同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清肌酐

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清肌酐的候选参考方法.方法 以[2H3]肌酐为内标,用无水乙醇沉淀血清中的蛋白质,用氯仿纯化上清液,用液相色谱串联质谱分离测定,以包括法定量.结果 血清肌酐测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.57%(范围0.52%～0.61%)、0.43%(范围0.11%～0.59%)和0.73%(范围0.62%～0.83%).加样回收试验的回收率范围为99.09%～101.13%.分析两种参考物质SRM909b和SRM 967b,测定结果与认定值的偏差小于0.4%.结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清肌酐的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清肌酐测定的参考方法.     

血清尿素同位素稀释气相色谱质谱法的建立和研究

目的 建立一种基于同位素稀释/气相色谱/质谱技术(isotope dilution/gas chromatography/mass spectrometry,ID/GC/MS)的血清尿素候选参考方法.方法 以[13C,15N2]尿素为内标,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白类物质,依次使用丙二醛-二甲基缩醛和N-甲基-(三甲基硅烷基)-三氟乙酰胺(MSTFA)将尿素衍生成为三甲基硅烷氧基嘧啶,用气相色谱/质谱(GC/MS)分析衍生产物,以包括法定量.结果 血清尿素测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.38%(范围0.12%～0.47%)、0.62%(范围0.49%～0.87%)和0.73%(范围0.51%～0.93%),回收率范围为99.37%～100.95%,分析美国国家标准和技术研究院(NIST)2个水平的血清标准物质SRM 909b,测定结果与靶值的偏差小于0.2%.结论 建立了ID/GC/MS技术测定血清尿素的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清尿素测定的参考方法.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清葡萄糖

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清葡萄糖的候选参考方法.方法 以[~(13)C_6]葡萄糖为内标,用重量法准确地与血清混合,除去蛋白后在碱性条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮反应,用LC/MS/MS测定葡萄糖和内标衍生产物,以包括法定量.结果 血清葡萄糖测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.36%(范围0.28%-0.42%)、0.47%(范围0.20%-0.67%)和0.61%(范围0.42%-0.76%).加样回收试验的回收率范围为99.0%-100.9%.分析参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的平均偏差为-0.20%(范围-0.39%-+0.11%).结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清葡萄糖的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清葡萄糖测定的参考方法.     

血清葡萄糖参考方法的复现及与临床常用检测方法的比对研究

目的 复现血清葡萄糖测定己糖激酶的参考方法 (紫外分光光度法),对此方法 进行性能验证,并评价5种临床常用检测方法 .方法 按照美国CDC推荐的血清葡萄糖测定己糖激酶参考方法 的要求,建立参考方法 ;通过测定标准参考物质(SRM),以及参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)主办的参考实验窒间的国际环形比对试验(ring-trial),来验证参考方法 的准确性;按照美国临床和实验室标准委员会(CLSI)EP9-A2试验方案,己糖激酶参考方法 作为比对方法 ,5种临床常用检测方法 作为待评方法 ,同时测定40份血清样品.结果 用己糖激酶参考方法 测定SRM965a,水平2和水平3与靶值的偏倚分别为0.93%、-0.23%;参加参考实验室国际比对,血清葡萄糖检测结果 在可接受范围内;5种常用检测方法 在医学决定点(Xc=6.11 mmol/L)预期偏差的95%可信区间在实验窜定义的可接受偏差(10%)范围内,也在生物学变异的可接受偏差(6.9%)范围内.结论 本室已复现并验证了血清葡萄糖测定己糖激酶参考方法 ;5种常用血清葡萄糖检测方法 的测定结果 与参考方法 的测定结果 有差异,但误差在临床可接受范围,不会影响临床检测结果 .     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清睾酮

目的建立一种用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清睾酮的候选参考方法。方法以[16,17,17-d3]睾酮为内标,用重量法准确地与血清混合,用乙酸乙酯-正己烷混合溶剂提取,以羟丙基-β-环糊精水溶液对提取液作净化处理,用液相色谱串联质谱分析,质谱选择离子监测模式检测睾酮与内标的特定碎片离子,用包括法定量。结果血清睾酮测定的批内、批间和总变异系数(CV)的均值(范围)为0.84%(0.22%~2.00%)、1.01%(0.48%~2.37%)和1.37%(0.53%~3.09%)。参考物质ERM DA-345a和NIST SRM 971测定结果与认定值的平均偏差范围为-2.0%~+1.8%。结论用ID-LC/MS/MS建立了血清睾酮的测定方法,方法准确、精密、简便,有望作为血清睾酮测定的参考方法。     

高效液相色谱法测定血清葡萄糖

摘要：目的:建立一种测定血清葡萄糖（glucose,Glu）的高效液相色谱法（HPLC）,探讨其能否作为血清Glu测定的参考方法。 方法:以D-半乳糖（D-galactose）为内标物,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白质,在pH 9.1条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）反应,用HPLC测定血清Glu衍生产物、D-半乳糖衍生产物,用标准曲线法定量;对建立的方法进行方法学评价。 结果:本法测定血清Glu的批内变异系数（CV）为0.33%～0.67%,平均0.51%;批间CV为0.02%～0.85%,平均0.38%;总CV为0.47%～1.03%,平均0.68%。回收率为98.22%～101.96%。分析Glu的参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的偏差为-0.928%～0.347%,平均偏差为-0.072%。 结论:初步建立了测定血清Glu的HPLC法;该法准确、精密,有望作为血清Glu测定的候选参考方法。     

反相高效液相色谱紫外法检测人血清尿酸

目的探讨日本临床化学会(JSCC)推荐的检测人血清尿酸(UA)的反相高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法是否可作为候选参考方法来验证同位素稀释质谱法、评价常规方法。方法对反相HPLC-UV法进行复现并进行方法学评价。观察尿酸酶处理人血清样本后的色谱以评价其特异性;检测系列标准液的UA水平并绘制标准曲线,观察线性范围;用朗道公司质控品评价精密度;用UA标准液评价回收率;分别用有证参考物SRM 909b(Ⅰ和Ⅱ)、国家一级标准物质GBW 09176、GBW 09175、GBW 09174评价正确度,并与2008年国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室RELA(ring trials for reference labora-tories)结果进行比对;用改良Bland-Altman图评价5种常规检测系统与反相HPLC-UV法间的偏差。结果尿酸酶处理后UA色谱峰消失;本法的线性范围为2.08～1 785μmol/L;批内变异系数(CV)均<0.3%,批间CV均<0.4%,日间CV均<2.3%,总CV均<2.7%;平均相对回收率为96.0%～100.6%;与SRM909bⅠ和Ⅱ靶值的偏移分别为-2.5%、-2.3%;与GBW09176、GBW 09174、GBW 09175靶值的偏移分别为0.29%,-0.74%和0.06%;与参加RELA比对的另3家实验室的平均值进行比较,水平1偏移为0.35%,水平2为-0.69%;Hitachi、Beckman Coulter、Roche、Dade、Vitros常规检测系统检测人血清UA与反相HPLC-UA法的相关系数分别为0.998 9、0.996 5、0.999 2、0.999 2和0.998 7,与反相HPLC-UA法的偏差均小于5%的生物学变异。结论本法特异、简便、快速,精密度好,正确度高,与具有良好溯源的常规测定系统具有良好的相关性和一致性,可推荐作为人血清UA测定的候选参考方法。     

常规方法测定血清尿素和肌酐正确度的验证和溯源性评价

目的 验证常规方法测定血清尿素、肌酐浓度的正确度,以评价其校准溯源性.方法 选择20份经同位素稀释气相色谱质谱法(ID-GC/MS)进行尿素定值的新鲜冰冻患者血清作为标本,用常规方法测定尿素浓度;另选择20份经同位素稀释液相色谱串联质谱法(IlD-LC/MS/MS)进行肌酐定值的新鲜冰冻患者血清作为标本,用待评价系统测定肌酐浓度;分别将尿素和肌酐的测定结果与质谱法认定值进行线性回归分析,计算百分偏倚并评估预期偏倚.结果 常规方法测定尿素结果与认定值间线性回归方程为y =0.9890X +0.0192(R2 =0.9990,P＜0.01,n=20);测定肌酐结果与认定值间线性回归方程为Y=0.9815X-6.4794(R2 =0.9989,P＜0.01,n=20);尿素、肌酐测定结果的平均百分偏倚分别为-0.41％ (P ＞0.05)和-4.20％ (P ＜0.05);通过线性回归方程计算出在3个医学决定水平的预期百分偏倚分别为尿素:-0.46％、-0.83％、-0.96％;肌酐:-15.90％、-5.87％、-2.95％.结论 常规方法定尿素结果和参考方法一致,结果可溯源至ID-GC/MS方法;肌酐测定结果与参考方法之间的偏倚符合根据生物学变异导出的“最低性能规范要求”,但是其特异性有改进的余地.     

应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的 评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法 ,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法 ;并应用此方法 评价常规酶比色法测定血清UA的结果 偏倚.方法 对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法 学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法 的准确性及可靠性.以反相HPLC内标法为比较方法 ,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法 ,对61份血清样本进行测定.组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估.结果 反相HPLC内标法测定UA线性范围达1 190 μmol/L,批内变异系数(CV)＜2.1%,日间CV＜3.9%,绝对回收率为96.2%～101.0%,平均相对回收率为95.1%～99.4%.测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果 与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%～-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的酶比色法分别与反相HPLC内标法比较,各组中2种方法 均相关良好(R2=0.996 9、0.997 2、0.995 2、0.996 7、0.997 3、0.994 7),在UA为120、470L、630 μmol/L时,预期相对偏倚范围分别为-14.6%～4.3%、-0.4%～8.0%、0.8%～8.8%,其中Beckman封闭系统测定结果 与反相HPLC内标法的一致性好,Roche封闭系统低值偏低,Dade和Vitros封闭系统高值偏高,封闭系统比开放系统结果 略好.结论 拟推荐以5-FU为内标的反相HPLC法作为血清UA测定的候选参考方法 .酶比色法在不同检测系统中所测结果 存在一些差异.     

应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法;并应用此方法评价常规酶比色法测定血清UA的结果偏倚。方法对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法的准确性及可靠性。以反相HPLC内标法为比较方法,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法,对61份血清样本进行测定。组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估。结果反相HPLC内标法测定UA线性范围达1190μmol/L,批内变异系数(CV)<2.1%,日间CV<3.9%,绝对回收率为96.2%~101.0%,平均相对回收率为95.1%~99.4%。测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%~-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的...     

基于电感耦合等离子体质谱法血清钙离子检测候选参考方法的建立

目的基于电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS),建立一种检测血清钙离子的候选参考方法。方法方法学建立.将从医院收集到的血清标本以0.3%硝酸溶液直接稀释100倍,在血清标本基质溶液中添加不同浓度钙标准溶液,配制含血清基质的标准品溶液。以锗(Ge)为内标,采用标准加入法,计算血清钙离子浓度。对所建立的候选参考方法进行线性、精密度、正确度的性能评估和方法比对。结果血清钙离子浓度在0.000~20.400 mmol/L内(稀释后浓度为0.000~0.204 mmol/L)线性良好(R2>0.9999);批内不精密度为0.22%~0.47%,批间不精密度为0.64%~0.77%,总不精密度为0.98%~1.09%;检测3个浓度SRM 956d,结果均在证书要求的不确定度范围内,相对偏移分别为-0.16%,0.04%,0.23%;该方法参加2017年参考实验室外部质量评价计划(RELA),比对通过。与检验医学溯源联合委员会(JCTLM)所列参考方法进行比较,结果一致性良好。本研究所建立的候选参考方法与临床常规电极方法进行比较,具有良好的相关性。结论成功建立血清钙离子检测候选参考方法,线性范围宽、具有良好的精密度与准确度。     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清总甘油

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油的方法.方法 以[13C3]-甘油作内标,用氢氧化钾异丙醇溶液水解血清甘油酯为游离甘油,将游离甘油转化为苯甲酸酯,用同位素稀释液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)分离检测,用标准曲线法定量.结果 甘油/内标峰面积比与甘油浓度(0.565～4.517 mmol/L)线性相关系数大于0.999 9;测定不同浓度血清总甘油批内变异系数(CV)平均为0.52%(范围0.21%～2.62%),总CV平均为1.15%(范围0.62%～2.00%);分析国际和国家标准物质,测定值与认证值的偏倚小于1%(-0.20%～1.06%).结论 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油方法,方法特异、精密、准确,可望用作血清总甘油测定参考方法.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定人血清尿酸

目的建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC/MS/MS）测定人血清尿酸的候选参考方法。方法用[1,3]1-5N2尿酸作内标,与一定量的血清充分混匀,加入等量乙腈沉淀血清蛋白并提取尿酸,氯仿纯化上清液后用液相色谱串联质谱（LC/MS/MS）分离测定。优化LC/MS/MS的色谱条件,评价该法的精密度、回收率和偏倚,并计算不确定度。结果对3个浓度水平的室间质量评价用质控血清测定3批,批内、批间和总变异系数（CV）的均值（范围）分别为0.54%（0.44%-0.69%）、0.66%（0.45%-0.79%）和0.86%（0.66%-1.02%）。加样回收试验回收率范围为98.38%-102.64%。美国国家标准与技术研究所（NIST）标准物质SRM 909b-Ⅰ、Ⅱ的测定均值与靶值的偏倚分别为0.04%和0.25%。3种质控血清的相对扩展不确定度分别为1.80%、2.19%和2.04%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清尿酸的方法精密、准确,有望作为血清尿酸测定的参考方法。     

血清尿酸紫外分光光度参考方法的建立及性能评价

目的以尿酸酶紫外光度法为基础,建立血清中尿酸测定的参考方法并评价其性能.方法 用新鲜患者血清样本、迈瑞常规复合校准品等对方法的精密度进行评估;用有证参考物质SRM909bⅠ和Ⅱ、IFCC参考实验室质评样本Rela A/B对方法的准确度进行初步评价,同时测定新鲜人血清并与同位素稀释质谱法进行方法学对比,验证方法准确度.结果 方法对新鲜患者血清、厂家复合校准品等不同类型样本批内不精密度CVintra小于1%,总不精密度CVt小于2%;有证参考物质SRM909bⅠ/Ⅱ测定结果均在参考值范围内,对UA参考实验室能力验证样本Rela A/B测定结果与中心值结果相对偏差小于0.5%;血清样本测定结果与同位素稀释液相质谱法可比,线性回归斜率1.005,相关系数0.999,医学决定水平处引入的相对误差小于3.25%.结论 血清尿酸紫外分光光度法已基本建立,精密度和准确度符合要求,测量结果和同位素稀释液相色谱/质谱法可比,可为常规系统尿酸溯源体系的建立和性能评估提供便捷有效的方法.     

Determination of serum glucose by isotope dilution mass spectrometry: candidate definitive method.

We report a rather simple method to determine glucose concentration in serum, using isotope dilution mass spectrometry and [13C6]glucose as internal standard. The procedure involves a single step of sample purification and the conversion of the analyte into its aldononitrile pentaacetate. The between-day and within-day contribution to total variance for a single measurement was determined by assaying Standard Reference Material (SRM) 909 serum. The method was then applied to measurement of glucose concentration in three lyophilized sera: SRM 909 and two other commercially available sera. In the two studies, the concentration of SRM 909 serum was found to be 0.8% above and 0.3% below the reported value (6.25 mmol/L), respectively; the overall coefficient of variation for determinations in all sera ranged from 0.37% to 0.56%. The precision and the accuracy of the method satisfy the requirements for a Definitive Method.     

A candidate reference method for coupled sodium-water determination in human serum

A candidate reference method is described for coupled sodium-water determination based on ion-exchange sodium separation from the serum matrix followed by gravimetry as Na2SO4, and serum water determination by means of microwave evaporation. For sera with normal sodium and water contents, the mean relative standard deviation is 0.6% (0.8 mmol/l). Mean inaccuracy for the coupled sodium-water determination is -0.3% (0.4 mmol/l). The candidate reference method can be considered a reference method because the reference method value did not differ significantly from the definitive value, there is no known source for interferences or bias, and misinterpretation due to abnormal protein or lipid levels is excluded because serum sodium is determined on a plasma water basis. Sodium concentrations determined by the candidate reference method are used for comparing field methods with the candidate reference method. If the resulting regression equation is used in the calibration procedure, good correlation between all (in)direct field methods and the candidate reference method is ensured, and accurate results are produced. Results of proficiency testing show a good correlation between (in)direct field methods and the candidate reference method, because sera with approximately normal water contents are used.