒜素和顺铂联合用药作用强于单独用药,可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制. 胞生长增殖受到抑制,与对照组的人视网膜母细胞瘤细胞相比形态学变化明显.大蒜素、 铂及两者联合作用均可以下调人视网膜母细胞瘤细胞中bcl-2的表达,上调人视网膜母细胞瘤细胞中PDCD5的表达,大蒜素15μg/mL和顺铂3μg/mL联合用药可增强对人视网膜母细胞瘤细胞的生长抑制,与大蒜素15μg/mL、顺铂3μg/mL单独处理人视网膜母细胞瘤细胞比较,下调bcl-2表达和上调PDCD5表达的作用差异有统计学意义(P<0.05).结论:大蒜素和顺铂联合用药作用强于单独用药,可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制. 胞生长增殖受到抑制,与对照组的人视网膜母细胞瘤细胞相比形态学变化明显.大蒜素、 铂及两者联合作用均可以下调人视网膜母细胞瘤细胞中bcl-2的表达,上调人视网膜母细胞瘤细胞中PDCD5的表达,大蒜素15μg/mL和顺铂3μg/mL联合用药可     

纳米铁颗粒联合三氧化二砷和阿霉素对Raji细胞凋亡和自噬的影响

目的:探讨四氧化三铁磁性纳米颗粒(Fe3O4-MNP)联合三氧化二砷(As2O3)及阿霉素(ADM)对非霍奇金淋巴瘤细胞株Raji凋亡和自噬的影响。方法:MTT法测定单药和联合用药后Raji细胞的生长抑制率;流式细胞术检测凋亡细胞及细胞内ADM浓度;蛋白印迹分析法测定凋亡相关蛋白BCL-2、NFκB、Survivin、BAX、P53、Caspase-3,自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、P62/SQSTM1的表达水平。结果:ADM联合As2O3能明显抑制Raji细胞的生长,它的抗肿瘤效应强于单用ADM或As2O3组,但弱于ADM+As2O3+Fe3O4-MNP组(P0.05);ADM+As2O3+Fe3O4-MNP细胞的凋亡率及ADM药物累积量均高于对照组、ADM组、As2O3组及ADM+As2O3组(P0.05),并且该组细胞中凋亡相关蛋白BCL-2、NFκB、Survivin表达下调幅度和BAX、P53、Caspase-3表达上调幅度均大于其它组(P0.05),自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达高于其它组,P62/SQSTM1的表达低于其他组(P0.05)。结论:Fe3O4-MNP联合As2O3和ADM通过促进凋亡和诱导自噬抑制了Raji细胞的生长,提高了抗肿瘤效应,对于恶性淋巴瘤治疗将是一个有前景的新方法。     

9-顺式维甲酸联合细胞毒药物对MYCN扩增型神经母细胞瘤细胞毒性及MYCN、MDR1表达的影响

目的:观察9-顺式维甲酸(9-cis retinoic acid,RA)联合细胞毒药物对MYCN扩增型神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞的毒性及MYCN、MDR1表达的影响,为临床合理用药提供依据.方法:RA分别与长春新碱(VCR)、顺铂(CDDP)、足叶乙甙(VP16)、阿霉素(ADR)双药联合或单独作用IMR32细胞株24 h后:(1) CCK-8法测定细胞生长抑制率;(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率;(3)实时荧光定量PCR法检测MYCN、MDR1的mRNA表达.结果:(1)细胞生长抑制率:各双药组高于相应单药组(P＜0.01).(2)细胞凋亡率:双药组高于相应单药组(P＜0.01),RA +CDDP高于其他双药组(P＜ 0.05). (3)MYCN表达:各双药组均低于相应单药组(P＜0.05),RA+VCR低于其他双药组(P＜ 0.05);MDR1表达:双药组高于相应单药组(P＜0.05),RA+ADR高于其他双药组(P＜0.01).结论:RA联合细胞毒药物对NB生长抑制、凋亡及下调MYCN表达有协同作用,可上调MDR1表达,综合分析RA与VCR或CDDP的组合可能为临床联合用药提供较合理的选择.     

载基因壳聚糖纳米超声微泡转染miRNA诱导Hela细胞凋亡的研究

目的:探讨载Survivin-miRNA的壳聚糖纳米超声微泡对癌细胞凋亡、增殖的影响.方法:实验分为5组,空白对照组、壳聚糖纳米超声微泡组和低、中、高浓度载Survivin-miRNA的壳聚糖纳米超声微泡转染组(分别给予50、100和200 nmol/L miRNA转染).流式细胞术检测各组Hela细胞凋亡指数(AI)和增殖指数(PI),RT-PCR检测靶向Survivin和caspase-3的mRNA表达,荧光分光光度法分析caspase-3活性变化.结果:各浓度转染组细胞AI明显高于对照组(P＜0.05),高浓度转染率最明显(P＜0.05);各浓度miRNA转染组PI明显低于对照组(P＜0.05),高浓度转染组最明显(P＜0.05);各浓度miRNA转染组Survivin mRNA转录水平有不同程度减弱.Caspase-3 mRNA的表达在各组细胞间差异无显著性(P＞ 0.05);各转染组细胞caspase-3活化水平较对照组明显提高(P＜0.01).结论:不同浓度靶向Survivin基因的miRNA能下调Survivin的mRNA表达水平,对caspase-3 mRNA的表达无明显作用,能激活caspase-3无活性前体,从而诱导Hela细胞凋亡,抑制细胞增殖.     

骨髓间充质干细胞旁分泌途径与阿霉素损伤心肌细胞凋亡:怎样证明其抑制效应?

背景:近来研究发现骨髓间充质干细胞移植后短期心功能受益主要是因为其可分泌多种细胞因子,促进了内生性修复过程,而不是心肌细胞的再生.目的:观察骨髓间充质干细胞旁分泌途径对阿霉素损伤心肌细胞凋亡的影响.方法:体外培养的乳鼠心肌细胞按3×10~8~(-1)浓度加入6孔培养板,3 mL/孔,培养72 h后分为3组:阿霉素损伤组、共培养组加入1 mg/L阿霉素作用4 h建立心肌细胞损伤模型,正常对照组不进行任何干预.共培养组取培养至第3代大鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞浓度为3×10~8~(-1),以3 mL/孔加入共培养插件Millicell装置中,预培养24 h,在造模后将Millicell装置插入到预先培养心肌细胞的6孔培养板中,建立共培养体系.检测条件培养基内细胞因子的质昼浓度变化,骨髓间充质干细胞对阿霉素损伤心肌细胞Caspase-9和Caspase-3活性、细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.结果与结论:与正常对照组比较,阿霉素损伤组胰岛素样生长因子1及肝细胞生长因子的质量浓度、心肌细胞Caspase-3及Caspase-9活性、心肌细胞凋亡率,心肌细胞Bax蛋白表达均明显升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显降低(P＜0.05).与阿霉素损伤组比较,共培养组胰岛素样生长因子1及肝细胞生长因子的质量浓度、心肌细胞Bcl-2蛋自表达均明显升高(P＜0.05),心肌细胞Caspase-3及Caspase-9活性、心肌细胞凋亡率、心肌细胞Bax蛋白表达均明显降低(P＜0.05).结果证实骨髓间充质干细胞在损伤环境下细胞因子分泌增加,并可通过旁分泌途径抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡.     

参麦及顺铂对人胃癌SGC-7901细胞生长的协同抑制作用

目的 探讨参麦及顺铂对人胃癌SGC-7901细胞生长的协同作用及其可能机制.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法测定细胞增殖情况;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化;RT-PCR检测VEGF、Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达.结果 MTT法显示参麦及顺铂能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,其作用具有时间及浓度依赖性,单用顺铂组,有效浓度为1.25 μg/ml,起效时间为72 h,其抑制率为(8.70±0.57)%,联合用药组,有效浓度为顺铂0.625 μg/ml,起效时间为48h,其抑制率为(8.87±0.10)%.行Hoechst33258染色可见细胞核出现固缩、边集,形成凋亡小体等凋亡现象;RT-PCR检测显示:与对照组相比,药物作用后Bcl-2、VEGF的mRNA表达降低,Caspase-3mRNA表达升高.结论 参麦与顺铂联合对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用顺铂相比,参麦与顺铂联合可有效减少顺铂的用药剂量,促进凋亡,其作用与协同促进Caspase-3的高表达及Bcl-2、VEGF的低表达有关.     

柚皮苷对地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡及线粒体凋亡途径的影响

目的探讨柚皮苷对地塞米松诱导下MC3T3-E1细胞增殖、凋亡的影响及可能的分子机制。方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞,实验分5组:空白对照组(NC)、地塞米松组(DEX)、1μmol/L柚皮苷+地塞米松组(1+DEX)、10μmol/L柚皮苷+地塞米松组(10+DEX)和50μmol/L柚皮苷+地塞米松组(50+DEX)。药物干预后,采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞技术检测各实验组细胞凋亡情况;q PCR法检测线粒体凋亡通路相关基因Apaf-1、Caspase-9 mRNA相对表达量;Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)及Cleaved-caspase-9蛋白表达。结果与NC组相比,地塞米松组细胞增殖受到抑制(P0.05),而不同浓度的柚皮苷以剂量依赖方式促进细胞增殖(P0.05)。流式细胞技术检测结果显示,DEX组细胞早期凋亡率增加(P0.05),而同时加柚皮苷干预组细胞凋亡率与DEX组相比明显减少(P0.05)。q PCR结果显示,DEX组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达升高(P0.05),而同时加柚皮苷干预组Apaf-1、Caspase-9 mRNA表达下降。WB结果显示DEX组Cyt-C、Cleaved-Caspase-9表达量增高(P0.05)。相反,同时加柚皮苷干预组Cyt-C及Cleaved-Caspase-9表达量减少(P0.05)。结论柚皮苷可以抑制地塞米松诱导的小鼠MC3T3-E1细胞凋亡,其机制可能与下调线粒体凋亡途径中Cyt-C、Apaf-1凋亡酶激活因子的表达,抑制Caspase-9凋亡蛋白的激活有关。